菌种活化方法
菌种活化_操作方法
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化A. 低温保存管之临时存放及解冻1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。
2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。
3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。
4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。
B. 菌株活化: 在无菌操作下1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。
2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
C. 划线法1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。
2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。
3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。
4. 灼烧接种环，将接种环归位。
D. 图示（1）金属接种环（2）平板划线法冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。
2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
4、( a ) 适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
菌种的活化操作步骤
菌种的活化操作步骤
菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。
菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。
要明白菌种活化的情况就需要了解菌种保藏的方式和方法。
目前国际国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。
对于不同的保存方式活化的方式也不同：
1、定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可。
2、液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。
3、沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。
或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。
菌种活化步骤
菌种活化步骤
日期：2007-6-26 18:31:28 点击次数2519 发布单位：EM 录入：李清
一、安瓿瓶装微生物菌种开封
1-1、用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿瓶。
1-2、用火焰将安瓿瓶口加热灭菌。
1-3、用镊子将铝封口撕开。
二、菌株恢复培养
2-1、用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。
2-2、取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下培养。
三、注意事项
3-1、菌种活化前，请将安瓿瓶保存在5-10℃的环境下。
3-2、厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。
3-3、某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。
四、制作ＥＭ菌液
4-1、菌种活化:用ＥＭ菌种10克、红糖0.1公斤（红糖先用热水溶化），加入1公斤的水。
注：（先把水加热到100°C后加入红塘或白糖，而后继续加热5分钟。
冷却到40°C时加入ＥＭ菌种），密闭发酵(35°C-40°C温度)下活化3天，打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。
可以作为液体菌种使用。
4-2、制作原液：将活化好的液体菌种加入二级发酵罐。
菌种——二级发酵罐(密闭) (加水比例:按1:10的比例加入) 二级发酵液:（10%的无菌糖水！0.1%琼脂粉！温度35-40度！发酵5-7天！）成品发酵液标准（气味：酸甜！PH值：4.0-5.0！活菌含量：100亿/ml ！）。
蘑菇接种培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在掌握蘑菇接种和培养的基本技术，了解蘑菇的生长习性，提高对蘑菇菌种和培养基的认识，为今后蘑菇栽培提供理论依据和技术支持。
二、实验材料1. 实验仪器：无菌操作台、酒精灯、接种针、培养皿、试管、恒温培养箱、显微镜等。
2. 实验材料：蘑菇菌种（如平菇、香菇、金针菇等）、PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）、无菌水、生石灰、脱脂棉等。
三、实验方法1. 菌种活化（1）将蘑菇菌种取出，用无菌水清洗表面，然后用无菌脱脂棉擦干。
（2）将菌种接种到PDA培养基平板上，放入恒温培养箱中，在适宜温度下培养。
（3）观察菌落生长情况，当菌落生长旺盛时，即可用于接种培养。
2. 接种培养（1）将活化后的菌种接种到装有新鲜PDA培养基的试管中，放入恒温培养箱中培养。
（2）定期观察菌丝生长情况，当菌丝长满试管时，即可进行转接培养。
3. 转接培养（1）将长满菌丝的试管取出，用无菌水清洗表面，然后用无菌脱脂棉擦干。
（2）将菌丝接种到装有新鲜PDA培养基的培养皿中，放入恒温培养箱中培养。
（3）观察菌落生长情况，当菌落生长旺盛时，即可进行出菇培养。
4. 出菇培养（1）将长满菌丝的培养皿取出，用无菌水清洗表面，然后用无菌脱脂棉擦干。
（2）将菌丝接种到装有新鲜培养基的菌袋中，放入出菇室中培养。
