我科新增外周血染色体核型分析项目,助力不良孕史等多种染色体相关疾病的诊断
染色体核型分析联合CNV-Seq检测在高龄孕妇产前诊断中的应用
作者简介:马海霞,女,副主任医师,主要从事产前诊断细胞遗传学研究㊂ ә 通信作者,E -m a i l :h e l i 20042008@163.c o m ㊂㊃论 著㊃D O I :10.3969/j.i s s n .1672-9455.2024.04.017染色体核型分析联合C N V -S e q 检测在高龄孕妇产前诊断中的应用马海霞1,冯丽云2,郭苑青2,何丽梅1ә上海市长宁区妇幼保健院:1.检验科;2.产筛中心,上海200051摘 要:目的 探讨染色体核型分析与全基因组拷贝数变异测序(C N V -S e q)技术在高龄孕妇产前诊断中联合应用的意义㊂方法 对2020年1月至2022年12月该院收治的723例高龄孕妇的羊水细胞染色体核型分析㊁C N V -S e q 检测结果进行回顾性分析㊂结果 723例高龄孕妇中检出染色体异常共29例,异常检出率为4.0%㊂723例高龄孕妇中检出核型异常21例,异常检出率为2.9%,其中染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例;染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例;染色体结构异常5例,包括染色体倒位3例,染色体易位2例;检出C N V -S e q 异常24例,异常检出率为3.3%,其中染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例;染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例;致病性染色体拷贝数变异8例,包括染色体微重复1例,染色体微缺失7例㊂其中染色体非整倍体异常中染色体核型分析和C N V -S e q 检测结果一致㊂结论 染色体核型分析联合CN V -S e q 检测可提高染色体异常检出率,两种方法各自有独特的优势,可以相互验证,互补不足,染色体核型分析可比较直观地检测出染色体结构变异,而C N V -S e q 可检测出染色体微缺失㊁微重复㊂关键词:染色体核型分析; 全基因组拷贝数变异测序; 高龄; 孕妇; 产前诊断中图法分类号:R 446.9文献标志码:A 文章编号:1672-9455(2024)04-0507-04A p p l i c a t i o n o f c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s c o m b i n e d w i t h C N V -S e q de t e c t i o n i n p r e n a t a l d i a g n o s i s of e l d e r l y p r e gn a n t w o m e n MA H a i x i a 1,F E N G L i y u n 2,G U O Y u a n q i n g 2,H E L i m e i 1ә1.D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y ;2.S c r e e n i n g C e n t e r ,S h a n g h a i C h a n g n i n g Di s t r i c t M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h H o s p i t a l ,S h a n gh a i 200051,C h i n a A b s t r a c t :O b je c t i v e T o e x p l o r e t h e s i g n if i c a n c e o f t h e c o m b i n e d a p p l i c a t i o n o f c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a -n a l y s i s a n d w h o l eg e n o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g (C N V -S e q )i n th e p r e n a t a l di a gn o s i s o f a m n i o t i c f l u i d i n e l d e r l y p r e g n a n t w o m e n .M e t h o d s T h e c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n d C N V -S e q de t e c t i o n r e s u l t s of a m -n i o t i c f l u i d c e l l s o f 723e l d e r l y p r eg n a n t w o m e n a d m i t t e d t o Sh a n g h ai C h a n g n i n g D i s t r i c t M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h H o s p i t a l f r o m J a n u a r y 2020t o D e c e m b e r 2022w e r e a n a l y z e d r e t r o s p e c t i v e l y.R e s u l t s C h r o m o s o m e a b n o r m a l i t i e s w e r e d e t e c t e d i n 29o f 723e l d e r l y p r e gn a n t w o m e n ,w i t h a n a b n o r m a l d e t e c t i o n r a t e o f 4.0%.A -m o n g 723e l d e r l y p r e g n a n t w o m e n ,21c a s e s w e r e f o u n d w i t h a b n o r m a l k a r y o t y pe ,t h e a b n o r m a l d e t e c t i o n