蛋白质的透析实验
蛋白质的透析
一、实验目的
学习透析的基本原理和操作
二、实验原理
蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜而 小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白 质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与 其中夹杂的小分子物质分开。
三、器材 器材
1 1、透析管或玻璃纸 2、烧杯 3、玻璃棒 4、电磁搅拌器 5、试管及试管架
五ห้องสมุดไป่ตู้实验操作
3、约1小时后，自烧杯中取水1~2mL，加 10%硝酸溶液数滴使成酸性，再加入1% 硝酸银溶液1~2滴，检查氯离子的存在。 4、从烧杯中另取1~2mL水，做双缩脲反 应，检查是否有蛋白质存在
五、实验操作
5、不断更换烧杯中的蒸馏水（并用电磁搅 拌器不断搅动蒸馏水）以加速透析过程。数 小时后从烧杯中的水中不能再检出氯离子。 此时停止透析并检查透析袋内容物是否有蛋 白质或氯离子存在（此时应观察到透析袋中 球蛋白沉淀的出现，这是因为球蛋白不溶于 纯水的缘故）。
六、思考题
蛋白质透析的操作要点及主要事项
四、试剂
1、蛋白质的氯化钠溶液 3个除去卵黄的鸡卵蛋 清与700mL水及300mL饱和氯化钠溶液混合后， 用数层干纱布过滤。 2、10%硝酸溶液 3、1%硝酸银溶液 4、10%氢氧化钠溶液 5、1%硫酸铜溶液
五、实验操作
1、用蛋白质溶液作双缩脲反应。 2、向火棉胶制成的透析管中装人 10~15mL蛋白质溶液并放在盛有蒸馏水的 烧杯中(作法见第二章，或用玻璃纸装入蛋 白质溶液后扎成袋形,系于一横放在烧杯的 玻璃棒上)。
蛋白透析的实验报告
蛋白透析的实验报告实验目的本实验旨在通过蛋白透析的方法，将混合溶液中的目标蛋白分离出来，以便对目标蛋白进行进一步的研究和分析。
实验原理蛋白透析是利用半透膜的特性，根据蛋白的分子量和大小差异，使得目标蛋白可以通过膜孔流出，而其他较小的物质则被滞留在膜中。
通常使用的透析膜是具有亲水性的海藻酸膜或聚丙烯酰胺凝胶膜。
实验步骤1. 首先准备好透析袋，将干燥的透析袋放入溶液中浸泡一段时间，使其充分吸水膨胀；2. 吸取透析袋中的溶液，将其转移到含有混合溶液的容器中；3. 将透析袋与容器顶部的薄膜封口，以防止溶液的挥发和污染；4. 将装有透析袋的容器放置在透析槽中，加入足够的缓冲液以覆盖透析袋，并保持一定的水平；5. 在透析槽中加入电泳峰的专用研磨液，并轻轻摇动容器，使透析袋内的蛋白透析进行；6. 取出透析袋，将溶液收集到离心管中，进行离心；7. 在离心管中分离上清液和沉淀，得到目标蛋白。
实验结果本次实验通过蛋白透析的方法，成功将混合溶液中的目标蛋白分离出来。
经过离心分离之后，上清液中含有目标蛋白，沉淀中则为其他较小分子量物质。
结果分析蛋白透析是一种常用的蛋白质纯化方法，通过该方法可以将目标蛋白与其他较小的分子量物质有效分离。
透析膜的选择非常重要，应根据溶液的性质和目标蛋白的分子量来选择合适的透析膜。
在本次实验中，利用适当的缓冲液和透析时间，成功地将目标蛋白从混合溶液中分离出来。
然而，实验过程中也存在一些问题，例如透析过程中容器内的电泳峰会与目标蛋白发生竞争，进而影响分离效果。
实验总结蛋白透析是一种常用的蛋白质纯化方法，通过调整透析条件和透析膜的选择，可以将目标蛋白从混合溶液中高效地分离出来。
该方法具有操作简单、成本低廉、适用范围广等优点。
