革兰氏染色教案资料
实验二 细菌的革兰氏染色法
实验二细菌的革兰氏染色法一、目的要求1.掌握革兰氏染色的方法及原理。
2.进一步熟悉显微镜的使用二、基本原理1. 革兰氏染色的意义：革兰氏染色的反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医生Gram 创立的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态特征而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏染色阴性细菌，用G-表示。
2. 革兰氏染色的原理：细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫－碘复合物被保留在细胞内而不易着色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫－碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
三、器材大肠杆菌，金黄色葡萄球菌12～20h斜面培养物；革兰氏染液，载玻片，显微镜等。
四、操作步骤1. 涂片取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种环以无菌操作分别从培养14～16h的枯草芽孢杆菌和培养24h的大肠杆菌的斜面上挑取少量菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。
载玻片要洁净无油迹；滴蒸馏水和取菌不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚。
2. 干燥室温自然干燥。
3. 固定固定时通过火焰2～3次即可。
此过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。
热固定温度不易过高，以载玻片背面不烫手为宜，否则会改变甚至破坏细胞形态。
4. 初染加草酸铵结晶紫一滴，约1～2min，水洗。
5. 媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
6. 脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现蓝色时为止，约20～30s，立即用水冲净酒精。
实验二 细菌革兰氏染色法
实验三细菌革兰氏染色法一、目的要求1. 掌握油镜的原理和使用方法；2. 了解革兰氏染色原理；3. 学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、基本原理1. Gram与革兰氏染色革兰氏染色（Gram stain）是以丹麦医生Hans Christain Joachim（1853-1938）的名字命名的。
Gram在对死于肺炎的患者肺部组织进行检查时发现某些细菌对特定染料有很高的亲和力。
革兰氏染色法的基本步骤是：a．初染：结晶紫染色；b．媒染：碘液媒染；c．脱色：乙醇脱色；d．复染：番红复染。
经过这样的染色后，发现肺炎球菌保持蓝紫色，肺部组织背景为浅黄色，达到了将细菌与被感染的肺部组织区分开的目的。
几年以后，德国病理学家Carl Weigert （1845-1904）在Gram染色方法基础上加上番红复染，使其成为微生物学研究领域最常用的染色方法之一。
2. 基本原理革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。
然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。
之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。
三、实验用品准备：灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器四、操作：1 涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。
革兰氏染色
说课教案革兰氏染色实验原理介绍：革兰氏染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所应起的。
革兰氏阳性菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子层次较多且结构致密，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔径缩小，在结晶紫-碘液染色后保留了结晶紫-碘复合物。
呈紫色。
番红复染后任呈现紫色。
革兰氏阴性菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色。
一、教学目标1、知识目标：学习并初步掌握革兰氏染色法；了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
2、能力目标：引导学生体验“实践—理论—实践”的一般认知规律；通过实验现象思考客观事实本质；培养学生实验探索的能力,提高学生发现问题、分析问题、解决问题的能力。
3、情感目标：体现学生的主体地位；展示生物学的魅力，激发学生物学的兴趣；培养理论联系实际的科学态度、实验探究能力与创新意识；培养学生的集体荣誉感。
二、教学对象1、学生具备生物学、化学的基本知识，有一定生物学实验、化学实验的基础。
2、前面学习了细菌的简单染色法。
3、学生学习积极性相对较差。
三、教学策略1、思想方法：以建构主义理论为指导，知识呈现、自主协作、知识建构2、过程方法：体现学生主体意识和教师的引导作用课题引入、学生阅读、给出过程、学生探究、实验分析3、认知方法：体现认知规律感性认识到理性认识，从现象看本质。
设计思想：以建构主义理论为指导，通过课题引入，学生对教材进行阅读，在老师的帮助下明确实验步骤，按步骤实施实验，汇报实验结果，提出问题、分析讨论问题。
探究性实验能激发学生的求知欲，进而引发学生对问题的自主协作式的探究学习；对实验现象的记录、分析探讨等活动，达到对知识的掌握，思维的扩展；学生在整个学活动中实现知识的感性认识到理性认识的升华，体现了学生的主体地位。
教师的引导、实验结果及问题的分析讨论，体现了在整个学习过程中的主导作用。
实验 细菌的革兰氏染色
实验八、细菌革兰氏染色实验一、实验目的和内容目的：1.熟悉油镜的使用与保养。
2.掌握细菌革兰氏染色法的原理及实验操作。
3.了解革兰氏染色实验在细菌分类鉴定上的重要性。
内容：1.学习显微镜（油镜）的使用和保养。
2.学习细菌革兰氏染色实验。
3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片并判断其结果。
