微生物实验-细菌培养、接种 f讲课教案

实验小结
1、三类培养基
➢液体培养基——用于增菌； 均匀混浊、沉淀、表面生长
➢ 半固体培养基——观察动力；保存菌种（6个 月）；穿刺线，扩散生长
➢ 固体培养基——分离纯化；保存菌种（1个月） 菌落、菌苔
2、IMViC试验
第三次实验课内容
1、热力对细菌和芽胞的杀菌作用 2、紫外线的杀菌作用 3、常用化学消毒剂的杀菌作用和抗生素敏感试验 4、耐药性变异； 5、细菌的鞭毛变异； 6、高压灭菌器的使用； 7、细菌的鉴定程序； 8、全自动微生物分析仪的谢产物不同。
甲基红（methyl red）实验
M - 甲基红（methyl red）实验 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 葡萄糖→丙酮酸
甲基红 甲基红 +
吲哚（indol）试验
I-吲哚（indol）试验
色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑
对二甲基氨基苯甲醛
枸橼酸盐利用试验 C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
菌苔（mossy）
指细菌生长繁殖后，在培养基 表面形 成的一层培养物
结果观察——半固体培养基
1、 扩散生长：具有动力的 细菌,可见培养物扩散和培 养基变混浊。 即有鞭毛的细菌：由穿刺线 向外扩散生长（羽毛状或云 雾状）
2、原位生长：没有动力的 细菌，可见培养物没有扩散， 培养基仍然澄清。 即无鞭毛的细菌： 沿穿刺 线生长
液体培养基
斜面培养基
半固体培养基
结果观察——普通平板
普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。 注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或 粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况。
结果观察——液体培养基
结果观察——斜面培养基
琼脂斜面培养基上大肠埃 希菌形成的菌苔生长现象
I - 吲哚（indol）试验 M - 甲基红（methyl red）试验 V - VP（Voges-Proskauer）试验 C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
I M Vi C试验
大肠埃希菌 + + - -
产气杆菌
- - ++
IMViC试验： 是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定。
第二次实验课
内容
1.细菌培养法（录象） 2.基础培养基制备（讲解示教） 3. 细菌接种法（一份/组）讲解 4.人体、物品中细菌检查（一份/组）讲解 5.飞沫、空气中细菌检查（一份/桌）讲解 6.观察细菌代谢产物（讲解） 7. 第一次实验报告评讲
人体、物品中细菌检查
材料：普通平板 （1份/组）
钱
21
1
2
细菌代谢产物观察
细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样， 产生的代谢产物也不一样。
常见：
• 糖发酵试验 • 吲哚（indol）试验 • 甲基红（methyl red）实验 • VP（Voges-Proskauer）试验 • 枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 • 尿素酶试验 • 硫化氢试验
利用枸橼酸盐生长 +
不能利用
-
硫化氢试验
硫化氢试验（醋酸铅培养基）
某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S， H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等）， 则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而 呈黑色为（＋）。
尿素酶试验
产生氨使培养基变碱， 指示剂显红色，为阳性。 如：变形杆菌为阳性。
IMViC试验
IMViC试验
金黄色葡萄球菌形成 的β溶血现象也称为乙 型溶血现象，属于完 全溶血。
细菌培养接种法——平板划线法
菌种：混合菌液 材料：普通平板 用具：接种环 方法：分区划线
4区
原始区域
1区 2区
3区
细菌培养接种法--斜面接种、液体接种、半固体
菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面 材料：斜面、液体、半固体培养基 用具：接种环、接种针
手
发
衣
盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。
飞沫、空气中细菌检查
材料：血平板 （1份/组）
距口15—20cm 用力咳嗽三次
置空气中 （避日光照射）
30分钟
飞沫
空气
盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。
结果观察——血平板
表皮葡萄球菌在血 琼脂平板培养基上 形成不溶血的菌落。
甲型溶血性链球菌形 成的α溶血现象也称 为甲型溶血现象或草 绿色溶血现象，属于 不完全溶血。