血尿素氮的测定
实验十三血清尿素氮测定(脲酶—Berthelot比色法)
实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。
2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。
在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。
其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。
2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。
3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。
（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。
表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。
血清尿素氮的测定[方案]
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血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。
2.复习尿素的生成机理及其意义。
【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。
其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。
【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作1：4稀释血清（或0.1血浆）尿素氮标准液0.1（0.02mg/ml）蒸馏水0.1二乙酰-肟0.5 0.5 0.5尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。
分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。
计算及结果分析尿素（mg%）×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。
本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。
3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。
4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。
5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。
由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。
如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。
【思考题】。
测定血清尿素的实验报告
一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。
2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。
3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。
二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。
尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。
二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。
因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。
其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。
三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。
- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。
- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。
- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。
2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。
- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。
- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。
- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮（BUN）是反映肾脏排泄功能的一个重要指标，也是评价肾脏疾病和代谢紊乱的标准检查之一。
BUN的原理方法：
BUN是指血液中尿素的浓度，它的检测是通过测定血液中尿素的含量来完成的。
尿素
是蛋白质代谢的末端产物，经由肝脏转化生成后再经过肾脏排泄。
正常情况下，尿素在肾
小球滤过后主要在肾小管内被再吸收，防止其大量丢失。
血中尿素的浓度，受到肝脏合成、尿素的经肾脏的再吸收、肾脏排泄和肾脏灌注量的影响。
BUN的测定方法包括酶法、光度法、电化学法、液体色谱法等，其中光度法是目前应用最广泛的方法之一。