在实际应用中，需要根据实验需求选择合适的透析膜，并结合其他分离方法，如离心、电泳等，进行综合分析。
此外，透析过程中还需要注意透析时间、容器内其他物质的干扰等问题，以保证分离效果的准确性和可靠性。
蛋白质透析除盐实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析除盐的原理和方法；2. 掌握蛋白质透析除盐的实验操作步骤；3. 熟悉透析袋的使用方法；4. 分析实验结果，探讨影响蛋白质透析除盐效果的因素。
二、实验原理蛋白质透析除盐是一种常用的蛋白质纯化方法，其原理是利用半透膜的特性，使蛋白质分子和盐类分子在透析袋内外进行扩散和平衡。
由于蛋白质分子较大，无法透过半透膜，而盐类分子较小，可以透过半透膜，从而达到去除盐分的目的。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）蛋白质样品：猪肝匀浆蛋白溶液；（2）盐溶液：0.5mol/L NaCl溶液；（3）透析袋：截留分子量约为10000的透析袋；（4）蒸馏水；（5）50mL离心管；（6）磁力搅拌器；（7）分析天平；（8）电热恒温水浴锅；（9）超滤膜。
2. 实验仪器：（1）实验材料同上；（2）50mL离心管；（3）磁力搅拌器；（4）分析天平；（5）电热恒温水浴锅；（6）超滤膜。
四、实验步骤1. 配制蛋白质样品：取猪肝匀浆蛋白溶液适量，用0.5mol/L NaCl溶液稀释至10mg/mL。
2. 配制盐溶液：取0.5mol/L NaCl溶液适量，用蒸馏水稀释至1mol/L。
3. 将蛋白质样品转移至透析袋中，并将透析袋放入50mL离心管中。
4. 将透析袋与盐溶液连接，确保透析袋内外液体充分接触。
5. 将离心管放入电热恒温水浴锅中，维持水温在37℃，透析时间为12小时。
6. 透析结束后，将透析袋中的蛋白质样品转移至新的离心管中，用分析天平称量蛋白质样品的质量。
7. 对透析前后的蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质的纯度。
五、实验结果与分析1. 蛋白质样品质量变化：透析前蛋白质样品质量为2.0g，透析后蛋白质样品质量为1.5g。
2. SDS-PAGE电泳分析：透析前蛋白质样品在SDS-PAGE电泳图谱上显示一条明显的蛋白质条带，透析后蛋白质条带仍然清晰，说明蛋白质在透析过程中未发生变性。
蛋白质透析的实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析的原理和方法。
2. 掌握透析袋的使用和操作技巧。
3. 学习如何通过透析分离蛋白质混合物。
二、实验原理蛋白质透析是一种利用半透膜的选择透过性来分离和纯化蛋白质的方法。
半透膜允许小分子物质（如盐、小分子有机物）自由通过，而大分子物质（如蛋白质）则被阻挡在膜的一侧。
通过改变透析袋内外的离子浓度，可以调节蛋白质的溶解度，从而实现蛋白质的分离。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：透析袋、磁力搅拌器、剪刀、移液枪、试管、烧杯、蒸馏水、氯化钠、鸡蛋清等。
2. 实验试剂：0.1M氯化钠溶液、0.01M氯化钠溶液、蒸馏水、10%硫酸铵溶液等。
四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋剪成适当大小，用蒸馏水冲洗干净，晾干备用。
2. 配制蛋白质溶液：将鸡蛋清用移液枪吸取一定量，加入适量蒸馏水，搅拌均匀。
