生化实验设计
生化大实验——精选推荐
实验一密度梯度离心法提取叶绿体探索新鲜菠菜叶片叶绿体的分离纯化及其叶绿体蛋白质提取方法，为深入研究甘蔗叶绿体蛋白质组学奠定基础。
以叶片为材料，通过差速离心法制备粗叶绿体制品，分别利用蔗糖密度梯度离心和Percoll梯度离心进一步分离纯化完整叶绿体；提取叶绿体蛋白质，并进行电泳分析。
两种密度梯度离心法均可获得纯度和完整率较高的叶绿体，但蔗糖密度梯度离心法具有分离时间较短、成本较低，分离的叶绿体完整率、纯度和含量高等特点，并且提取的叶绿体蛋白质电泳条带清晰,蛋白质数量多且较全。
与Pecoll梯度离心法相比，蔗糖密度梯度离心法更适宜于在亚细胞水平上进行甘蔗蛋白质组学研究。
1 实验目的掌握手工制作密度梯度技术，了解蔗糖密度梯度离心的原理及优缺点。
2 实验原理密度梯度离心就是通过扩散法用相同的缓冲液把梯度介质配成不同浓度的梯度液，采用上铺法（或下铺法）将密度最大的梯度液置于离心管的底部，而把密度最小的梯度液铺在梯度的最上层，然后经之一段时间（最好放在与离心管温度相同的温度下，一般为24小时），让密度梯度溶质扩散，最后形成一种较为平坦的梯级梯度。
然后在密度梯度介质液柱的顶部铺上一层样品溶液，在离心期间，样品中的各种亚细胞组分会按照它们各自的沉降速度，被分成一系列的样品区带离心。
这种离心方法的基本依据是利用样品颗粒或大分子的不同沉降速率从而达到分离的目的。
密度梯度的作用在于一方面支撑样品溶液，另一方面用来稳定区带以防离心期间梯度柱中产生的对流对它的破坏。
颗粒在梯度中移动的快慢。
取决于它们的大小、形状、密度和离心力以及梯度介质的密度和黏度。
在含有不同颗粒的混合样品中，各种颗粒的移动是相互独立的，因此在各种颗粒的S值相差很小的情况下也能达到分离目的。
用两种或若干种浓度的蔗糖制成的梯度，在离心条件下，叶绿体和比它沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管底部。
通过这种方法可粗略的分离叶绿体。
生化实验
实验一：分光光度法一：定义：分光光度法是根据物质对不同波长的光波具有选择性吸收的特性---即可以产生吸收光谱，而建立起来的一种定量，定性分析的方法。
分类：根据波长范围可分为紫外，可见和红外分光光度法。
特点：1，与其它光谱分析方法相比，起仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快，2，灵敏度高3，选择性好4，精密度和准确度较高5，用途广泛。
二：分光光度法基本原理：物质对光的选择性吸收1：光的基本性质：波动性，微粒性2：物质对光的选择性吸收：一种物质呈现何种颜色，是与入射光的组成和物质本身的结构有关。
溶液呈现不同的颜色是由溶液中的质点（离子或分子）对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。
能复合成白光的两种颜色的光也称为互补色光。
3：吸收曲线（光谱）物质的分子内部存在状态：电子能级，振动能级，转动能级组成：紫外--可见吸收光谱，红外吸收光谱，远红外吸收光谱4、透光率和吸光度当一束单色光通过均匀的溶液时，入射光强度为I0，吸收光强度为Ia，透射光强度为It，反射光强度为Ir，则I0 = Ia + It + Ir 透光率(transmittance)T：透射光的强度It与入射光强度I0之比。
透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；透光率愈小，溶液对光的吸收愈多。
吸光度A:透光率的负对数。
A愈大，溶液对光的吸收愈多。
5、Lambert-Beer定律Lambert定律：当一适当波长的单色光通过一固定浓度的溶液时，其吸光度与光通过的液层厚度成正比。
式中b为液层厚度，k1为比例系数，它与被测物质性质、入射光波长、溶剂、溶液浓度及温度有关，Lambert定律对所有的均匀介质都是适用的。
三：分光光度计的基本组成(1)光源光源的作用：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度，稳定。
