1株人成骨肉瘤细胞系的建立及特性观察
人骨肉瘤MG63多药耐药细胞亚系建立及生物学特性分析(精)
人骨肉瘤MG63多药耐药细胞亚系建立及生物学特性分析[ 10-09-11 16:53:00 ] 编辑：studa20作者：刘岩张德宝杨华孙大辉【摘要】目的建立阿霉素(DXR)诱导的人成骨肉瘤MG63多药耐药细胞株亚系MG63/DXR10、MG63/DXR40、MG63/DXR100并观察其生物学特性。
方法以DXR 为诱导剂，采用逐步增加剂量的方法诱导MG63细胞，建立多药耐药细胞株亚系MG63/DXR10、MG63/DXR40、MG63/DXR100;MTT法检测药物敏感性;光镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构变化，绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数。
结果 (1)经DXR 6个月的诱导建立了MG63/DXR细胞株亚系。
(2)MG63/DXR对DXR的耐药指数为 76.87，对长春新碱、氨甲蝶呤、环磷酰胺亦产生不同程度的交叉耐药。
(3)光镜观察可见：MG63细胞排列规则，形态呈梭形，大小一致;MG63/DXR细胞株亚系排列不规则，大小不均，形态呈三角形、多角形及多核现象。
透射电镜显示：MG63细胞膜平滑，粗面内质网较丰富;MG63/DXR细胞株亚系细胞表面突起增加，粗面内质网丰富，胞质内可见髓样小体、溶酶体及大量糖原池。
(4)MG63细胞与其多药耐药细胞株亚系MG63/DXR10、MG63/DXR40、MG63/DXR100细胞生长曲线相近。
(5)细胞周期分析显示MG63、MG63/DXR10、MG63/DXR40、MG63/DXR100细胞G0/G1期分别为86.34%、83.67%、78.11%、68.81%;G2/M期分别为5.92%、7.45%、7.78%、10.90% ;S期分别为 7.74%、8.87%、14.11%、20.30%;而MG63/DXR与MG63细胞的凋亡指数无显著差异。
结论 (1)小剂量DXR为诱导剂建立了人骨肉瘤多药耐药细胞株亚系(MG63/DXR10、MG63/DXR40、MG63/DXR100)，MG63/DXR、MG63/DXR细胞对于甲氨蝶呤、长春新碱、环磷酰胺产生不同程度交叉耐药。
骨肉瘤病例-精品医学课件
05
骨肉瘤病例最新研究进展与未来研究 方向
骨肉瘤相关研究最新进展概述
分子生物学研究
近年来，骨肉瘤的分子生物学 研究取得了较大进展，深入探 讨了骨肉瘤的发生、发展、耐
药机制及治疗靶点。
遗传学研究
遗传因素在骨肉瘤发病中具有 重要作用，研究者发现了多个 与骨肉瘤发病相关的基因变异
。
治疗方法研究
针对骨肉瘤的治疗方法，研究 者们不断探索新的治疗策略， 包括免疫治疗、基因治疗和靶 向治疗等，并取得了一定的疗
压痛
骨肉瘤引起的疼痛在夜间较为明 显，同时局部有压痛，随着病情 发展，压痛范围逐渐扩大。
牵涉痛
骨肉瘤可引起远离病变部位的牵涉 性疼痛，如病变部位在脊柱，可引 起下肢疼痛。
骨肉瘤的体征与辅助检查
体征
X线检查
骨肉瘤患者可出现局部肿胀、皮肤温度升高 、静脉怒张等体征。病变部位可有压痛、肿 块、功能障碍等。
CT检查
可清楚显示肿瘤的钙化、骨化及软 组织肿块，对手术方案的制定有重 要指导意义。
MRI检查
可明确肿瘤范围、软组织受累情况 及是否存在肺转移，为诊断和治疗 提供重要依据。
骨肉瘤的临床治疗策略与方法
手术切除
手术切除是骨肉瘤治疗的首选 方法，切除范围包括肿瘤及其 周边正常组织，必要时需进行
关节置换。
。
骨肉瘤的治疗原则以手术切除 为主，同时进行放疗、化疗等
辅助治疗。
骨肉瘤的手术治疗包括截肢手 术、关节离断术和全关节置换 术等，具体手术方式需根据病
情和医生建议来选择。
02
骨肉瘤病例临床表现与辅助检查
骨肉瘤的疼痛症状
早期疼痛
骨肉瘤早期可表现为轻度间歇 性疼痛，随着病情发展，疼痛
人骨肉瘤耐阿霉素细胞模型的建立及其生物学特性(精)
中国组织工程研究与临床康复第 15卷第 37期 2011– 09– 10出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research September 10, 2011 Vol.15, No.37 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH6913 1Department of Orthopedics, Ninth People’s Hospital of Chongqing,Chongqing 400700, China; 2Department of Orthopedics,Second Affiliated Hospital ofChongqing Medical University,Chongqing 40010, ChinaChen Yu☆ , Doctor, Attending physician, Department of Orthopedics, Ninth