生化实验设计1
生化大实验——精选推荐
实验一密度梯度离心法提取叶绿体探索新鲜菠菜叶片叶绿体的分离纯化及其叶绿体蛋白质提取方法，为深入研究甘蔗叶绿体蛋白质组学奠定基础。
以叶片为材料，通过差速离心法制备粗叶绿体制品，分别利用蔗糖密度梯度离心和Percoll梯度离心进一步分离纯化完整叶绿体；提取叶绿体蛋白质，并进行电泳分析。
两种密度梯度离心法均可获得纯度和完整率较高的叶绿体，但蔗糖密度梯度离心法具有分离时间较短、成本较低，分离的叶绿体完整率、纯度和含量高等特点，并且提取的叶绿体蛋白质电泳条带清晰,蛋白质数量多且较全。
与Pecoll梯度离心法相比，蔗糖密度梯度离心法更适宜于在亚细胞水平上进行甘蔗蛋白质组学研究。
1 实验目的掌握手工制作密度梯度技术，了解蔗糖密度梯度离心的原理及优缺点。
2 实验原理密度梯度离心就是通过扩散法用相同的缓冲液把梯度介质配成不同浓度的梯度液，采用上铺法（或下铺法）将密度最大的梯度液置于离心管的底部，而把密度最小的梯度液铺在梯度的最上层，然后经之一段时间（最好放在与离心管温度相同的温度下，一般为24小时），让密度梯度溶质扩散，最后形成一种较为平坦的梯级梯度。
然后在密度梯度介质液柱的顶部铺上一层样品溶液，在离心期间，样品中的各种亚细胞组分会按照它们各自的沉降速度，被分成一系列的样品区带离心。
这种离心方法的基本依据是利用样品颗粒或大分子的不同沉降速率从而达到分离的目的。
密度梯度的作用在于一方面支撑样品溶液，另一方面用来稳定区带以防离心期间梯度柱中产生的对流对它的破坏。
颗粒在梯度中移动的快慢。
取决于它们的大小、形状、密度和离心力以及梯度介质的密度和黏度。
在含有不同颗粒的混合样品中，各种颗粒的移动是相互独立的，因此在各种颗粒的S值相差很小的情况下也能达到分离目的。
用两种或若干种浓度的蔗糖制成的梯度，在离心条件下，叶绿体和比它沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管底部。
通过这种方法可粗略的分离叶绿体。
生化实验
实验一：分光光度法一：定义：分光光度法是根据物质对不同波长的光波具有选择性吸收的特性---即可以产生吸收光谱，而建立起来的一种定量，定性分析的方法。
分类：根据波长范围可分为紫外，可见和红外分光光度法。
特点：1，与其它光谱分析方法相比，起仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快，2，灵敏度高3，选择性好4，精密度和准确度较高5，用途广泛。
二：分光光度法基本原理：物质对光的选择性吸收1：光的基本性质：波动性，微粒性2：物质对光的选择性吸收：一种物质呈现何种颜色，是与入射光的组成和物质本身的结构有关。
溶液呈现不同的颜色是由溶液中的质点（离子或分子）对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。
能复合成白光的两种颜色的光也称为互补色光。
3：吸收曲线（光谱）物质的分子内部存在状态：电子能级，振动能级，转动能级组成：紫外--可见吸收光谱，红外吸收光谱，远红外吸收光谱4、透光率和吸光度当一束单色光通过均匀的溶液时，入射光强度为I0，吸收光强度为Ia，透射光强度为It，反射光强度为Ir，则I0 = Ia + It + Ir 透光率(transmittance)T：透射光的强度It与入射光强度I0之比。
透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；透光率愈小，溶液对光的吸收愈多。
吸光度A:透光率的负对数。
A愈大，溶液对光的吸收愈多。
5、Lambert-Beer定律Lambert定律：当一适当波长的单色光通过一固定浓度的溶液时，其吸光度与光通过的液层厚度成正比。
式中b为液层厚度，k1为比例系数，它与被测物质性质、入射光波长、溶剂、溶液浓度及温度有关，Lambert定律对所有的均匀介质都是适用的。
三：分光光度计的基本组成(1)光源光源的作用：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度，稳定。