临床意义：
BUN的高低可以反映肾脏功能是否受到影响。
一般来说，BUN增高是肾功能受损的重要指标，包括急性肾损伤、肾衰竭、肾小球肾炎、肾盂肾炎、泌尿系梗阻等病态情况。
此外，由于肝脏是尿素生成最重要的器官，肝脏疾病如肝炎、肝硬化等也会影响BUN的测定结果。
对于临床医生而言，BUN的测定结果可以作为诊断和治疗的重要线索，也可以用来监测肾
脏疾病和代谢紊乱的治疗效果。
需要注意的是，BUN的测定结果还应考虑个体差异、摄入蛋白质的数量和质量等因素
的影响。
在诊断或监测疾病的过程中，应结合临床病史、身体检查和其他相关检查结果，
综合分析判断。
尿素氮测定
【注意事项】 1．试剂中加入硫氨脲和镉离子可增加显色强度和色泽的稳 定性，还可消除羟胺的干扰，但仍有轻度退色现象，故应及时
比色。
2．尿液中尿素亦可用此法测定，但因尿液中尿素浓度较高，
需将尿液作50倍以上稀释后再行测定。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮表示，尿素分子中含有二个 氮原子，因此1mmol/L尿素等于2 mmol/L尿素氮。世界卫生组 织推荐使用尿素，并以mmol/L表示浓度单位，我国卫生部也已 规定一律使用尿素，不再使用尿素氮一词。
响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。
3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液尿素含量增加，如前列腺肿 大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致尿道受压等。
2.血液尿素浓度降低较为少见，除婴儿、妊娠（血容量增加）及低蛋白高糖饮食
外，常见于严重肝病患者，如肝炎合并广泛性肝坏死、肝功能衰竭等。
取4只试管，具体操作按下表进行。 加入物(ml) 空白管（B） 标准管（S） 测定管（人） 测定管（牛）
血清
尿素标准应用液 蒸馏水 二乙酰一肟溶液 尿素氮试剂
—
— 0.1 0.5 5.0
—
0.1 — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
各管混匀后，置沸水中加热15min，取出置冷水中冷却后，分光光度计波长540nm，
【原理】
尿素与二乙酰在酸性环境中加热可缩合成红色的二
嗪衍生物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不
稳定，故通常用二乙酰一肟代替，它与强酸作用，产
生二乙酰。后者再与尿素反应，缩合生成红色的二嗪
衍生物。
＋ H2 O H 二乙酰一肟
双乙酰 ＋ 尿素
实验诊断学之肾脏功能的实验室检测
临床意义： 1.较早反映肾功能损害的敏感指标：可较早判断肾 小球损害 2.评估肾功能损害程度：可作为观察肾移植成功与 否的客观指标，移植成功，该指标逐步回升，发生 排斥，则下降。
3.慢性肾衰失代偿后限制蛋白摄入的尺度。 4.慢性肾衰临床分型的参考：
血尿酸（UA）的测定
原理 UA是体内嘌呤代谢终产物，小部分经肝分解
方法和公式： 1.标准24小时留尿计算法：（1）3天低蛋白饮食，
禁食肉类，避免剧烈运动，（2）准确收集24 小时尿液，测尿量和尿肌酐浓度并计算分钟尿 量，（3）同时采静脉血检测血肌酐浓度。 2.计算公式：C＝U×V／P
U：尿肌酐浓度，V：每分钟尿量，P：血浆肌 酐浓度。 3.参考值：成人80－120ml/min
原理 2-M是体内有核细胞产生的一种小分子蛋白， 正常人血中2-M浓度很低，可自由通过肾小球， 然后在近端肾小管几乎被全部重吸收
参考值 1-2 mg/L
临床意义 肾小球滤过功能下降时，β2-M水平升高
肾小管功能试验
（一）肾脏浓缩的稀释功能试验 原理：肾脏的浓缩稀释功能主要是通过抗利尿激 素（ADH）对髓袢，远曲小管，部分集合管起作 用，调节水的重吸收来实现的，表现为尿量和尿 比重的变化。因此在一定饮食条件下检测被检者 尿量和尿比重的变化可以观察到肾脏的浓缩和稀 释功能，来间接判断肾小管的功能状态。
3.肾前性少尿：当严重脱水，大量腹水，心功 能衰竭，休克等血容量不足，肾血流灌注不 足导致滤过率下降而少尿，BUN升高，但升 高幅度较小，经扩容后尿量增加可自行下降。
4.组织蛋白分解增强：当高热，大面积烧伤， 严重创伤，大手术后，甲亢，上消化道出血 等。
血清肌酐测定
▪ 血浆肌酐种类：内源性和外源性 ▪ 血浆肌酐的代谢：大部分从肾小球滤过，不
尿素氮测定的标准操作规程
尿素氮测定的标准操作规程尿素氮测定（速率法）1：概述尿素是人体内蛋白氮代谢的终产物，它构成了血液中绝大部分的非蛋白氮。
尿素产生于肝脏，经过肾脏排泄至尿中，因此尿素的含量取决于蛋白质的摄入量，蛋白质分解代谢和肾功能。
2：标本的手收集新鲜并无甲状腺标本，血清或血浆样本均不甲状腺。
血浆样本就可以使用肝素或edta 抗凝。
样本在4摄氏度可以平衡7天。
献血前病人应当禁食12小时，收集静脉3ml,等待凝结后（最出色放到37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为提抗凝剂的血液在30-60分钟心肌划出血清。
3000r/minVergt5-10分钟，分离出血清水泵。
不建议使用血浆标本。
3方法原理样品中的尿素在试剂中脲酶的催化下与水反应生成氨和二氧化碳，生成的氨与试剂中的酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶的催化下产生谷氨酸，同时nadh被氧化为nad+，从而使340nm处的光吸收值下降。
通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可计算出样品中尿素的浓度。
