淋巴细胞功能检测一T细胞功能检测二B细胞功精品PPT课件
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T、B淋巴细胞-PPT课件
↓ “单阳性”(SP，CD4+或CD8+ )TCRαβ T细胞
— 皮、髓质交界处
T细胞发育的阳性选择（positive selection）
CD4+CD8+T细胞＋胸腺上皮细胞（表面MHC分子）
如果与MHC-I结 合，最终分化为 CD8+T细胞
如果与MHC-II 结合则最终分化 为CD4+T细胞
如果与MHC分子不 结合或亲和力过高则 在胸腺皮质中凋亡
1.T细胞分化、成熟的场所 胸腺基质细胞与胸腺细胞的相互作用构
成了决定T细胞分化、增殖和选择性发育的胸 腺微环境。
2.自身耐受的建立与维持
➢胸腺细胞（未成熟的T细胞） 在胸腺微环境中，循被膜下 →皮质→髓质移行成熟
➢在移行过程中，胸腺细胞表 面分子发生变化：在被膜下 为CD4-CD8-双阴性（DN）细 胞；在皮质为CD4+CD8+双阳 性（DP）细胞；在髓质为 CD4+或CD8+单阳性（SP） 细胞。
阳性选择（获得MHC限制性）
单阳性细胞(SP， CD4+或CD8+T细胞）
阴性选择（获得自身耐受）
成熟的单阳性细胞
B淋巴细胞
是淋巴干细胞在鸟类法氏囊和哺乳类动物 的骨髓中分化成熟而来，故又称囊依赖性淋巴细 胞（bursa dependent lymphocytes) 或骨髓依 赖性淋巴细胞（bone marrow dependent lymphocytes)，均简称Ｂ细胞。
TCRγδ细胞主要存在于小肠粘膜上皮和 表皮，而外周血中仅占成熟T细胞的1%～5%。 因此TCRγδ细胞是皮肤粘膜局部抗病毒感染 的重要效应细胞；同时还具有抗肿瘤作用及 分泌细胞因子参与免疫调节。
— 皮、髓质交界处
T细胞发育的阳性选择（positive selection）
CD4+CD8+T细胞＋胸腺上皮细胞（表面MHC分子）
如果与MHC-I结 合，最终分化为 CD8+T细胞
如果与MHC-II 结合则最终分化 为CD4+T细胞
如果与MHC分子不 结合或亲和力过高则 在胸腺皮质中凋亡
1.T细胞分化、成熟的场所 胸腺基质细胞与胸腺细胞的相互作用构
成了决定T细胞分化、增殖和选择性发育的胸 腺微环境。
2.自身耐受的建立与维持
➢胸腺细胞（未成熟的T细胞） 在胸腺微环境中，循被膜下 →皮质→髓质移行成熟
➢在移行过程中，胸腺细胞表 面分子发生变化：在被膜下 为CD4-CD8-双阴性（DN）细 胞；在皮质为CD4+CD8+双阳 性（DP）细胞；在髓质为 CD4+或CD8+单阳性（SP） 细胞。
阳性选择（获得MHC限制性）
单阳性细胞(SP， CD4+或CD8+T细胞）
阴性选择（获得自身耐受）
成熟的单阳性细胞
B淋巴细胞
是淋巴干细胞在鸟类法氏囊和哺乳类动物 的骨髓中分化成熟而来，故又称囊依赖性淋巴细 胞（bursa dependent lymphocytes) 或骨髓依 赖性淋巴细胞（bone marrow dependent lymphocytes)，均简称Ｂ细胞。
TCRγδ细胞主要存在于小肠粘膜上皮和 表皮，而外周血中仅占成熟T细胞的1%～5%。 因此TCRγδ细胞是皮肤粘膜局部抗病毒感染 的重要效应细胞；同时还具有抗肿瘤作用及 分泌细胞因子参与免疫调节。
免疫学 第九章 淋巴细胞-PPT精选文档
3．按T细胞功能分类 • 辅助性T细胞（Th）： CD4 T细胞，分泌 细胞因子，分Th1和Th2细胞 。 • 细胞毒性T细胞（Tc）：为CD8 T细胞，主 要效应细胞，可特异性杀伤靶细胞。分为 Tc1和Tc2细胞
阳性选择的意义：使成就的T细胞具有识别、结合 MHC的能力，在识别抗原时显示MHC约束性。
• 阴性选择：阳性选择的T细胞的TCR与 MHC-自身抗原肽显示高亲和力的被清除， 只有显示低或中等亲和力的及无识别能力 的被留下。 • 意义：清除自身反应性T细胞。不会和自身 抗原起反应。
（二） 、T细胞受体
外周
干 细 胞
CD4-CD8-TCR-
TCR+
双阴性 T细胞
双阳性 T细胞
Ⅱ类分子 自身反应性
外周
不识别
MHC分子 无TCR被清除 被清除 被清除
阳性选择：双阳性T细胞在胸腺与各类细胞（DC、 Mф 等）的MHC互作，能结合且具低亲和力的T细胞 克隆被选择，可分化成T细胞。
与MHCⅠ分子 作用分化成CD8 TC，与MHCⅡ分子作 用分化成CD4 TC。
• 细胞种类的鉴定依据： 不同免疫细胞及同类细胞的不同分化阶段 可表达不同的种类和数量的表面膜蛋白或 分化抗原(CD)。 分化抗原是鉴定免疫细胞种类及分化状态 的标志。
免疫细胞均由骨髓的多能干细胞发育而来。
再生
多能干细胞
髓样干细胞
淋巴干细胞
B细胞
红细胞 血小板
肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞
第九章 淋巴细胞
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授课时间：
两个学时
目的与要求
一、T淋巴细胞 1．掌握T细胞主要表面分子的结构和生物学作用 2．掌握T细胞亚群的分类及其功能 3．掌握T细胞在胸腺内的发育过程和机制 二、Ｂ细胞 1．掌握B细胞主要表面分子的结构和生物学作用。 2．了解B细胞亚类及其特点，熟悉B细胞的发育过程。 三、自然杀伤细胞 掌握NK细胞概念，了解其作用和意义。
淋巴细胞PPT课件
pre-TCR由β链和pre-Tα链组 成
6
没有TCR α链表达 CD3低表达
二、双阳性细胞时期
pre-T增殖活跃开始表达CD4和CD8，形成 CD4+CD8+双阳性（double positive, DP）T 细胞。
α链基因发生重排，开始表达有功能性的TCR。 CD3表达水平逐渐升高。