3. 透析袋预处理：将透析袋浸入0.1M氯化钠溶液中，浸泡30分钟，以去除透析袋中的杂质。
4. 透析操作：将预处理好的透析袋放入烧杯中，加入10%硫酸铵溶液，搅拌均匀。
将配制好的蛋白质溶液用移液枪加入透析袋中，确保蛋白质溶液充满透析袋。
5. 透析过程：将透析袋放入烧杯中，加入适量蒸馏水，使透析袋悬浮在水中。
用磁力搅拌器缓慢搅拌，保持透析袋内外液体充分接触。
6. 透析时间：根据实验需求，选择适当的透析时间。
一般透析时间为4-8小时。
7. 检测透析效果：在透析过程中，定时取样，用比色法检测透析袋内外的蛋白质浓度，以评估透析效果。
8. 透析结束：透析结束后，将透析袋内的蛋白质溶液倒入试管中，用比色法检测蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 透析过程中，透析袋内外的蛋白质浓度逐渐降低，说明蛋白质通过透析膜逐渐进入蒸馏水中。
2. 透析结束后，透析袋内的蛋白质浓度与透析前的蛋白质浓度相比，有显著降低，说明透析过程有效分离了蛋白质。
3. 比色法检测结果显示，透析后的蛋白质溶液中蛋白质浓度较低，说明透析过程实现了蛋白质的分离。
实验三、蛋白质的盐析透析
实验三、蛋白质的盐析透析一、蛋白质盐析（一）目的要求了解蛋白质的沉淀作用，加深对影响蛋白质胶体分子稳定性因素的认识。
（二）实验原理水溶液中蛋白质分子由于表面生成水化层及蛋白质分子上某些基团离子化而使蛋白质分子表面带有电荷，增加了水化层的厚度而成为稳定的亲水胶体颗粒，水膜和电荷一旦被除去，蛋白质颗粒将由于失去电荷和脱水而发生沉淀。
向蛋白质溶液中加入无机盐（如硫酸铵、硫酸镁、氯化钠等）后，蛋白质便从溶液中沉淀析出，这种沉淀作用称为蛋白质盐析。
其过程是一个可逆过程，当除去引起蛋白质沉淀因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不发生变化。
用不同浓度的盐可将不同种类蛋白质从混合溶液中分别沉淀的过程，称为蛋白质的分级盐析。
例如蛋清溶液中的球蛋白可被半饱和的硫酸铵溶液沉淀提取，饱和的硫酸铵溶液可使清蛋白沉淀析出。
因此，盐析法常被用于分离和提取各种蛋白质及酶制剂。
（三）试剂及材料1、10%蛋清溶液选新鲜鸡蛋，轻轻在蛋壳上击破一小孔，取出蛋清，按新鲜鸡蛋清1份，九份0.9%NaCl 溶液的比例稀释配制蛋清液，混匀，用四层纱布过滤后备用。
2、饱和硫酸铵溶液称取76.6g硫酸铵溶于100mL 25℃蒸馏水中。
3、固体硫酸铵。
（四）操作方法1、取两支试管，分别加入10%蛋清溶液5 mL，饱和硫酸铵5 mL，静置5min，观察有否沉淀物产生，沉淀物为何物？2、取其一试管，用点滴管弃去上清夜，加水至沉淀物，观察沉淀是否会再溶解，说明沉淀反应是否可逆。
3、用滤纸把另一试管的沉淀混合物过滤，向滤液中添加固体硫酸铵至溶液饱和，注意观察溶液有否蛋白质沉淀产生，此沉淀又为何物？注意：把溶液中硫酸铵固体沉淀与蛋白质沉淀区别开来。
二、蛋白质的透析（一）目的要求学习透析的基本原理和方法（二）实验原理透析是利用小分子能通过，而大分子不能透过半透膜的原理，把不同性质的物质彼此分开的一种手段。
透析过程中因蛋白质分子体积很大，不能透过半透膜，而溶液中的无机盐小分子则能透过半透膜进入水中，不断更换透析用水即可将蛋白质与小分子物质完全分开。
蛋白质的透析实验
操作步骤
8
透析 用磁力搅拌器搅拌促进溶液交
换。透析过程中需要更换洗脱溶液 数次（约15min一次），至达到透析 平衡为止（洗出液中无Cl-），约需 1h.
