染色方法总结
细菌一般染色方法

细菌一般染色方法细菌染色是一种常用的实验技术,通过染色使细菌在显微镜下能够更清晰地观察和分析。
细菌染色通常分为简单染色、阴性染色和阳性染色三种方法。
一、简单染色方法:简单染色是最基础的细菌染色方法,主要是用一种染色剂来染色所有类型的细菌。
常用的染色剂有墨汁、甲基蓝、伊红等。
简单染色的步骤如下:1.取一片细菌涂片,将其干燥。
2.在涂片上滴加染色剂,覆盖整个片面。
3.将染色剂置于片上一分钟,用水冲洗。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
简单染色可以使细菌呈现出斑点或条纹状,并能够区分一些基本形态和结构,但不能提供更多细菌信息。
二、阴性染色方法:阴性染色可使细菌显现为透明,而背景呈色的方法。
常用的阴性染色剂有阿里兹红、印度墨等。
阴性染色的步骤如下:1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上,使其成薄层。
2.滴加阴性染色剂到涂片上,使其均匀覆盖涂片表面。
3.用水冲洗染色液,并用纸巾擦干涂片。
4.镶片并观察。
阴性染色使背景呈色,使细菌透明,从而可以更清晰地观察其形态特征。
三、阳性染色方法:阳性染色可以使细菌显现为有色的圆点或杆状,常用的阳性染色剂有甲基蓝、伊红等。
阳性染色的步骤如下:1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上。
2.将染色剂滴加到涂片上,使其完全覆盖涂片。
3.置片5-10分钟,然后用水冲洗染色剂。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
阳性染色可以染色细菌,使其呈现有色的形态,便于观察和鉴定。
此外,还有一些特殊染色方法,如革兰氏染色法、氢酒精酸快速染色法等。
革兰氏染色是一种经典的细菌染色方法,通过不同细菌细胞壁的染色性质来将其分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
该方法使用革兰紫染色剂和碘液,以及酒精和碳酸盐条件溶液进行染色处理。
氢酒精酸快速染色法是一种常用的快速染色方法,将细菌用甲基蓝染色液处理一段时间后,用酒精和酸性酒精进行洗涤和脱色,最后用伊红染色液着色。
这种方法可以快速地将细菌分为两种主要类型:革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
各种染色技术总结

一、原理:1、革兰氏染色原理:通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。
2、芽孢染色法的原理:芽孢又叫内生孢子(endosopre),是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体,通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理,用不同染料进行着色,使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。
芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难,因此,当先用弱碱性染料,如孔雀绿(malachite green)或碱性品红(basic fuchsin)在加热条件下进行染色时,此染料不仅可进入菌体,而且也可进入芽孢,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料则难以透出,若再用复染液(如番红液)或衬托溶液(如黑色素溶液)处理,则菌体和芽孢易于区分。
用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内,进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。
3、荚膜染色法的原理:荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质,其主要成分是多糖类,不易染色,故常用衬托染色法,即将菌体和背景着色,而把不着色且透明的荚膜衬托出来。
