ABI Veriti 梯度PCR仪使用说明
ABI-Veriti中文操作说明
ABI Veriti 梯度PCR仪使用说明基因Gene Company Limited（声明：此说明仅供一般操作参考，未经厂家审核也不代表任何技术承诺，请以原版资料为准）操作步骤：1、打开PCR仪的热盖，插入0.2ml的样品管。
盖好热盖。
2、打开PCR仪的电源，仪器程序开始初始化，需等待几分钟。
3、初始化完成后，显示主菜单：4、点“Browse/New Methods”，进入PCR程序列表：5、可以直接点一个PCR程序，选择“Start Run”运行；点右边的符号，可以选择不同的文件夹。
如要新建一个PCR程序，点“New”，出现PCR程序：6、添加一段程序：点中上方的“Stage”位置，该位置变红；再点“Add”，软件将加入一段新的程序。
7、修改循环数、温度、时间：点中循环次数、温度或时间位置，下方出现数字键。
依次点数字键，出现合适数字后，点“Done”确定。
8、增加一个步骤：点“Step”位置，该位置变红；再点“Add”，软件将加入一个新的步骤。
9、删除一个步骤：点“Step”位置，在点“Delete”，软件将该步骤删除。
10、建立梯度模式：1）点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项如下2）点“VeriFlex step”，出现梯度创建窗口：输入6个梯度温度，温度下方的“1－2”是指对应的1、2两行加热孔，全部输好后，点“Done”确定。
注意：相邻的两个梯度温度之差最大不能超过5℃！11、建立渐变模式：1）点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项如下2）点“Auto Delta”，出现渐变模式创建窗口。
点“Staring Cycle”，输入起始循环数；点“Delta Temperature”，输入温度变化值；点“Delta Time”，输入时间变化值。
渐变模式适用于touchdown PCR，可以提高PCR反应的特异性。
例：输入起始循环数为2，温度变化值为＋0.5℃，时间变化值为＋5s，则表示从第2个循环开始，每循环一次升温0.5℃，时间增加5s。
PCR仪使用及维护方法
PCR仪使用及维护方法
1、打开PCR仪开关，输入密码后按Enter键进入主页面。
2、根据自己所PCR基因的特性，设置变性、复性、延伸的温度以及扩增次数和其温度。
3、按下START按钮，进行PCR扩增。
4、扩增完成后，按下Enter键结束PCR过程，并及时取出扩增产物。
5、最后终止反应的降温过程使用10℃即可（建议将所有程序最后一步都改为10℃）
6、使用完毕后清理台面，收拾并带走自己的东西（包括使用过的封口膜，如果有封口膜粘在PCR仪盖子上，一定要及时清理）
7、长时间10℃保存时，取出PCR产物后要及时轻柔擦去盖上的冷凝水。
8、严禁在通风口前放置东西，如果发现有异物在通风口附近，要及时清理。
梯度PCR热循环仪简单操作步骤
梯度PCR热循环仪简单操作步骤1、连接电源,打开开关,让仪器在待机状态保持10分钟左右。
2、在待机状态下，按“exit”键直接进入编辑文件状态。
设置第1个程序单元Unit 1，先设置循环数Cyc.,此时循环数框格处的“0”在闪烁，按“数字健”输入所需循环数，按“enter”键确认。
3、接下来进入第1程序单元的第1节温度和时间设置，此时温度栏内的数字“0”在闪烁，按“数字键”输入所需温度后并按“enter”确认；温度设置好后，光标自动跳到时间栏内，并且时间栏内的数字“0”在闪烁，按“数字键”输入时间并按“enter”确认。
4、接着进入第1程序单元的第2节温度时间设置，此时温度栏内的数字0在闪烁，按“数字键”输入所需温度后并按“enter”确认；温度设置好后，光标自动跳到时间栏内，并且时间栏内的数字“0”在闪烁，按“数字键”输入时间并按“enter”确认。
5、如果要终止第1程序单元的设置，将第3节的温度和时间都设置为0并按“enter ”键。
6、第1程序单元各节温度和时间设置完成后，仪器将提示您是否选择温度和时间修饰功能。
用键和键，选择“Yes”或“No”。
选择“Yes”，则仪器将执行温度和时间自动递增或递减。
选择“No”，则关闭此功能。
7、进入温度和时间修饰功能以后，按“+/－”键和“数字键”输入每次循环第一节递增或递减的温度和时间（其中“+”表示递增，显示时省略；“－”表示递减）。
如第1节每次循环温度增加0.2C，时间增加2S。