r a t e w a s 2.9%,i n c l u d i n g 13c a s e s of c h r o m o s o m e a n e u p l o i d y ,i n c l u d i ng 7c a s e s o f t r i s o m y 21,1c a s e o f t r i s o m y 18a n d 5c a s e s o f s e x c h r o m o s o m e a n e u p l o i d y .T h e r e w e r e 3c a s e s o f c h r o m o s o m e m o s a i c i s m ,i n c l u d i n g 2c a s e s o f s e x c h r o m o s o m e m o s a i c i s m a n d 1c a s e o f a u t o s o m a l m o s a i c i s m.T h e r e w e r e 5c a s e s o f c h r o m o s o m e s t r u c t u r ea b n o r m a l i t y ,i n c l u d i n g 3c a s e s o f c h r o m o s o m e i n v e r s i o n a n d 2c a s e s o f c h r o m o s o m e t r a n s l o c a t i o n .C N V -S e qa b n o r m a l i t i e s w e r e d e t e c t e d i n 24c a s e s ,w i t h a n a b n o r m a l d e t e c t i o n r a t e o f 3.3%,i n c l u d i n g 13c a s e s o f c h r o -m o s o m e a n e u p l o i d y ,i n c l u d i n g 7c a s e s o f t r i s o m y 21,1c a s e o f t r i s o m y 18a n d 5c a s e s o f s e x c h r o m o s o m e a n e u -p l o i d y .T h e r e w e r e 3c a s e s o f c h r o m o s o m e m o s a i c i s m ,i n c l u d i n g 2ca s e s o f s e x c h r o m o s o m e m o s a i c i s m a n d 1c a s e o f a u t o s o m a l m o s a i c i s m.T h e r e w e r e 8c a s e s o f p a t h o g e n i c c h r o m o s o m e c o p y n u mb e r v a r i a t i o n ,i nc l ud i n g1c a s e o f c h r o m o s o m e m i c r o d u p l i c a t i o n a n d 7c a s e s o f c h r o m o s o m e m i c r o d e l e t i o n .T h e r e s u l t s o f c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s a n d C N V -S e q d e t e c t i o n i n c h r o m o s o m e a n e u p l o i d y w e r e c o n s i s t e n t .C o n c l u s i o n C h r o m o -s o m a l k a r y o t y p e a n a l y s i s c o m b i n e d w i t h C N V -S e q d e t e c t i o n c a n i m p r o v e t h e d e t e c t i o n r a t e o f c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i -t i e s .E a c h m e t h o d h a s u n i q u e a d v a n t a g e s a n d c a n m u t u a l l y v e r i f y c o m p l e m e n t a r y d e f i c i e n c i e s .C h r o m o s o m a l k a r y o t y pe a n a l y s i s c a n i n t u i t i v e l y d e t e c t c h r o m o s o m a l s t r u c t u r a l v a r i a t i o n s ,w h i l e C N V -S e q ca n d e t e c t c h r o m o s o m a l m i c r o d e -l e t i o n s a n d m i c r o d u pl i c a t i o n s .K e y wo r d s :c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s ; w h o l e g e n o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g ; e l d e r -l y ; p r e g n a n t w o m a n ; p r e n a t a l d i a gn o s i s ㊃705㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n ,F e b r u a r y 2024,V o l .21,N o .4高龄孕妇是指年龄ȡ35岁的孕妇㊂孕妇高龄是胎儿染色体异常的重要因素之一[1]㊂胎儿染色体异常可引起胎儿组织㊁器官发育异常等㊂高龄可造成卵子老化㊁卵巢功能衰退,从而增加受精卵或生殖细胞减数分裂时染色体不分离的风险[2]㊂一直以来传统的染色体核型分析技术作为实验室产前诊断的金标准,除了可以检测出染色体数目异常外,还可以检测出大片段的结构异常,但同时也存在耗时㊁耗力㊁培养周期长㊁只能检测5M