4剂来源，配置及储存试剂来源：试剂布局：试剂一和试剂二均为液体试剂，可以轻易采用。
投入使用后在2-8度可以平衡30天。
若试剂浑浊，或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值高于1.0a,应予以弃置。
试剂储存：试剂贮藏储存2-8摄氏度可以平衡至标签右图失灵期。
5分析仪器cs-600b全自动生化分析仪6计算方法alt(u/l)=(a/min*tv*1000)(6.3*sv*p)式中tv=总反应体积sv=样本体积6.3=nadh在340nm处的毫摩尔消光系数p=比色杯光径（cm）7线性范围：本实验的线性范围：0----35mmol/l8参考范围：2.82---8.2mmol/l9失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
2：崭新上开一瓶质控Fanjeaux，重测失控项目，例如Duras的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能将过期或在室温避免时间过长而变质，例如结果仍不再容许范围，则展开下一步。
二乙酰一肟法测定血清尿素(精)
3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿 素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱 肿瘤致使尿道受压等。
2．血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者 外，常见于肝功能衰竭患者。
【注意事项】
1．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽 稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色 经冷却后，应及时比色。
2．尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离 子水作50倍以上稀释。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮mg/dl表示，因为一个尿素分 子中有2个氮原子，所以1mmol尿素相当于28mg尿素氮 (1mmol/L尿素相当于2.8mg/dL尿素氮)；另外还有以尿素氮 mmol/L表示，则1mmol/L尿素＝2mmol/L尿素氮。世界卫生 组织推荐尿素用mmol/L表示，我国卫生部临检中心也已规 定一律使用此表示方法，不再用尿素氮一词。
【原理】本实验采用二乙酰一肟法测定血清尿素氮。二乙酰 一肟法系根据双乙酰与尿素形成二嗪衍生物的有色复合物 的显色反应。由于双乙酰本身不稳定，故用二乙酰一肟来 代替，其反应式如下：
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰 不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。
3．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它 化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然 也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少 引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的 最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171μmol/L、血红蛋 白达10g/L入物(ml) 空白管 标准管 测定管 基础管 回收管
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实验步骤
• 取试管3只，标明‘空白’、‘标准’、‘标 本’，按下表操作。
试管号 （ml）
空白
0.05 ------0.5 5.0
标准
---0.05 5 5.0
标本
------0.05 0.5 5.0
5
蒸馏水 尿素标准液 血清
二乙酰一肟氨 基硫脲溶液
酸混合液
2013-8-1
2013-8-1 2
实验用仪器及试剂 • 722－分光光度计、离心机、 恒温水浴锅、微量取样器、 微量采血工具等。 • 尿素标准液、二乙酰一肟氨 基硫脲溶液、酸混合液。
2013-8-1 3
实验原理 • 在强酸的条件下，样品中的 尿素与二乙酰一肟和氨基硫 脲共热，生成红色复合物， 其显色强度与尿素成正比。 与同样处理的尿素标准液比 较，即可求出样品中的尿素 含量。
2013-8-1 7
• 混匀，置沸水浴中10分钟，取出冷 却。 • 525毫微米为波长，空白管调零， 比色 • 代入公式计算结果 • 血尿素mmoL/L=测定管光密度/标 准管光密度×20 • 正常值:1.7—7.0mmoL/L
2013-8-1 6
分析讨论
长时间大强度运动时蛋白质、氨基酸分解 代谢加强参与供能，血液和尿液中的尿 素含量随蛋白质、氨基酸分解加强而增 多。机体对负荷的适应性越差，运动生 成的尿素就越多。因此，血尿素可作为 反映机体疲劳程度和评定机能状况的重 要指标。运动中血尿素浓度的升高，一 般出现在运动后30分，绝大多数出现在 40-60分。
实验题目:
•血尿素的测定 （BUN） • （二乙酰一肟法）
• 实验人：体育教育专业、运动训练专业、民族 体育专业、运动人体科学专业、特殊教育等专 业 • 实验地点：运动生化实验教室 • 日期
2013-8-1 1
实验目的
•了解血尿素测定的原理 及操作、观察运动前后 血尿素值的变化，了解 血尿素指标在体育实践 中的应用。