可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500 nm)紫外区：氢灯，氘灯(180～375 nm)(2) 单色器单色器的作用：从光源的连续光谱中，分出某一波长范围的光，作为吸光光度分析的光源。
生 化 实 验
(3) 0.10mo1/L醋酸溶液100mL
(4) 0.01mo1/L醋酸溶液50mL
（5）0.5%酪蛋白溶液（以0.01M NaOH作溶剂）100ml
（6）0.01%溴甲酚绿指示剂
（7）0.02mo1/L氢氧化钠溶液100ml
（8）0.02mo1/L盐酸溶液100ml
1.00N醋酸溶液（ml）2.4————
0.1N醋酸溶液（ml）—4.01.0——
0.01N醋酸溶液（ml）———2.50.62
酪蛋白醋酸钠溶液（ml）1.01.01.01.01.0
溶液的最终pH3.24.14.75.35.9
沉淀出现的情况
（2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以“—、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个是酪蛋白的等电点。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2。
NH2和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所
形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成
有色物质。此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸
在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
(13) 2％氯化钡溶液150mL
四、实验操作
1、蛋白质的盐析
中性无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
4、有机溶剂沉淀蛋白质
取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL 95％乙醇，混匀，观察沉淀的生成。
生化实验技术综合设计性大实验
7.干燥离子互换剂应怎样进行处理？何谓 离子互换剂转型？
8.动植物总DNA或RNA提取旳措施主要有哪 些？以猪脾脏DNA提取为例试述每环节主 要原理是什么？怎样判断所提取DNA旳纯 度？
9.蛋白质浓度测定措施有哪些？怎样鉴定 所提取蛋白旳纯度？未知蛋白质分子量 从鸽肝中提取乙酰化酶，需将 动物饥饿后取材，可降低肝糖原，以 简化纯化环节。
7．对生物技术产品宿主菌或细胞旳要求
选择生物技术产品旳宿主受体菌或细 胞也应考虑到后处理旳问题。如用大肠杆 菌体现，因为其不能将所体现旳蛋白质分 泌到体外，故提取时必须破壁，增长了提 取旳困难，而且还可能具有毒素类有害因 子；
3.表面活性剂处理法
表面活性剂旳分子中，兼有亲脂 性和亲水性基团，能降低水旳界面张 力，具有乳化、分散、增溶作用。较 常用旳有十二烷基硫酸钠(SDS)、氯 化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠等。
生化物质旳提取
利用一种溶剂对不同物质溶解度旳差别， 从混合物中分离出一种或几种组分旳过程 称为提取（extraction），提取又称萃取 或抽提，其含义基本相同。用冷溶剂从固 体态物质提取旳过程可称为浸渍 （maceration）；用热溶剂者可称为浸提 （digestion），也称浸煮
思索题（课前设疑）
1.怎样保持生化物质旳生物活性？一般生化物 质在碱性条件下轻易变性，还是在酸性条件 下轻易变性？
2.一般从天然生物材料制作生化物质旳过程大 致可分为几种阶段？
3.在制备生化物质前应怎样选择原料？
4.什么叫动态吸附和静态吸附？它们在应用 上有何区别？
5.对酸性物质旳提取，常在什么条件下进行？ 对碱性物质旳提取，常在什么条件下进行？ 对两性物质旳提取，常在什么条件下进行？
生化实验教案设计
生化实验是现代生物学研究中非常重要的实验项目，其是生物学的基础性实验之一，能够提供很多的重要信息，对于研究生物学的相关领域有着非常重要的意义。