（3）观察出菇情况，当菌丝长满菌袋，出现菇蕾时，即可收获。
四、实验结果与分析1. 菌种活化菌种在PDA培养基平板上生长良好，菌落生长旺盛，无污染现象。
2. 接种培养接种后的试管菌丝生长迅速，菌丝呈白色，菌丝体粗壮，无污染现象。
3. 转接培养转接后的培养皿菌丝生长良好，菌落生长旺盛，无污染现象。
4. 出菇培养出菇培养期间，菌丝长满菌袋，出现菇蕾，菇蕾生长旺盛，无污染现象。
五、实验结论通过本次实验，掌握了蘑菇接种和培养的基本技术，了解了蘑菇的生长习性。
实验结果表明，蘑菇菌种在适宜的条件下生长良好，出菇效果显著。
在今后的蘑菇栽培中，应根据蘑菇的生长习性，优化接种和培养条件，提高产量和品质。
甘油菌菌种活化步骤,甘油菌怎么保存
甘油菌菌种活化步骤，甘油菌怎么保存1、LB培养基制备：准备10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化钠，加入800ml去离子水，拌匀，直至完全溶解，然后用0.2ml氢氧化钠（5mol/L）将ph调节到7.4，并加入1L去离子水，高压蒸汽灭菌。
2、倒平板：培养基放置在60°C水浴锅中保温，取出后，轻轻转动培养基，让琼脂分布均匀。
一、甘油菌菌种活化步骤1、LB培养基制备（1）准备10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化钠，然后加入800ml去离子水，搅拌均匀，直至完全溶解，接着使用0.2ml的氢氧化钠（5mol/L）将ph调节到7.4左右，并加入1L的去离子水，高压蒸汽灭菌20分钟左右。
（2）在高压灭菌之前，应当加入15g/L（铺制平板用）或7g/L （配制顶层琼脂糖用）的琼脂糖。
2、倒平板（1）超净台、接种环、培养皿，酒精灯等用紫外线灭菌30分钟左右。
（2）高压灭菌后的培养基放置在60°C的水浴锅中保温，等到溶液尚未冷却的时候，将培养基取出，轻轻转动，让琼脂均匀分布在培养基溶液中。
（3）等到冷却至50°C的时候，在超净台中加入抗生素，并旋转将培养基混合均匀，然后从烧瓶中倾出培养基铺制平板。
（4）将甘油菌冻存管放在冰上，直接用接种环在冻存管内的冰渣上蘸一下，然后涂上平板。
3、大量培养（1）将冷藏的液态培养基重新高温高压灭菌，等到冷却至50°C 的时候，加入抗生素，接着将菌落挑至已经加入抗生素的液态培养基中（2-5ml），37°C，200rpm培养8小时左右。
（2）按照1：500-1000的比例，将添加了抗生素的液态LB培养基稀释上一步骤所得菌液（20-25μL菌液+25ml液态LB培养基），37°C，200rpm培养12-16小时。
二、甘油菌怎么保存1、如果是20%甘油保存菌种（甘油：菌液=20：80），一般放置在零下70°C的环境下保藏。
活化菌种的方法
活化菌种的方法菌种是微生物学研究中非常重要的一部分，它们可以用于制备各种发酵产品，如酸奶、酒、酱油等。
但是，菌种经过一段时间的保存后，会出现休眠或死亡的现象，这就需要进行活化处理，使其恢复生命活力。
本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。
一、温度法温度法是最常用的活化菌种方法之一。
该方法是将被保存的菌种移至适宜的温度环境下进行培养，使其恢复生命活力。
具体方法是将菌种从冰箱中取出，放置于适宜的温度环境中进行培养。
一般情况下，大多数菌株的培养温度为30℃左右。
二、营养法营养法是通过添加适当的营养成分来活化菌种。
该方法适用于营养成分缺乏、菌种处于休眠状态的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有适量营养成分的培养基中进行培养。
常用的营养成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨等。
三、pH法pH法是通过改变培养基的pH值来活化菌种。
该方法适用于菌种处于休眠状态、培养基酸碱度不适宜的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到pH值适宜的培养基中进行培养。
一般情况下，大多数菌株的适宜pH值为6.5-7.5。
四、氧气法氧气法是通过调节培养环境氧气含量来活化菌种。
该方法适用于需氧菌株、培养环境氧气含量不足的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有适量氧气的培养基中进行培养。
常用的氧气供应方式包括摇床培养和搅拌培养。
五、复苏法复苏法是通过多种活化手段的组合来活化菌种。
该方法适用于菌种处于极度休眠状态、多种单一活化手段无法恢复生命活力的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有多种活化成分的培养基中进行复苏培养。
常用的活化成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨、氧气等。
总之，活化菌种是菌种保存和利用中的重要环节。
选择合适的活化方法可以使菌种恢复生命活力，保证其在后续的利用中发挥更好的作用。
活化菌种的方法
活化菌种的方法菌种的活化是指将冷冻、干燥或其他方式保存的菌种重新复苏，使其具有生物活性和生长能力的过程。
活化菌种的方法有很多种，根据菌种的特点和保存方式的不同，选择不同的方法进行活化。
本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。
一、液体培养法液体培养法是一种简单、易操作的活化菌种方法。
首先将保存的菌种接种到含有适当营养成分的液体培养基中，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
液体培养法的优点是适用范围广，可以用于多种菌种的活化，且容易控制生长条件，可以获得较高的活化率。
但液体培养法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
二、固体培养法固体培养法是将保存的菌种接种到含有适当营养成分的固体培养基上，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
固体培养法的优点是可以获得单个菌落，可以对菌株进行纯化和鉴定。