染整工艺知识点总结

染整工艺知识点总结染整工艺是一种将纺织品经过染色和整理等处理,使其达到预期颜色和效果的技术。
染整工艺是纺织品生产过程中重要的一环,对最终产品的质量和外观起着至关重要的作用。
以下是染整工艺的一些知识点总结。
1. 纺织品染色纺织品染色是指把未经染色的纱线、面料或成衣等纺织品浸泡在染料溶液中,使其吸收染料,使得纺织品的颜色得到改变的过程。
染色方法包括浸染、印花、染织等。
(1)浸染浸染是指将纺织品浸泡在染料中,使其充分吸收染料。
浸染有直接染色和间接染色两种方式。
直接染色是指染料直接与纺织品接触,在加热或长时间浸泡后使染料牢固地固定在纺织品上。
而间接染色则是纺织品先以化学方法处理,使之成为适于吸取染料的状态,再浸染染料。
(2)印花印花是指将图案的印版或模板印到纺织品上,再将染料涂抹或浸渍到图案上,使得只有图案部分的颜色改变。
印花可以使用木刻、屏版、圆网版、镂空版等方法进行。
(3)染织染织是将已上色的纱线经织造再染色的工艺。
这种方法可以减少不必要的浪费,提高染色的均匀度和一致性。
2. 染料染料是染色的主要原料,它们通过与纺织品发生化学反应,使纺织品着色。
染料的种类繁多,按化学结构可分为酚酞染料、甲酚染料、偶氮染料、还原性染料等几大类。
根据染色方式分为直接染料、酸性染料、还原性染料、分散性染料、活性染料等。
(1)直接染料直接染料是指染料分子中含有与纺织品相亲的基团,它们可以直接地被纺织品上的纤维结构所吸附。
这类染料对纺织品的亲和力较强,染色效果好,但容易出现均匀度不够的问题。
(2)分散性染料分散性染料具有优异的溶解性和分散性,能够均匀地分散在水中,可以广泛应用于涤纶、酚醛和酚酞等合成纤维的染色。
(3)酸性染料酸性染料主要用于动植物蛋白纤维的染色,具有在酸性条件下良好的亲和性能,可以在较低的温度下得到良好的染色效果。
3. 染整工艺流程染整工艺流程主要包括预处理、染色、整理三个阶段。
(1)预处理预处理是指将原始纺织品进行清洁、退浆、脱脂、漂白、煮练等处理,以准备后续的染色工艺。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)

病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色,其中蓝色代表胶原和网状纤维,淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质,红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒,橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果,其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色,其中绿色代表胶原纤维,红色代表肌纤维,橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维,其中红色代表胶原纤维,黑色代表网状纤维,绿色代表弹性纤维,淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色,其中红色代表胶原纤维,绿色代表细胞核,黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察,Ⅰ型呈强双折光性,呈黄色或红色纤维,Ⅱ型呈弱双折光,呈多种色彩疏网状分布,Ⅲ型呈弱双折光,呈绿色的细纤维,Ⅳ型呈弱双折光的基膜,呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果,以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson(V.G)苦味酸-酸性品红法Van Gieson(V.G)苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色,其中鲜红色代表胶原纤维,黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞,蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果,以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色,其中黑色代表网状纤维,红色代表胞核(核固红复染),黄棕色代表胶原纤维,淡红色代表细胞质(红液复染)。
