电穿孔系统技术参数
ECM830多功能型细胞电穿孔 细胞转基因活体导入系统 简介 ...
ECM830多功能型细胞电穿孔细胞转基因活体导入系统简介：ECM830可以满足所有体外和体内电穿孔研究的需要，并可对预处理的动、植物细胞进行融合。
该型号具有精细的电压调节，可监控所有参数，可调整脉冲间隙，这些细节是其优异品质的内在保证。
特别需要指出的是，配合BTX 提供的专用附件，可以轻松进行诸如活体转基因和导入蛋白，多肽及其他药物的研究和治疗。
应用：♦哺乳动物细胞转染♦体外／体内／离体／卵内实验♦核移植♦植物组织和原生质体的转染♦细菌和酵母的转化可靠性：方形波技术保证了更高的效率和哺乳动物细胞存活率。
通用性：利用BTX多种专业电极和新型的BTX MOS多孔板电穿孔仪，可以将仪器运用到各种电穿孔领域。
监控仪选配新的VIP 3000可以允许用户监控和记录下电穿孔过程中的主要电参数。
利用选配的通讯模块，就可以把数据下载到电脑上或在打印机上打印出来。
多孔板电穿孔仪新的MOS-多孔优化系统利用BTX-ECM电源发生器可为研究人员提供先进的多孔技术。
ECM830是为体外和体内电穿孔设计的方形波电穿系统。
BTX方形波技术为研究者提供了更高的细胞转染率和存活率。
ECM830应用范围广泛，包括了哺乳动物细胞和植物细胞转染，胚胎操作，核转移以及细菌和酵母转化。
ECM830的主要特点包括了：5至3000伏的电压范围；精确的电压调进，10微秒至10秒的脉冲范围，可控制的脉冲间隔，电弧淬灭功能（arc Quenching）可显示真实电压及脉冲波长数字显示屏。
更为客户提供了两年的质量保证。
ECM830主机可和BTX的各种专业及配件结合使用，使分子或药物的体外／体内导入实验更加得心应手。
技术规格操作状态：启动后内部自检界面：数字用户界面输入：110V／220V通用充电时间：最大5sec(没有延迟)电压范围：5－500V电压模式／1V分辨率505－3000V高电压模式／5V分辨率波长范围：10μsec─999μsec低电压模式／1μsec分辨率1msec─999msec低电压模式／1msec分辨率1sec─10sec低电压模式／0.1sec分辨率10μsec─600μsec高电压模式／1μsec分辨率多脉冲：1─99脉冲间隔：100msec─10sec电弧控制：电弧淬灭功能安全：脉冲发生器短路保护特点精密度及性能♦高级方波脉冲外形♦低电压模式1V分辨率及0.5％的精确率♦可监视电压、脉冲持续时间、脉冲间隔及脉冲数目安全性能♦电弧淬灭功能♦脉冲发生器短路保护♦外部安全机架可操作性能♦数字用户界面♦单一旋转数字盘控制♦在线帮助系统♦电压范围5V─3000V♦脉冲持续时间范围10msec─10sec优点♦高级的方形波技术产生更高的存活率及效率。
电穿孔技术
电穿孔技术电穿孔缓冲液：配方1：200mM/L葡萄糖,5mM硫酸镁2mM/L疏基乙醇20mM/LTris-HCI ,pH值7.6Universal Electroporation Solution通用电转染缓冲液性能特点：1. 显著提高转染效率和细胞存活率2. 适用于难转染细胞等几乎所有细胞类型3. 与所有电融合/电穿孔仪兼容产品货号：UES0001产品规格：1ml保存：Universal Electroporation Solution保存于4度建议-20度长期保存保质期：正确的使用和保存条件下，保质期为6个月电转染次数：1ml Universal Electroporation Solution用0.4cm电极杯可进行5组实验用0.2cm电极杯可进行10组实验电转染条件：电压260V电容950μF操作步骤：1．收集细胞：用胰酶消化细胞，将细胞培养液吸入到15ml离心管中，1000rpm,5min，弃其上清。
2．用不含血清的培养液洗涤一次，弃其上清。
3．取2～10ug质粒加入到100ul电转缓冲液中，充分混匀。
4．用100ul混有质粒的电转缓冲液充分溶解细胞，转入0.2cm电转导入杯中。
5．将电转导入杯放入样品槽中，释放电脉冲，电击参数按电容1000 mF，电压150-500 V，间隔20V取值，取得最佳效果。
6．立即取出电击杯，分别用一次性吸管将混和液转移至加有完全培养基的一次性细胞培养瓶中，放入细胞培养箱中培养。
电穿孔法转染哺乳动物细胞来源： 发布时间：2009-08-31 查看次数：1935站长注：下文是发表于Nature Methods中的一篇关于电穿孔转染方法的文章，站长对其作了注释，方便大家理解。
电穿孔转染理论上可转染所有的组织细胞，因此对其他如脂质体、磷酸钙沉淀等方法转染效果不明显的细胞可选用此方法。
电转过程中，最重要的就是电穿孔仪的电压、电容以及与电泳缓冲液的选择。
提到电转仪，最出名的恐怕就属BIO-RAD了，他在1986年推出了世界上第一台电穿孔仪，并发布了多种细胞仪电转过程中的电压，电容，电转缓冲液等可省却大家很多的摸索过程，具体资料可到其主页上查找相关Nature Methods 3, 67 - 68 (2006)Transfection of mammalian cells by electroporationPulsed electrical fields can be used to introduce DNA into a wide variety of animal cells1, 2. Electroporation works well with cell lines that are refractive to other techniques, such as calcium phosphate–DNA coprecipitation. But as with other transfection methods, the optimal conditions for electroporation of untested cell lines must be determined experimentally.电穿孔转染可用于磷酸钙转染效率低下的细胞，具有操作简便，转染效率高等优点，但对于不同的细胞，其转染条件有很大的不同，需要进行摸索。
