葡萄酒的酿造实验报告
葡萄酒制作实验

实验六葡萄酒酿造一、目的要求分离纯化葡萄表面上存在的野生葡萄酒酵母,将其富集并扩大培养,酿造葡萄酒二、基本原理葡萄酒型野生酵母在葡萄皮上附着得甚多,所以分离这类醇母比较容易,对于采用当地特产葡萄酿制具有独特风味的葡萄酒,分离本地的葡萄酒型醇母非常必要。
本实验采用平板或斜面富集分离酵母,采用液体发酵进行扩大培养。
从微生物群体中经富集分离生长在平板上的单个菌落不保证是纯培养,因此纯培养的确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定,有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
葡萄酒酿造就是将葡萄转化为葡萄酒。
它包括两个阶段:第一阶段为物理化学或物理学阶段,即在酿造红葡萄酒时,葡萄浆果中的固体成分通过浸渍进入葡萄汁,在酿造白葡萄酒时,通过压榨获得葡萄汁;第二阶段为生物学阶段,即酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵阶段。
葡萄原料中,20%为固体成分,包括果梗、果皮和种子,80%为液体部分,即葡萄汁。
果梗主要含有水、矿物质、酸和丹宁;种子富含脂肪和涩味丹宁;果汁中则含有糖、酸、氨基酸等,即葡萄酒的非特有成分。
而葡萄酒的特有成分则主要存在于果皮和果肉细胞的碎片中。
从数量上讲,果汁和果皮之间也存在着很大的差异。
果汁富含糖和有机酸,芳香物质含量很少,几乎不含丹宁。
而对于果皮,由于富含葡萄酒的特殊成分,则被认为是葡萄浆果的“高贵”部分。
葡萄酒酿造的目标就是,实现对葡萄酒感官平衡及其风格至关重要的这些口感物质和芳香物质之间的平衡,然后保证发酵的正常进行。
红葡萄酒是用带色果皮的葡萄制成。
含有果皮或果肉中的有色物质,酒色深红,鲜红或红宝石色。
干红葡萄酒含洒精9~13%。
葡萄酒发酵可以采用天然发酵和纯种发酵两种方法。
三、实验材料1. 新鲜葡萄数公斤2. 菌种分离培养基(1)固体培养基取自新鲜葡萄的榨汁25ml, 稀释一倍,加2%琼脂。
若pH小于4,宜调节至4~4.5后,然后121℃灭菌20min。
葡萄酒的酿造实验报告及葡萄酒的生产工艺与设备

葡萄酒的酿造实验报告及葡萄酒的生产工艺与设备1.引言葡萄酒是一种世界广泛喜爱的酒类,其酿造工艺非常复杂。
本实验旨在研究葡萄酒的酿造工艺和评估不同酿造条件下葡萄酒的质量。
2.实验设计2.1材料准备选择优质葡萄作为原料,保证葡萄酒的质量。
选取不同的葡萄种类和酿造条件进行实验。
2.2酿造过程2.2.1榨汁将葡萄放入压榨机中,轻压使其释放汁液。
将汁液收集至发酵桶中。
2.2.2发酵将发酵桶中的汁液加入酵母,并控制温度在18-25摄氏度。
发酵过程中要注意搅拌,以保证酵母充分与葡萄汁接触。
2.2.3均质化发酵结束后,将酒液过滤以除去固体残渣,然后进行均质化处理以提高葡萄酒的品质。
2.2.4熟化将酿造好的葡萄酒装入木桶或不锈钢罐中进行熟化。
时间根据需要调整,一般在数月至数年之间。
熟化完成后,将葡萄酒瓶装并密封,以便陈年和销售。
3.结果与讨论根据不同葡萄品种和酿造条件的组合,我们制造了几种葡萄酒。
通过传统口感评估,我们对不同样品的质量进行了评估。
根据我们的实验结果,我们发现葡萄品种和酿造条件对葡萄酒的品质有着显著的影响。
一些葡萄酒样品具有更浓郁的果香和更柔和的口感,而其他样品则具有更鲜明的酸度和更清晰的口感。
这一差异可能是由葡萄的天然特点和酿造过程的细节所引起的。
