香蕉束顶病毒简易制样技术及分子检测
香蕉种植中的病毒病害分子检测与防治方法
香蕉种植中的病毒病害分子检测与防治方法香蕉是世界上最主要的水果作物之一，在许多国家都有种植。
然而，香蕉种植中常常会受到病毒病害的威胁，这会导致产量下降和经济损失。
因此，对香蕉种植中的病毒病害进行检测和防治是至关重要的。
一、病毒病害的检测方法1. 实验室检测：通过实验室技术，可以检测出香蕉植株中是否存在病毒病害。
常用的实验室检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、PCR和南方杂交等。
- ELISA：ELISA是一种基于抗体和抗原反应的方法，可以检测出香蕉植株中的病毒。
首先需要提取香蕉组织中的病毒蛋白，并与特定抗体结合，然后通过染色或荧光方法来检测反应结果。
- PCR：PCR是一种基于DNA扩增的方法，可以检测出香蕉植株中的病毒。
首先需要提取香蕉组织中的DNA，然后通过特定引物扩增病毒DNA片段，最后通过凝胶电泳等方法来检测扩增产物。
- 南方杂交：南方杂交是一种基于核酸杂交的方法，可以检测出香蕉植株中的病毒。
首先需要提取香蕉组织中的RNA或DNA，然后通过特定探针与目标病毒核酸结合，并通过染色或荧光方法来检测结果。
2. 田间检测：除了实验室检测，还可以通过田间观察和病原检测来判断香蕉植株是否感染了病毒病害。
常用的田间检测方法包括病毒病害病斑观察、病原酶活性检测和PCR检测。
- 病斑观察：通过观察香蕉植株叶片上的病斑形状、颜色和扩散情况，可以初步判断是否受到病毒病害的感染。
- 病原酶活性检测：通过特定底物和试剂，可以检测出病毒感染的香蕉植株中的病原酶的活性水平，从而判断是否存在病毒病害。
- PCR检测：和实验室检测中的PCR方法类似，通过田间快速提取DNA，然后进行PCR扩增和电泳分析，可以迅速判断香蕉植株中是否存在病毒病害。
二、病毒病害的防治方法1. 清除病毒源：在香蕉种植中，最重要的是清除病毒源，避免病毒的传播和扩散。
可以通过挖除感染植株、销毁病毒带菌者和病毒传播媒介等方法来清除病毒源。
2. 强化植株免疫力：通过合理施肥、浇水和植物生长调节剂的使用，可以增强香蕉植株的免疫力，降低感染病毒的可能性。
超低温保存脱除香蕉束顶病毒的研究
超低温保存脱除香蕉束顶病毒的研究香蕉束顶病是香蕉生产上的严重病害之一。
在生产中推广无病毒苗是有效控制病毒的方法之一。
获得无病毒母株，常规脱除病毒主要方法有茎尖脱毒和热处理。
超低温保存种质资源，同时可以脱除病毒，试验研究超低温脱除香蕉束顶病的现象。
以感染香蕉束顶病的巴西蕉[Musa acuminaxe（AAA group）Dwraf Cavendish cv．Baxi]为材料，对玻璃化法超低温保存脱除香蕉束顶病毒的方法及原因进行了初步研究。
试验主要结果如下：1．比较了感染香蕉束顶病的巴西蕉吸芽外植体的灭菌及培养方法，发现多芽外植体采用0.1％升汞灭菌12～14 min，在灭菌率和外植体再生之间可以达到较好的平衡；外植体萌发的无菌芽在MS+6-BA 4.0 mg／L+NAA 0.4 mg／L的培养基上分化较好；无菌芽在MS+6-BA2.0 mg／L+0.2 NAAmg／L的培养基生长较好，叶片浓绿，蕉苗粗壮。
2．香蕉茎尖培养条件进行了优化：发现茎尖在液体培养基上进行暗培养、置于摇床（110 r／min，25℃）上摇动，茎尖培养7d即可伸长0.76cm，一个月后增殖系数达到1.9。
在固体培养基暗培养条件下，茎尖培养7d伸长0.65cm，且增殖率高达2.7，这是一个经济实用的方法。
3．采用石蜡切片方法，观察了超低温保存过程中茎尖结构的变化。
结果表明在超低温保存过程中，茎尖外围几层细胞死亡，有效地减少了香蕉茎尖物理体积，减少了茎尖携带病毒的细胞数目。
分生组织细胞细胞质浓厚，自由水含量低，相对成活率高；这部分茎尖不带病毒或携带病毒浓度低，因此，萌发出植株的不带病毒的株数增加，提高了茎尖的脱毒率。
4．检测了香蕉束顶病的病毒。
Primer up：ATT ACT CGA GCT CGG GAC GGG ACAT（65.3℃）；Primer down：TATACT CGA GGG GTAATAATA TAC CCC（60.5℃）。
海南香蕉束顶病和花叶病的PCR检测
海南香蕉束顶病和花叶病的PCR检测
马千全;李志英;李克烈;徐立
【期刊名称】《热带农业科学》
【年(卷),期】2005(025)005
【摘要】用CTAB法从感染束顶病(BBTV)的海南香蕉叶片组织中提取DNA,以此为模板分别用特异引物对BBTV的组分Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ进行扩增并测序,结果得到大小分别为607、490和326 bp的特异片断;用CTAB法从感染花叶病(CMV)的病叶组织中提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板用特异引物进行扩增测序,结果得到大小为557bp的特异片断.用PCR方法可从相当于100 ng的叶片组织中检测到BBTV和CMV.