b以上的异常等缺点[3]㊂近年来,随着二代测序技术的快速发展,低深度全基因组拷贝数变异测序(C N V-S e q)被广泛应用于产前诊断领域,与传统的染色体核型分析技术相比,其有检测范围广㊁精准㊁通量高㊁成本低㊁操作简便等诸多优势,为染色体畸变及染色体拷贝数变异(C N V)检测提供了新的手段,但只能检测总体染色体数目的改变而不能检测结构的重排㊂本研究回顾性分析2020年1月至2022年12月本院723例高龄孕妇的羊水细胞染色体核型及C N V-S e q检测结果,探讨二者在高龄孕妇产前诊断中联合应用的意义,以期为临床医生提供参考依据,现报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料选取2020年1月至2022年12月本院产前诊断中心就诊的723例高龄孕妇为研究对象㊂纳入标准:(1)孕妇年龄ȡ35岁;(2)均为单胎妊娠㊂排除标准:(1)既往有不良孕产史;(2)孕期接触过有毒㊁有害物质㊂所有孕妇孕周18~26周,年龄35~44岁,孕妇均签署知情同意书后进行羊膜腔穿刺术,同时进行染色体核型分析和C N V-S e q检测㊂1.2方法1.2.1羊膜腔穿刺 B超定位下严格无菌操作,经腹壁进行羊膜腔穿刺术,每例孕妇均抽取3试管羊水,每管10m L,共30m L,其中2管进行细胞培养染色体核型分析,1管进行C N V-S e q检测㊂1.2.2染色体G显带染色体核型分析2管羊水分装于两支15m L无菌离心管中,1500r/m i n离心10 m i n,留取0.5~1.5m L沉淀,加5m L G i b c o培养基混匀后,进行细胞接种,培养7d后观察细胞是否贴壁,如贴壁进行换液,当贴壁细胞生长旺盛可见5~8个大克隆时,加入10μg/m L秋水仙素60μL,作用3.0~3.5h后收获细胞制片并进行G显带,按照人类细胞遗传学国际命名体制(I S C N2016)标准进行分析诊断,嵌合体通常计数100个细胞,必要时做C带分析㊂1.2.3 C N V-S e q检测抽取10m L羊水,送至华大基因公司完成分析㊂实际检测中主要针对染色体非整倍体变异和100k b以上的C N V,方法如下:按照试剂盒说明书从羊水细胞中提取分离并纯化基因组D N A,并以此作为起始模板,构建D N A文库,进行测序㊂使用比对软件将读序信息与人类参考基因组(G R C h37,U C S C r e l e a s e h g19)进行比对分析,并通过检索I S C A㊁D e c i p h e r㊁C l i n v a r等数据库,参照美国医学遗传学与基因组学学会(A C MG)遗传变异分类标准与指南[4]对检测到的C N V的致病性进行评估㊂结果分为5类:致病㊁可能致病㊁临床意义未明㊁可能良性㊁良性㊂1.3统计学处理采用E x c e l2007软件进行数据处理及统计分析㊂2结果723例高龄孕妇中检出染色体异常共29例,异常检出率为4.0%㊂723例高龄孕妇中,染色体核型分析检出核型异常21例,异常检出率为2.9%,C N V-S e q检测结果异常24例,异常检出率为3.3%;核型异常中包括染色体非整倍体13例,染色体嵌合体3例,染色体结构异常5例;C N V-S e q检测结果异常包括染色体非整倍体13例,染色体嵌合3例,致病性染色体拷贝数变异(p C N V s)8例㊂723例高龄孕妇中检出染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例,其中47,X X X2例㊁47,X Y Y2例㊁47,X X Y1例,染色体核型分析结果与C N V-S e q结果均一致㊂见表1㊂723例高龄孕妇中检出染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例㊂染色体核型分析结果与C N V-S e q检测结果在嵌合比例上均不一致㊂见表1㊂723例高龄孕妇中检出染色体结构异常5例,包括染色体倒位3例,染色体易位2例㊂染色体核型分析结果与C N V-S e q检测结果均不一致,其中C N V-S e q检测结果均未见异常㊂见表1㊂723例高龄孕妇中检出p C N V s8例,包括染色体微重复1例,染色体微缺失7例㊂染色体核型分析结果与C N V-S e q检测结果均不一致,其中染色体核型分析结果均未见异常㊂见表1㊂表1723例高龄孕妇中羊水染色体核型分析异常与C N V-S e q检测结果比较类别染色体核型分析结果C N V-S e q检测结果两种检测结果一致性例数(n)染色体数目异常47,X N,+21s e q[G R C h37]d u p(21p13q22.3)48.13M b一致747,X N,+18s e q[G R C h37]d u p(18p11.32q23)78.08M b一致147,X X X s e q[G R C h37]d u p(X p22.33q28)155.27M b一致2㊃805㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4续表1723例高龄孕妇中羊水染色体核型分析异常与C N V-S e q检测结果比较类别染色体核型分析结果C N V-S e q检测结果两种检测结果一致性例数(n)47,X Y Y s e q[G R C h37]d u p(Y p11.32q12)59.37M b一致247,X X Y s e q[G R C h37]d u p(X p22.33q28)155.27M b一致1染色体嵌合45,X[3]/46,X X[52]s e q[G R C h37]d e l(X p22.33q28)155.27M b嵌合比例19%不一致1 46,X,i(X)(q10)[81]/45,X[19]s e q[G R C h37]d e l(X p22.33p11.21)54.26M b不一致147,X Y,+9[45]/46,X Y[55]s e q[G R C h37]d u p(9)(p24.3q34.3)141.21M b,嵌合比例18%不一致1染色体结构异常45,X Y,d e r(13;14)(q10;q10)未见异常不一致146,X X,i n v(10)(q11.2q23)m a t未见异常不一致146,X Y,t(1;11)(q25;q13)p a t未见异常不一致146,X Y,i n v(2)(p11.2q13)未见异常不一致147,X