可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500 nm)紫外区：氢灯，氘灯(180～375 nm)(2) 单色器单色器的作用：从光源的连续光谱中，分出某一波长范围的光，作为吸光光度分析的光源。
生 化 实 验
(3) 0.10mo1/L醋酸溶液100mL
(4) 0.01mo1/L醋酸溶液50mL
（5）0.5%酪蛋白溶液（以0.01M NaOH作溶剂）100ml
（6）0.01%溴甲酚绿指示剂
（7）0.02mo1/L氢氧化钠溶液100ml
（8）0.02mo1/L盐酸溶液100ml
1.00N醋酸溶液（ml）2.4————
0.1N醋酸溶液（ml）—4.01.0——
0.01N醋酸溶液（ml）———2.50.62
酪蛋白醋酸钠溶液（ml）1.01.01.01.01.0
溶液的最终pH3.24.14.75.35.9
沉淀出现的情况
（2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以“—、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个是酪蛋白的等电点。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2。
NH2和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所
形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成
有色物质。此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸
在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
(13) 2％氯化钡溶液150mL
四、实验操作
1、蛋白质的盐析
中性无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
4、有机溶剂沉淀蛋白质
取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL 95％乙醇，混匀，观察沉淀的生成。
2022简单生物实验设计方案
2、增殖培育(又称丰富培育)
增殖培育就是在所采集的土壤等含菌样品中加入某些物质，并创建一些有利于待分别微生物生长的其他条件，使能分解利用这类物质的微生物大量繁殖，从而便于我们从其中分别到这类微生物。因此，增殖培育事实上是选择性培育基的一种实际应用。
3、纯种分别
在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。通过上述的增殖培育只能说我们要分别的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必需进行纯种分别。
改进：染色时不用吸水纸吸水，而是将玻片倾斜10度左右，这个角度肯定不能太大，太大水就会流出盖玻片下的小空间，然后从较高一侧的盖玻片与载玻片的缝隙往里滴碘液，让碘液自己流进盖玻片下，假如有液体流到盖玻片外，用吸水纸擦拭，但肯定要强调不能从盖玻片边缘吸水，盖玻片四周肯定要有充盈的液体，这样才不会出现大气泡。
⑵盖盖玻片
盖用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要视察的材料上
⑶染色
染：将玻片倾斜10度左右，从高的一侧滴入碘液，让其自己流入玻片。问题：染色时书中要求是把1-2滴碘液滴在盖玻片的一侧，然后用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。然而，部分同学可能将盖玻片下全部水全部吸干，做出的装片会有许多的大气泡，且气泡将细胞掩盖了，或者有人将气泡误认为细胞。
三、试验方法及步骤：