【总页数】5页(P17-20,32)
【作者】马千全;李志英;李克烈;徐立
【作者单位】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,海南,儋州,571737
【正文语种】中文
【中图分类】S668.1;S436.67
【相关文献】
1.香蕉束顶病毒PCR检测技术研究 [J], 肖火根;胡晋生
2.斑点法检测柑桔黄龙病,香蕉束顶病 [J], 张陶;胡绪岚
3.PCR法检测香蕉束顶病毒 [J], 周莉娟;郑伟文
4.香蕉束顶病及其防治的研究：Ⅰ.病原物的电子显微镜观察及束顶病的... [J], 徐绍华;蔡文启
5.用一步PCR法同时检测香蕉束顶病毒和香蕉花叶心腐病毒 [J], 管维;杨雷亮;邱德义;王章根;周灼标;陈定虎
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香蕉3种病毒的多重PCR检测体系
园艺学报，（）：– 2010375 829834 Acta Horticulturae Sinica收稿日期：2009–12–28；修回日期：2010–04–04nyhyzx07-29nycytx-33-062009B020201011 香蕉3种病毒的多重PCR 检测体系谭小勇，阮小蕾，吴丽婷，翟国会，李华平*（华南农业大学植物病毒研究室，广州 510642）摘 要：根据GenBank 中已发表的香蕉束顶病毒（Banana bunchy top virus ，BBTV ）﹑黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus ，CMV ）和香蕉线条病毒（Banana streak virus ，BSV ）的基因序列，找出保守序列分别设计出特异引物，在建立各种病毒单项PCR 技术的基础上，通过优化多重PCR 反应条件，建立了能同时检测3种病毒的多重PCR 检测体系。
该体系可同时扩增BBTV 的615 bp 、CMV 的480 bp 和BSV 的945bp 的特异片段。
这些片段克隆测序结果表明，多重PCR 扩增的不同病毒片段是特异和专化的，其核苷酸序列与相应的病毒基因片段的相似性都达91%以上。
该体系的灵敏度测定结果表明，从相当于或大于10-2 mg感病植物组织中均能检测到这3种病毒。
关键词：香蕉；病毒；黄瓜花叶病毒；香蕉束顶病毒；香蕉线条病毒；多重PCR中图分类号：S 668.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2010）05-0829-06Development of a Multiplex PCR Protocol for the Detection of Three Viruses in BananaTAN Xiao-yong ，RUAN Xiao-lei ，WU Li-ting ，ZHAI Guo-hui ，and LI Hua-ping *（Laboratory of Plant Virology ，South China Agricultural University ，Guangzhou 510642，China ）Abstract ：Based on the establishment of the optimal PCR and RT-PCR for the detection of single virus ，a multiplex PCR protocol for the detection of three main viruses (Banana bunchy top virus ，BBTV ；Cucumber mosaic virus ，CMV ；Banana streak virus ，BSV) in banana is developed. Three specific fragments with