X+21,i n v(2)(q21q44)未见异常不一致1染色体微重复未见异常s e q[G R C h37]d u p(4q22.1q22.1)不一致1染色体微缺失未见异常s e q[G R C h37]d e l(15q13.2q13.3)不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(16p12.2p11.2)不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(15q11.2q11.2)550.3k b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(15q11.2q11.2)1.03M b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(6)(q27q27)3.87M b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(20)(p12.2p12.2),1.44M b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(14)(q12q12),4.69M b不一致13讨论近年来,伴随 三孩 政策的落地,高龄孕妇比例不断增多㊂‘低深度全基因组测序技术在产前诊断中的应用专家共识“[5]为C N V-s e q技术在产前诊断中的规范应用提供了指导建议㊂本研究通过回顾性分析723例高龄孕妇产前诊断中胎儿染色体核型分析及C N V-S e q异常检出情况,探讨二者联合检测在高龄孕妇产前诊断中的临床应用价值,为临床医生提供参考依据㊂染色体非整倍体异常可引起严重的出生缺陷,是产前诊断中最为常见的胎儿染色体异常,染色体核型分析与C N V-S e q都可提示胎儿染色体非整倍体异常,二者联合应用可相互验证㊂本研究中723例高龄孕妇中检出染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例,染色体核型分析和C N V-S e q检测结果一致,提示染色体核型分析和C N V-S e q都可以准确地检测胎儿染色体的非整倍体异常㊂同时使用两种原理不同的检测技术可以相互验证其结果的准确性,以最大限度地降低缺陷儿的出生,减少漏诊㊁误诊㊂本研究中723例高龄孕妇中检出染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例,但嵌合比例核型与C N V-S e q检测结果均不一致㊂性染色体嵌合中1例核型分析结果为45,X嵌合比例为5.5%,而C N V-S e q检测结果为45,X,嵌合比例为19%,1例核型分析结果为45,X和46,X,i(X)(q10)的嵌合比例分别为19%和81%,而C N V-S e q检测结果为X染色体短臂缺失,1例常染色体嵌合中核型分析结果为47,X Y,+9的嵌合比例为45%,而C N V-S e q检测结果为9号染色体,嵌合比例为18%㊂提示由于染色体核型分析和C N V-S e q原理不同,在染色体嵌合体诊断中及嵌合比例分析中存在差异㊂有研究报道,C N V-S e q联合染色体核型分析可弥补单一检测方法诊断嵌合体出现误诊的不足[6],C N V-S e q可检测低至5%的嵌合体[7]㊂染色体核型分析和C N V-S e q检测结果不一致的标本可通过荧光原位杂交(F I S H)㊁多重连接依赖式探针扩增技术(M L P A)等第3种方法进行验证,为临床提供最准确的依据㊂染色体核型分析可以检测染色体倒位㊁易位及罗伯逊易位的类型,C N V-S e q可以检测有无致病性遗传物质的增多或减少,二者联合应用可明确胎儿染色体大片段重排的类型及意义㊂本研究中723例高龄孕妇中染色体核型分析检出染色体结构异常5例,包括染色体倒位3例,易位2例,而C N V-S e q检测结果未㊃905㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4见异常㊂有研究表明产前诊断标本中染色体罗氏易位和相互易位占比约为0.89%和1.82%[8],若胎儿易位或倒位来自父母双亲之一,且没有总遗传物质的丢失或增加,则不影响胎儿的表型和智力发育[9],孕妇可继续妊娠㊂若新发易位或倒位在发生重排的同时发生其他拷贝数变异,涉及致病性遗传物质的增多或减少,则孕妇需进行相应的遗传咨询决定是否继续妊娠㊂因此,倒位或相互易位的胎儿携带者需联合C N V-S e q检测确定染色体在发生重排的同时总体遗传物质是否发生了改变,以提高产前诊断的精准度,减少误诊㊁漏诊㊂C N V-S e q是一项基于高通量测序技术的基因组拷贝数变异检测,可通过改变分辨率㊁调整测序深度检测不同大小的C N V,其优势主要包括操作简便㊁检测范围广㊁分辨率高㊁周期短㊁所需D N A样本量低[10],WA N G等[11]报道该技术与染色体核型分析比较,对致病性或可能致病的C N V检出率由1.8%提高至2.8%,可靠性和准确性较好,且适用性较好㊂本研究中所用的方法分辨率为100k b,可很好地弥补染色体核型分析分辨率低的不足㊂本研究723例高龄孕妇中C N V-S e q检出p C N V s8例,包括染色体微重复1例,染色体微缺失7例,染色体核型分析均未见异常㊂C N V-S e q检测可额外诊断染色体微缺失/微重复综合征,发病率为1/50000~1/400[12]㊂染色体微缺失/微重复综合征会导致一些复杂临床表型,如智力发育异常㊁生长发育迟缓㊁内分泌异常㊁内脏器官畸形等,是染色体疾病中的常见类型,目前已发现67种染色体微缺失/微重复综合征㊂研究证实C N V-S e q 能明显提高致病性染色体微缺失/微重复的检出率,是检测该种染色体畸变的有效方法,因此,对高龄孕妇的产前诊断联合应用染色体核型分析和C N V-S e q 有很重要的临床意义[13-15]㊂综上所述,在对高龄孕妇实施产前诊断时,染色体核型分析和C N V-S e q检测两种方法各自有独特的优势,联合使用可以相互验证,互补不足,染色体核型分析可比较直观地检测出染色体结构变异,而C N V-S e q可检测出染色体微缺失㊁微重复,有效提高染色体异常检出率,减少遗传缺陷患儿的出生,为临床的产前咨询提供有效㊁可靠的依据㊂参考文献[1]林晓娟,唐中锋,宋筱玉,等.甘肃地区1701例高龄孕妇产前诊断结果临床分析[J].中国优生与遗传杂志,2019, 27(10):1196-1198.[2]张娜,颜梅珍,王元白,等.高龄孕妇羊水染色体核型分析及拷贝数变异分析[J].