按“+/－”键和“数字键”输入每次循环第二节递增或递减的温度和时间（其中“+”表示递增，显示时省略；“－”表示递减）。
如第2节每次循环温度减少0.3C，时间减少3S. 进入第2程序单元的设置，按“数字键”，输入循环次数，再按“enter”键. 进入第2程序单元的第1节温度时间设置，此时温度栏内的数字0在闪烁，按“数字键”输入温度后并按“enter”确认；温度设置好后，光标自动跳到时间栏内，并且时间栏内的数字0在闪烁，按“数字键”输入时间并按“enter”确认。
PCR仪使用说明及注意事项
PCR仪使用说明及注意事项开机：PCR仪的开关在仪器的背面将开关打开后仪器显示如下界面F1（Run）选择一个程序并开始运行；F2（Create）Ｆ3（Ｅdit）建立一个新程序或修改已有程序；Ｆ４(Ｕtil) 查看仪器最后运行的程序；Ｆ５（Ｕser）建立、编辑或删除新用户。
建立新用户：选择Ｆ５选择Ｆ２用户名可以用字母、数字或它们的组合命名，通过方向键选择字母、通过数字键选择数字。
命名完成后选择Ｆ１，用户名建立完成。
程序设置：1、新建程序选择用户名后，选择Ｆ２通过光标移动及数字键设定程序的各个参数（包括各反应阶段的事件、温度及循环数），完成后选择Ｆ２储存程序，出现以下界面，选择Ｆ３为程序命名选择Ｆ１保存。
２、编辑程序：在主菜单的界面下选择Ｆ２，选择需要编辑的程序选择Ｆ１编辑编辑完成后，选择Ｆ２保存程序信息。
运行程序：在主菜单下选择Ｆ１，然后选择运行的程序选择Ｆ１在此界面下需确定样品的体积，选择Ｆ１开始运行。
程序运行结束后出现以下界面退出到主菜单，取出样品并关闭电源。
注意事项：1、使用PCR仪需提前预订，预订的程序要标明退火温度和延伸时间：如果不用要及时取消或通知接下来要做的人。
2、不得无故拖延反应开始的时间，如无故拖延超过半小时，该时间段即刻取消，其他同学可协商使用。
3、PCR反应结束后请及时收取PCR产物，或交代同学及时帮忙收取。
若后续反应不能及时跟上，请务必关机！因为开机状态下，热盖将持续工作，长此以往，热盖容易损坏。
4、PCR反应最后一步请务必设置为：16℃，2 min。
（切忌4℃，∞，避免压缩机过度耗损！）5、PCR仪不能同一温度设置较长时间，16℃３小时。
6、PCR仪不能开机运行过夜。
PCR仪操作指南
PCR仪操作指南
引言：
PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，用于检测和扩
增特定DNA序列。
PCR仪是进行PCR实验的必备设备之一，本操作指南将
详细介绍PCR仪的使用流程和操作注意事项，旨在帮助使用者正确操作PCR仪，提高实验的成功率。
一、实验前的准备工作：
1.根据实验需要，选择合适的引物，设计PCR反应体系。
2.准备好PCR反应物，包括DNA模板、引物、核酸酶、脱氧核苷酸三
磷酸、聚合酶等。
3.根据PCR仪的使用手册，检查设备的工作状态，保证设备正常运行。
4.准备PCR反应管，确保干净无污染。
二、操作步骤：
1.打开PCR仪电源，启动设备。
根据使用手册，设置合适的温度和时
间参数，并选择合适的热启动模式（立即开始或延迟开始）。
2. 调整PCR仪的温度设置。
根据PCR实验需要，设置热循环的温度
范围和时间参数，包括Denaturation（变性）、Annealing（退火）和Extension（延伸）步骤的温度和时间。
3. 预热PCR仪至所需的初始温度。
根据实验需要，将PCR仪的温度
调整至Denaturation步骤所需的温度（通常为95℃）。
4.添加PCR反应物至PCR反应管中。
按照预先设计的PCR反应体系，
将DNA模板、引物、核酸酶、脱氧核苷酸三磷酸、聚合酶等加入PCR反应
管中。
5.将PCR反应管放置在PCR仪的样品架中。
确保PCR反应管放置稳定，避免管内反应物溢出。
6.关闭PCR仪的上盖。
ABI测序仪简易使用20100106
评估定位结果: 各道的信号高度应该相差不大，间隔均一 96道毛细管一般为5或6，允许范围为4～8 48道毛细管为9～11） 确认所有毛细管都有信号
光谱校正
• 从图可以看到，四（或五）色荧光检 测系统的本质是检测四（或五）种荧 光素在其中心发射波长处的信号。由 于每一种荧光素的发射光谱不是锐线 光谱，而是 一种有一定宽度分布的光 谱带。所以一个纯荧光除在它自己光 谱的中心波长处能采 集到信号N1外， 在其他荧光信号光谱的中心波长处亦 能检测到信号而产生信号重叠。为了 校准信号重叠，需知道一种荧光信号 在其他荧光信号处产生的重叠系数。 所以，我们用四（或五）条不同长度 的ＤＮＡ片断分别标记上不同的荧光 素来计算这些系数。