油红染色方法总结

油红染色方法总结引言油红染色是一种常用的染色方法,用于对细胞和组织切片进行染色,以提高显微镜下观察细胞结构和组织器官的清晰度和对比度。
本文将介绍油红染色的原理、步骤,并总结一些常见的油红染色注意事项和优化方法。
原理油红染色是利用对嗜酸性的脂质成分特异染色的性质,通过染色剂与细胞膜、胞浆中的脂质结合,使细胞或组织切片呈现出红色。
油红染色的基本原理如下:1.油红染色剂:染色剂中含有对脂质有亲和力的成分,常用的染色剂有Sudan III、Sudan IV等。
2.染色过程:细胞或组织切片与染色剂接触后,染色剂分子与脂质结合形成复合物,通过显微镜观察可见红色染色。
3.嗜酸性:脂质在最多情况下是嗜酸性的,即使用酸性染色剂染色时与脂质结合反应,形成可见的红色油红染色。
油红染色步骤下面是一般的油红染色步骤:1.准备组织切片:首先,需要获取待染色的组织切片样本。
通常,从动物或人体组织中切割出薄片以进行后续染色处理。
2.固定组织切片:将组织切片用10%的缓冲福尔马林进行固定处理,固定时间一般为24小时。
3.洗涤组织切片:用流动的水将固定的组织切片洗涤数分钟,以去除福尔马林残留。
4.脱水组织切片:使用一系列不同浓度的酒精(如70%、85%、95%和100%)进行脱水处理,每个浓度的酒精浸泡时间一般为3-5分钟。
5.渗透组织切片:将组织切片浸泡在透明质酸酯(如甲苯或二甲苯)中,时间一般为3-5分钟。
6.染色组织切片:将经过渗透的组织切片放入含有油红染色剂的盛器中,染色时间一般为10-15分钟。
7.清洗组织切片:用透明质酸酯迅速清洗组织切片,以去除多余的染色剂。
8.盖片和观察:将清洗过的组织切片放在显微镜玻璃片上,在玻璃片上加上一滴透明质酸酯,用盖片覆盖,然后放在显微镜下观察。
注意事项和优化方法在进行油红染色过程中,以下是一些需要注意的事项和可能的优化方法:•组织切片厚度:过厚的组织切片会导致染色剂渗透不均匀,建议切割切片时控制在3-5微米。
染色实验工艺总结

染色实验工艺总结一、实验目的本次染色实验旨在探究不同染料在不同纤维上的染色性能,了解染色工艺对纤维着色效果的影响,为提高染色质量和效率提供理论依据。
二、实验原理染色是将染料通过物理或化学方法固定在纤维上,使纤维呈现出所需颜色的过程。
实验原理包括纤维的吸色性、染料的溶解性、染色温度、时间等因素对染色效果的影响。
三、实验步骤1.准备纤维样品:选择不同种类的纤维,如棉、涤纶、尼龙等,进行预处理,如清洗、烘干等。
2.配制染料溶液:按照染料与溶剂的比例,配制不同浓度的染料溶液。
3.染色实验:将纤维样品浸入染料溶液中,控制染色温度、时间和搅拌速度等参数,观察并记录染色效果。
4.洗涤与固色:将染色后的纤维样品进行洗涤,去除未固定的染料,然后进行固色处理,使染料更牢固地固定在纤维上。
5.烘干与测试:将固色后的纤维样品烘干,然后进行色牢度、色深等性能测试。
四、实验结果与分析通过实验,我们得到了以下结果:1.不同纤维对染料的吸色性能存在差异。
例如,棉纤维对酸性染料的吸色性能较好,而涤纶纤维对分散染料的吸色性能较好。
2.染料浓度、染色温度、时间和搅拌速度等因素对染色效果有显著影响。
随着染料浓度的增加,染色深度逐渐提高;随着染色温度的升高,染色速度加快,但过高的温度可能导致染料分解;染色时间越长,染色深度越深,但过长的时间可能导致染料过度渗透,影响染色效果;适当的搅拌速度有助于染料在纤维上的均匀分布。
根据实验结果,我们可以得出以下结论:1.在选择染料时,应根据纤维类型和所需颜色选择合适的染料类型。
2.在染色过程中,应控制好染料浓度、染色温度、时间和搅拌速度等参数,以获得最佳的染色效果。
3.固色处理对于提高染色牢度非常重要,应选择合适的固色方法和条件。
五、实验总结通过本次染色实验,我们深入了解了染色工艺对纤维着色效果的影响,为实际生产中的染色操作提供了有益的参考。
同时,我们也发现了染色过程中存在的一些问题和挑战,如染料的选择、染色参数的控制以及固色处理等。
病理学技术—特殊染色最最全总结