People’s Hospital of Chongqing,Chongqing 400700, Chinachenyu@ Correspondence to: Deng Zhong-liang, Doctor, Professor, Department of Orthopedics, Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 40010, Chinadeng7586@gmail. comSupported by: the National NaturalScience Foundation of China, No.30772211*Received: 2011-06-10 Accepted: 2011-07-30人骨肉瘤耐阿霉素细胞模型的建立及其生物学特性 *☆陈渝 1,王大勇 1,翁政 1,邓忠良 2Establishment of adriamycin-resistant human osteosarcoma cell line and research on its biological characteristicsChen Yu1, Wang Da-yong1, Weng Zheng1, Deng Zhong-liang2AbstractBACKGROUND: Multidrug resistance is a major factor leading to the failure of chemotherapy for human osteosarcoma. However,the precise mechanism remains poorly understood.OBJECTIVE: To establish adriamycin-resistant human osteosarcoma cell line143B/ADM and to analyze its biological characteristics.METHODS: Increasing concentrations of adriamycin (ADM were applied for 45 days to establish 143B/ADM resistant strain. Thehalf of inhibiting concentrations (IC50 and resistance indexs (RI of different antitumor drugs were measured by CCK assay, andthe cell cycle was analyzed by flow cytometry. The cellular efflux capacity was estimated by rhodamine test. After the cell lineswere treated by ADM, intracellular ADM concentration was detected by fluorospectrophotometer, and the apoptosis wasobserved by laser scanning confocal microscope and flow cytometry. Meanwhile, the expression of multidrug resistance 1(MDR-1, multidrug resistance-associated protein 1 (MRP-1 and lung resistance protein (LRP were detected by western blotanalysis.RESULTS AND CONCLUSION: After induction for 45 days, the RI of 143B/ADM cells to ADM was 15.7, and the 143B/ADM cellsshowed various resistances to cisplatin, methotrexate, isophosphamide, vincristine and taxinol. Compared with 143B/WT cell line,there were less cells in G2/M phase and more cells in G1 and S phases, markedly decreased intracellular rho123 and ADM in143B/ADM cell line (P < 0.01. Flow cytometry and confocal laser microscopy analysis showed that at 72 hours after treatmentwith ADM (10 mg/L, cell apoptosis in 143B/ADM cells was less than that in143B/WT