建立新的Analysis Protocol
Plate Manager：如何建立新的上样板
样品准备与上机
运行上样板
如何控制运行的程序
开始运行一个Run的程序
停止当前运行的板号 和 停止Run Scheduled中其他等待运行的板号 完成当前运行的板号 和 停止Run Scheduled中其他等待运行的板号 停止当前运行的板号 和 继续运行Run Scheduled中其他等待运行的板号
ABI公司 DNA测序仪器的应用
仪器硬件构造 3730XL
各部件功能
电源开关 打开或关闭仪器电源
照明灯开关
进样器按钮 阳极缓冲液杯
打开或关闭仪器内部的照明灯
使进样器抓取缓冲液槽到毛细管针端（或相反） 内装67毫升1X缓冲液，电泳时作为阳极介质 装1X缓冲液，电泳时作为阴极介质 装双蒸水，清洗毛细管用 装双蒸水，灌胶时盛放废胶 泵入胶并将其灌入毛细管 上装有阳极，阳极缓冲液杯装在此处 保证毛细管束的温度均一性和稳定性
PCR仪使用说明
PCR仪使用说明步骤：1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单：“-RUNENTER PROGRAM PROGRAM”准备执行程序。
2、放入样本管，关紧盖子。
3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：“-ENABLE DISABLE HEATED LID” 按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。
4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM，按《Proceed》，屏幕显示“-NEW LIST EDIT DELET”，按《Proceed》，1）选择NEW，命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认。
2）输入程序步骤：名字输入后，显示“STEP1 _TEMP GOTO OPITON END”，按《Proceed》则可以输入温度（0～100℃），按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上。
3）选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步（循环数最多可达9999次）（为实际循环数-1)。
4) 选择option，显示“STEP EXTENDI NCREMENT SLOPE”再选择increment，按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值（-0.1℃～6℃），按《Proceed》确认。
选择extend，按《Proceed》确认，输入每个循环增加或减少的时间（-60～60秒），按《Proceed》确认。
选择slop（指温度上升或下降的速率），输入温度的改变值（-0.1～1.5℃）按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认。
ABI梯度PCR仪参数 3
ABI Veriti 梯度PCR:
招标参数：
1、★原装进口
2、样品容量:96x0.2mL；具防蒸发样品保护
3、温度范围：4.0-99.9℃，控温精确到0.1℃。
4、BLOCK加热冷却速度：平均升降温速度≥5.0℃／秒
5、样品加热冷却速度：平均升降温速度≥4.25℃／秒
6、温度精确性: ≤±0.25℃(35-99.9℃)
7、温度均一性:＜0.5℃(到达95℃后20秒)
8、基于触摸屏的菜单；彩色触摸屏大小≥16cm
9、存储程序大小≥800个，带USB接口
10、★可达独立控温区域≥6个,同时运行不同反应程序≥6个；
11、菜单为在线导航式帮助菜单；有记忆功能，断电后再启动可完成未完成程序。
12、★快速模式: ≤25分钟完成PCR反应
13、★温度梯度设置范围: ≥25℃(相邻区间温差可达5℃整块板上最大温差可
达25℃)。
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ABI Veriti 梯度PCR仪使用说明
哈尔滨德远科技开发有限公司
操作步骤：
1、打开PCR仪的热盖，插入0.2ml的样品管。
盖好热盖。
2、打开PCR仪的电源，仪器程序开始初始化，需等待几分钟。
3、初始化完成后，显示主菜单：