一、TCR-CD3复合体
TCR
类型：TCR、TCR
功能：特异识别MHC分子 提呈的抗原肽（3个CDR）
CD3
构型：和
免疫受体酪氨酸活化基序 （immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM）
功能：转导T细胞活化的第
T细胞一旦成熟，就随血液离开胸腺进入外周免 疫器官。
8
9
四、阳性选择
在胸腺皮质区发生的，双阳性T细胞与胸腺上皮细胞递呈的自 身肽-MHCⅠ/Ⅱ复合物反应；
不能与自身肽-MHC分子结合或亲和力过高的DP细胞被克隆 清除（95%左右的细胞），TCR与自身肽-MHC分子以适当的 亲和力结合的T细胞继续分化；
3
第一节 T细胞的分化发育
来自骨髓的祖T细胞（T lineage progenitor, pro-T）从胸腺皮髓交界处进入胸腺；
pro-T细胞首先移行至胸腺皮质外层，再逐渐向 深皮质区、皮髓交界和髓质区迁移并逐渐分化发 育成熟；
最终，发育成熟的T细胞进入外周淋巴器官。
4
胸腺微环境对于T细胞分化成熟的的重要性
5
一、双阴性细胞时期
在分化早期，T细胞经历祖T细 胞（pro-T cell）和前T细胞
（pre-T cell）。
6
没有TCR α链表达 CD3低表达
二、双阳性细胞时期
pre-T增殖活跃开始表达CD4和CD8，形成 CD4+CD8+双阳性（double positive, DP）T 细胞。
α链基因发生重排，开始表达有功能性的TCR。 CD3表达水平逐渐升高。
一、TCR-CD3复合体
TCR
类型：TCR、TCR
功能：特异识别MHC分子 提呈的抗原肽（3个CDR）
CD3
构型：和
免疫受体酪氨酸活化基序 （immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM）
功能：转导T细胞活化的第
T细胞一旦成熟，就随血液离开胸腺进入外周免 疫器官。
8
9
四、阳性选择
在胸腺皮质区发生的，双阳性T细胞与胸腺上皮细胞递呈的自 身肽-MHCⅠ/Ⅱ复合物反应；
不能与自身肽-MHC分子结合或亲和力过高的DP细胞被克隆 清除（95%左右的细胞），TCR与自身肽-MHC分子以适当的 亲和力结合的T细胞继续分化；
3
第一节 T细胞的分化发育
来自骨髓的祖T细胞（T lineage progenitor, pro-T）从胸腺皮髓交界处进入胸腺；
pro-T细胞首先移行至胸腺皮质外层，再逐渐向 深皮质区、皮髓交界和髓质区迁移并逐渐分化发 育成熟；
最终，发育成熟的T细胞进入外周淋巴器官。
4
胸腺微环境对于T细胞分化成熟的的重要性
5
一、双阴性细胞时期
在分化早期，T细胞经历祖T细 胞（pro-T cell）和前T细胞
（pre-T cell）。
淋巴细胞-PPT课件
凋亡 (2 ) 颗 粒 酶
(1 ) 穿 孔 素
(3 )F a s / F a s L 途 径 C T L (大 )正 在 攻 击 肿 瘤 细 胞 (小 )
二、B淋巴细胞
• 来源于骨髓（鸟类来自于腔上囊）→在骨 髓或腔上囊内发育成熟→移行至外周淋巴 组织→执行特异性体液免疫应答，参与抗 原呈递。
–B细胞的分化发育
γδ T细 胞
低 5-15% 粘膜上皮 100% < 1% 20-50% > 50% 简 单 多 肽 、 H SP、 脂 类 、 多 糖 M HC类 似 分 子
C D 4+ T 细 胞 与 C D 8+ T 细 胞 的 比 较
C D 4+ T 细 胞 表型 识别抗原肽 MHC限制性 Th Tc C D 3+C D 4+C D 813-17A A M H C -II 类 分 子 +++ + C D 8+ T 细 胞 C D 3+C D 8+C D 48-10A A M H C -I 类 分 子 +++
(b ) C D 4 分 子 与 M H C - II 类 分 子 / 抗 原 肽 复 合 物 (p M H C ) 的 结 合 .
其他分子
CD28/CTLA-4：B7-1/B7-2 CD2（LFA-2，SRBC）：CD58（LFA-3） LFA-1：ICAM-1，2，3 CD40L：CD40
（三）T细胞亚群及其功能
等位基因排除：
若 等 位 基 因 （ 编 码 α或 β） 中 其 中 之 一 能重排成功，相应的另一基因被关闭。 以确保仅有一个基因产物。 最 终 获 得 功 能 性 的 α链 和 β链 组 合 成 TCR，表达于细胞表面。
淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二B细胞功培训课件
淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二 B细胞功
2
第一节 淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外 实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对 抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体 外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂 原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴 细胞分泌产物的测定
1/26/2021
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2．应用与方法学评价：
➢该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检
测抗体分泌量。
➢优点：
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