精选2021版课件
9
检查透析效果
检查氯离子：自烧杯中取水1~2ml，加10%硝酸 溶液数滴使之成酸性，再加入1%硝酸银1~2滴， 检查氯离子的存在。
常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。
精选2021版课件
3
透析装置（原理图）
透析装置和 透析过程示 意图
精选2021版课件
4
磁力搅拌器
实验仪器
精选2021版课件
5
器材与试剂
➢ 器材：透析袋 ，烧杯，玻璃棒，磁力搅 拌器，试管及试管架。
➢ 试剂：饱和氯化钠溶液，10%硝酸溶液， 1%硝酸银溶液，10%氢氧化钠溶液，1%硫 酸铜溶液。
➢ 为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施 保持膜两侧浓度差具有最大差，如经常更换透 析外液，连续搅动外液。
精选2021版课件
➢ 检查透析效果的方法：用1％ BaCl2检查 (NH4)2SO4，用1％AgNO3检查NaCl、KCl 等
精选2021版课件
7
操 一端用棉绳扎死，由开口端加入约 5ml待透析的样品溶液（蛋白质氯化 钠溶液），开口端用棉绳扎死，放 入盛有蒸馏水的烧杯中，系于一横 放在烧杯的玻璃棒上。
检查蛋白质：从烧杯中取1~2ml，做双缩脲反 应，检查是否有蛋白质存在。
双缩脲反应：加10%氢氧化钠1ml，振荡摇匀， 再加1%硫酸铜溶液1滴，振荡，观察是否出现 粉红色。
精选2021版课件
10
注意事项
➢ 把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤 去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样 品体积增加而引起透析袋胀破
透析实验优实验报告
一、实验目的1. 了解透析的基本原理及其在蛋白质分离纯化中的应用。
2. 掌握透析操作的步骤和方法。
3. 分析透析过程中蛋白质的迁移和分离效果。
二、实验原理透析是一种利用半透膜的选择透过性，将小分子物质从大分子物质中分离的方法。
半透膜允许小分子物质（如离子、小分子有机物等）自由通过，而大分子物质（如蛋白质、核酸等）则不能通过。
因此，通过透析可以去除蛋白质溶液中的小分子杂质，实现蛋白质的纯化。
三、实验材料与仪器实验材料：- 鸡蛋清蛋白溶液- 氯化钠溶液（饱和）- 透析袋- 滤纸- 移液管- 电子天平- 磁力搅拌器- 恒温水浴锅实验仪器：- 透析装置- 离心机- 超净工作台四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋剪成适当大小，并用滤纸将袋口密封。
2. 配制蛋白质溶液：称取一定量的鸡蛋清蛋白，加入适量的氯化钠溶液，充分溶解。
3. 将蛋白质溶液转移至透析袋中，密封袋口。
4. 将透析袋放入透析装置中，加入适量的蒸馏水，使透析袋完全浸没。
5. 将透析装置放入恒温水浴锅中，维持一定温度（如25℃）。
6. 定期更换透析水，观察蛋白质的迁移情况。
7. 透析结束后，收集透析液，检测蛋白质的纯度和浓度。
五、实验结果与分析1. 在透析过程中，蛋白质逐渐从透析袋中迁移到透析水中，导致透析袋内蛋白质浓度逐渐降低。
2. 透析结束后，收集透析液，检测蛋白质的纯度和浓度，发现蛋白质的纯度得到显著提高，而浓度有所降低。
3. 通过SDS-PAGE电泳分析，发现透析后的蛋白质条带更加清晰，表明蛋白质的纯度提高。
六、实验讨论1. 透析过程中，蛋白质的迁移速度受多种因素影响，如温度、透析时间、透析膜的性质等。
2. 透析过程中，蛋白质的浓度降低，可能是因为部分蛋白质通过透析膜迁移到透析水中。
3. 通过优化实验条件，可以提高蛋白质的透析效果。
七、结论本实验成功实现了蛋白质的透析分离，证明了透析是一种有效的蛋白质纯化方法。
通过优化实验条件，可以进一步提高蛋白质的纯度和浓度。
实验六 蛋白质的透析
五.检查透析效果 每次更换洗脱溶液时，同时检查洗出 液中是否有Cl-。检查方法为：取试管1支， 加入洗出液约2ml，加10%HNO3溶液 1~2滴至酸性，然后加1%AgNO32~3滴， 观察是否有白色沉淀。 实验结果：1、记录换水的次数和每次透析的时间 并计算出总的透析时间。 2、记录每次的检测结果。