葡萄酒的生产工艺需要一系列设备来进行实施。
4.1压榨机压榨机用于将葡萄轻压,使其释放汁液。
压榨机通常由不锈钢制成,以确保其卫生和耐用性。
4.2发酵桶发酵桶用于容纳葡萄汁和酵母,并提供一个适当的环境促进发酵。
4.3均质器均质器用于将葡萄酒液体过滤并进行均质化处理,以提高葡萄酒的品质和口感。
4.4熟化设备熟化设备可以是木桶或不锈钢罐。
木桶可以为葡萄酒提供更复杂的风味,而不锈钢罐则更容易控制温度和其他环境因素。
瓶装设备用于将葡萄酒瓶装,并进行密封,以便陈年和销售。
5.结论通过本实验,我们深入了解了葡萄酒的酿造工艺和评估方法。
葡萄品种和酿造条件对葡萄酒的品质有着重要的影响。
自制葡萄酒实验报告

自制葡萄酒实验报告自制葡萄酒实验报告引言:葡萄酒作为一种古老而神秘的饮品,一直以来都吸引着人们的关注。
它丰富的口感和多样的风味使其成为许多人喜爱的饮品之一。
然而,很少有人了解葡萄酒的制作过程以及其中的化学变化。
因此,本实验旨在通过自制葡萄酒的过程,探索葡萄酒的制作原理,并观察其化学变化。
实验材料:1. 新鲜葡萄:选取新鲜、成熟的葡萄作为实验材料,以确保酒的质量。
2. 砂糖:用于提供酵母发酵所需的碳源。
3. 酵母:用于发酵葡萄汁中的糖分,产生酒精和二氧化碳。
4. 水:用于稀释葡萄汁,以调整酒的浓度。
实验步骤:1. 葡萄的处理:将新鲜的葡萄洗净,并去除葡萄梗。
然后将葡萄压碎,使其释放出汁液。
2. 葡萄汁的提取:将压碎的葡萄放入一个容器中,并用纱布过滤,以去除固体颗粒。
得到的葡萄汁即为酿酒的原料。
3. 添加砂糖:根据葡萄汁的酸度和糖度,适量添加砂糖,以提供酵母发酵所需的碳源。
4. 添加酵母:在葡萄汁中加入适量的酵母,搅拌均匀。
酵母会利用葡萄汁中的糖分进行发酵,产生酒精和二氧化碳。
5. 发酵过程:将容器密封,并放置在适宜的温度下进行发酵。
在发酵过程中,要定期观察酒液的变化,并轻轻搅拌以促进发酵。
6. 过滤和贮存:当酒液停止冒泡并变得清澈时,可以进行过滤。
使用纱布或滤纸过滤酒液,去除残留的固体颗粒。
然后将酒液倒入干净的容器中,密封贮存。
实验结果:经过一段时间的发酵,我们成功制作出了自制葡萄酒。
酒液呈现出琥珀色,具有浓郁的葡萄香气。
口感醇厚,带有一定的酸度和甜度。
经过过滤后,酒液变得清澈透明,没有悬浮物。
讨论:葡萄酒的制作过程中,发酵是关键的步骤。
酵母利用葡萄汁中的糖分进行发酵,产生酒精和二氧化碳。
这个过程中,糖分被转化为酒精,使酒液的甜度减少,而酒精浓度增加。
同时,二氧化碳的释放使酒液产生起泡现象。
发酵的时间和温度对酒液的口感和风味有重要影响,需要根据个人喜好进行调整。
结论:通过本次实验,我们成功制作出了自制葡萄酒。
果酒酿造报告实验

实验四 果酒酿造报告实验报告一、目的及原理了解果酒发酵的原理并掌握果酒酿造的一般操作技术。
果酒酿造是利用酵母菌将果汁中糖分经酒精发酵产生酒精,再在陈酿、澄清过程中经酯化、氧化及沉淀作用,使之成为清彻透明、色泽鲜美、醇和芳香的酿造果酒。
其化学反应式如下:↑+→252612622COOH H C O H C 酵母菌二、材料及用具1.材料:葡萄、蔗糖、食用酒精、优质酿酒酵母、偏重亚硫酸钾等。
2.用具:酵母培养的仪器设备、破碎机、过滤机、压榨机、发酵缸、折光仪、蒸馏器、温度计、酒精计、吸管、台称、白瓷盆、纱布、棉花、导管、焦亚硫酸或硫磺。