cells. Furthermore, compared with143B/WT, the MDR-1 expression of 143B/ADM was increased significantly with no difference of MRP-1 and LRP expressionamong both cell lines. Multidrug resistance of 143B/ADM cells is related to MDR-1, and has no relationship with MRP-1 and LRP.Chen Y, Wang DY, Weng Z, Deng ZL.Establishment of adriamycin-resistant human osteosarcoma cell line and research on itsbiological characteristics. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(37: 6913-6918.[ ]摘要背景:多药耐药是骨肉瘤化疗失败的重要原因,目前其耐药机制不明。
稳定表达TSLC1基因骨肉瘤MG63细胞系的建立及鉴定
６ ６ ・
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稳 定 表达 Ｔ Ｓ Ｌ Ｃ １ 基 因 骨 肉瘤 ＭＧ６ ３细 胞 系 的 建 立 及 鉴 定 ★
（ ４ ３ ０ ０ ２ ２ 武汉） 武 汉 市 第 一 医 院 皮 肤 科 覃 莉
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骨肉瘤汇报ppt课件
以上各型成分混合存在 ，以骨质形成为主，软 骨组织和纤维组织次之 。
小细胞型骨肉瘤较少见 ，约占骨肉瘤的2%～ 5%。瘤细胞体积小，与 淋巴细胞相似，可呈弥 漫分布或巢状分布，异 型性明显，核分裂象易 见。
肿瘤生长与转移机制
01
02
03
局部浸润和生长
骨肉瘤通常起源于骨膜或 骨骼的间叶组织，通过局 部浸润和生长的方式逐渐 扩大。
手术时机
尽早手术，避免肿瘤进一步发展和 转移。
化疗药物应用及方案优化
化疗目的
杀死肿瘤细胞，缩小肿瘤 体积，提高手术成功率和 患者生存率。
化疗药物选择
根据肿瘤类型和分期，选 择合适的化疗药物，如甲 氨蝶呤、顺铂等。
化疗方案优化
根据患者具体情况和药物 敏感性，制定个性化的化 疗方案，提高治疗效果和 减少副作用。
02
骨肉瘤的病理生理
病理分型及特点
成骨细胞型骨肉瘤
软骨母细胞型骨肉 瘤
纤维母细胞型骨肉 瘤
混合型骨肉瘤
小细胞型骨肉瘤
瘤细胞直接形成骨样组 织或骨质，以瘤骨形成 为主。
以瘤软骨形成为主，较 少。
瘤细胞呈梭形，交织排 列，似纤维瘤结构，细 胞间常有胶原纤维，肿 瘤内可见少许不规则的 骨样组织，是由瘤细胞 形成的。
软组织肿块
部分病例肿瘤形成巨大软组织肿块， 密度不均，瘤内不规则钙化和骨化。
CT及MRI表现
CT检查
CT检查可以清楚地显示肿瘤在软组织中的浸润程度，并可发现跳跃病灶。增强扫描可显示肿瘤的血供 情况，对判断预后有一定帮助。
MRI检查
MRI检查具有多参数、多平面成像的优点，可以显示肿瘤在骨髓腔内的浸润范围、与周围软组织的关 系以及有无跳跃病灶等。在T1WI上，肿瘤呈低信号或等信号；在T2WI上，肿瘤呈高信号或稍高信号 。增强扫描可显示肿瘤的强化程度及范围。
人骨肉瘤细胞系MG-63细胞球形成细胞干性特征
人骨肉瘤细胞系MG-63细胞球形成细胞干性特征刘辉琦;杰永生;郑蕊;舒雄【摘要】目的从人骨肉瘤细胞系MG-63中分离细胞球,鉴定其干性特征并探讨其与侵袭、转移的相关性及可能机制.方法无血清悬浮培养富集MG-63细胞球,PKH26染色确定细胞球中存在干细胞,Western blot检测细胞球干性相关蛋白表达.甲基纤维素半固体培养及Transwell小室检测细胞球自我更新及侵袭能力,并对上皮间质转化和侵袭、转移相关蛋白进行检测.结果 MG-63细胞无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球中存在单个PKH26阳性细胞.与MG-63单层细胞相比,干细胞相关蛋白OCT-4、SOX2和Nanog表达显著提高(P<0.05).MG-63细胞球细胞成球数是单层细胞的1.84倍(P<0.01),侵袭能力较单层细胞提高1.45倍(P<0.01).细胞球中E-cadherin低表达,snail及MMP2高表达(P<0.05).结论骨肉瘤细胞系MG-63细胞球形成细胞具有干性特征,通过上皮间质转化促进了细胞的侵袭与转移.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2019(039)002【总页数】5页(P230-234)【关键词】骨肉瘤;细胞球;侵袭;转移【作者】刘辉琦;杰永生;郑蕊;舒雄【作者单位】青海大学医学院病理生理教研室, 青海西宁810001;北京市创伤骨科研究所,北京100035;北京市创伤骨科研究所,北京100035;北京市创伤骨科研究所,北京100035【正文语种】中文【中图分类】R738.3骨肉瘤是儿童和青少年常见原发恶性肿瘤，具有恶性度高，易复发和早期转移等特征[1]，80%～90%的患者就诊时已有临床上尚未发现的转移灶。