molecular weights at 615 bp for BBTV ，480 bp for CMV and 945 bp for BSV were simultaneously amplified in one PCR reaction system. The sequence analysis of amplified fragments indicates that three virus fragments shared above 91 percent identities with that of other relative viruses. It was showed that the sensitivity of this protocol equaled to be able to detect the three viruses at the level of 10-2 mg banana tissue.Key words ：banana ；virus ；Cucumber mosaic virus ；Banana bunchy top virus ；Banana streak virus ；multiplex PCR由香蕉束顶病毒（Banana bunchy top virus ，BBTV ）引起的香蕉束顶病是香蕉生产上最主要的病毒病害之一，限制和威胁着世界上25%的香蕉种植区域的香蕉生产（Dale ，1987）。
香蕉束顶病毒海口分离物Rb蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗血清制备
。
第 一作 者 简介 ：冯 团诚 ，男 ，１８ ９ ３年 生 ，硕 士 ，主 要 研 究 方 面 为 分 子 病 毒 学 ；Ｅ ｍａ ： ｕ ｎ ｃｅ ｇＦ Ｎ － ｉ Ｔ ａ —ｈ ｎ Ｅ Ｇ＠ｇ ｉ ｍ。 ｌ ｍａ ｌ
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 。
１１１ 毒 源 ．． 香 蕉 束顶 病毒 感 病株 海 口病样 ，一 ０ｃ保存 。 ８ ＝ 【
基 金项 目 ：国 家 科技 支 撑 计 划 项 目（ ． ０ Ｂ Ｄ ８ ０ ） Ｎｏ ０ ７ Ａ ４ Ｂ １ ；教 育 部 ／ 南 省教 育 厅 联 合 资 助博 士 点 基 金 项 目（ ｏ ０ ５ ５ ５ ０ ） ２ 海 Ｎ． ００６０２ ￣ ２
表 达 。 目的 蛋 白经 Ｎ “ Ｎ Ａ 琼 脂 糖 亲 和 层 析 纯 化 后 免 疫 家 兔 并 获 得 抗 血 清 。Ｗｅ ｔ Ｒ ｂｏ 检 测 结 果 表 明 ．抗 血 清 ｉ一 Ｔ ｓ ｒ ｌ ｅ ｔ 与诱 导 表 达 的 Ｂ Ｔ Ｂ Ｖ编 码 Ｒ ｂ蛋 白 发 生 特 异 性 反 应 。 间 接 Ｅ ＩＡ 法 测 定 的抗 血 清 效 价 大 于 １ ２ ００ ０ 用 抗 血 清 ＬＳ ： ５ ０
对 感 病 香 蕉 和 健 康 香 蕉 进 行 检 测 ，结 果 表 明 ，抗 血 清 对 感 病 香 蕉 有 很 高 特 异 性 ，最 佳 工 作 浓 度 为 １ １ ０ 。 ： ０ ５
关键 词 香 蕉 束 顶 病 毒 ；Ｒ ｂ蛋 白 ：原 核 表 达 ；抗 血 清 ；间 接 Ｅ ＩＡ ＬＳ ｄ ｉ １ ． ６ ／ ｉ ｎ１ ０ — ５ １ ０ ００ ．０ ｏ ０３ ９ ． ｓ ． ０ ２ ６ ． １ ．８ ２ ９ ｊｓ ０ ２ ０
中图 分 类 号 ￥ ３ ． ４ ２４
香蕉束顶病毒海口分离物CP基因的原核表达、纯化及其抗血清制备
ＣＨＩ ＮＥＳ Ｊ Ｅ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｔ ＲＯＰ Ｃ ＣＲ Ｓ Ｉ ＡＬ ＯＰ
Ｖｏ － １ ｌ Ｎｏ５ ３ ．
Ｍ ａ ２ ０ ｖ． ０１
２ １ 年 ５ 月 ００