病理学技术—特殊染色最最全总结病理学技术是医学研究领域中的一个重要分支,它利用各种不同的方法和技术,对组织和细胞进行分析和研究。
其中,特殊染色技术是病理学技术中的一个重要组成部分,通过使用不同的染色剂,有助于观察并区分不同的细胞和组织结构,以辅助诊断和研究。
以下是对特殊染色技术的最全总结。
1. PAS染色(Periodic Acid-Schiff染色):PAS染色可以用于检测细胞和组织中的多糖物质,如糖原、粘多糖和黏多糖等。
PAS染色通过一系列的化学反应,将含有醛基的物质氧化,然后与PAS染料反应生成染色物质。
2. 铁染色:铁染色可用于检测细胞和组织中的铁含量,它可以帮助鉴别铁负荷过多或过少的情况。
常用的铁染色方法包括Perls染色和Prussian blue染色。
3.去脂酸和酶染色:去脂酸和酶染色用于检测细胞和组织中的脂质和酶活性。
去脂酸染色通过将组织切片浸泡在油酸中,然后用溴化黄染色,观察脂质的分布情况。
酶染色通过使用特定的染色剂来观察细胞中的酶活性,如碘化物染色用于检测过氧化物酶活性。
4.免疫组织化学染色:免疫组织化学染色是通过使用特异性抗体来检测细胞和组织中的蛋白质和其他分子。
常见的免疫组织化学染色方法包括免疫荧光染色和酶联免疫组化染色。
这些染色技术可以用于确定特定抗原的存在和定位,从而帮助确定疾病的诊断和预后。
5.组织切片染色:组织切片染色是一种常见的特殊染色技术,它可以用于检测细胞和组织中的结构和细胞器。
常用的组织切片染色方法包括伊红染色、苏木素-伊红染色和单色染色等。
6.核酸染色:核酸染色用于检测细胞和组织中的核酸结构和功能,其中最常用的核酸染色方法是荧光原位杂交(FISH)和DAPI染色。
荧光原位杂交可以用来检测染色体异常和基因重排等。
7.肉眼可见染色:肉眼可见染色是一种用于检测显微镜下不易观察到的细胞和组织结构的染色技术。
常见的肉眼可见染色方法包括钙化染色和淀粉样变染色等。
总结以上所述,特殊染色技术在病理学领域中具有重要的应用意义,通过使用不同的染色剂,可以对细胞和组织进行全面和准确的分析和研究。
病理学技术——特殊染色最全总结

病理学技术——特殊染色最全总结特殊染色是病理学中常用的一种技术手段,用于染色并可视化细胞、组织或病理标本中特定的结构、细胞成分或病理损伤,从而帮助诊断人员更准确地判断疾病类型和病理变化程度。
特殊染色的种类繁多,下面将对一些常见的特殊染色进行全面总结。
一、银染色法银染色法是通过化学反应使待染物质与银盐结合,生成黑色或褐色沉淀,并在显微镜下观察变化。
常见的银染色方法有:Reticulin(網狀纖維)染色、Gomori银染色、Grocott-Methenamine银染色。
二、PAS染色PAS染色(Periodic Acid-Schiff染色)是一种常见的特殊染色技术,用于检测糖原以及其他多糖类物质。
通常使用的PAS染色是将待染物标本与过氧化铬酸溶液(Periodic Acid)处理后再使用Schiff试剂进行染色的方法。
PAS染色为酸性物质染成红色,大多为胞浆染色。
常见的应用包括鉴别肝细胞变性、神经纤维、肾小管等结构。
三、 Masson三色染色法Masson三色染色法是一种多彩染色方法,通过染色剂的组合可染出细胞核、胶原纤维和细胞质等不同组织成分。
Masson三色染色方法包括酸性区域以绿色染色显示胶原纤维,细胞核以黑色或暗蓝色染色显示,胞质以红色染色显示。
该染色法在组织纤维化、炎症反应等病变的检测中应用广泛。
四、Mallory三色染色法Mallory三色染色法和Masson三色染色法类似,可以用于显示胶原纤维、细胞核和胞质等组织成分。
其区别在于Mallory三色染色法标本在染色前需用盐酸处理,使染色剂更易于沉积在纤维上,能更清晰地显示组织纤维结构。
五、Giemsa染色Giemsa染色通常用于血液和骨髓涂片的染色,并可以显示细胞核、染色质和胞质等成分。
Giemsa染色法有多种方法,如Giemsa-Eosin染色法、Giemsa-Wright染色法等,可根据需要选用。
六、von Kossa染色法von Kossa染色法用于检测组织中的钙盐沉积,如血管壁的钙化、尿路结石等。