目前常规治疗手段的手术和放化疗并不能很好的控制骨肉瘤病情的发展，预后差[2]。
近年来研究发现骨肉瘤中存在有肿瘤干细胞，这些细胞具有自我更新、多向分化潜能、强致瘤性及与肿瘤异质性相关等特点[3]，可能是临床治疗失败的关键原因之一。
骨肉瘤教学演示课件
危险因素和预防
环境因素
长期接触某些化学物质（如苯、 甲醛等）或放射线可能增加患骨 肉瘤的风险。
预防
避免长期接触有害化学物质和放 射线；积极治疗骨骼疾病；对于 有家族史的人群，应定期进行体 检和筛查。
01
02
遗传因素
有家族史的人群患骨肉瘤的风险 增加。
03
04
其他因素
如骨骼疾病（如佩吉特病、骨髓 炎等）也可能增加患骨肉瘤的风 险。
根据患者情况制定个性 化的康复锻炼计划，促
进肢体功能恢复。
04
并发症和预后
并发症
病理性骨折
01
由于肿瘤侵蚀骨骼，导致骨骼脆性增加，易发生骨折。
脊髓受压和神经根的刺激症状
02
肿瘤发生在脊柱部位时，可能导致脊髓受压和神经根的刺激症
状，如疼痛、麻木、肌肉无力等。
关节活动受限
03
肿瘤发生在关节附近时，可能导致关节活动受限，影响患者运
动功能。
预后因素和生存期
肿瘤分期
早期骨肉瘤预后较好，晚期则 预后较差。
手术切除是否彻底
完全切除肿瘤的患者预后较好 ，残留肿瘤组织的患者预后较 差。
化疗和放疗的敏感性
对化疗和放疗敏感的患者预后 较好，不敏感的患者预后较差 。
患者年龄和身体状况
年轻、身体状况良好的患者预 后较好。
生活质量和心理支持
疼痛管理
发病率和死亡率
骨肉瘤的发病率在所有恶性肿瘤中相对较低，但仍然是儿童 和青少年中最常见的恶性骨肿瘤之一。其发病率随着年龄的 增长而逐渐降低。
骨肉瘤的死亡率较高，主要是由于其恶性程度高、易转移和 复发等原因所致。尽管随着医疗技术的不断进步，骨肉瘤的 生存率有所提高，但仍然需要更多的研究和治疗手段来提高 患者的生存率和生活质量。
细胞系或细胞株的建立
、概念、概念1、细胞系（Cell Line）：原代培养舞经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineag e of Cells）所组成。
2、细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
如果不能继续传代或传代数有限，称为有限细胞株（finitec ell strain）；如果可以连续传代，称为连续细胞株（continu ous cell strain）。
对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。
二、建立细胞系（或株）的要求什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞，视具体情况而定，无统一规定。
对于用作原代培养的细胞只要供体均一，取材部位及组织种类等条件稳定即可，如用做长期培养，特别是反复传代的细胞，常需做如下说明：1、组织来源：细胞供体所属物种，来自人体或者动物；个体性别、年龄；取材的器官或组织。
如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病历号等。
2、细胞生物学检测：了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。
如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法；应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜P H值。
三、若干细胞建株的要点及基本过程（一）肿瘤细胞培养技术要点1、取材：材料主要来源于外科手术或活检瘤组织，取材时避免用坏死组织，要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位，瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。
取材后尽快培养，因故不能立即培养者，可冻存。
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收稿1997-12-17 修回1998-02-23 编辑 王雪萍
・研究快报・
1株人成骨肉瘤细胞系的建立及特性观察*
杨彤涛 范清宇 张殿忠 裘秀春 刘树林 马保安 周 勇 (第四军医大学唐都医院骨科 西安710038)
关键词 成骨肉瘤 细胞系 核型分析
中图号 R738.1
0 引言 成骨肉瘤是人类最常见的原发性恶性骨肿瘤,死亡率、致残率很高.建立该肿瘤的细胞系,有助于对其深入研究,我们新建立了1株人成骨肉瘤细胞系,体外已传120余代,现报告如下.
