热原检查标准操作规程(2015版药典)

热原检查标准操作规程（2015版药典）1．目的：

通过本规程的制定，使该检查操作进一步规范化，标准化，以减少误差的发生。

2．依据：

《中国药典》2015年版四部通则1142 P153。

3．适用范围：

本标准适用于本公司有热原检查的操作。

4．责任：

热原QC检验人员对本规程的实施负责。

5．程序：

5．1．概述

本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

5．2．实验材料及用具

5．2．1．天平（精度50g，家兔称重用）。

5．2．2．电热干燥箱（0~300±）℃

5．2．3．恒温水浴箱（37~100）℃

5．2．4．家兔固定盒

5．2．5．实验用具：注射器、针头、金属直镊、注射器盒、时钟、75％酒精棉球、手术镊。

5．3．将供试品放入恒温水浴箱中，温热至约38℃。

5．4．供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。未曾使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前7日内预测体温，进行挑选。挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上。对用于血液制品、抗毒素和其他同一抗原性供试品检测的家兔可在5天内重复使用1次。如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。

5．5．试验前的准备

5．5．1．用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱中经250℃、50分钟加热除热原。注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，50分钟加热除热原。

5．5．2．在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，实验室的温度应在17~25℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，防止动物骚动并避免噪声干扰。

5．6．检查法：

5．6．1．家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于宽松适宜装置中，直至试验完毕。

5．6．2．测量家兔体温应使用精密度为±0.1℃的测温装置。

5．6．3．测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约为6cm，时间不得少于1.5分钟，每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。

5．6．4．当日使用家兔，正常体温应在38.0～9.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。

5．6．5．每个供试品用家兔3只，在测定正常体温后15分钟内自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至38℃的供试品溶液，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃）。如3只家兔中有1只体温升高0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔体温升高的总和达1.3℃或高于1.3℃，应另取5只家兔复试，检查方法同上。

5．6．6．注射前，先用75％酒精棉球轻擦家兔耳静脉的注射部位，从耳尖端静脉进针，如进针不利，则顺序向前进行。

5．6．7．注射完毕，拨出针头时，用75％酒精棉球按压针孔数秒钟，止血，注射时间一般每只家兔不超过3分钟。

5．6．8．每隔30分钟，按前法测家兔体温一次，共测6次。

5．7．温差计算：

注射药液后，以6次测得体温中最高的一次减去正常体温，为该兔体温的升高度数；如6次体温均低于正常体温，均以0℃计。

5．8．结果判断

5．8．1．在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或低于3.5℃，均判为供试品的热原检查符合规定。

5．8．2．在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6 以上的家兔超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5℃，均判为供试品的热原检查不符合规定。

当家兔升温为负值时，均以0℃计。

5．9．注意事项：

5．9．1．热原实验室内外，均应保持安静，避免强烈直射的日光或灯泡及其它刺激。

5．9．2．在试验过程中，避免家兔骚动，保持体温稳定并注意相对湿度保持稳定。

5．9．3．试验过程中，家兔因肛门出血过多，造成升温或降温超过规定时应复试。

6．文件变更历史