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mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00AgNOR染色法:1、试剂配制:(1)AgNOR染色液:甲液:明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml,在60℃使之完全溶解,再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。
乙液:硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml,4℃冰箱保存。
(2)AgNOR工作液取甲液10 ml,乙液20 ml 临用前混合。
2、步骤:(1)切片脱蜡至水(2)双蒸水洗2次(3)AgNOR 工作液中(25℃)浸染30分钟(暗处进行)(镜下观察)(4)双蒸水洗3次(5)脱水,透明,封固3、结果:油镜观察,细胞核及胞质背景为淡黄色, AgNOR呈棕黑色颗粒状。
B鞭毛染色法:1.试剂配制:甲液:丹宁酸5克氯化铁(FeCl3)1.5克福尔马林(15%)2.0毫升氢氧化钠(NaOH)1%1.0毫升乙液:硝酸银(AgNO3)2克蒸馏水100毫升制备乙液时,待硝酸银溶解后,取出10毫升备用,向余下的90毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵,先呈很浓厚的沉淀,再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。
再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中,先呈现薄雾,但轻摇则消失,继续边滴加边摇动,待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。
如雾重,则银盐沉淀,不宜使用。
2.染色方法:(1)将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上,置37°培养16—20小时,备用。
(2)在载玻片的中部相隔一厘米处,用接种环各沾一滴蒸馏水,然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中,倾斜玻片使培养物流至另一水滴中,两水滴自然相通,菌体从上位自然扩散到下位水滴中,待干燥后染色。
(3)在干燥涂片上加甲液3—5分钟,用蒸馏水冲洗。
将残水沥干或用乙液冲去残水后,加适量乙液保持30—60秒钟。
染色时在酒精灯上稍加热,使染液出现蒸汽即可,用蒸馏水冲洗。
(4)镜检:菌体及鞭毛皆染成茶色。
3.注意事项:(1)染液最好随用随配,存放至次日效果则差。
(2)一定要充分洗净甲液后再加乙液,否则背景较脏。
(3)防止水及培养物沾有氯化物。
(4)切忌用接种环涂抹培养物。
(5)载玻片一定要洗净。
先用洗衣粉煮沸,再水洗,干后放在洗液中,浸泡24小时,取出水洗除去残酸,沥干,存放于95%乙醇中备用。
(6)加热时最好置金属板上,使载玻片受热均匀。
β-半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖:葡萄糖和半乳糖。
β-半乳糖苷酶的活性可以用X-gal(5-溴-4-氢-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)等显色底物加以检测,β-半乳糖苷酶可将X-gal转变为不溶性的深蓝色沉淀。
X-gal可以做为组织染色剂,可以在所有表达β-半乳糖苷酶的植物和动物组织上产生颜色。
应该是可以用来病毒感染组织切片染色的。
CCAE染色步骤1、试剂配制:(1)A液:萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml中。
(2)4%副品红液:取盐酸副品红(EM级)1g,溶于蒸馏水20ml内,再加入10m1/L的HCl 5m1,稍加温以增加溶解度,过滤、贮室温下。
于使用前,取等量副品红液与新鲜的4%亚硝酸钠混合,之后用淀粉碘化物试纸测试,瞬间试纸应变为蓝色才合格,如果不变色,应加入更多的亚硝酸盐。
(3)B液:o.1mol/L的Michaelis Veronal-醋酸缓冲液(PH 7.6)30ml,加入新配制的副品红液3滴,用1moI/L HCl使PH值调至6.3。