二、实验原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C．Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
染色前必须先固定细菌，其目的有二：一是杀死细菌，使细胞质凝固，菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。
常用的有加热和化学固定两种方法。
固定时应尽量维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三、实验材料和用具（1）菌种：培养12-16h的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的青枯假单胞杆菌。
（2）染色液和试剂：吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95 %酒精、复染剂（蕃红）、二甲苯、香柏油。
（3）器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。
四、实验步骤：①涂片：取干净载玻片一块，在载玻片的加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，做成菌液。
干燥（可过火3—4次）制成薄的涂面，注意取菌不要太多，过火速度要快。
②初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1 min，倾去染液，流水冲洗至无色。
③媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1 min，后水洗。
④脱色：除去残水后，滴加95 %酒精进行脱色约15－20 sec，后立即用流水冲洗。
⑤复染：滴加复染剂——番红染色液，染3－5 min，水洗后用吸水纸吸干。
⑥镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察染色结果并绘图。
实验二细菌革兰氏染色
（一）革兰氏染色 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—
脱色—水洗—复染—水洗—干燥—镜检
菌悬液
涂片
干燥
滴加无 菌水
取菌苔
涂片
固定
Smear preparation
Heat fixing
Staining
crystal violet stain
wash with water
Counterstain with Safranin
3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。
4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色
成分
肽聚糖 磷壁酸 类脂质 蛋白质源自占细胞壁干重的%革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等 4、标本片：芽孢、荚膜、孢子丝
四、实验方法
注意事项：
（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革 兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。
（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。
实验细菌的革兰氏染色
• 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
• 它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
• 革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌 的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色 反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示； 染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性 细菌，用G-表示。 • 细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细 胞壁的成分和结构不同而造成的。
（二）细菌细胞的革兰氏染色
1．涂片：将培养24小时的枯草芽孢杆
球菌、大肠杆菌和未知菌分别作涂片
（注意涂片切不可过于浓），干燥、
固定。固定时通过火焰1～2次即可，
不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色
（1）初染加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟， 水洗。 （2）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分 钟，水洗。 （3）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白 背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不 出现紫色时为止，约20～30秒钟，立即用 水冲净酒精。 （4）复染用番红液染1～2分钟，水洗。
4、染色：放标本于水平位置，分别滴加染色 液于涂片薄膜上，染色时间长短随不同染 色液而定。结晶紫染色液染2—3分钟，石 炭酸复红染色液约染1—2分钟。
5、水洗： 染色时间到后，用自来水冲洗， 直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流 不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避 免直接冲在涂片处。冲洗后，将标本晾干 或用吹风机吹干，待完全干燥后才可置油 镜下观察。
三、实验器材
• 1、菌种：大肠杆菌，枯草芽孢杆 菌,未知菌； • 2、试剂：草酸铵结晶紫，番红水 溶液，碘液，95%乙醇， • 3、仪器：显微镜，载玻片等。
四、实验步骤
（一）细菌细胞的简单染色 1、涂片 ：取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理 盐水于载玻片中央，用无菌操作挑取大肠杆菌和 枯草芽孢杆菌于载玻片的水滴中，调匀并涂成薄 膜。注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。 2、干燥 ： 室温中自然干燥。 3、固定： 涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使 细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱 落。但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。
