鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
蛋清溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。
2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。
3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。
它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。
四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。
2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。
将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。
3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。
4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。
重复洗涤2-3次。
5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。
7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。
五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。
2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。
根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。
六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。
2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
黄敏;孔明航;王丽明
【期刊名称】《中国食品添加剂》
【年(卷),期】2010(000)003
【摘要】研究从鸡蛋清中提取与精制溶菌酶的方法,观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用.从鸡蛋清提取溶菌酶的方法:取出鸡蛋清,过滤,用蒸馏水溶解,加氯化钠,调节溶液pH至5.0,加入溶菌酶晶种,4℃下静置结晶,过滤,可以得到溶菌酶粗品.将粗品溶菌酶溶解,按上述步骤溶解后结晶,重复3次,可以精制溶菌酶.用滤纸片法观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌作用.结果表明,鸡蛋清溶菌酶提取的较优条件是:酶液pH 10.0、氯化钠加入量5%、蛋清液用2倍体积蒸馏水稀释.70℃下保温5min,鸡蛋清溶菌酶的精制率最高.鸡蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌有明显抑制作用,80℃加热30min对鸡蛋清溶菌酶的抑菌作用影响很小.
【总页数】4页(P154-157)
【作者】黄敏;孔明航;王丽明
【作者单位】长江大学生命科学学院,荆州,434025;湖北省国营大垸农场,大
垸,433300;长江大学生命科学学院,荆州,434025
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2+5
【相关文献】
1.鸡蛋清中溶菌酶的提取工艺研究 [J], 于洋
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鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
2 结果与分析
211 蛋清液稀释倍数对溶菌酶粗提取率的影响 固定 pH 为 1018, 氯化钠的添加量为蛋清溶
液体积的 5% ( w / v, 以下同 ), 在 4e 下静置 1 w 结晶, 分别 加入蛋清体积 1、 2、 3、 4 倍的蒸馏 水, 提取溶菌酶的结果见图 1。
由图 1可见, 蛋清液加入 1倍体积蒸馏水稀
过滤并混匀, 按蛋清体积加入蒸馏水, 轻轻搅拌 5m in, 使蛋清溶液的稠度均匀。之后向蛋清溶液 中缓慢加入氯化钠细粉并轻轻搅拌。加完氯化钠 后, 再用氢氧化钠溶液调节 pH, 加入定量标准溶 菌酶结晶作为晶种。 4e 下静置。待结晶完全后, 用布氏漏斗 滤出结 晶, 即得到 粗制 的溶 菌酶 晶 体。
在单因子试验的基础上, 选用 L9 ( 33 ) 正交 表, 进行正交试验, 优化溶菌酶粗提取的工艺参 数表。因素水平见表。
表 1 盐析法提取蛋清酶溶菌酶的因素水平表 L9 ( 33 )
水平
蒸馏水添加量 (倍 ) ( 因素 A )
pH (因素 B )
氯化钠加入量 (% w /v) (因素 C)
1
2
91 5
中国食品添加剂 试验研究
Ch ina Food Add itives
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
黄敏 1, 孔明航 2, 王丽明 1
( 1. 长江大学生命科学学院, 荆州 434025; 2. 湖北省国营大垸农场, 大垸 433300)
摘 要: 研究从鸡蛋清中提 取与精制溶菌酶的方法, 观察溶 菌酶对大肠 杆菌与金黄 色葡萄球 菌的抑 制作
将溶菌酶液ph调至610一组在80e加热30m一组不加热测定对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌抑制作用产生抑菌圈直径的结果见表蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌产生的抑制圈直径mm菌种类酶处理对照0110溶菌酶0125溶菌酶0150溶菌酶1100溶菌酶大肠杆菌未处理酶热处理酶1312171319151918金黄色葡萄球菌未处理酶热处理酶1111012111312由表可见抑菌圈直径与溶菌酶浓度存在相表现为
鸡蛋溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。