西南医科大学学报,2021,44(2):144-149.[3]修霞,张胜利,曾杰,等.染色体畸变检测在自然流产绒毛组织染色体核型分析中的应用价值[J].中国综合临床, 2016,32(10):950-953.[4]R I C HA R D S S,A Z I Z N,B A L E S,e t a l.S t a n d a r d s a n dg u i d e l i n e s f o r t h e i n t e r p r e t a t i o n o f s e q u e n c e v a r i a n t s:a j o i n t c o n s e n s u s r e c o mm e n d a t i o n o f t h e A m e r i c a n C o l l e g e o f M e d i c a l G e n e t i c s a n d G e n o m i c s a n d t h e A s s o c i a t i o n f o r M o l e c u l a r P a t h o l o g y[J].G e n e t M e d,2015,17(5):405-424.[5]中华医学会医学遗传学分会临床遗传学组,中国医师协会医学遗传医师分会遗传病产前诊断专业委员会,中华预防医学会出生缺陷预防与控制专业委员会遗传病防控学组.低深度全基因组测序技术在产前诊断中的应用专家共识[J].中华医学遗传学杂志,2019,36(4):293-296.[6]邓新娥,黄杏玲,王远流,等.拷贝数变异测序在胎儿先天性心脏病产前遗传学诊断中的应用[J].中国生育健康杂志,2020,31(2):137-142.[7]WA N G Y,C H E N Y,T I A N F,e t a l.M a t e r n a l m o s a i c i s mi s a s i g n i f i c a n t c o n t r i b u t o r t o d i s c o r d a n t s e x c h r o m o s o m a l a n e u p l o i d i e s a s s o c i a t e d w i t h n o n i n v a s i v e p r e n a t a l t e s t i n g[J].C l i n C h e m,2014,60(1):251-259.[8]代鹏,孔祥东.355例产前胎儿羊水细胞易位染色体核型分析及遗传咨询[J].中国优生与遗传杂志,2019,27(5): 560-563.[9]K A I HU I Z,Y A N H,R U I D,e t a l.F a m i l i a l i n t e l l e c t u a ld i s a b i l i t y a s a re s u l t of a d e r i v a t i v e c h r o m o s o m e22o r ig i-n a t i n g f r o m a b a l a n c e d t r a n s l o c a t i o n(3;22)i n a f o u r g e n-e r a t i o nf a m i l y[J].M o l C y t og e n e t,2018,11:18.[10]刘洪倩,刘俊涛,邬玲仟,等.低深度全基因组测序技术在产前诊断中的应用专家共识[J].中华医学遗传学杂志, 2019,36(4):293-296.[11]WA N G J,C H E N L,Z HO U C,e t a l.P r o s p e c t i v e c h r o m o-s o m e a n a l y s i s o f3429a m n i o c e n t e s i s s a m p l e s i n C h i n a u-s i n g c o p y n u m b e r v a r i a-t i o n s e q u e n c i n g[J].A m J O b s t e tG y n e c o l,2018,219(3):287.e1-287.e18.[12]WA T S O N C T,MA R Q U E S-B O N E T T,S HA R P A J,e ta l.T h e g e n e t i c s o f m i c r o d e l e t i o n a n d m i c r o d u p l i c a t i o n s y d r o m e s:a n u p d a t e[J].A n n u R e v G e n o m i c s H u m G e n-e t,2014,15:215-244.[13]汪菁,徐晶晶,陈玲,等.C N V-S e q在高龄孕妇产前诊断中的应用[J].安徽医科大学学报,2019,54(10):1659-1662.[14]唐艳,卢守莲,王珏.染色体核型分析联合C N V-S e q检测在高龄孕妇产前诊断中的临床应用[J].系统医学,2022, 7(15):164-168.[15]冯暄,郝胜菊,张庆华,等.C N V-s e q技术在1395例高龄孕妇产前诊断中的临床应用评价[J].临床检验杂志, 2022,40(3):190-193.(收稿日期:2023-08-07修回日期:2023-12-15)㊃015㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4。
276例不良孕产及核型异常患者染色体核型分析
摘要 ： 目的 通过 ２ ７ ６例有 不 良孕产 史且核型异常患 者外周 血染色体核 型分析 ， 探讨 不 良孕产 史与染 色体核型异 常的关 系。
关键词 ： 染 色体 ； 不 良孕 产 ； 流产 ； 核 型
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ９—６ ４ ６ ９ ． ２ ０１ ５ ． １ １ ． ０ ２ ９
染 色体异常是导致夫妇不 良孕产 的重要原 因 ， 文献报道
我 国一 般 人 群 中染 色 体 异常 率 为 ０ ． ５ ％ ～１ ． ０ ％， 不 良孕 产 史 患 者 比一 般 人 群 明显 增 高 ， 其 发生率 为 ２ ％ ～１ ０ ％。反复 自
２ ７ ６例不 良孕产且核型异常 的患者进行细 胞遗传学 分析 ， 为
遗 传 咨 询提 供 参 考 。
１ 资 料 与 方法
１ ． １ 一般资料