三、酿造技术(以葡萄酒为例)(一)工艺流程原料→称重→洗涤→破碎→榨汁→成分调整→果汁杀菌→接种→主发酵→分离转桶→后发酵→转换容器→陈酿澄清(添桶换桶)→成品调配→装瓶杀菌→成品(二)酿造方法及步骤 1.酵母菌的扩大培养 可分为①-级培养(液体试管培养),在无菌条件下。
每支试管中接入原酵母菌1~2环,摇匀、置于25~28℃恒温下始养以24~28小时,发酵旺盛时,可转入二级培养。
②二级培养把经调整好、杀菌过的果汁装入三角瓶,接入一支经一级培养后的酵母液,于25~28℃下恒温培养20~24小时,可供下级用。
③三级培养用大玻璃瓶装经调整的果汁,杀菌温度70~80℃半小时,或采用SO 2或偏重亚硫酸钾(K 2S 2O 5)杀菌,采用SO 2杀菌须在前一天进行,放置一夜后才可供使用。
摇匀二级菌种,迅速倒入培养液中,接种量为培养液的2~5%,在25~28℃恒温下培养24~48小时,待酵母繁殖旺盛可供酒母或再扩大培养用。
2.原料处理①选果:宜选完全成熟、含糖量高、香味好而酸味适中的葡萄,未成熟及腐败的葡萄不宜采用。
用清水冲洗干净。
②破碎及除梗。
③榨汁:如酿造白葡萄酒,破碎后需榨取果汁;酿造红葡萄酒时,需带皮发酵,使色素溶于酒中。
④果汁调整:测定果汁含糖量,调整至15~20%,含酸量至0.8~1.2%。
葡萄酒酿造实验报告

一、实验目的1. 了解葡萄酒的酿造过程,掌握葡萄酒的基本制作方法。
2. 学习葡萄酒发酵过程中的微生物学知识,观察酵母菌的繁殖和发酵现象。
3. 掌握葡萄酒的陈酿、过滤和装瓶等工艺流程。
二、实验材料1. 成熟、颜色深的葡萄(如巨丰、玫瑰香等)2. 冰糖或白糖3. 玻璃罐、玻璃坛、陶瓷坛、不锈钢瓶、塑料瓶等发酵容器4. 细塑料管5. 木棒或筷子6. 丝袜或细纱布7. 温度计8. pH试纸9. 酵母菌三、实验步骤1. 葡萄挑选:选择成熟、颜色深的葡萄,剔除病果、烂果和枝梗。
2. 葡萄清洗:将葡萄放入清水中,轻轻搓洗,去除表面的污垢和杂质。
3. 葡萄破碎:将葡萄放入发酵容器中,用木棒或筷子轻轻捣碎,使葡萄汁释放出来。
4. 添加辅料:根据葡萄和糖的重量比例(10:2),向发酵容器中加入适量的冰糖或白糖。
5. 调节pH值:用pH试纸检测发酵液pH值,若过高或过低,可适当添加醋酸或氢氧化钠进行调节。
6. 加入酵母菌:将酵母菌溶于少量温水中,搅拌均匀后加入发酵容器中。
7. 发酵:将发酵容器密封,置于阴凉通风处。
每天用木棒搅拌葡萄皮,并压入酒液中。
8. 发酵结束:6天后,品尝酒液基本没有甜味时,说明酒精发酵完成。
9. 过滤:将葡萄酒汁倒入矿泉水瓶,用细纱布过滤掉葡萄皮、籽、糟等残渣。
10. 陈酿:将清澈的酒液倒入另一个矿泉水瓶,装满后盖紧盖子,放置两至三周。
11. 装瓶:将陈酿好的葡萄酒倒入事先准备好的空瓶中,装满后密封。
四、实验现象1. 葡萄装入坛子后,半天内葡萄汁中产生较多气泡,说明酵母菌开始繁殖和发酵。
2. 6天后,坛中气泡减少,酒液颜色逐渐变深。
3. 经过陈酿和过滤,酒液变得清澈透亮。
五、实验结果分析1. 通过本次实验,掌握了葡萄酒的酿造过程,包括葡萄挑选、清洗、破碎、发酵、陈酿、过滤和装瓶等环节。
2. 观察到酵母菌在发酵过程中的繁殖和发酵现象,了解了葡萄酒发酵的微生物学知识。
3. 通过调整pH值,使酒液达到最佳发酵条件。
酿葡萄酒的实验报告

一、实验目的1. 了解葡萄酒的酿制过程。
2. 掌握葡萄酒的基本制作方法。
3. 培养动手操作能力和实验观察能力。
二、实验器材1. 主发酵器:玻璃罐、玻璃坛、玻璃瓶、陶瓷坛、不锈钢瓶或能耐受酒精又对人无害的塑料瓶、塑料罐等。
2. 二次发酵容器及装酒的容器:空酒瓶、饮料瓶、矿泉水瓶等。