(一)试验材料：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、毛笔、滴管、擦镜纸;清水、碘酒溶液;西红柿、空心莲子草、洋葱;创可贴(切片时可能会有人受伤)
生化实验 设计试验--PAGE
tetramethyl ethylene diamine, 简称TEMED)的
作用下,聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。
Exit 生命科学学院
实验原理
设计试验
聚丙烯酰胺凝胶电泳按其有无浓缩效应分为连
生 续及不连续系统，在连续系统中凝胶总浓度、缓 物 冲液PH均相同，带电颗粒在电场作用下主要靠电 化 荷及分子筛效应得以分离；在不连续系统中缓冲 学 液离子成分、PH、凝胶总浓度及电位梯度均不连 实 续，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应和分 验 子筛效应，还具有浓缩效应，可使稀的样品在电
生
生物化学实验
物 化
设计试验
学 实
主讲：刘连芬
验
聊城生命科学学院
E-Mail：liulianfen@
生命科学学院பைடு நூலகம்
设计试验
相关知识背景
聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel
生 electropHoresis, PAGE）是以聚丙烯酰胺为支 物 持介质的电泳。聚丙烯酰胺是由单体丙烯酰胺
物 1.准确称取新鲜材料3g，加入9ml 提取缓冲液
Exit 生命科学学院
设计试验
生 物 化 学 实 验
Exit 生命科学学院
设计试验
试剂
1、1mol/L盐酸48.0 mL Tris 36.6g TEMED 0.24 mL
生
物
2、Acr 28.0g
Bis 0.753g
化 3、过硫酸铵 0.14- 0.3g
学
4、1mol/L盐酸48 mL Tris 5.98g TEMED 0.48 mL
化 （acrylamide. Acr）和交联剂N, N’-甲叉双丙烯
生化创新设计实验
1.2.2市售饮品及榨汁的维生素C测定
维生素C易被光及空气氧化，微量金属离子(铜、铁等)可加速其氧化，实验操作要迅速。维生素C在酸性溶液中比在碱性溶液中稳定，实验在酸性条件下进行【4】，同时避免阳光直射。
市售维生素饮料中有许多种类，且都打着高维生素C含量的标签，本实验希望以相对科学，准确的方式测定市售饮料中维生素C的含量，并通过与新鲜柠檬榨汁中维生素C含量的比较指出哪些饮料的相对维生素C含量更与纯果汁接近。
1 材料与方法
1．1实验材料
百事维动力，农夫山泉水溶C100，名仁柠檬苏打，新鲜柠檬，1%草酸溶液，2%淀粉溶液，0.05mol/L碘液，250ml锥形瓶若干，烧杯若干，低温离心机，玻璃棒，酸式滴定管，广泛ph试纸，100ml容量瓶。
同时我们发现农夫山泉水溶c100的宣传广告宣称一瓶饮料中有五个半柠檬的维生素C含量，可是实验中我们发现，一瓶饮料为445ml，而每100ml饮料中有22.4mg维生素C较其广告有较大出入。
4结论
通过实验我们发现，市售饮料中的维生素C含量可能要比标签中的读数要大一些，且农夫山泉水溶C100存在虚假宣传情况，通过本次实验我们有理由相信，商家在制售维生素饮料的过程中多多少少会有一些虚假成分，同时我们可以得出结论：新鲜水果较维生素饮料而言更适合补充人体日常所需维生素
Abstract:By comparing the content of vitamin C in common commercial drinks and comparing with the content of vitamin C in lemon juice, the loss of vitamin C in drinks was discussed. And whether there are suspected adulterants.
生化实验教案设计
生化实验是现代生物学研究中非常重要的实验项目，其是生物学的基础性实验之一，能够提供很多的重要信息，对于研究生物学的相关领域有着非常重要的意义。