收集我院 ２ ０ １ ３ 年 １ 月—２ ０ １ ４年 ４月就诊 的
２ ７ ６对 不 良孕 产 夫 妇 ， 年龄２ １～ ４ ５岁 ， 流 产 次 数 为 ２～ ６次 。
．
２ １ ４ ２．
安 徽Biblioteka 医 药Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ２ ０ １ ５ Ｎ ｏ ｖ ； １ ９ （ １ １ ）
２ ７ ６ 例 不 良孕 产 及 核 型 异 常 患 者 染 色 体 核 型 分析
南京地区4335例遗传咨询者外周血染色体核型分析
异常核型
异常核型 检出率( % )
93
3. 64
29
3. 70
7
2. 62
8
3. 81
38
23. 90
15
13. 16
25
27. 17
58
68. 24
3
4. 34
276
6. 37
结果
在 4335 例外周血染色体的检测中检出异常核型 276 例， 异常者占 6. 37% ，其中结构异常 189 例，占异常核型 68. 48% ； 数目异常 74 例，占核型异常 26. 81% ； 嵌合体 13 例，占核型异 常 4. 71% 。部分异常核型及相关临床表现见表 2。
讨论
造成自然流产、死胎、畸形、不孕不育等不良孕产史的原 因很多，主要包括环境因素、感染、内分泌失调等，而染色体 异常是导致自然流产、智力低下、先天性畸形、生长发育迟缓、 原发性闭经、原发不孕等疾病的重要原因之一。染色体核型
基金项目： 江苏省卫生厅医学科研项目( H201068) 通讯作者： 许争峰
染色体是遗传物质的载体，不论其结构或数目的改变均 会引起智力发育障碍或疾病。智力低下者中检出染色体异 常 58 例，异常核型检出率为 68. 24% ，居异常核型高位，55 例为 21 － 三体综合征，占智力低下异常核型 94. 83% ，其它 类型的智力低下仅占 5. 17% 。这说明智力低下染色体异常 中主要是 21 － 三体。21 － 三体综合征是最常见的染色体疾 病。它以先天性 智 力 低 下 为 主 要 表 现，生 活 不 能 自 理，且 无 法治疗。纯合型的 21 － 三体几乎都是新发生的，与父母的核 型无关，主要是由于双亲一方的配子在减数分裂中受到某些 因素的影响，使得 21 号染色体不分离而致。这种不分离常 发生于卵子生成过程中，受物理、化学因素和病毒感染的影 响，高龄孕妇卵子的老化也会引起不分离的现象，并随着母 亲年龄的增高而发病率增加。目前关于 21 － 三体综合征的 治疗仅限于对症治疗，不能实现彻底根治，由于该病发病率
639对不良孕产史夫妇外周血染色体核型分析
临床研究发生。
3.3 适度的皮瓣张力。
在切口缝合的时候,要在充分切除癌可能侵犯的皮肤的基础上,尽量减小皮瓣张力。
如果皮瓣张力高,可以使用皮肤减张的方法缝合。
具体方法包括:①皮肤缺损面积小时,可以采用皮肤网状戳孔法,即用手术刀尖将切缘两侧皮肤切开多个小切口,深度达真皮层,不要全层切开,以防破坏皮下毛细血管网。
当皮瓣缝合以后颜色正常,则停止戳孔。
此法简单实用。
②如果皮肤缺损较大,则采用游离植皮术,一般采用下腹全厚皮片移植。
用刀尖在皮片上多点切开成网状,一可增加皮片面积,二可使皮下的渗血渗液能及时排出,防止移植皮片坏死。
3.4 防止皮下积液。
液体的产生几乎不可避免,如果不能顺畅引流,则可以形成皮下积液,因此尽量减少液体的产生和通畅的引流是防止皮下积液的必然手段[3][4],这些措施包括:防止淋巴管漏、术后双管引流、胸带加压包扎等。
参考文献1 许晋彦.改良乳腺癌根治术后近期并发症分析(附36例报告)[J ].山东医药2007,47(33):67～682 潘俊峰.乳腺癌改良根治术后皮瓣坏死的预防探讨[J ].肿瘤学杂志,2007,13(6):467～4683 毛国璋.乳腺癌根治术后皮瓣下局部积液的治疗体会[J ].医师进修杂志,2004,27(5):564 张艳君.两种包扎法预防乳腺癌根治术后皮下积液的疗效观察[J ].军医进修学院学报,2004,25(5):388～389作者单位:115100 辽宁省大石桥中心医院639对不良孕产史夫妇外周血染色体核型分析张志红 王金兰 孙超英【中图分类号】R596.1 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085(2008)03-0050-03【摘要】目的:探讨不良孕产史与染色体异常之间的关系。
方法:我们对639对不良孕产史夫妇进行了外周血染色体核型分析。
结果:发现79例异常核型,常染色体异常中女性27例,男性6例;性染色体异常46例男性45例,女性1例。
异常检出为率6.18%。
３０１５例遗传咨询者外周血染色体核型嵌合体分析
《中国产前诊断杂志（电子版）》 ２０２３年第１５卷第２期·论著· ３０１５例遗传咨询者外周血染色体核型嵌合体分析张孝乾 张艳萍 周玉侠 吴玉苏 古晋（青岛大学附属山东省妇幼保健院，国家卫生健康委员会生育调控技术重点实验室，山东济南，２５００００）【摘要】 目的 探究遗传咨询者外周血染色体核型嵌合类型、嵌合比例及其与临床表型的关系。
方法回顾性分析３０１５例来自山东省妇幼保健院遗传咨询者外周血染色体核型，分析不同嵌合类型、嵌合比例个体的身高、体重、智力及生殖能力。
结果 ３０１５例外周血样本中染色体核型嵌合体２７例，嵌合比例０．９％。
致病性嵌合体２１例，多态性嵌合体６例。
致病性嵌合型中，Ｘ染色体嵌合体１９例，多于常染色体嵌合体数量。
Ｘ重复型嵌合体身高大于Ｘ丢失型嵌合体（犘＝０．０３２）。
Ｘ嵌合体嵌合比例３％～５％，显著低于其他类型嵌合比例（犘＝０．０００；χ２＝２３．５）。
结论 纳入研究的样本中Ｘ染色体较常染色体嵌合比例更高；Ｘ染色体低比例嵌合体在所有嵌合体中占比大，且可能会影响个体身高发育。