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淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二 B细胞功
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(四) 体内试验
➢体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 ➢将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
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3．临床应用与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定药物和 手术等因素对体液免疫功能的影响 ➢评价免疫治疗或免疫重建后机体产 生抗体的能力。
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淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二 B细胞功
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(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法
1.原理：
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淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二 B细胞功
形态学
1/26/2021
3H－TdR掺入 法
淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二 B细胞功
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(二) 溶血空斑试验 1. 原理：
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免疫学实验——淋巴细胞功能检测
材料: 1.肝素(100单位/毫升)、 淋巴细胞分层液人 的正常血液 2.0.5%绵羊红细胞悬液(用Hanks液配制), Hanks 液 3.吸收过的胎牛血清:取经56℃30分钟加热灭 活后的胎牛血清加半量压积兔红细胞混合后， 37℃水浴20分钟，2000转/分离心10分钟， 取上清液即成。 4. 灭菌注射器，针头，试管，吸管等。
Thanks For watching
B细胞产生抗体能力的测定
ELISPOT法
原理：ELISPOT全称为酶联免疫斑点试验，可用于测定产 生IgG和IgM抗体的B细胞。其方法是用抗原包被固相，然后 加入抗原特异性B细胞。如果B细胞产生抗体，抗体与板上的 抗原结合。加入酶标二抗和显色剂就会显色。一个斑点就代 表一个产生抗体的细胞。
方法
1.抗原包被: 37C° 2h，或4C°过夜。固相载体可用聚苯乙烯 平皿、亚硝酸纤维膜、96孔板。 2.抗体生成细胞培育:加入适量抗体生成细胞，37C°, 5%CO. ，3~4h，或过夜。洗涤，去除为与固相结合的细胞。 3.测定斑点产生细胞:加二抗，37C° ，5%CO.2，2~3h。加辣 根过氧化物酶或碱性磷酸酶和底物显色。 4计数: 24h后用10~30倍显微镜下计数斑点形成细胞。
淋巴细胞功能检测
实验任务
市场上有一广告产品，据说有免疫增强作用， 请设计一个方案证实之(从影响淋巴细胞功能、
T淋巴细胞增殖的角度考虑) .
淋巴细胞功能检测
•T细胞增殖（转化）实验 •绵羊红细胞玫瑰花环试验 •B细胞产生抗体能力的测定 •细胞因子的检测
T细胞增殖（转化）实验
原理：T细胞在体外经某种物质刺激，细胞代谢和形态相继变化，在 24~48h细胞内蛋白质和核酸的合成增加，产生一系列增殖的变化，如 细胞变化、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等，由 淋巴细胞转变为淋巴母细胞。因此，这种淋巴细胞增殖又叫淋巴细胞 转化。据此可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。
免疫学 T淋巴细胞ppt课件
免疫学 T淋巴细胞
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识别由8~10个残基组成的内源性抗原
肽，受自身MHC免疫Ⅰ学 T淋类巴细分胞 子限制
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四、Th、CTL和 Treg细胞
❖ Th细胞：辅助T、B淋巴细 胞应答的功能亚群
❖ Th1、Th2、Th17
❖ CTL (Tc) 细胞：具有免 疫杀伤效应的功能亚群
❖ Tc1、Tc2
免疫学 T淋巴细胞
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四、Th、CTL和 Tr细胞
❖ 调节性T细胞（Tr）：具有免疫抑制功能 的功能亚群，在免疫应答的负性调节和自 身免疫耐受中发挥作用
❖ 自然调节性T细胞（nTreg） 适应性调节性T细胞（iTreg）
Tr1
CD4+ CD25+ Foxp3+
Th3
免疫学 T淋巴细胞
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TCRαβ
TCRαβ
T helper cells help other cells carry out their functions