生化实验在教学中也占据着非常重要的位置，生化实验教案的设计也就显得尤为重要。
生化实验全套教案设计需要从实验的基础性方面入手，设计出符合授课对象基础知识水平和学习态度的实验教学方案。
在教案设计中，需充分考虑学生的各种知识脉络，例如物理、化学、生物等基础知识，还需要针对各种不同层次的同学，调整教学内容和难度。
生化实验全套教案设计要充分考虑实验条件和实验的安全性。
实验条件是评估整个实验教学成功与否的关键点。
需要在教案设计时充分考虑实验条件，包括实验材料、设备和技术，确保能够顺利完成整个教学过程。
同时，更加重要的是，教师需要为实验设计一个完善的安全操作方案，考虑不同实验条件下的好坏情况，预防事故的发生。
做好实验操作和安全防范，可以保证各个环节的顺利进行。
在教案设计中充分考虑实验的科学性，科学性是生物学研究中必不可少的一个方面，在生化实验中更是不可或缺的重点。
生化实验全套教案的设计需要充分考虑科学性，需要突出实验的科学特点，比如实验的目的、原理、操作步骤、程度等方面，从而使同学们获得更为深入的理解和认识。
在设计实验时，需要围绕实验目的和原理提出问题和难点，让同学们能够从实验中获得更加丰富和深入的知识。
在教案设计中充分考虑实验的教育意义。
生化实验不仅仅是一种教学方式，而且作为教育手段，也有着非常重要的作用。
在设计教学方案时，需要充分思考实验的教育价值，想办法让同学们在实验中得到更多的知识和启示，提高学生的实验能力和学习效率。
除了重要的实验操作和内容以外，还应该加强同学们的实验室合作能力,加强同学们的学术经验能力，帮助同学们更好地理解实验内容，提高实验收获，从而达到教育目的。
为了保障生化实验教学效果，设计生化实验全套教案，一定要细致，系统，周密，确保教学质量的同时也需要充分体现教育意义和科学性。
生化实验的设计实验报告
一、实验目的1. 掌握从生物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 学习使用酚-氯仿法进行DNA的粗提取和纯化。
3. 熟悉DNA的鉴定方法。
二、实验原理DNA是生物体内的重要遗传物质，具有独特的碱基序列。
在提取过程中，利用DNA与蛋白质、RNA等物质的溶解性差异，通过适当的化学试剂和操作步骤，将DNA从细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：鸡血、无菌生理盐水、无水乙醇、氯化钠、酚-氯仿、NaCl溶液、DNA标准样品等。
2. 仪器：离心机、玻璃棒、量筒、烧杯、滴管、吸管、移液器、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 鸡血采集：取鸡血2ml，加入10ml无菌生理盐水，充分混匀。
2. 细胞裂解：取2ml鸡血混合液，加入等体积的酚-氯仿，充分混匀后静置5分钟。
3. DNA沉淀：取上述混合液，加入2.5倍体积的无水乙醇，充分混匀后静置10分钟。
4. DNA纯化：将上述混合液转移到离心管中，离心5分钟（8000r/min），弃去上清液。
5. DNA溶解：将沉淀用50μl NaCl溶液溶解，混匀。
6. DNA鉴定：取少量溶解后的DNA溶液，加入2μl DNA标准样品，观察颜色变化。
五、实验结果1. 在实验过程中，观察到鸡血混合液与酚-氯仿混合后分层，上层为红色，下层为无色。
2. 在DNA沉淀过程中，观察到白色沉淀形成。
3. 在DNA溶解过程中，观察到溶液颜色由白色变为无色。
4. 在DNA鉴定过程中，观察到溶液颜色与DNA标准样品颜色相似。
六、实验结论1. 成功从鸡血中提取了DNA。
2. 酚-氯仿法是提取DNA的有效方法。
3. DNA在生物组织中的提取具有实际应用价值。
七、实验讨论1. 实验过程中，酚-氯仿的加入有助于细胞裂解和DNA的提取。
2. 无水乙醇的加入有助于DNA的沉淀。
3. NaCl溶液的加入有助于DNA的溶解。
4. 实验过程中，注意操作规范，避免污染。
5. DNA提取过程中，温度、pH值等条件对实验结果有影响。