3. 细塑料管:用于虹吸法倒出葡萄酒。
4. 木棒或筷子:用于搅拌葡萄皮和葡萄汁。
5. 丝袜或细纱布:用于过滤葡萄酒汁。
6. 成熟、颜色深的葡萄。
7. 冰糖或白糖。
8. 温度计。
9. 计时器。
三、实验过程1. 准备材料:将葡萄洗净,去皮去籽,留下葡萄肉。
2. 装填发酵器:将葡萄肉挤入发酵器中,然后放入葡萄皮,装至70%容量,虚掩盖子。
3. 发酵初期:将发酵器放置在阴凉通风处,每天用木棒搅拌葡萄皮,并压入酒液中,确保葡萄皮与酒液充分接触。
4. 加入辅料:发酵过程中,每隔一段时间加入适量的冰糖或白糖,搅拌均匀。
5. 发酵过程:观察发酵情况,当酒液中气泡减少,酒液颜色逐渐变深时,说明发酵进入后期。
6. 完成发酵:当酒液基本无甜味时,说明酒精发酵完成。
7. 过滤:将葡萄酒汁倒入二次发酵容器,用细纱布过滤掉葡萄皮、籽、糟等固体物质。
8. 二次发酵:将过滤后的酒液倒入矿泉水瓶中,密封,放置一段时间进行二次发酵。
9. 储存:待酒液澄清后,倒入玻璃瓶中,密封储存。
四、实验现象1. 葡萄装入发酵器后,半天内,葡萄汁中产生较多气泡。
2. 发酵过程中,气泡逐渐减少,酒液颜色逐渐变深。
3. 发酵完成后,酒液基本无甜味,呈金黄色。
五、实验反思1. 酿制葡萄酒的过程中,发酵条件对酒的品质有很大影响,如温度、湿度、搅拌等。
2. 在发酵过程中,要密切关注发酵情况,及时调整发酵条件,以保证酒的品质。
3. 过滤是葡萄酒酿制过程中的重要环节,要选择合适的过滤材料,确保酒液的清澈度。
4. 储存过程中,要选择合适的容器,避免酒液受到污染。
六、实验总结本次实验成功制作了一瓶美味的葡萄酒,通过亲自动手操作,了解了葡萄酒的酿制过程,掌握了基本制作方法。
葡萄酒酿造实验报告

葡萄酒酿造实验报告一.实验过程1.葡萄挑选,发酵1.1 原理概述葡萄酒是指用纯葡萄汁发酵,经陈酿处理后生成的低酒精度饮料。
根据颜色分为红葡萄酒和白葡萄酒两种。
前者是红葡萄带皮浸渍发酵而成;后者是葡萄汁发酵而成的。
而按照酒内糖分的不同可以分为干葡萄酒(含糖量4g/L以下)、半干葡萄酒(含糖量在4~12g/L)、半甜葡萄酒(含糖量在12~45g/L)、甜葡萄酒(含糖量大于45g/L)。
另外根据是否含二氧化碳分为静酒或气酒。
红葡萄酒的成分相当复杂,它是经自然发酵酿造出来的果酒,它含有最多的是葡萄果汁,占百分之八十以上,其次是经葡萄里面的糖份自然发酵而成的酒精,一般在百分之十至百分之十三,剩余的物质超过1000种,比较重要的有300多种。
红葡萄酒其他重要的成分如酒酸,果性,矿物质和单宁酸等。
虽然这些物质所占的比例不高,却是酒质优劣的决定性因素。
质优味美的红葡萄酒,是因为它们能呈现一种组织结构的平衡,使人在味觉上有无穷的享受。
另外葡萄的营养很高,而以葡萄为原料的葡萄酒也蕴藏了多种氨基酸、矿物质和维生素,这些物质都是人体必须补充和吸收的营养品。
1.2 实验步骤1.2.1葡萄挑选挑选成熟完整没有伤口的葡萄,剔除烂掉的葡萄。
1.2.2 葡萄清洗逐颗清洗,注意不要过分冲洗,因为发酵所需的酵母,来源于葡萄皮上的野生酵母,过分冲洗会大量减少酵母的数量,不利于发酵。
1.2.3 压榨把葡萄捏碎放入准备好的陶罐中,使葡萄汁流出,挑出葡萄籽,不需要去皮。
1.2.4 葡萄汁改良根据自己所用葡萄的量添加适量的糖,五斤葡萄加一斤糖。
1.3 思考题葡萄酒中的酒精度,糖度如何检测?答:酒精度测定,经过蒸馏后用酒度计温度计读数,查表得准确酒精度,糖度用糖度计测定。