第十章
T淋巴细胞
免疫学 T淋巴细胞
1
淋巴细胞（Lymphocyte）
❖ 淋巴细胞来源于
淋巴样干细胞，
是一个复杂不均
一的细胞群体，
根据其表面标志
和功能特征，分
为许多形态相似
功能不同的亚群
免疫学 T淋巴细胞
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淋巴细胞（Lymphocyte）
❖ 淋巴细胞来源于淋巴 样干细胞，是一个复 杂不均一的细胞群体， 根据其表面标志和功 能特征，分为许多形 态相似而功能不同的 亚群
——赋予成熟T细胞具有识别、结合MHC的能力，使T细胞 在识别抗原时显示MHC限制性
免疫学 T淋巴细胞
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T细胞的胸腺选择
免疫细胞功能检测技术课件.ppt
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
vv
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的 吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠 菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴 法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨 噬细胞。
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
vv
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
vv
三、NK细胞活性测定
形态法 酶释法 荧光法 同位素法 化学发光法
vv
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
vv
2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
vv
(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：
vv
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的 吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠 菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴 法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨 噬细胞。
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
vv
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
vv
三、NK细胞活性测定
形态法 酶释法 荧光法 同位素法 化学发光法
vv
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
vv
2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
vv
(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：
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B细胞增殖
形态学 3H－TdR掺入 法
(二) 溶血空斑试验 1. 原理：
2. 方法学：
➢ 经典溶血空斑形成试验 ➢ 被动溶血空斑试验
3．临床应用与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定药物和 手术等因素对体液免疫功能的影响 ➢评价免疫治疗或免疫重建后机体产 生抗体的能力。
(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法
第一节 淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外 实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对 抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体 外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂 原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及） ➢B细胞（执行体液免疫功能） ➢NK和K细胞（非特异性免疫作用）
肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线
意义： 肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
图15-2 T细胞细胞毒试验示意图
(四) 体内试验
➢特异性抗原皮肤试验 ➢PHA皮肤试验
二、B细胞功能检测
➢B细胞增殖能力的试验 ➢溶血空斑试验 ➢B细胞抗体形成功能的检测 ➢体内试验
(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA
1.原理：
2．应用与方法学评价：