香 蕉束顶病毒海 口分 离物 Ｃ Ｐ基 因的 原 核 表 达 、纯 化 及 其 抗血 清 制 备
摘要 用 Ｐ Ｒ方法 从 感 染香 蕉 束顶 病 毒 （ ａ ａａｂ ｎｈ ｏ ｉ ，Ｂ Ｔ 的香 蕉植 株 幼嫩 假 茎 和 叶片 总 Ｄ Ａ 中扩 Ｃ Ｂ ｎｎ ｕ ｃ ｖｔ ｖ ｐ ｍｓ Ｂ Ｖ） Ｎ
增 外壳 蛋 白 （ｏｔ ｒｔ ｎ Ｐ 基 因 。回收 目的片段 ，经 Ｘ ｏＩ和 Ｂ ｍ Ｉ ｃａ ｐｏ ｉ，Ｃ ） ｅ ｈ ａ Ｈ 双酶 切后 与 同样 酶切 的质粒 载体 ｐ Ｔ ０ （ ） Ｅ ３ａ＋
相 连 接 ，酶 切验 证 及 测 序 结 果 获 得 了含 Ｂ Ｔ Ｐ基 因的 重 组 质 粒 ｐ Ｔ ０ — Ｐ 将 重 组 质 粒 转 化 Ｃ ｄ ｎ ｐｕ 表 达 ＢＶ Ｃ Ｅ ３ａＣ 。 ｏ ｏ ｌｓ
菌 ，在 ２ ℃、０４ ｏ Ｌ ＩＴ ５ ． ｍｍ ｌ Ｐ Ｇ条 件 下 诱 导 ６ｈ或 过 夜 ，经 １ ％ Ｓ Ｓ Ｐ Ｇ ／ ２ Ｄ — Ａ Ｅ电 泳 分 析 可 知 ．该 重 组 菌 表 达 了 ～个
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
１ １ １ 毒 源材 料 感染 香蕉 束顶病 毒 的香蕉 植株 采 自海南 省海 口市 ，一 ０℃保存 。 ． ． ８
基金项 目：国家科技支撑计划项 目（ ｏ ０７ ＡＤ ８ ０ ） Ｎ ．２ ０ Ｂ ４ Ｂ １ ，教育部， 海南省教育厅联合 资助博士点基金项 目（ ｏ ０ ５ ５ ５ ０ ） Ｎ ．２ ０ ０ ６ ０ ２ 。 第 一 作 者简 介 ：余 乃 通 ，男 ，１８ ９ ５年 生 ，浙 江 人 ，硕 士 研 究 生 ，从 事病 毒 分 子 生 物 学 研 究 ，Ｅ ｍ ｉ ｕａｔｎ＠１ ３ ｏ — ａｌ ｎｉ ｇ ６ ． ｎ。 ：ｙ ｏ ｃ
香蕉束顶病毒的提取及其特性的研究
取广 州郊 区香 蕉种植 园内 自然 状态 下感染 Ｂ Ｔ Ｂ Ｖ后 、 病症 特 征 明显 的香 蕉植 株 叶 （ 片 、 叶 叶柄 和叶 脉 ） ，
用正 常香蕉 植 株叶作 对 照实验 ．
１ ２ 实 验 方 法 ．
１ ２ １ Ｂ Ｔ 的提 取 ．． Ｂ Ｖ
将具 明显 Ｂ ＴＤ病 症的 新鲜香 蕉病 株 叶 剪去 枯 烂 叶后 称 重 ， 自来 水 冲洗 叶 片 ， Ｂ 用 滤
纸吸干 ， 后 剪 成 １ 然 ５×１ ｒｍ 的小 块 ， 速 投 入 液 氮 中冷 冻 ｌ ｎ 参 考 ［ Ｈａｄｎ ｇ］
Ｔ ｏ ｓ Ｂ Ｔ 的 提取方 法 ， 加 以改进 ， ｈ ｍａ【 的 Ｂ Ｖ ３ Ｊ 并 所有 操作均 在 ４ 下进行 ． ℃
香蕉 （Ｍｕａｐ ｒｄｓ ｃ ｓ ａ ａ ｉａａＬ、） ｉ 是我 国南方 亚热 带地 区重要 的经 果林作 物 。近年来 ， 广东 、 广西 、 福建 等省 份 的香 蕉 园普遍 流行 花 叶病 和 束顶病 （ Ｂ Ｄ） 其 中 ， 顶病 对 以传 统 栽培 方法 为 主的 老香 蕉 园造成 了毁 灭 ＢＴ ． 束 性灾 害 ．９ １ １ ９ 年底 广 州 、 莞 、 东 中山等地 区约 １ ０万 亩蕉 园的调 查表 明 Ｂ Ｔ Ｂ Ｄ发病率 高达 ２ ％ 一３ ％ ， ０ ０ 严重 地
维普资讯
第 ２ ９卷 ２期
２ ００６年 ４月
安 徽 师 范 大 学 学 报 （ 自然 科学 版 ）
Ｊｕ ｏ ｍ￣ ｏ ｕｈ ｉＮｏ ｍａ ｉｅｓｆ （ ｔ ｒｌ ｃｅ ｃ ） ｆ？ ￣ｕ ｒ ｌＵｎｖｒｉｙ Ｎａ ｕａ ｉｎ ｅ Ｓ
Ｖｏ ． ９ Ｎｏ ２ Ｉ２ ． Ａ ｐ ．２ ０ ０ ６ ｒ
的， 病 源物是 ｌ ｂ的单链 Ｄ 其 ｋ ＮＡ（ｓ ＮＡ） ｓ Ｄ ．
香蕉束顶病毒基因附加组分的克隆及序列分析
中图 分 类 号
香 蕉 束 顶 病 毒 （ ａ ａ ａ ｂ ｎ ｈ ｏ ｉ ｓ 大学植 物 病毒研 究 室 对 Ｂ ＴＶ 的生 物 学 、 因组 分 ｂ ｎ ｎ ｕ ｃ ｙ ｔｐ ｖｒ ， ｕ Ｂ 基