2.葡萄酒的二次发酵2.1 目的葡萄酒酒精发酵之后进行的苹果酸-乳酸发酵,降低酸度让葡萄酒柔和,使葡萄酒澄清。
2.2 原理残糖发酵:酒中的残糖继续发酵可以提高酒精度。
后发酵期间必须将容器装满,并且严格密闭。
葡萄酒酿造工艺中相关的实验报告11篇

Ptl次发酵中酿酒酵母的分离实验报告在发酵中分离酿酒酵母的实验报告中,应包含以下内容:实验结果、结论、讨论、参考文献。
实验结果部分应包括分离的酵母的数量、存在的污染物、产率和效率。
结论部分应总结实验结果,并评估所获得的酿酒酵母的质量。
讨论部分应总结实验的成功与否,以及评估未来的可能性。
最后应引用相关参考文献,以供学术研究参考。
葡萄酒酒度的测定实验报告葡萄酒酒度的测定实验报告应包含以下内容:1. 试验细节,包括试验过程,使用的设备,取样方法等;2. 测试结果,包括各批次葡萄酒的酒精浓度(ABV),保留量,酒精折射率,酒精相对密度,酒精类型,PH水平,最终酒精浓度和其他有关性质;3. 结论,包括最终酒精浓度结果以及发酵过程、调味过程和储存条件对酒精浓度的影响;4. 推荐,包括使用葡萄酒的建议,以及对调配酒精度的建议。
葡萄酒中酸的测定实验报告葡萄酒中酸测定实验报告通常包括对试样中总酸用碳酸氢钠一项滴定法测定,用乙酰胺-二苯甲醛法发生试验测定乙醛或柠檬酸等,然后根据测得的结果进行分析和评价。
葡萄酒成熟度测定实验报告葡萄酒成熟度测定实验报告包括以下内容:1. 实验背景、目的和方法:实验的背景、目的及其测试方法。
2. 测试结果:列出最终测试结果,并一一列出各种因素(如酒精含量、酸度和甜度等)对成熟度的影响。
3. 结论:评估测试结果,得出最终的结论,并给出建议。
葡萄酒中含糖量测定实验报告葡萄酒中含糖量测定实验报告包括对样品的分析和检测,以及使用各种实验方法来测定其含糖量。
报告将列出实验过程,测试结果,其中各种化学物质的浓度以及最终的结论等。
白葡萄酒的酿造实验报告白葡萄酒的酿造实验报告应包括:葡萄品种、生产地点和时间、采摘量、原料特征、发酵过程、酿制工艺、酒液特性及储存条件等内容。
此外,还应详细描述酿酒过程中可能出现的问题,并且针对这些问题给出相应的解决方案。
最后,实验报告应总结出酿酒过程中遇到的挑战以及所采取措施得出的结论。
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葡萄酒的酿造及其中酵母菌对发酵过程的影响实验设计方案一、前言:葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经发酵酿成的酒精饮料。
通常分红葡萄酒和白葡萄酒两种。
前者是红葡萄带皮浸渍发酵而成;后者是葡萄汁发酵而成的。
我们所要酿造的是红葡萄酒。
葡萄酒有增进食欲,滋补作用的作用。
葡萄酒中含有糖、氨基酸、维生素、矿物质。
这些都是人体必不可少的营养素。
它可以不经过预先消化,直接被人体吸收。
非凡是对体弱者,经常饮用适量葡萄酒,对恢复-健康有利。
同时还有助于消化,葡萄酒能刺激胃酸分泌胃液,每60-100克葡萄酒能使胃液分泌增加120毫升。
自酿的葡萄酒,不用添加发酵剂,也不添加任何防腐剂和澄清剂。
家酿的葡萄酒利用葡萄皮上的野生酵母菌分解葡萄中的糖份转化为酒精,另加点糖提高酒精度。
一般保质期不超过两年,所以成酒后应在两年内喝光。
二、实验目的:1、熟悉酿造葡萄酒的过程和原理。
2、学会葡萄酒中酵母菌的分离纯化。
3、熟悉酵母菌形态观察和菌落计数法4、对比来说明,酵母菌对葡萄酒发酵的影响,杀菌剂(SO2)对发酵过程的影响。