实训5 革兰氏染色
革兰氏染色一、实验目的1.练习微生物制片操作过程；2.练习染色技术；3.能正确使用显微镜。
二、实验原理G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。
呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。
三、实验仪器、试剂显微镜、酒精灯、接种环、玻片、结晶紫、草酸铵、碘、碘化钾、乙醇、番红四、思考题革兰氏染色中所观察微生物没有生命活性，在操作过程中接种环可否不经过灼烧灭菌？双手是否可以不经过酒精棉消毒？五、实验步骤1.载玻片的清洁点燃酒精灯、将酒精浸泡的载玻片取出、烧去多余的酒精灭菌。
2.涂片①在酒精灯火焰旁、按无菌操作法图片：首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量菌种，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。
②可先做浓菌液、再做染色涂面，便于观察。
③涂片完灼烧接种环。
3.干燥、固定将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次，以载玻片的加热面接触手背皮肤，不觉过烫为佳，待冷却后再在火焰上方来回通过一两次，再冷却，这样重复操作直到薄层干了为止。
4.初染在制好的片上滴一滴草酸铵结晶紫，染色1 min后用水洗，注意水流不要直接对准薄层。
5.媒染。
加卢戈碘液大概一滴，作用1 min后6.水洗注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。
7.脱色。
用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。
这一步是革兰氏染色的关键，必须严格掌握好，如果脱色时间过长则会把阳性菌误认为阴性菌；如果脱色不够则容易被误认为是阳性菌。
（做对比实验、一个脱色30s、另一个脱色2min、观察实验结果是否一样）8.水洗、干燥9.复染滴加0.5%的番红染色一滴，液染色10～30 s后，用自来水冲洗。
10.镜检干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。
实验三 革兰氏染色法
三、器材：
大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革兰氏染色液，
载玻片，显微镜等
四、操作步骤：
1、涂片：将大肠杆菌（24h）和金黄色葡萄球菌 （24h）分别涂片、干燥、固定。
2、染色： （1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 （2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 （3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗 至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立即用水冲净乙醇 （4）复染：用番红液染1--2分钟，水洗
4 显微镜计数：五分钟后，先低倍镜找计数室，后 高倍镜计数。一般以每小格5—10个菌体为宜。常选 四角和中央五个中格计数。格线上菌体只数上线和 左边线。芽大于母体一半方计。同法计另一室。
5 清洗血球计数板：自来水冲洗，切勿用硬物洗刷， 自行凉干。镜检，洗净为止。
五．实验报告：1 结果；2 思考题：第（1）题。
实验三 革兰氏染色法
内蒙古科技大学 基础生物实验中心
一 目的要求： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法。 2、了解革兰氏染色法的原理极其在细菌分类
鉴定中的重要性。
二 基本原理： 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain
Gran 创立的，基本步骤是： 1、初染：结晶紫染色 2、媒染：碘液媒染 3、脱色：乙醇脱色 4、复染：番红复染
水玻璃球三角烧瓶，1ml无菌吸管，斜面，平板， 无菌涂棒，土样。
四 操作步骤 1．倒平板； 2．制备土壤稀释液：称取土样10克，放入90ml 无菌水中，震荡20分钟，取1ml悬液于9ml无菌水 中，吹吸三次，使其充分混匀。再取1ml于下一 9ml无菌水中，以此类推，制成10-1、10-2、10-3、 10-4、10-5、10-6各种稀释度的土壤稀释液。
经此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌
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（6） 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混 合制片，作革兰氏染色对比。
2.5固定的目的 • ① 杀死微生物，固定其细胞结
构； • ② 保证菌体能牢固地粘附在载
• 复染液也是一种碱性染料，目的是使脱色的细菌 重新染上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较。 常用沙黄染液或蕃红花红溶液
2.3、意义：
（1）鉴别细菌:用此染色法可将所有细菌分为两大 类,这样可将致病菌的范围缩小,然后再进一步鉴 定。
(2)选择药物:革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌在细胞 壁等结构上有很大差别,因而对抗生素的敏感性不 同。例如大多数阳性菌对青霉素敏感大多数阴性 菌对青霉素不敏感(脑膜炎球菌等除外),可供临床 实践中选用抗菌药物的参考。
3、固定：一般用加热法固定。将载玻片迅速来回通过 火焰3次，以玻片触及皮肤热而不烫为度。这样可以使 菌体粘附于载玻片上。加热还可杀死细菌，改变细菌细 胞膜的通透性，易于染色。也可用甲醇、乙醇等化学药 品固定。
三、染色方法
• 1、单染色法：仅用一种染料对细菌进 行染色，操作简单。可观察细菌的形 态、大小及排列，但不能显示细菌的 结构及染色特性。分为染色、水洗、 干燥三个步骤。染色剂为亚甲蓝或碱 性复红染色液。
(3)与致病性的关系:大多数革兰氏阳性菌的致病物 质主要为外毒素;而大多数革兰氏阴性菌的致病物 质主要为内毒素.