2. 了解溶菌酶的性质和功能。
3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。
溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。
2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。
四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。
2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。
3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。
5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。
6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。
五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。
2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。
3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。
4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。
5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。
6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。
7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。
如何从蛋清中提取溶菌酶
盐析法实验步骤
• 将预处理的蛋清倾人烧杯中，边搅拌边加入蛋白质5％的 食盐粉末，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过 高或沉淀于容器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大 量的白色沉淀．溶解后再用0．1mol／L的NaOH溶液调节 pH9．5-pH10.0。置于4℃环境中，数天后即有溶菌酶结 晶出现，将酶晶体过滤，收集结晶沉淀粉，用丙酮脱水， 真空干燥即为粗产品。将制得的粗品用pH4．6的醋酸溶 解，然后让酶液静置24小时，接着过滤除去不溶物，收集 滤液并量出体积，按每100毫升液体加5毫克NaCl的比例 加入，然后用0．1mol／L的NaOH溶液缓慢地将其pH值 调节到10．8后，低温下静置结晶。为加速结晶过程可向 酶液中加入溶菌酶晶种，待结晶完全后再倾去上清液，用 布氏漏过滤可得溶菌酶结晶。如纯度不高，可重复操作提 纯，直至达到所需的纯度为止，结晶于30—40℃得溶菌酶 产品。
离子交换法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
从蛋清中提取溶菌酶的方法
溶菌酶作用机制
• 溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。 • 它作用于N一乙酰氨基葡萄糖胺和N一乙酰胞壁酸 之间的B一1，4糖苷键，能使某些细菌细胞中粘 多糖成分分解。因而具有溶菌能力。 • 溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，处理革 兰氏阳性细菌可得到原生质体。溶菌酶是一种无 毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用， 因此可用作食品防腐剂。
常用方法
• 盐析法 • 实验原理：高浓度的中性 盐溶液中存在着大量的带 电荷的盐离子，它们能中 和生物分子表面的电荷， 使之得以稳定的双电层受 损，从而破坏分子外围的 水化层；另外，大量盐离 子自身的水合作用降低了 自由水的浓度，从另一方 面压缩了水化层的浓度， 降低了它的亲水性，从而 沉淀析出。 • 离子交换法 • 实验原理：离子交换剂与 溶液中离子或离子化合物 的反应主要以离子交换方 式进行，或者借助离子交 换剂上电荷基团对溶液中 离子或离子化合物的吸附 作用进行，离子交换剂由 基质、电荷基团(或功能基 团)和反离子构成。
鸡蛋清中抑菌活性蛋白作用机制的研究进展
鸡蛋清中抑菌活性蛋白作用机制的研究进展杨晓雪，剧梦璇（东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨 150030）摘 要：鸡蛋清中富含多种具有抑菌功能的生物活性成分。
随着鸡蛋贮存时间延长，蛋清中的浓蛋白会发生稀化现象，从而导致抑菌效果降低，微生物繁殖加快，鸡蛋品质下降。
本文对鸡蛋贮藏过程中的卵黏蛋白、溶菌酶及其复合物的相互作用形式、抑菌机制等进行探讨，以期为优化鸡蛋加工过程中的消毒杀菌工序、改良鸡蛋贮藏方法、延长鸡蛋保质期提供参考。
关键词：鸡蛋；蛋清蛋白；抑菌作用；蛋白相互作用Research Progress on the Mechanism of Antibacterial ActiveProteins in Egg WhiteYANG Xiaoxue, JU Mengxuan(Northeast Agricultural University, College of Food Science, Harbin 150030, China) Abstract: Egg white is rich in a variety of bioactive components with antibacterial function. With the prolongation of egg storage time, the concentrated protein in egg white will be diluted, which will lead to the decrease of bacteriostatic effect, the