三、材料和仪器:(一)材料:葡萄3斤(因葡萄还未上市,可用提子代替,苏果超市有,但比较贵)。
白糖半斤(二)仪器:1、主发酵器:玻璃罐(坛、瓶)、陶瓷坛、能耐受酒精又对人无害的塑料瓶罐等均可。
2、二次发酵容器及装酒的容器:可以用空酒瓶、饮料瓶、矿泉水瓶等都可3、一根细塑料管。
用来在发酵完成后利用虹吸法将葡萄酒从发酵容器中倒出。
4、木棒或筷子。
用来在发酵过程中搅拌葡萄皮和葡萄汁。
5、丝袜或细纱布。
用来过滤葡萄酒汁。
四、实验步骤:(一)葡萄酒的酿造1、清洗:将主发酵器(即玻璃坛等)充分洗干净,控干。
2、浸泡:将葡萄摘除蒂,把剪好的葡萄冲洗干净后用淡盐水浸泡十分钟左右,这是为了去掉葡萄皮上的农药和其他有害物质,再次冲洗,晾干至表面没有水珠。
3、装瓶:将葡萄捏破,葡萄肉连同葡萄皮挤到主发酵器中。
当把葡萄装到发酵器容量的70%左右时,停止装葡萄,盖上盖子,但不要完全拧紧。
4、发酵:将装好葡萄的发酵器放在28℃恒温培养箱内。
葡萄装入发酵器后,大约会在12个小时以内启动发酵,表现为葡萄汁中有较多气泡产生。
在发酵启动后,每天两次用木棒或筷子将葡萄皮压入酒液中,然后盖上盖子。
5、加糖:发酵启动后一到两天内,放入250g白糖,作用是提高酒精度。
发酵启动后三到四天时,再次放入白糖250g,将糖浸入葡萄汁中搅拌均匀。
6、二次发酵:当酒精发酵完成后,首先利用虹吸法,将葡萄酒汁倒入二次发酵器,然后将剩下的葡萄皮、籽、糟等用丝袜或细纱布过滤,过滤后的酒液也混入二次发酵器中。
葡萄皮、籽、糟扔掉。
注意二次发酵器留有1/10空隙,盖子也不要拧的很紧。
放在阴凉处。
二次发酵主要是苹果酸-乳酸发酵,不再产生酒精。
7、加入澄清剂,加入少量酒精。
二次发酵完成,即得到葡萄酒原酒。
8、口味:自酿出的葡萄酒是酸的,还有一些的刺激性味。
附:葡萄酒的质量检测葡萄酒的质量指标是现行国家标准GB/T15037-94中规定的检验指标;色泽:紫红、深红、宝石红、红微带棕色澄清程度:澄清透明、有光泽、无明显悬浮物(使用软木塞封口的酒允许有3个以下不大于1mm的软木渣)。
葡萄酒应是澄清的,若酵母菌生长,则会出现浑浊,所以要检测出我们自酿的葡萄酒中酵母菌的含量是否合格。
香气:具有纯正、优雅、怡悦、和谐的果香甜味:具有纯净、幽雅、爽怡的口味和新鲜(二)酵母菌的分离纯化1、制备葡萄酒稀释液取发酵2-3天时的葡萄酒液,称量1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中,充分振荡,此即为10-2浓度的菌悬液。
用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中,用移液管吹吸三次,摇匀,此即为10-3浓度。
同样方法,依次稀释到10-7。
稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
(稀释倍数是根据微生物的数量进行选择,不固定。
可以直接涂布、或划线法分离纯化。
)2、涂布法分离(酵母菌定量分离用)依前法向无菌培养皿中倾倒已融化并冷却至45~50℃的马铃薯葡萄糖培养基,待平板冷凝后,用无菌移液管分别吸取三个不同稀释度(10-4,10-5,10-6)菌悬液0.1mL-0.2,依次滴加于相应编号已制备好的马铃薯葡萄糖培养基平板上,右手持无菌玻璃涂棒,左手拿培养皿,并用拇指将皿盖打开一缝,在火焰旁右手持玻璃涂棒于培养皿平板表面将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散,切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。