4、点“Browse/New Methods”，进入PCR程序列表：
5、可以直接点一个PCR程序，选择“Start Run”运行；点右边的符号，可以选
择不同的文件夹。
如要新建一个PCR程序，点“New”，出现PCR程序：
6、添加一段程序：点中上方的“Stage”位置，该位置变红；再点“Add”，软件将
加入一段新的程序。
7、修改循环数、温度、时间：点中循环次数、温度或时间位置，下方出现数字键。
依次点数字键，出现合适数字后，点“Done”确定。
8、增加一个步骤：点“Step”位置，该位置变红；再点“Add”，软件将加入一个新的步骤。
9、删除一个步骤：点“Step”位置，在点“Delete”，软件将该步骤删除。
1）点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项如下
2）点“VeriFlex step”，出现梯度创建窗口：
输入6个梯度温度，温度下方的“1－2”是指对应的1、2两行加热孔，全部输好后，点“Done”确定。
注意：相邻的两个梯度温度之差最大不能超过5℃！
1）点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项如下
2）点“Auto Delta”，出现渐变模式创建窗口。
点“Staring Cycle”，输入起始循环数；点“Delta Temperature”，输入温度变化值；点“Delta Time”，输入时间变化值。
渐变模式适用于touchdown PCR，可以提高PCR 反应的特异性。
例：输入起始循环数为2，温度变化值为＋0.5℃，时间变化值为＋5s，则表示从第2个循环开始，每循环一次升温0.5℃，时间增加5s。
12、增加暂停步骤：
1）点中一个步骤，再点“Option”键，出现选项如下
3）点“Pause”，出现如下窗口。
输入暂停的起始位置，暂停间隔和暂停时间，点“Done”确定。
上图表示每隔10个循环暂停10s，在10个循环的第1个循环之前暂停。
13、编辑PCR程序完成后，点“Save”保存。
点“Run Method”，输入PCR程序名称；点，选择保存PCR程序的文件夹（如果要保存在USB文件夹中，需要先插U盘）。
再输入反应体积和热盖温度（这两项在运行程序时可以修改）。
点“SaveδExit”确定。
14、回到PCR程序列表界面，选择新建的PCR程序。
15、点“Start Run”，出现运行参数设置窗口
输入反应体积和热盖温度，点“Start Run Now”开始运行PCR程序。
16、仪器运行选中的PCR程序，显示运行监视窗口。
A-运行状态栏，显示运行温度和剩余时间
B-加热警示标记C- 阶段指示
D- 步骤温度E- 步骤时间F- 步骤指示
C-状态报告，显示日期、时间和仪器状态
D-延伸箭头，点箭头可以显示更多的步骤
16、暂停运行：
点“Pause Run”，仪器暂停，出现暂停选项栏
“Remaining Time”显示暂停剩余时间，“Elapse Time”显示已暂停时间。
如果需要修改暂停时间，点，输入时间值，点“Done”确定；点“Resume Run”，结束暂停，继续运行PCR程序。
17、终止运行：点“Stop”可以终止整个PCR程序。
18、反应报告：
PCR程序结束后，仪器会自动生成反应报告，显示当次反应的各项指数。
该报告可以保存和打印。
19、PCR反应结束后，打开热盖，取出样品，关闭仪器电源。
并开盖放置，使热盖和加热模块正常降温。
应用软件使用
一、使用9700模式运行PCR程序
Veriti和9700具有不同的升降温控制模式，但是在Veriti中可以通过模式转换，使仪器运行9700的升降温模式。
对于已在9700上摸索好的PCR程序，可以直接在Veriti 上运行，不用再修改反应条件。
1、在主菜单，点“Tools Manu”，
2、点“Convert a Method”，
3、选中“9700 Max Mode”，点箭头
输入9700上的PCR反应条件，设定PCR程序，点箭头
4、在保存程序窗口，输入名称，选择文件夹保存程序。
5、回到PCR程序列表界面，选择新建的9700模式PCR程序，运行程序。
二、Tm值计算
1、在主菜单，点“Tools Manu”，
2、点“Calculate Tm”
3、输入盐浓度和引物浓度，在“Primer 1 Sequence”和“Primer 2 Sequence”分别输入引物的序列，再点“Calculate”，软件计算显示Primer 1和Primer 2的Tm值。