➢该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检 测抗体分泌量。 ➢优点：
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
(四) 体内试验
➢体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 ➢将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
1．显微镜检查法：
吞噬率(%) 吞噬细菌的白细胞数 100 计数的白细胞数
杀菌率(%)
胞内含着染菌体的细胞数 计数的白细胞数
100
2. 溶菌法
杀菌率(%) （1 作用30、06m0或in 9菌0落mi数n 菌落数）100
3．NBT还原试 验
二、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强 的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白 色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒， 用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔 渗出液获得鼠巨噬细胞。
(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定
1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法
2．非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法
一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术
吞噬细胞的功能：
趋化 吞噬 胞内杀灭作用
一、中性粒细胞功能的检测
➢ 细胞趋化功能的检测 ➢ 吞噬和杀菌功能的检测
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
2. 方法学： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
(二)吞噬和杀菌功能测定
一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成 母细胞
分化
细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞
淋巴母细胞 过渡型
细胞大小(直径μm) 12～20
(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激 后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生 物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、 生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功 能。
（三）T细胞介导的细胞毒试验
1.原理：
靶细胞抗原
T细胞 靶细胞
致敏CTL
观察杀伤活力
2.方法
➢ 形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 ➢ 同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞
➢优点：形态学方法简便易行，普通光 学显微镜便能观察结果，适于基层实验 室应用。 ➢缺点：是依靠肉眼观察形态学变化， 判断结果易受主观因素影响，重复性和 准确性较差。
（2）3H-TdR掺入法
试验孔A 均值
SI
570nm
对照孔A 均值
570nm
➢优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观 性强，重复性好。 ➢缺点：但需一定设备条件，同时还存在 放射性核素污染问题。
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
第十五章 免疫细胞功能检测技术
第一节 淋巴细胞的功能检测 一、T细胞功能检测 二、B细胞功能检测 三、NK细胞活性测定
第二节 吞噬细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测 二、巨噬细胞功能检测
第三节 免疫细胞功能检测的临床应用
思考题 小结
对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬 细胞、树突状细胞等功能测定可以 有效评价机体特异性和非特异性免 疫功能。
特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原
3. 检测方法
形态法：刺激物 淋巴细胞（4-6天） 同位素法：PHA 淋巴细胞（54h）
DNA合成期 + 3HTdR掺入
母细胞化
收集细胞
检测β射线
测定细胞内的3H－TdR
（1）形态学检查法
转化率
转化的淋巴细胞数
100%
转化和未转化的淋巴细胞数
方法学评价：
三、NK细胞活性测定
染色计数
➢形态法 ➢酶释法 ➢荧光法 ➢同位素法 ➢化学发光法
离心取上清
靶 测LDH或AKP
细
胞 溶 解
离心取沉淀 测活细胞荧光
测CPM值
常用靶细胞: K562细胞株
测发光强度
第二节 吞噬细胞功能检测技术
吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内 杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。