3 培养观察接种后的所有平板倒置与适宜温度培养箱中培养。
大约28-30度,时间两到三天。
将葡萄分为两组发酵,一组为空白对照,另一组加入提取出的酵母菌,观察其在发酵过程中酵母菌的生长对葡萄酒发酵时间的影响。
4、酵母菌形态观察将每个发酵阶段的葡萄汁用显微镜观察其中酵母菌的菌体特征(三)酵母菌的检测利用血球计数法测定材料与仪器:葡萄酒汁,血球计数板,显微镜,盖玻片,无菌毛细管。
操作步骤:1、镜检计数室在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物,则需清洗后才能进行计数。
2、加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片,再用无菌的细口滴管将稀释的葡萄酒汁由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室,一般计数室均能充满菌液。
注意不可有气泡产生。
3.显微镜计数静止5分钟后,将血球计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数室所在位置,然后换成高倍镜进行计数。
在计数前若发现菌液太浓或太稀,需重新调节稀释度后再计数。
一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。
每个计数室选5个中格(可选4个角和中央的中格)中的菌体进行计数。
位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
如遇酵母出芽,芽体大小达到母细胞的一半时,即作两个菌体计数。
计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。
4.清洗血球计数板使用完毕后,将血球计数板在水笼头上用水柱冲洗,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用吹风机吹干。
镜检,观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。
若不干净,则必须重复洗涤至干净为止。
实验结果:注意事项:1、各类容器一定要洗干净,葡萄在酿制过程中不能碰到油污、铁器、铜器、锡器等,但可以接触干净的不绣钢制品。
2、在发酵时,发酵器的盖子一定不要盖死,防止爆炸。
3、糖不要多放,那样会影响发酵过程,产生我们不希望的成分,如果想喝甜葡萄酒,可以在发酵完成后饮用时加糖。
五、具体操作过程和实验现象及分析(一)第一次发酵:葡萄的清洗,捏碎,装罐,加盖(稍微透氧)做成两个瓶葡萄酒,一瓶对照(加入分离纯化后的酵母菌),一瓶空白。
将两个发酵罐放在28恒温培养箱中发酵。
注意不要太用力搓洗葡萄,以防把葡萄皮上的野生酵母菌洗掉。
每天都到实验室里,将浮在上面的葡萄按下去,以便皮上的酵母菌得到充分的利用。
加糖:第一次加糖发酵两天后,第二次发酵五天后。
每次每瓶加75克糖。
(二)第一次培养和观察:(1-3天)实验准备:制备PDA培养基,灭菌,低温保存;培养皿灭菌,制备无菌水并保存。
1、据实验方案,12小时后酒精发酵启动,所以1天后,我们提取了适量葡萄汁,进行酵母菌的分离培养。
取0.5ml的葡萄汁,梯度稀释成10-1,10-2……10-6,采用平板涂布的方法,进行第一次培养。