生化实验在教学中也占据着非常重要的位置，生化实验教案的设计也就显得尤为重要。
生化实验全套教案设计需要从实验的基础性方面入手，设计出符合授课对象基础知识水平和学习态度的实验教学方案。
在教案设计中，需充分考虑学生的各种知识脉络，例如物理、化学、生物等基础知识，还需要针对各种不同层次的同学，调整教学内容和难度。
生化实验全套教案设计要充分考虑实验条件和实验的安全性。
实验条件是评估整个实验教学成功与否的关键点。
需要在教案设计时充分考虑实验条件，包括实验材料、设备和技术，确保能够顺利完成整个教学过程。
同时，更加重要的是，教师需要为实验设计一个完善的安全操作方案，考虑不同实验条件下的好坏情况，预防事故的发生。
做好实验操作和安全防范，可以保证各个环节的顺利进行。
在教案设计中充分考虑实验的科学性，科学性是生物学研究中必不可少的一个方面，在生化实验中更是不可或缺的重点。
生化实验全套教案的设计需要充分考虑科学性，需要突出实验的科学特点，比如实验的目的、原理、操作步骤、程度等方面，从而使同学们获得更为深入的理解和认识。
在设计实验时，需要围绕实验目的和原理提出问题和难点，让同学们能够从实验中获得更加丰富和深入的知识。
在教案设计中充分考虑实验的教育意义。
生化实验不仅仅是一种教学方式，而且作为教育手段，也有着非常重要的作用。
在设计教学方案时，需要充分思考实验的教育价值，想办法让同学们在实验中得到更多的知识和启示，提高学生的实验能力和学习效率。
除了重要的实验操作和内容以外，还应该加强同学们的实验室合作能力,加强同学们的学术经验能力，帮助同学们更好地理解实验内容，提高实验收获，从而达到教育目的。
为了保障生化实验教学效果，设计生化实验全套教案，一定要细致，系统，周密，确保教学质量的同时也需要充分体现教育意义和科学性。
最新生物化学设计性实验报告
最新生物化学设计性实验报告实验目的：本实验旨在通过设计性实验，探究特定生物化学过程的机制和特点，验证理论假设，并培养学生的科研能力和实验技能。
实验背景：生物化学是研究生物体化学组成、化学变化及这些变化与生物体功能之间关系的科学。
设计性实验是生物化学教学和研究中的重要组成部分，它能够帮助学生更好地理解生物化学的基本概念，并通过实践活动加深对知识的掌握。
实验材料：1. 酶类样品2. 底物溶液3. 缓冲液4. 酶活性测定试剂盒5. 分光光度计6. 离心机7. 微量移液器8. 试管和比色皿9. 冰浴和恒温水浴实验方法：1. 预实验：首先对酶样品进行纯化，并通过酶活性测定初步了解其活性范围。
2. 实验设计：根据预实验结果，设计一系列实验，包括不同pH值、温度、底物浓度对酶活性的影响。
3. 实验操作：a. 准备一系列不同pH值的缓冲液，并调整酶样品和底物溶液至相应pH值。
b. 在不同温度下（如25℃、37℃、50℃）测定酶活性，记录数据。
c. 改变底物浓度，观察米氏常数（Km）和最大速率（Vmax）的变化。
4. 数据分析：利用图表和统计学方法分析实验数据，得出酶活性与实验条件之间的关系。
实验结果：1. pH值对酶活性的影响图显示，酶活性在特定pH值下达到最大，而在过高或过低的pH值下活性显著降低。
2. 温度对酶活性的影响图表明，酶活性随温度升高而增加，但在接近50℃时急剧下降，表明酶可能发生变性。
3. 底物浓度实验结果显示，当底物浓度增加到一定程度后，酶活性趋于平稳，计算得到的Km值与文献值相近。
讨论与结论：通过本实验，我们验证了酶活性受pH值、温度和底物浓度的影响。
实验结果与理论预期相符，表明设计性实验是理解和掌握生物化学原理的有效手段。
同时，实验过程中可能出现的误差和问题也为我们提供了宝贵的学习和改进机会。
生化实验的设计实验报告
一、实验目的1. 掌握从生物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 学习使用酚-氯仿法进行DNA的粗提取和纯化。
3. 熟悉DNA的鉴定方法。
二、实验原理DNA是生物体内的重要遗传物质，具有独特的碱基序列。
在提取过程中，利用DNA与蛋白质、RNA等物质的溶解性差异，通过适当的化学试剂和操作步骤，将DNA从细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：鸡血、无菌生理盐水、无水乙醇、氯化钠、酚-氯仿、NaCl溶液、DNA标准样品等。