2、染色步骤:(1)将A.、B二液混合,过滤,加入氟化钠(17mg/10ml), 使之最后浓度为0.04mol/L.(2)切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)(3)流水冲洗。
(4)苏木素复染。
(5)空气干燥后封固。
GGrimelius硝酸银反应法(嗜银反应):1、试剂配制:硝酸银液: 1%硝酸银水溶液 3毫升蒸馏水 87毫升0.2M醋酸缓冲液(PH5.6) 10毫升还原液: 对苯二酚 1克亚硫酸钠 5克蒸馏水 100毫升2、染色步骤:(1)切片脱蜡至蒸馏水(2)60℃硝酸银液内3小时(3)用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗(4)入45℃的还原液处理1分钟(5)蒸馏水洗(6)5%硫代硫酸钠处理1 分钟(可不做)(7)水洗,脱水,透明,封固3、结果:嗜银颗粒呈棕黑色。
正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞,故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断。
HHID染色法1、染色步骤:(1)切片脱蜡至蒸馏水(2)放入预热的1当量盐酸中10分钟(3)蒸馏水洗(4)Schiff液中染10分钟(5)自来水洗15分钟至细胞核红色(如2~5步不做,可在染好爱先蓝后染核固红2分钟)(6)蒸馏水洗(7)高铁二胺液 18~24 小时(8)爱先蓝液(pH2.5)染10~20分钟(9)蒸馏水洗(10)脱水,透明,封固2、结果: 硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液(唾酸粘液)物质蓝色。
硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜,而小肠粘膜仅出现唾酸粘液,此法多用于确定肠化的分型。
HP(硝酸银法)1、试剂配制:(1)醋酸缓冲贮备液,PH3.60.2N醋酸缓冲液,PH3.6 10 ml蒸馏水 240 ml以下各液均用此液配制(2)1 %硝酸银液硝酸银 1 g醋酸缓冲贮备液,PH3.6 100 ml(3)2 %硝酸银液硝酸银 0.2 g醋酸缓冲贮备液,PH3.6 10 ml(4)5 %明胶液明胶 5 g醋酸缓冲贮备液,PH3.6 100 ml先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右,然后倾入明胶,于37℃温箱内慢慢溶解,搅拌。
(5)3 %对苯二酚液对苯二酚 0.3 g醋酸缓冲贮备液,PH3.6 10 ml(6)明胶对苯二酚液3 %对苯二酚液 1 ml5 %明胶液 15 ml(7)显影液明胶对苯二酚液 16 ml2 %硝酸银液3 ml在操作到第4步完成前5分钟充分混合,置于56℃水浴箱中保温待用。
2、操作方法:(1)组织脱蜡至蒸馏水(2)醋酸缓冲贮备液洗2次(3)入1 %硝酸银液中,56℃,1小时(4)切片不水洗,直接放入预热的显影液中56℃,肉眼呈黄棕色为止。
(5)倾去显影液,于56℃的水中浸洗2分钟(6)水洗(7)脱水,透明,封固。
3、结果:幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。
Highman甲醇刚果红染色法(类淀粉染色)1、试剂配制:甲醇刚果红染液: 刚果红 0.5 g 甲醇 80 ml 甘油 20 ml碱性乙醇分化液: 氢氧化钾 0.2 g 80%乙醇 100 ml2、染色步骤:(1)切片脱蜡至水(2)甲醇刚果红染液染10~20分钟(3)用碱性乙醇分化液分化数秒(4)水洗(5)苏木素复染2分钟(6)水洗(7)脱水,透明,封固3、结果:淀粉样物呈桔红色。
4、类淀粉染色的应用:确定淀粉样变性及玻璃样变性的胶原组织,后者在刚果红法染色后呈淡桔色,常用于诊断甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等。