【关键词】 Ｘ染色体嵌合；嵌合体；嵌合比例；卵巢发育不全综合征【中图分类号】 Ｒ７１５．５ 【文献标识码】 Ａ犇犗犐：１０．１３４７０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｐｄ．２０２３．０２．００２ 通信作者：张孝乾，Ｅｍａｉｌ：Ｚｉｖ２０１９＠１６３．ｃｏｍ基金项目：山东省医药卫生科技发展计划（２０２００２０８１３８３）犃狀犪犾狔狊犻狊狅犳狆犲狉犻狆犺犲狉犪犾犫犾狅狅犱犽犪狉狔狅狋狔狆犲犮犺犻犿犲狉犻狊犿犻狀３０１５犮犪狊犲狊狅犳犵犲狀犲狋犻犮犮狅狌狀狊犲犾狅狉狊犣犺犪狀犵犡犻犪狅狇犻犪狀 ，犣犺犪狀犵犢犪狀狆犻狀犵，犣犺狅狌犢狌狓犻犪，犠狌犢狌狊狌，犌狌犑犻狀犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犅犻狉狋犺犚犲犵狌犾犪狋犻狅狀犪狀犱犆狅狀狋狉狅犾犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔狅犳犖犪狋犻狅狀犪犾犎犲犪犾狋犺犆狅犿犿犻狊狊犻狅狀狅犳犆犺犻狀犪，犕犪狋犲狉狀犪犾犪狀犱犆犺犻犾犱犎犲犪犾狋犺犆犪狉犲犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犛犺犪狀犱狅狀犵犘狉狅狏犻狀犮犲犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱狋狅犙犻狀犵犱犪狅犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犑犻狀犪狀２５００００，犛犺犪狀犱狅狀犵，犆犺犻狀犪【犃犫狊狋狉犪犮狋】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲 Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈｉｍｅｒｉｓｍｔｙｐｅｓａｎｄｃｈｉｍｅｒｉｓｍｒａｔｉｏｓｏｆｋａｒｙｏｔｙｐｅｓｆｒｏｍｃｏｕｎｓｅｌｅｄｐａｔｉｅｎｔｓｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄ，ａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ．犕犲狋犺狅犱狊 Ｗｅｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｎａｌｙｚｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｋａｒｙｏｔｙｐｅｓｆｒｏｍ３０１５ｇｅｎｅｔｉｃｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｉｔｓｈｅｉｇｈｔ，ｗｅｉｇｈｔ，ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅａｎｄｆｅｒｔｉｌｉｔｙ．犚犲狊狌犾狋狊 Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ２７ｃａｓｅｓｏｆｃｈｉｍｅｒｉｓｍｉｎ３０１５ｓａｍｐｌｅｓ，ｗｉｔｈａｃｈｉｍｅｒｉｓｍｒａｔｉｏｏｆ０．９％．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ２１ｃａｓｅｓｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｃｈｉｍｅｒｉｓｍａｎｄ６ｃａｓｅｓｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｃｈｉｍｅｒｉｓｍ．Ａｍｏｎｇｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｃｈｉｍｅｒｉｓｍ，ｔｈｅｒｅｉｓ１９ｃａｓｅｓｏｆＸ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｃｈｉｍｅｒｉｓｍ，ｗｈｉｃｈｉｓｍｏｒｅｔｈａｎａｕｔｏｓｏｍａｌｃｈｉｍｅｒｉｓｍ．ＴｈｅＸｒｅｐｅａｔｃｈｉｍｅｒｉｓｍｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＸ ｌｏｓｓｃｈｉｍｅｒｉｓｍ（犘＝０．０３２）．ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＸ ｃｈｉｍｅｒｉｓｍｃｈｉｍｅｒｉｓｍｗａｓ３％ ５％，ｗｈｉｃｈｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｏｔｈｅｒｔｙｐｅｓｃｈｉｍｅｒｉｓｍｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＝０．０００；χ２＝２３．５）．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀 Ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅａｕｔｏｓｏｍｅｓｃｈｉｍｅｒｉｓｍ，ｔｈｅＸｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｃｈｉｍｅｒｉｓｍｈａｄｍｏｒｅｑｕａｎｔｉｔｙ．Ｈ；ＬｏｗｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＸｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｃｈｉｍｅｒａｓａｒｅｍｏｒｅｐｒｅｖａｌｅｎｔｉｎｔｈｅＸｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｌｏｗｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｃｈｉｍｅｒｉｓｍｍａｙａｆｆｅｃｔｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｈｅｉｇｈｔ．【犓犲狔狑狅狉犱狊】 Ｘ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｃｈｉｍｅｒｉｓｍ；Ｃｈｉｍｅｒａ；Ｃｈｉｍｅｒｉｃｒａｔｉｏ；Ｏｖａｒｉａｎｈｙｐｏｐｌａｓｉａｓｙｎｄｒｏｍｅ 染色体核型嵌合体是常见染色体异常类型，约占染色体异常的０．２％～２．５％［１］。
39对不良孕产史夫妇外周血染色体核型分析
ｒ （３ １ ） ｏ １ ； 的患者结婚 ３ ， ｂ ４ 年 其妻已 自 发流产 ３ ， 次 且均 在孕 ３个 月 内流产 。 染色体多态性主要表现为同源染色体之间形态 结构、 带纹宽窄和着色强度等方面的明显差异 ， 一般 认 为变异 只涉及异 染 色 质 区 ， 有 明显 的表 型 或病 没 理 学意义 。但 是 ， 目前 关 于染 色 体 多态 性 究 竟 与 不
３ 讨 论
１ 对 象与 方法
１１ 研究对象 ．
妇 产科 、 儿科 、 泌尿 外科 就诊 的 ３ ９对 （８例 ） ７ 有不 良 孕 产史 夫妇 的外周 血标 本 ， 中原发性 不 孕者 ５对 ， 其 原、 继发 反复 流产 （ 以上 ）死 产 者 １ ２次 、 ６对 ， 良生 不 育 史者 １ ８对 ， 括 生育 唐 氏儿 、 包 脑瘫 、 天 畸形 儿 、 先