2. 仪器：离心机、玻璃棒、量筒、烧杯、滴管、吸管、移液器、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 鸡血采集：取鸡血2ml，加入10ml无菌生理盐水，充分混匀。
2. 细胞裂解：取2ml鸡血混合液，加入等体积的酚-氯仿，充分混匀后静置5分钟。
3. DNA沉淀：取上述混合液，加入2.5倍体积的无水乙醇，充分混匀后静置10分钟。
4. DNA纯化：将上述混合液转移到离心管中，离心5分钟（8000r/min），弃去上清液。
5. DNA溶解：将沉淀用50μl NaCl溶液溶解，混匀。
6. DNA鉴定：取少量溶解后的DNA溶液，加入2μl DNA标准样品，观察颜色变化。
五、实验结果1. 在实验过程中，观察到鸡血混合液与酚-氯仿混合后分层，上层为红色，下层为无色。
2. 在DNA沉淀过程中，观察到白色沉淀形成。
3. 在DNA溶解过程中，观察到溶液颜色由白色变为无色。
4. 在DNA鉴定过程中，观察到溶液颜色与DNA标准样品颜色相似。
六、实验结论1. 成功从鸡血中提取了DNA。
2. 酚-氯仿法是提取DNA的有效方法。
3. DNA在生物组织中的提取具有实际应用价值。
七、实验讨论1. 实验过程中，酚-氯仿的加入有助于细胞裂解和DNA的提取。
2. 无水乙醇的加入有助于DNA的沉淀。
3. NaCl溶液的加入有助于DNA的溶解。
4. 实验过程中，注意操作规范，避免污染。
5. DNA提取过程中，温度、pH值等条件对实验结果有影响。
初中化学生物实验教案设计
初中化学生物实验教案设计实验目的：通过观察酵母在不同糖类溶液中的发酵作用，了解酵母的生物作用以及发酵所释放的气体的性质。
实验原理：酵母是一种微生物，能够利用糖类产生能量，并产生二氧化碳和酒精作为副产物。
在发酵过程中，酵母通过酶的作用将糖分解为能量和产物。
实验材料：酵母粉、蔗糖溶液、葡萄糖溶液、淀粉溶液、试管、试管架、气球、注射器、玻璃棒。
实验步骤：1.将三个试管标记为A、B、C，并分别加入等量的蔗糖溶液、葡萄糖溶液和淀粉溶液。
2.向每个试管中加入适量的酵母粉，并用玻璃棒轻轻搅拌均匀。
3.将每个试管口用气球盖住，并用橡皮筋固定。
4.用注射器向每个试管中注入等量的水。
5.将三个试管放置在试管架上，观察气球的膨胀情况。
6.记录每个试管中气球膨胀的时间和程度。
实验要点：1.在实验过程中要注意酵母粉的用量，过多或过少都会影响实验结果。
2.观察气球的膨胀情况时，要注意记录每个试管的膨胀时间和膨胀程度，以便做出比较。
3.在实验结束后，要注意将试管及废弃物妥善处理，注意实验室的清洁卫生。
实验结果分析：1.蔗糖溶液中酵母发酵所产生的气体最多，气球膨胀最快。
2.葡萄糖溶液中酵母发酵的效果次之，气球膨胀速度较慢。
3.淀粉溶液中酵母发酵所产生的气体最少，气球膨胀较缓慢。
实验小结：通过本次实验，我们可以看到不同糖类溶液中酵母的发酵作用。
蔗糖溶液中酵母产生的气体最多，说明蔗糖是酵母的优质能源；淀粉溶液中酵母的发酵效果较差，说明淀粉不是酵母理想的能源来源。
这个实验不仅帮助我们了解酵母的生物作用，还可以引导我们合理选择不同糖类溶液作为发酵的原料。
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成都医学院
大学生实验设计项目
立题报告书
课题名称：测定不同时间泡菜中亚硝酸盐含量的变化研究方向：物质含量检测
专业、班级：2013级临床本科八班
学生姓名：徐良震1325100408
陈强1325100409
王镜洁1325100410
带教教师：王丹
实验室名称生物技术实验教学中心
2014年12月21日
(三)技术路线及实验方案
1技术路线
2．实验步骤：
（1）泡菜的腌制
购买一定数量的红萝卜，将其洗净、去皮，晾晒后，切成条状,放于泡菜坛中，加入一定调料；以清水和盐4:1的比例配制盐水，煮沸，冷却，然后倒入坛中，盐水须没过蔬菜；密封泡菜坛，置于阴凉处，温度控制在28℃—30℃，等待发酵。
（2）溶液的配制
a）配制4mg/ml对氨基苯磺酸溶液，配制2mg/mlN-1－萘基乙二胺盐酸盐溶液，配制5ug/ml亚硝酸钠溶液，配制提取剂。