acceleration of microbial reproduction and the decrease of egg quality. In this paper, the interaction forms and antibacterial mechanism of ovomucin, lysozyme and their complexes during egg storage were discussed, in order to provide reference for optimizing the disinfection and sterilization process in egg processing, improving egg storage methods and prolonging egg shelf life.Keywords: egg; egg white protein; antibacterial function; protein interaction鸡蛋是一种营养配比均衡的食品，被称为“全营养食品”，具有营养全面、蛋白含量高（11%～13%）、蛋白易吸收（吸收率99.6%）等优点。
蛋清溶菌酶分离实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取、分离纯化技术。
2. 掌握电渗析/超滤内在耦合（EDUF）技术在分离蛋白中的应用。
3. 分析实验过程中影响分离效果的因素，优化实验条件。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然碱性蛋白质，具有抗菌、消炎和抗病毒等功能。
溶菌酶广泛存在于鸡蛋清中，含量丰富。
本实验采用EDUF技术，利用溶菌酶与卵白蛋白（OVA）在特定pH条件下的荷电性及分子量差异，从鸡蛋清中分离提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、PVDF100超滤膜、氯化钠、磷酸缓冲液、溶菌酶标准品等。
2. 实验仪器：电渗析/超滤装置、电子天平、pH计、分光光度计、离心机、恒温水浴锅等。
四、实验步骤1. 预处理：将鸡蛋清用4层纱布过滤，去除杂质。
2. 调节pH值：将过滤后的鸡蛋清用1 mol/L的HCl溶液调节pH值至7.0。
3. 电渗析/超滤：将调节pH值后的鸡蛋清加入EDUF装置中，设置操作电压为5.0V，原料室和回收室料液流量均为50mL/min，进行电渗析/超滤。
4. 收集溶菌酶：将电渗析/超滤后的溶液用离心机离心，收集沉淀。
5. 纯化：将沉淀用磷酸缓冲液（pH值为8.0）溶解，通过离子交换树脂纯化溶菌酶。
6. 活性测定：采用分光光度法测定溶菌酶的活性。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶回收率：在操作电压为5.0V，采用PVDF100超滤膜，原料室和回收室料液流量均为50mL/min的条件下，溶菌酶的回收率可达21.05%。
2. 溶菌酶纯度：经纯化处理后，溶菌酶的纯度可达100%。
3. 溶菌酶活性：通过分光光度法测定，溶菌酶的活性为2.30U/mg。
4. 影响分离效果的因素分析：（1）pH值：溶菌酶在pH值为8.0时活性最高，因此在纯化过程中将pH值调节至8.0。
（2）操作电压：操作电压越高，溶菌酶的回收率越高，但电压过高会导致溶菌酶变性，因此选择5.0V为最佳操作电压。
（3）超滤膜材料：PVDF100超滤膜对溶菌酶的截留效果较好，因此选择该膜材料。
提取溶菌酶的实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握溶菌酶的提取方法；2. 了解溶菌酶的分离纯化过程；3. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；4. 学习溶菌酶纯度鉴定与分子量测定。
二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清中。
溶菌酶能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，导致细菌细胞壁破裂，从而起到杀菌作用。
本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、考马斯亮蓝G-250、邻苯二甲酸氢钾、苯酚、硫酸铜、氢氧化钠、无水乙醇等；2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平等。
四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋清，用4倍体积的0.1mol/L的NaOH溶液溶解；（2）将溶液搅拌均匀，置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用等体积的4倍体积的0.1mol/L的HCl溶液调节pH至4.5；（4）将溶液置于高速离心机中，以10000r/min离心30分钟；（5）取上清液即为粗提溶菌酶。
2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定（1）取粗提溶菌酶溶液，用硫酸铵饱和溶液进行盐析，调节硫酸铵浓度为0.5mol/L；（2）将溶液置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用高速离心机以10000r/min离心30分钟，取沉淀；（4）将沉淀用0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲溶液溶解，得纯化溶菌酶溶液；（5）测定酶活力和蛋白浓度，酶活力单位以每分钟产生1μmol的产物为1个单位，蛋白浓度采用考马斯亮蓝G-250法测定。
3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）取纯化溶菌酶溶液，进行SDS-PAGE电泳分析；（2）根据电泳结果，计算溶菌酶的分子量；（3）根据纯化溶菌酶溶液的蛋白浓度和酶活力，计算溶菌酶的纯度。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取通过实验，成功提取了鸡蛋清中的溶菌酶，提取率为0.5%。