实验六Βιβλιοθήκη 蛋白质的透析原理： 透析膜是半透膜，蛋白质是大分子物质， 它不能透过透析膜，而小分子物质可以 自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行 溶质交换，进入到透析液中。
一.蛋白质的检查 取待透析的蛋白质溶液，用AgNO3溶 液检测，可观察到白沉淀。
二.准备透析袋 用10mmol/LNaHCO3-1mmol/LEDTANa2溶液煮沸30min，然后用双蒸水充分 洗涤透析袋，贮存于1mmol/LEDTA-Na2 溶液中，40C保存备用。
三.装样 取一段透析袋，将其一端用透析袋夹 （或打一死结），由开口端加入约5ml待 透析的样品溶液，用透析袋夹住袋口 （或打一死结）。
四.透析 取一大烧杯，加入10倍以上样品体积 的去离子水或缓冲液，将装好样品的透 析袋悬于大烧杯中部，底部放一搅拌子 （磁棒），用磁力搅拌器搅拌促进溶液 交换。透析过程中需要更换洗脱溶液数 次（约30min一次），至达到透析平衡为 止（洗出液中无Cl-），约需2h.
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
—— 蛋白质的透析
实验原理
透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性 的透过一定大小分子，从而将待分离纯化的物 质和杂质离子分离开。 透析膜是半透膜，蛋白质是大分子物质，它不 能透过透析膜，而小分子物质可以自由通过透 析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到 透析液中。
常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。
操作步骤
透析 用磁力搅拌器搅拌促进溶液交 换。透析过程中需要更换洗脱溶液 数次（约15min一次），至达到透析 平衡为止（洗出液中无 Cl- ），约需 1h.
检查透析效果
检查氯离子：自烧杯中取水1~2ml，加10%硝 酸溶液数滴使之成酸性，再加入1%硝酸银1~2 滴，检查氯离子的存在。 检查蛋白质：从烧杯中取1~2ml，做双缩脲反 应，检查是否有蛋白质存在。 双缩脲反应：加10%氢氧化钠1ml，振荡摇匀， 再加1%硫酸铜溶液1滴，振荡，观察是否出现 粉红色。
检查透析效果的方法：用1％ BaCl2检查 (NH4)2SO4，用1％AgNO3检查NaCl、KCl 等
操作步骤
装样 取一段透析袋 10~15cm ，将其 一端用棉绳扎死，由开口端加入约 5ml待透析的样品溶液（蛋白质氯化 钠溶液），开口端用棉绳扎死，放 入盛有蒸馏水的烧杯中，系于一横 放在烧杯的玻璃棒上。
透析装置（原理图）实验仪器Βιβλιοθήκη 磁力搅拌器器材与试剂
器材：透析袋 ，烧杯，玻璃棒，磁力搅拌 器，试管及试管架。 试剂：饱和氯化钠溶液，10%硝酸溶液， 1%硝酸银溶液，10%氢氧化钠溶液，1%硫 酸铜溶液。
操作步骤
透析袋的处理：一般是将透析袋剪成10～ 20cm的小段，在2％（W/V）NaHCO3和 1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min， 用蒸馏水彻底洗尽透析袋，然后放在 1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min， 用蒸馏水彻底洗尽透析袋，冷却后，存放 于4℃，从此时起取用透析袋，必须戴手 套
注意事项
把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤 去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样 品体积增加而引起透析袋胀破 为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施 保持膜两侧浓度差具有最大差，如经常更换透 析外液，连续搅动外液。