电火花高速打孔参数
电火花高速打孔参数
1.打孔极限：由于电火花打孔是一种切削加工工艺，所以打孔极限受到刀具尺寸、加工材料以及加工参数的影响，在正常设定下可以实现金属微小孔加工。
2.电流控制：电火花打孔的电流可以分为大电流、中电流和小电流，根据所使用的加工材料的性质选择不同的电流，通常可以容许较大的电流，并利用其勤私来提高加工的效率。
3.电压控制：电火花打孔的电压应根据加工材料的性质进行选择，但一般可以选择较高的电压，以获取较大的能量密度，从而提高打孔效率。
4.切削参数：用于电火花打孔加工的切削参数，可以按所要求的尺寸调整，以确保打孔尺寸精度，如刀具直径、切削台面、切削步距等参数。
5.冷却参数：在电火花打孔过程中使用冷却液可以降低机床温度，冷却参数可以根据实际打孔效果来选择，冷却液流速等参数均要求严格控制。
电穿孔系统
电穿孔系统BJ5183电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。
BJ5183为重组腺病毒质粒构建专用菌株，能够表达供pAdEasy骨架质粒和pAdEasy穿梭质粒进行同源重组的所有组分。
pUC19质粒检测感受态细胞的转化。
1.电极间距为0.1cm的电转杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporationcuvettes）插入碎冰中，压实冰面，冰中静置5分钟，使电转杯充分降温。
（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和DNA，用蒸馏水洗3遍，将其泡在75%乙醇中30分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）；2.取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒DNA或连接产物（洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照pUC19可以用无菌水稀释到10pg/μl），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。
3.启动电转仪，设置电击参数：2.0kV，200Ω，25μF（BTX ECM 630或Bio-RadGenePulser）。
用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。
完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃，150-250rpm振荡培养1小时。
4.取100-200μl左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的LB平板上，倒置放于37℃培养箱培养12-18小时。
注意事项：1.电转杯必须预冷。
感受态细胞应该在冰水浴中化冻，加入DNA后应轻柔混匀，加入DNA的体积小于细胞体积的1/10。
2.一旦DNA加入到细胞中，电击操作应该立即进行。
3.DNA 应该溶解在水或TE中，连接酶的存在会降低转化效率，必要时需纯化连接产物。
Bio-rad_Gene_Pulser_Xcell电穿孔系统(中文说明书)
Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统一Gene Pulser Xcell电穿孔系统介绍电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化，Gene Pulser Xcell可以提供2种波型，即指数波和方波。
1.Exponential Decay Wave（指数波）所谓指数波的方式，就是将已经充电到指定电压的电容进行快速的放电，放电的方式是以指数的形式进行的（如上面的slide显示）。
该种方式的电穿孔取决于2个参数，电场强度(kV/cm)和时间常数(ms)。
在实验过程中，采用具体的电击杯调整电压即可调整不同的电场强度。
此外，电容和电阻的具体值也可以在Gene Pulser Xcell的界面上进行设置。
•电容器充电到预定的电压(V0)放电后，即向样品释放脉冲，细胞表面的电压随时间按指数方式下降的•电容器的电压值达到峰值释放脉冲后迅速的衰减•电场强度 E (V/cm) 是用来描述电击杯外界电场环境的一个参数（E=V/d ）•脉冲时间是一般用时间常数来进行衡量(~37% of V0，V0/e)•脉冲的时间是由电阻和电容的大小所决定的备注：PC module作用PC（Parallel Capacitor）模块的本质就是在放电回路中在样品上并联一套电阻。
在放电回路中设置PC模块的目的：如果实验样品具有很高的电阻值，那么脉冲就需要维持相当长的时间，这样对细胞是会有损伤的，长时间的电场作用会导致细胞的裂解。
并联了PC模块后对样品而言电击是的电压并没有变化，但是PC 模块起到了分流的作用，可以使得脉冲的时间常数大大减小，可有效的维持细胞的活性。
并联了PC模块后，时间常数取决于该模块的电阻，电阻越小，那么放电的时间也就越短。
2. Square Wave（方波）对于某些细胞而言，采用指数波进行实验特别容易导致细胞的死亡。