但固体培养法的缺点是需要较长时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
三、滴定法滴定法是将保存的菌种加入到含有适当营养成分的液体培养基中，然后逐渐加入新的培养基，使菌株逐渐适应新的环境。
滴定法的优点是可以逐渐适应新的环境，可以获得较高的活化率。
但滴定法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
四、化学处理法化学处理法是利用化学物质对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的化学处理方法包括酸碱处理、渗透压处理、氧化还原处理等。
化学处理法的优点是操作简单，可以获得较高的活化率。
但化学处理法对菌株的适应性要求较高，有可能对菌株造成伤害，影响其生物活性和生长能力。
五、生物处理法生物处理法是利用其他微生物对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的生物处理方法包括共培养法、共生法、共生菌法等。
生物处理法的优点是可以利用其他微生物对菌株进行适应性调节，可以获得较高的活化率。
但生物处理法对微生物的适应性要求较高，且需要较长时间才能获得足够的活化菌种。
菌种活化操作步骤
菌种活化操作步骤引言：菌种活化是一项重要的实验室技术，用于使冷冻保存的微生物菌种恢复活力并进行后续研究。
本文将介绍菌种活化的操作步骤，以帮助读者正确进行实验并获得可靠的结果。
一、准备工作1.1 材料准备确保准备好以下实验材料：- 冷冻保存的菌种样本- 无菌培养基- 无菌培养皿或试管- 灭菌的移液器和吸头- 灭菌的培养箱或恒温培养箱- 无菌操作台或洁净工作台1.2 环境准备在进行菌种活化之前，必须确保实验环境的无菌和洁净。
清洁操作台或洁净工作台，并使用适当的消毒剂擦拭工作表面。
同时，确保培养箱或恒温培养箱已经预热到适当的温度。
二、菌种活化步骤2.1 无菌操作在进行菌种活化之前，务必进行无菌操作。
戴上手套，使用灭菌的移液器和吸头，避免任何外界污染。
2.2 菌种接种将冷冻保存的菌种样本取出，迅速将其转移到无菌培养基中。
使用移液器，将适量的菌种悬浮液滴入无菌培养皿或试管中。
确保每个培养皿或试管只接种一种菌种。
2.3 培养条件设置根据菌种的特性，设置适当的培养条件。
这包括温度、pH值、培养基成分等。
将接种好的培养皿或试管放入预热好的培养箱或恒温培养箱中。
2.4 培养过程管理在菌种活化的过程中，需要定期观察和管理培养过程。
这包括检查培养皿或试管中的菌落形态和生长情况，以及调整培养条件，如温度和培养基的补充。
2.5 菌种分离与保存当菌种活化成功后，可以进行菌种分离和保存。
使用无菌技术，将菌落转移到新的培养皿或试管中，并进行进一步的鉴定和研究。
同时，将一部分菌种保存在冷冻条件下，以备将来使用。
结论：菌种活化是一项关键的实验技术，为后续的微生物研究提供了可靠的菌种资源。
通过正确的操作步骤，可以成功地活化冷冻保存的菌种，并获得可靠的实验结果。
在进行菌种活化实验时，务必遵循无菌操作规范，并根据菌种的特性进行适当的培养条件设置和管理。
这将有助于保证实验的准确性和可重复性，为微生物研究提供坚实的基础。
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低温保存管（cryo tube）中之一般菌种临时存放及活化
A. 低温保存管之临时存放及解冻
1. 低温保存管（cryo tube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。
2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。
3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。
4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。
B. 菌株活化: 在无菌操作下
1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。
2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
C. 划线法
1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。
2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。
3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。
4. 灼烧接种环，将接种环归位。
D. 图示
（1）金属接种环
（2）平板划线法
冷冻干燥管之开管说明
下列步骤请在无菌环境下操作：
1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。
2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
4、( a ) 适用于细菌
用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
( b ) 适用于霉菌、酵母菌
用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。
5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。
6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期 ( lag period ) 较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养 (Subculture) 后才能正常生长。
经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。
7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。
8．未开封之冷冻干燥管，请冷藏于4℃冰箱，切勿冷冻保存。
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