2.4具体操作步骤：
2.4.1涂片：左手持菌液试管，右手持接种环， 用接种环从试管培养液中取一环菌，从酒 精灯外焰穿过，于载玻片中央涂成薄层 （事先在背面做好标记圆圈）即可，或先 滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环 从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混 合均匀，涂成一薄层。拔或塞试管塞时， 应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接 种环在火焰上烧灼灭菌。
三、染色方法
• 2、复染色法：用两种或以上的碱性染 料先后对细菌进行染色。可观察细菌 的形态、大小及排列，能显示细菌的 结构及染色特性，还有鉴别细菌的作 用。常用革兰染色法。通过此法染色， 可将细菌鉴别为革兰阳性菌（G+）和 革兰阴性菌（G-）两大类。丹麦细菌 学家G.Gram发明而得名。
• 2.1实验材料：大肠埃希菌，金 黄色葡萄球菌18-24h培养物； 草酸铵结晶紫染液；沙黄染液； 生理盐水；95%乙醇；卢戈碘 液；二甲苯；接种环；酒精灯； 显微镜等。
• 具体操作步骤：
2.4.2干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可 在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿 靠近火焰。
2.4.3固定：常用高温进行固定。即手持载玻 片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快 速来回移动3~4次，共约3~4秒。要求玻片 温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮 肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。
格兰染色Mp4
作业：
• 1、染色标本的制备方法 • 2、革兰染色的具体步骤 • 3、革兰染色的医学意义
2.7实验原理：
• 细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透 性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和 结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后 形成不溶性复合物，乙醇能使它溶解，所以染色 的前二步结果是一样的，但在G+细胞中，乙醇还 能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结 晶紫和碘的复合物分子太大，不能通过细胞壁， 保持着紫色。在Gˉ细胞中，乙醇处理不但破坏了 胞壁外膜，还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜，于 是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗 漏出来，当再用衬托的染色液复染时，显现红色。 红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但 被紫色盖没，红色显示不出来。
革兰染色
一、染色标本的制备
1、涂片：载玻片上滴加生理盐水一滴，接种环取待检 菌培养物少许，研入无菌生理盐水中，形成一个极薄的 均匀的菌膜，直径在1cm左右为宜。如果时液体培养物 则直接取少许菌液涂成菌膜。
2、干燥：室温自然干燥即可。也可在远离火焰上方的 空气中干燥。切记不可太近火焰，以免烤焦废弃。
玻片上，以免水洗时被水冲掉； • ③ 改变菌体对染料的通透性，
一般死细胞原生质容易着色。
2.6实验现象：
• 染色后菌体呈蓝紫色的，称为“革兰阳 性菌”；菌体是伊红色，称“革兰阴性 菌”。无论阳性菌还是阴性菌，都有杆 菌和球菌。葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿 假单胞菌是临床最为常见的病原菌。葡 萄球菌属于革兰阳性菌，大肠杆菌属于 革兰阴性菌。除大肠杆菌以外，临床较 常见的肠杆菌科细菌还有变形杆菌属， 沙门菌属、克霉白菌属；铜绿假单胞菌 是临床常见的较耐药革兰阴性杆菌。
细菌结构模式图
2.7实验原理：
① G+细菌的细胞壁
• G+细菌细胞壁具有较厚（20-80nm）而致 密的肽聚糖层，多达20层，占细胞壁成分 的60%～90%，它同细胞膜的外层紧密相 连 ；有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸。细 胞生长中有自溶素（酶类）起作用，磷壁 酸对自溶素有调节功能，阻止胞壁过度降 解和壁溶。如果细胞壁的肽聚糖层被消溶， G+细胞成为原生质体（protoplasts），细 胞壁不复存在，而只存留细胞膜。除链球 菌外，大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白 质。
具体操作步骤：
2.4.4. 染色：
（初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水 洗。
（3）脱色：将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用 95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止， 约20—30秒，立即用水冲净酒精。
（4）复染：用番红液染1—2分钟，水洗。
2.2、染色方法：包括初染、媒染、脱色、复染、
镜检、结果分析等步骤。
• 初染染料为碱性染料，常用结晶紫。
• 媒染剂的作用是增强染料与细菌的亲和力，更好 地加强染料与细胞的结合。常用碘液。
• 脱色剂帮助染料从被染色的细胞中脱色。利用细 菌对染料脱色的难易程度不同，而将细菌加以区 分。革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色，而革兰阴 性细菌则易被脱色。常用丙酮或乙醇。