取10-4,10-5 10-6的三个梯度的稀释菌液进行涂布接种,每个梯度三个培养皿。
涂布完成后,放入28℃恒温培养箱倒置培养,一到两天。
2、葡萄汁的制片观察:取适量葡萄汁和无菌水混合,再附上载玻片,置于十倍镜下观察现象:由于葡萄汁成分非常多,所以镜头里背景很模糊,而且,只能观察到很少的类似于酵母菌的单个细胞,放置于40倍镜下,观察也不是很清楚,其他大多是杂菌和杂物在乱跑。
(分析,发酵未真正启动,葡萄皮上的酵母菌,还未在葡萄汁中大量繁殖,所以是视野里的现象模糊,酵母菌很少)3、葡萄酒的观察现象从之前强烈的果香味转变为有淡淡的酒香味,而且3-4天时,发酵罐中有大量的气泡,葡萄皮颜色变暗,葡萄汁增多,且颜色更深。
葡萄酒中的酵母菌的观察,此时,由于,酵母菌的大量繁殖,在显微镜的视野里已经能,观察到很清晰的酵母菌个体,而且数量较多,图像背景亮了很多,(可能是酵母菌的生长抑制了其他杂菌的生长,是的葡萄之中的杂质变得很少了。
)4、三天后,去取培养好的九个培养基,观察其中菌落的生长情况现象:实验结果似乎没有那么理想,培养基中的菌落,可谓五彩缤纷,有白色的菌落,有黄色的粉状的菌落,有绿色的干燥的菌落,最多的就是黑色霉菌的菌落,散发出来的味道更偏于霉菌的味道,而且,大多的菌落干燥,且成绒毛丝状。
显微镜观察:尽量挑取一些,纯净的白色菌落的菌种,和无菌水混合置于显微镜下观察,发现,菌种不纯,有一些清晰可见的酵母菌细胞,但也参杂着一些霉菌的特征结构。
结果处理方案:挑取一些疑似的白色菌种,进行涂布培养,方法同上,培养1-2天。
同时,也要再做一个备份,万一,白色的菌落不是酵母菌,所以,再取此时的葡萄汁,再做六个培养基,进行培养,原理同上。
(三)第二次培养观察:(4-5天)葡萄酒里发酵现象的观察:葡萄酒里产生了浓郁的酒精味到,而且葡萄酒里有很多泡沫。
疑似菌落的观察:观察上次疑似菌种培养基的培养结果,发现效果还是不佳,虽然有很少的的黑色霉菌生长,但是通过显微镜观察,发现,它应该是霉菌的一种,而不是酵母菌备份培养基的观察:有意外的收获,发现,备份的六个培养基,酵母菌生长的都很好,有很多的乳白色的圆形斑点,湿润且光滑,闻起来有酒香味,且没有其他的杂菌,很符合,酵母菌的菌落培养特征。
且通过显微镜的观察,观察到了很清晰的酵母菌细胞。
对比分析:第一次培养的失败的原因:1、可能是刚一开始,葡萄汁中的酵母菌很少,而稀释的倍数太大,导致涂布培养时,其他杂菌的数量优势甚于酵母菌,所以才会出现那样的结果。
2、也有可能在超净工作台进行涂布操作时,没有严格做到无菌,培养基被污染。
3、而备份成功的缘由是3-4天时,酵母菌生长旺盛,抑制了其他杂菌的生长,使得生长出来的菌落,很纯净。
(四)第三次培养观察:(6-7天)准备工作:PDA培养基的制备,麦芽汁培养基的制备,培养皿的灭菌。
将备份培养基中长出的酵母菌,进行涂布接种,在10-4、10-5、10-6三个稀释度,每组做四个培养基(两个PDA,两个麦芽汁),做好后放入28度恒温的培养箱内进行培养。
观察:两天后取出观察,PDA培养基上菌落长势良好,10-4的两个培养基上菌落数过多,无法计数,而10-5、10-6的培养基上,菌落分布均匀,可以计数。
可能是由于涂布不均匀的问题,麦芽汁培养基上菌落,太过集中,没有PDA上生长的好。
由于时间的有限,我们将此组培养基的菌种接种到对照的葡萄酒中。
由于7天左右已经是酒精发酵的后期,我们发现在空白的葡萄酒中,已经几乎看不到气泡,而在对照的试验中,我们发现还有很多的泡沫,而且酒精味更浓。