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实验设计：酶偶联反应测定血清中的肌酐
张燕111004048 周方111004052 周跃慧111004053
一、广泛查阅文献、确定候选方法：经过查阅相关文献，根据方法选择的要求对各种方法进行比较，充分了解各方法的科学依据和真实的使用价值，再根据临床应用价值、实验室条件等综合分析后，目前主要的肌酐测定方法有化学测定法(碱性苦味酸法)、酶法、高效液相层析法、拉曼散射法、同位素稀释质谱法、毛细管电泳法及电极法等。
二、候选方法设计：
1、实验原理：肌酐经肌酐水合酶催化生成肌酸，肌酸与肌酸激酶、丙酮酸激酶、乳
酸脱氢酶的级联催化作用下生成乳酸，并将NADH变成NAD+，测量在340nm处
监测NADH吸光度变化速率，其降低程度与肌酐含量呈正比例，反应式如下
P教材198
2、反应最适条件探讨：设计一系列实验分别探讨该候选方法的最适试剂浓
度、缓冲体系的种类、离子强度、pH值、反应温度和时间、检测波长等。
3、候选方法的初步试验：——对候选方法做初步评价试验，包括：
①标准曲线和重复性；
②质控血清和新鲜标本的重复试验；
③分析浓度不同的标本，并与公认的参考方法的结果对比。
三、方法学评价：
（一）重复性试验：检测候选方法的随机误差。
批内重复性试验：目的是测定实验方法的偶然误差，但产生偶然误差的原因也可能由于仪器、温度、试剂、标准品缺乏稳定性，吸量、计时、混匀等操作缺乏重现性造成，应排除这些因素才能把试验所产生的误差归于方法学的误差。
重复性试验依据时间间隔可分为批内、天内、天间三种重复性试验。
方法学评价重复性试验应由实验者作批内(或天内)及天间重复性试验
原理：批内重复性试验是指在相同条件下(用同样的方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一实验室由同一人操作，并保持实验期间准确度不变)对同一标本在尽可能短的时间内进行m轮，每轮n次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法。
其结果能反映各次测定结果相互接近的程度，用于客观评价酶偶联反应测定血清中的肌酐随机误差的大小。
操作步骤：将血清标本用酶偶联反应测定血清中的肌酐作5轮，每轮4次血糖测定，即可获得20个测定数据。
计算：
1．按照批内精密度的计算公式计算5轮每轮4次测定值的平均数()、标准差(S)和变异系数(CV%)。
首先计算出每轮测定值的均数、标准差(Si)及方差S12 S22 S32、S42。
再将5轮的总和代入公式即可算出批内标准差Sw。
最后计算出变异系数(CV%)。
（二）回收试验：通过计算回收率，检测候选方法的比例系统误差
试剂：
1．血清标本收集无肝炎病毒、无溶血、无脂浊的人混合血清，用酶偶联反应测定血清中的肌酐，再用生理盐水稀释到一定浓度备用
2．肌酐校准液
3．生理盐水。
4．其它试剂同酶偶联反应测定血清中的肌酐
操作步骤：1．样品制备
基础样品：血清0.9ml + 0.1ml生理盐水。
回收样品Ⅰ：血清0.9ml＋0.01ml 80mmol/L肌酐标准液＋ 0.09ml生理盐水。
回收样品Ⅱ：血清0.9ml＋0.06ml 80mmol/L肌酐标准液＋ 0.04ml生理盐水。
回收样品Ⅲ：血清0.9ml＋0.09ml 80mmol/L肌酐标准液＋ 0.01生理盐水。
2．血糖浓度测定按酶偶联反应测定血清中的肌酐，每份样品作双份检测，结果取平均值。
计算:
1．加入浓度计算:加入浓度(mmol/L)=标准液浓度×
2．回收量计算:回收量＝回收样品测得值－基础样品测得值
3．回收率计算:回收率(%)=×100
请将各计算结果填入表2-4内。
表2-4 回收试验的数据处理
样品测得浓度加入浓度回收浓度回收率(%)
(umol/L) (umol/L) (umol/L)
基础样品
回收样品Ⅰ
回收样品Ⅱ
回收样品Ⅲ
平均回收率。
(三)干扰试验：通过计算干扰值，检测候选方法的恒定系统误差。
试剂：
1．血清标本收集无肝炎病毒、无溶血、无脂浊的人混合血清，用酶偶联反应测定血清中的肌酐，再用生理盐水稀释到一定浓度备用