1 方法
1.1 组织来源 标本取材于17岁男性患者1996-07-16的截肢,病理诊断为成骨肉瘤(软骨母细胞型).
1.2 建系过程 将无菌切取的肿瘤标本剪成直径1mm左右的小块,贴壁接种于培养瓶底,底面朝上,同时加入含200 mL/L小牛血清及常规量青、链霉素的RP M I1640培养液, 2h后翻转.3d后见有细胞晕生长,定期半量换液,反复清除成纤维细胞.1mo后1∶2传第1代.至第4代时,细胞渐迅速生长,以后平均4d～5d传1代.
1.3 细胞生物学特性鉴定
1.3.1 细胞形态 将生长于盖玻片上的单层细胞以950 mL/L乙醇固定,行HE染色,光镜观察.另将细胞以25 mL/L戊二醛固定,常规方法处理,行扫描和透射电镜观察.
1.3.2 组织化学染色 将不同代数的细胞,培养于盖玻片上,950mL/L乙醇固定,进行碱性磷酸酶(钙钴法)、酸性磷酸酶(刘氏法)染色及阿新蓝-PA S染色法显示胞浆中酸性、中性粘多糖.
1.3.3 乳酸脱氢酶同工酶测定 取对数生长期的第65代细胞3×106个,PBS中制成悬液,反复冻融,收集上清,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,NA D-PM S-N BT染色显带定量.
1.3.4 染色体分析 取第80代细胞按常规方法处理,G显
*国家自然科学基金资助项目 No.39330200
杨彤涛,男,27岁,硕士生,住院医师带后进行核型分析.
1.3.5 裸鼠移植 取第78代细胞5×106个/只,分别接种于8只BA L B/c裸鼠右臂皮下,3w k后处死裸鼠,取移植瘤,固定后光镜、电镜观察.
2 结果
2.1 细胞形态 相差显微镜下,细胞呈上皮样排列,单层贴壁生长,有重叠生长现象.多数为多边形,可见瘤巨细胞. HE染色见胞浆轻度嗜碱,核大,核浆比例异常,可见较多分裂相.透射电镜示胞浆内较多粗面内质网,核大畸形,核仁大.扫描电镜下见细胞表面满布微绒毛.电镜下未见支原体.
2.2 组织化学染色 碱性磷酸酶(A K P)染色胞浆内弥漫着色.酸性磷酸酶(ACP)染色为阴性.酸性及中性粘多糖染色部分细胞呈阳性.
2.3 同工酶谱 为5条带,乳酸脱氢酶(L D H)同工酶相对含量百分数L D3>L D2>L D4>L D1>LD5.
2.4 染色体分析 为亚三倍体核型,染色体干系数目为64～66,占81%,结构异常涉及16条染色体,有衍生染色体、易位、缺失等改变.
2.5 裸鼠移植 8只裸鼠全部成瘤,光镜下形态与原肿瘤相似,电镜下细胞形态与培养的细胞一致.
3 讨论 原发性恶性骨肿瘤中成骨肉瘤发病率最高,随着对其研究的不断深入,国内外相继建立了若干成骨肉瘤细胞系,大多数保留了其来源组织的特征[1,2].我们建立的细胞系为上皮样细胞,多数为多边形和三角形,单层贴壁生长,有重叠生长现象,可见瘤巨细胞及有丝分裂相.细胞核大,核浆比例异常.增殖迅速,染色体为亚三倍体型,有多种染色体异常表现.裸鼠移植成瘤率100%,成瘤时间短.符合恶性肿瘤细胞特征.该细胞系L DH同工酶谱与成骨肉瘤组织的L DH同工酶谱基本一致,L D3活性最高,经过1a余体外培养,连续传代120余次,性质稳定,表明其为1株新建成的成骨肉瘤细胞系,为成骨肉瘤的研究提供了新的实验材料.进一步的研究工作正在进行中.
参考文献
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收稿1998-01-16 修回1998-03-19 编辑 王小仲
264第四军医大学学报(J F our th M ilit M ed U niv)1998;19(3)。