１ 资料 与 方法
１ １ 皮质类 固醇诱发 的开角型青光 眼 （ ） ． １ 一般 情况 ： 例 （２眼） 占５ ．％ ， ２ ７ ３ ， ２９ 发病年龄 ８～ ７岁 ， ６ 平均 ２ ． 。男 性 ｌ ， 性 ｌ 。 （ ） ２７岁 ５眼 女 ７眼 ２ 原发 病
因： 局部 疾 病 含 春 季 结 膜 炎 ９眼 ， 敏性 结 膜 炎 ４ 过 眼 ， 性结 膜炎 ３眼 ， 慢 葡萄 膜 炎 ４眼 ， 膜 屈 光术 后 角 ７眼 ； 身疾病 含 肾病综 合征 ２眼 ， 全 系统 性 红 斑狼 疮 １眼 ， 风湿 性 关 节 炎 ２眼。 （ ） 类 ３ 用药 情 况 ： 局部 使 用２ ５眼 ， 含地塞 米松 眼液 、 典必 舒 眼液等 ； 全身 使 用
约 ２ｍ ， ｌ在酒精灯火焰旁 ， 向装有 ５ｍ 外周血淋 巴 ｌ 细胞 培养 基 的培养 瓶 中 注射 ０ ５～０ ７ｍ 外 周 血 ， ． ． ｌ
外周血染色体核型分析 项目简介
外周血染色体核型分析项目简介临床应用：用于染色体遗传病的诊断、不孕不育、先天畸形、智障诊断、胚胎植前筛选等。
检测结果的临床意义我国，人口中有20-25%的人患有各种遗传病，其中由染色体病导致的有近1400多万人。
染色体病主要表现为不孕、不育、反复性或自发流产、死胎、生育异常儿、闭经、智力发育不全或智力低下、多发畸形等。
然而，染色体病至今没有特殊、有效的疗法，主要在于预防和早期干预，所以做染色体检查，对于遗传咨询、降低出生缺陷、正确的生育指导及提高人口素质均具有重要意义。
适检人群1.不明原因的生长、发育迟缓，异常面容，多发畸形，身材矮小，两性畸形和智力发育迟缓的病人。
2.不明原因死产和新生儿死亡。
10%是由于染色体异常导致。
3.具有原发性闭经或不明原因的继发性闭经的女性。
4.原发性不育或习惯性流产的夫妇。
约3%～6%的原发性不育或习惯性流产的夫妇，其中一方存在染色体异常。
5.一级亲属中携带已知的或者可疑的染色体异常。
6.肿瘤。
几乎所有的肿瘤都与一条或多条染色体异常相关，肿瘤组织的染色体检查有助于临床诊断和预后评估。
7.高龄妊娠。
孕妇年龄大于30～35岁时，其胎儿染色体异常的风险明显增加，因此应对高龄孕妇的胎儿常规进行染色体分析。
标本采集要求1.采集要求：无菌采静脉血3ml，使抗凝剂与静脉血充分混匀,防止凝固，等待本中心配送人员收取，应在室温4～25℃保存。
采样和送检过程要严格无菌操作，严防溶血、凝血。
2.化疗期间病人和大剂量或长期使用抗生素病人需停药半个月后采血。
3所有样本应在保质期内及时送检（保存24小时）。
过了保质期样本不能保证培养效果。
或通知临床重新抽血送检。
4.如有大量饮酒或有酗酒习惯，采血期间尽量避免。
临床项目收费标准。
遗传咨询者外周血染色体核型分析结果如何
遗传咨询者外周血染色体核型分析结果如何1咨询对象和方法对2000年1月～2003年12月来我们省妇保所进行遗传咨询者888例患者做了外周血染色体检测及核型分析。
1、1咨询对象888例受检者均来自贵阳医学院附属医院遗传咨询门诊、男性科、儿科、妇产科等科室。
其中男433例，女455例，年龄从新生儿到50岁不等，而40岁以下患者占98。
51%，以生育年龄及16岁以下儿童为主，其就诊原因包括不良孕产史、智力低下、原发闭经、无精症及其它。
1、2方法针对每个受检者的情况，我们分别进行常规询问病史、体检、抽取外周血，在含25%小牛血清的1640培养基中培养68～72h，低渗、固定、制片、G显带，每例镜下观察30个分裂象，分析3个核型，对异常者加大计数及分析量。
2结果888例中检出染色体异常74例，异常核型检出率8。
33%，其咨询原因及异常核型检出率情况见表1。
表1888例咨询原因及异常核型检出情况略在888例遗传咨询患者中，发现异常染色体13类，其类型分布见表2。
3讨论优生遗传咨询是检测遗传病的一种有效手段，通过细胞遗传学的检查发现染色体异常者，提供诊断依据和生育指导。
对提高人口素质有较深远的社会效益。
表2异常染色体核型分布略3、1智力低下与染色体异常本资料在智力低下者中检出染色体异常29例，异常核型检出率为27。
88%，居异常核型高位，大部分为21-三体综合征，这主要说明染色体异常特例是21-三体，是引起智力低下的重要原因。
因此由于智力低下而就诊者应先进行染色体检查。
染色体是遗传物质的载体，不论其结构或数目的改变均会引起智力发育障碍或疾病。
国内报道染色体异常引起智力低下约占10%～15%[1～3]，本资料检出率为27。
88%，大大高于国内平均水平，这可能与检测的选择条件不同有关。
从染色体畸变类型观察，国内报道是以21-三体综合征为主，占90%，与本资料全部为21-三体综合征，基本相符。
21-三体综合征是最常见的染色体疾病。
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我科新增外周血染色体核型分析项目,助力不良孕史等多种染色
体相关疾病的诊断
染色体是基因的载体,承载着人类的主要遗传物质。
人类的体细胞属二倍体细胞，共包含23对染色体，1-22号常染色体互相配对，性染色体X和X或Y配对，即每个细胞都含有46条染色体。
2.5万个基因就分布在这23对不同染色体上，随着细胞的一分为二，所有遗传物质经复制后也随染色体分配到子代细胞，完成遗传物质的上下代传递。
染色体是基因的载体，染色体数目或结构的改变，导致遗传物质发生相应的改变，同样可引起遗传病，又称染色体病。
染色体异常所致的疾病有100余种，临床上常引起流产、死胎、生殖功能障碍(不孕症、复发性流产、畸胎)、智力低下、第二性征发育异常、外生殖器两性畸形、性情异常（身材高大，性情凶猛和有攻击性行为的男性）、先天性多发畸形等。
因此，在临床上开展外周血染色体核型分析，对于疾病病因的诊断有着十分重要的意义。
什么样人群要做外周血染色体核型分析呢？
主要包括以下人群：
①有明显的智力发育不全、生长迟缓或伴有其他先天畸形者；
②夫妇之一有染色体异常；
③曾生育过染色体异常患儿的夫妇；
④复发性流产夫妇；
⑤原发性闭经和女性不育症；
⑥无精子症和男性不育症；
⑦两性内外生殖畸形者；
⑧35岁以上的高龄孕妇；
⑨有害物质接触史；
⑩优生优育指导下的婚前染色体检查。
为助力优生优育，预防出生缺陷，开展相关疾病的诊断，我科新购买了MetaSystems 公司的世界上技术领先的染色体核型扫描分析仪(Metafer-玻片扫描系统和Ikaros染色体核型分析系统)，来为您解决上述疾病的病因筛查问题，欢迎有上述需求的患者前来我科就诊。