Ｂ Ｔ 是香蕉 束 顶病 的病 原 。根 据 １ Ｂ Ｖ） ０个 国家 和地 的克 隆 、 列分 析 和 功 能 研 究 等 方 面作 了 大量 的工 序
１ 材 料 与 方 法
供 试感 染香 蕉 束顶 病毒 的病株 分别 采 自华南 农 业 大学 植 物病 毒研 究 室和广 东 省高 州市 。
２ 株 系 ，即侵 染 香 蕉 （ ｓ ａ ａ） 个 Ｍｕａｎ ｎ 、大 蕉 （ ｓ－ １１ 供 试材 料 Ｍ．ａ ．
侵 染香 蕉 、 大蕉 而不 侵 染粉 蕉 的 ＮＳ株 系 ｌ 。 ２ ］ Ｂ Ｔ 基 因组 是 由至少 ６个 环状 单 链 ＤＮＡ 组 Ｂ Ｖ
作 为模 板 ， Ｂ ＴＶ组 分 １的特异 性 引物 进行 Ｐ Ｒ 经 Ｂ Ｃ
Ｂ Ｔ 的 附加 组 分 首 先 从 Ｂ ＴＶ 台 湾 分 离 物 扩 增 。 回收 Ｐ Ｒ产 物 ， ＥｃＲ Ｉ酶 切 鉴 定 Ｂ Ｔ Ｂ Ｖ Ｂ Ｃ 用 ｏ Ｂ Ｖ
香 蕉束 顶 病 毒 基 因 附加 组 分 的克 隆及 序 列 分 析
阮小 蕾 李 海辉 李 华 平 Ｈ
１ 华南农业 大学植物病毒研 究 室， ． 广州 ５ ０ ４ ２ 广 州起 义烈 士陵 园， １６２ ． 广州 ５０ ８ １００
摘要
采用 Ｐ Ｒ的方法分别 克隆 了香蕉束顶病毒 （ Ｂ ） Ｃ Ｂ ＴＶ 广东分离物 ＮＳ株 系和 Ｎ Ｐ株系的 附加组分 ， Ｓ 将
大利 亚 、 埃及 、 隆迪 、 济 、 加 、 布 斐 汤 印度 、 萨 摩 亚 ） 分 ， 对其 进行 了序列 分析 。 西 并
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香蕉束顶病毒简易制样技术及分子检测
彭军;唐复润;黄俊生;杨腊英;黄华平;谢玉萍;王国芬
【期刊名称】《热带农业科学》
【年(卷),期】2005(25)4
【摘要】筛选了5对依据香蕉束顶病毒(Banana Bunchy Top Virus,BBTV)外壳蛋白基因(CP)、复制酶基因(RF)保守区段设计的引物.结果显示,以RF为靶序列的引物,香蕉束顶病毒PCR特异性高,可以从感病组织中检测到ng(10-9g)级的病毒.样品提取缓冲液经过Sephadex凝胶介质过柱可有效浓缩病毒、去除PCR反应抑制物质,提高检测灵敏度,降低检测的假阴性.
【总页数】4页(P4-6,52)
【作者】彭军;唐复润;黄俊生;杨腊英;黄华平;谢玉萍;王国芬
【作者单位】中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物国家重点实验室,海南,海口,571101;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南,儋
州,571737;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南,儋州,571737;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南,儋州,571737
【正文语种】中文
【中图分类】Q943;S435.6
【相关文献】
1.香蕉束顶病毒复制酶和黄瓜花叶病毒衣壳蛋白融合基因植物表达载体的构建 [J], 郑耘;李华平;肖火根;范怀忠
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3.利用单克隆抗体检测有症状或无症状香蕉植株中的香蕉束顶病毒 [J], 黄惜
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5.用一步PCR法同时检测香蕉束顶病毒和香蕉花叶心腐病毒 [J], 管维;杨雷亮;邱德义;王章根;周灼标;陈定虎
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