对于这种细胞而言，采用方波的形式来进行电穿孔既可以进行有效的转染，又可以很好的保护细胞，维持细胞的活性。
Bio-radMicroPulser电穿孔仪中文说明书
MicroPulser 电穿孔仪操作手册2018 年12 月27 日1、介绍（1 ）基本原理MicroPulser 电穿孔仪用于细菌、酵母和其他众多微生物的电击转化，转化时，高压电脉冲作用于悬浮在小体积高阻介质中的样品。
本系统由一个脉冲发生器（pulse generator ）模块、一个电击腔（shocking chamber ）和一个装有电极的电击杯（cuvette ）组成。
样本放置于电击杯的电极之间。
MicroPulser 模块包含一个电容器，将电容器充电至高电压，然后模块将电容器中的电流放电到试管中的样品中。
MicroPulser 的电容放电电路产生具有指数衰减波形的电脉冲，如下图。
当电容器放电至样品时，跨越电极的电压迅速上升至最大电压（or 峰值电压，peak voltage ；也称为初始电压，Vo ），并随时间（t ）减小，如下式：其中τ=R · C，为时间常数，是脉冲长度的简便表达式。
R 为电路电阻，单位为ohms （欧姆）。
C 为电容，单位为microfarad （微法拉）。
根据方程1 ，τ是电压下降至峰值电压1/e （~37% ）的时间。
MicroPulser 的内部电路被设计以使E.coli 、酿酒酵母及其他许多微生物可以得到最佳电穿孔，最佳转化效率发生在大约5ms 的时间常数内。
这些电穿孔条件是通过使用10 微法拉电容器和将600 欧姆电阻与样品池并联以及将30 欧姆电阻与样品池串联来实现的。
除时间常数外，电场强度是另一个决定转化效率的重要参数。
电场强度E，是施加于电极间的电压，公式为：其中，V 为施加的电压，d 为电极间的距离，单位为cm 。
电场强度和细胞的尺寸（size ）决定了横贯每个细胞的电压降，正是电压降可能是电穿孔中电压效应的重要表现。
30 欧姆串联电阻的目的是在发生电弧的情况下保护设备电路。
在正常操作条件下，当样本在高电阻介质中，电阻不会影响施加在样本上的电压。
穿孔机技术参数
穿孔机（DX703-1625型）技术参数表机床加工操作过程一.开机准备接上380V.50HZ电网电源，将面板上的急停开关顺时针旋一下，使之弹出，合上左侧总开关，则整机带电，风机运行。
检查工作液桶中装满工作液，废液桶清空，在不装密封圈及电极的情况下，开水泵直至水从转夹头流出，然后关掉水泵，进行下一步操作。
二.装夹工件、电极1.用手动上下开关让主轴处于合适位置。
2.用压板、T型螺杆将工件固定在工作台上，不能松动。
3.根据电极直径选择相应的密封圈。
三.加工1.根据电极直径、电极工件材料和对加工表面粗糙度、加工效率等，设置好脉冲参数和加工电流（详见推荐使用参数表）2.检查放电回路连线及工作液管路是否连接可靠。
3.通过移动拖板将工件移至所需位置，使电极对准加工位置（打孔处）。
手摇二次行程拖板的手柄，使导向器下移至离工件表面5mm处。
同时打开旋转头控制键，使旋转头转动。
4.打开工作液泵工作，查看其压力表并调节压力阀，使压力在6MPA，在电极出口的处的工作液射出有力。
5.打开脉冲电源开关键，开启加工电源，电压表约在85V。
6.将自动加工开关打开，Z轴会自动向下进给，当电极与工件之间的距离小到放出火花时，说明加工已经开始。
然后调节伺服旋钮，使主轴运行稳定，电压表读数在15V 左右。
7.在加工过程中查看加工状态，若有频繁短路，电压表读数跳动厉害，则应手动操作，调整调节旋钮，使主轴抬起，观察工作液的喷射情况及电极端部损耗是否均匀。
然后加以适当的处理。
8.穿孔后，会在工件下端面的孔口处看见火花及喷水。
欲使孔的出口较好，则加工时间要适当延长。
9.加工结束后，关闭脉冲开关有工作液泵，Z轴自动回升。
当电极完全退出加工的孔后，将自动加工开关关闭，主轴锁停；再将导向器抬起，卸下工件。
四.关机确认不再加工后，将水泵高频开关关闭，然后将总开关关闭，切断总电源，清洁工作台面及擦拭机床。
加工参数选择表普通钢（用黃铜电极）1.旋转头漏水⑴若旋转头泄流孔只是轻微渗水，不影响加工，属正常情况，可不必理会⑵若旋转头泄流孔漏水较多，使电极出水口压力明显不足则必须更换密封组件。
电穿孔简介
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目录
• 电穿孔技术概述 • 电穿孔技术原理 • 电穿孔技术实验及数据分析 • 电穿孔技术优缺点及改进方案 • 电穿孔技术前景展望及未来发展趋势
01
CATALOGUE
电穿孔技术概述
技术定义
电穿孔技术是一种基于电场作用，在细胞膜上 形成瞬时孔道，从而改变细胞膜通透性，实现 物质跨膜转运和细胞融合的技术。
03
近年来，电穿孔技术的研究更 加深入，应用领域也更加广泛 。
技术应用领域
基因导入
电穿孔技术可将外源基因导入细胞内 ，为基因治疗和基因疫苗制备提供有 效手段。
药物输送
通过电穿孔技术，可将药物准确送达 靶细胞，提高药物治疗效果和降低副 作用。
疫苗制备
电穿孔技术可用于制备亚单位疫苗和 基因工程疫苗，提高疫苗的安全性和 有效性。
• 电穿孔（Electroporation）是一种基于电场诱导的细胞 膜可逆性穿孔技术，通过施加高强度电场，使细胞膜产生 可逆性穿孔，从而实现细胞膜的通透性改变、细胞内外的 物质交换以及细胞融合等生物效应。
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它利用高强度电场脉冲在细胞膜上诱导产生可 逆性孔道，允许原本不能透过细胞膜的物质进 入细胞内。
电穿孔技术可用于基因导入、药物输送、疫苗 制备等领域，具有高效、安全、可控等优点。