2．肌酐校准液
3．生理盐水。
4．其它试剂同酶偶联反应测定血清中的肌酐
操作步骤：
1．样品制备
基础样品：血清0.9ml＋蒸馏水0.1ml。
干扰样品Ⅰ：血清0.9ml＋9.0mmol/L肌酐标准液0.05ml+蒸馏水0.05ml。
干扰样品Ⅱ：血清0.9ml＋9.0mmol/L肌酐标准液0.1ml。
血液样品：蒸馏水0.9ml＋9.0mmol/L肌酐标准液0.1ml。
2．肌酐值的测定按酶偶联反应测定血清中的肌酐
计算：
1．干扰物加入值计算干扰物加入值＝干扰物溶液浓度×
2．干扰值计算干扰值(mmol/L)＝干扰样品测定值－基础样品测定值3．干扰率计算干扰率(%)＝干扰值/基础值×100
计算结果请填入表2-5内。
表2-5 干扰试验的数据处理
样品葡萄糖测得值加入值干扰值干扰率(%)
(umol/L) (umol/L) (umol/L)
基础样品－－－
回收样品Ⅰ
回收样品Ⅱ
样品
（四）方法比较试验：检测候选方法的系统比例误差。
1、用允许分析误差（EA）和医学决定水平(XC)判断候选方法能否接受。
评价试验中得到的结果，经统计学处理就能得出各种误差值，将其与确定的允许误差值EA进行比较。
各项指标都小于EA，则表示该方法可以接受；任何一项指标大于EA，则表示不能接受。
单值判断指标，可信区间判断指标
误差类别判断指标备注
随机误（RE） 1.96STM＜EA STM：重复试验方法的
标准差
比例误（PE ）(|R-100|)(xc/100)＜EA R：平均回收率
恒定误（CE）|偏差|＜EA由干扰试验测出
系统误（SE）|(a+bXC)-XC|＜EA对比试验回归方程
总误差（TE） 1.96STM+|(a+bXC)-XC|＜EA包括随机及系统误差三、参考值与参考范围
从按若干标准规定的参考人群中选定一定数量的参考个体，通过检测所得结果，经统计学处理求得均值（X）和标准差（S），均值（X）即为参考值，而上述结果的95%的分布区间（X±2S）即为参考范围。
四、临床诊断性能
诊断试验评价四格表
金标准
诊断试验有病无病合计
阳性真阳性(a)假阳性(b)a+b
阴性假阴性(c)真阴性(d)c+d
a+c b+d N
五、质控体系的建立
酶偶联反应测定血清中的肌酐
实验目的酶偶联反应测定血清中的肌酐
实验原理：肌酐经肌酐水合酶催化生成肌酸，肌酸与肌酸激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶的级联催化作用下生成乳酸，并将NADH变成NAD+，测量在340nm 处监测NADH吸光度变化速率，其降低程度与肌酐含量呈正比例，反应式如下：
P教材198
实验试剂：血清、R：肌酐水合酶；R2 ：肌酸激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶
操作步骤：连续监测法(340nm处吸光度，其降低程度与肌酐含量呈正比例)
加入物 B C U
样品（ul）X
标准品（ul）X
蒸馏水（ul）X
R1（ul） a a a
混匀，在37℃恒温5min，
R2 b b b
混匀，在37℃恒温5min,在340nm处吸光度，其降低程度与肌酐含量呈正比例
计算：样品肌酐测定（umol/L）=△Au
△Ac /min ×Cc
正常参考值：血浆肌酐44-133μmol/L。
注意事项：
1、此法特异性高，标本不需去蛋白，特别适用于自动分析。
但工具酶过多、价格昂贵。
2、酶法具有线性范围宽、抗干扰能力强、重复性好等特点
3、血尿素浓度除受肾功能影响外，还受到蛋白质分解代谢引起的变化，如高蛋白饮食、胃肠道出血、口服类固醇激素等都可使血尿素浓度增高。
4、样品为不溶血的血清、血浆（肝素或EDTA抗凝）。
样品应在低温条件下运输保存，样品中Crea在2~8℃保存可稳定3天，-20℃保存可稳定数月。
5、采用必要的预防措施适用试剂，试剂使用后应立即盖紧瓶盖，避免污染。
准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控制。