技术发展历程
01
电穿孔技术的发展经历了数十 年的研究历程，最早可追溯到 20世纪70年代。
02
早期的研究主要集中在实验室 内的基础研究，随着技术的不 断发展和完善，逐渐应用于临 床研究和实际应用。
04
CATALOGUE
电穿孔技术优缺点及改进方案
电穿孔技术优缺点及改进方案
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多功能电穿孔系统
1、工作条件：
电源：100 – 120 VAC or 220 – 240 VAC, 50/60 Hz.
功率：最大240W
室温：0 - 35︒C,
相对湿度：0 – 95%, (non-condensing)
2、总则用于原核和真核细胞电转化
3、详细技术指标及规格：
3.1 系统配置：带有方波输出功能的主机、原核细胞组件及哺乳动物细胞组件，0.1/0.2/0.4cm电激转
化杯。
该细胞转化仪用于原核细胞、真菌以及哺乳动物细胞的电击转化试验，包括外源DNA导入和细胞融合等。
技术要求和参数：
*（1）系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。
（2）输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。
*（3）电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。
500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。
（4）电阻（并联）：50 – 1,000 Ω以50 Ω递增，及无限大设置
*（5）样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω
在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω
（6）方波放电时间：10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增，
持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，
可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔
500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，
可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔
（7）主机：
输出波形：指数衰减和方波两种输出波形
输出电压; 200 – 3,000伏
放电容量：10, 25, 50 μF，三档调节
样品电阻：最小20 Ω，在10 – 2,500 V档位，
最小600 Ω，在2,500 – 3,000 V档位，
方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，
可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔
*实验方法预存：24种程序预设，方便用户优化自己的实验条件
用户自定义方法储存：最多144个程序方便用户储存自己的实验方法。
脉冲波形检测：实时监测并显示脉冲波形。
（8）原核细胞系统
*输出波形：指数衰减或方波
输出电压; 200 – 3,000伏
放电容量：10, 25, 50 μF
*样品电阻：在10 – 2,500 V ，20 Ω最小
在2,500 – 3,000 V，600 Ω最小
*方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms以0.05 ms递增，
1 –
2 次脉冲，5 sec 最小间隔
（9）哺乳动物系统:
*系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。
输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。
电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。
500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。
*样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω
在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω
*方波放电时间：
10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增，
持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔
500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔
系统附件及消耗品
*** 电击杯：0.1cm，50个/包
0.2cm，50个/包
0.4cm，50个/包
技术服务要求
1.设备安装调试: 在买方指定的地点完成安装调试，并配合买方进行测试验收。
2.质保期为验收合格后整机保修12月，终身维修，质保期外只收硬件成本费。
3.维修响应时间: 接到维修通知后，1个工作日内作出响应，3个工作日内到场排除故障。
4.交货地点：用户指定位置。
注：该设备办理免税，如不能办理免税，所有费用由中标公司承担。