L六胺银染色法1、试剂配制:六胺银液配制:3%六次甲基四胺水溶液 5 ml2.5%硝酸银水溶液 0.5 ml摇晃,变清,再加2.5%四硼酸钠1.5~2 ml加蒸馏水至30~40 ml2、步骤:(1)切片脱蜡至水,蒸馏水洗(2)0.5%高碘酸浸15分钟,蒸馏水洗(3)六胺银液60℃,1-2小时,(或六胺银液80-90℃,半小时左右)蒸馏水洗(镜下基底膜呈黑色)(4)0.2% 氯化金调色数秒(5)丽春红淡染(6)水速洗(7)烘干,透明,封片。
3、结果:肾小球基底膜呈黑色,霉菌,弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。
MMallory 三色法1、步骤(1)切片脱蜡至水(2)0.5%酸性复红水溶液1 min(3)蒸馏水洗(4)入下液1-2min苯胺蓝0.5g,桔黄G 2g,磷目酸或磷钨酸 1g,蒸馏水100ml。
(5)蒸馏水洗(6)95%乙醇分色(7)脱水,透明,封片。
2、结果:胶原纤维蓝色,红细胞桔黄色,核红色。
M allory磷钨酸~苏木素染色法(PTAH)1、试剂配制:苏木素 0.1 g 磷钨酸 2.0 g 蒸馏水 100 ml先将苏木素加热溶于20毫升蒸馏水,再将磷钨酸溶于80毫升蒸馏水。
等苏木素冷却后,加入磷钨酸溶液,混合,放置数星期后,才可使用。
如急用,可加入0.2 g高锰酸钾,加速其成熟。
2、染色步骤:(1)切片脱蜡至蒸馏水。
(2)放入0.25%高锰酸钾水溶液5分钟。
(3)蒸馏水洗。
(4)2.5%草酸漂白5分钟。
(5)蒸馏水洗多次。
(6)置于磷钨酸苏木素溶液12~24小时。
(7)95%酒精快速分化,滤纸吸去剩余酒精,置60℃温箱中烘干。
(8)二甲苯透明,封固。
3、结果:纤维胶质,肌胶质,神经胶纤维,纤维素,横纹肌等均染成蓝色。
胶原,网状纤维和骨基质着黄色或砖红色。
在工作中常用于观察横纹以证实肿瘤细胞是否有横纹肌分化特征。
Masson 三色染色法、1、试剂配制:丽春红酸性品红液:丽春红 0.7 g 酸性品红 0.3 g蒸馏水 99ml 冰醋酸 1 ml苯胺蓝液: 苯胺蓝 2 g 蒸馏水 98 ml 醋酸 2 ml亮绿液:亮绿 0.2g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 0.2 ml苦味酸酒精液:苦味酸在95%酒精中的饱和液 20 ml,加95%酒精10 ml 2、染色步骤:(1)切片脱蜡至蒸馏水(2)苏木素染5~10分钟(3)盐酸酒精分化(4)流水蓝化,蒸馏水洗(苏木素可不染)(5)丽春红酸性品红液中染5~8分钟(6)蒸馏水洗(7)1% 磷钼酸中染1~3分钟(8)不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟 (如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)(9)水速洗,置60℃温箱中烘干,二甲苯透明,封固3、结果:胶原纤维蓝色(苯胺蓝复染)或绿色(亮绿复染),肌纤维、纤维素红色。
4、注意:(1)此法广泛用于胶原纤维和平滑肌的鉴别,也为肾组织活检,观察肾小球病变的重要染色法,常用于观察缺血病变的心肌。
用于观察肾小球病变时,一定要用2um以下半薄切片。
(2)细胞核染色后分化很重要,观察控制着色程度。
而HE染色则是最常用的一种常规染色方法,但无法区别胶原纤维和肌肉。
N粘液染色(一)PAS染色法与染糖元的方法相同。
(二)AB(pH2.5)染色法1、试剂配制:爱先蓝8GX 1 g 蒸馏水 97 ml 冰醋酸 3 ml核固红液: 核固红 0.1g 硫酸铝 5g 麝香草酚 50mg 蒸馏水 97ml2、染色步骤:(1)切片脱蜡至蒸馏水。
(2)爱先蓝液染10~20分钟(3)蒸馏水洗(4)核复染(核固红5分钟),水洗(5)脱水,透明,封固。
唾液酸及弱硫酸化粘液及一般粘液呈蓝色。
常用于确定胞浆内空泡的性质,特别是当细胞呈现印戒样特征时。
J甲基绿派洛宁法(改良Cook,1974)1、试剂配制:(1)2%甲基绿水溶液:甲基绿(methyl green)1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提,方法详后。
(2)5%派洛宁水溶液:派洛宁G(pyronine G)1g蒸馏水加至20ml(3)0.2M醋酸盐缓冲液(pH 4.8)0.2M醋酸液41ml0.2M醋酸钠液59ml(4)甲基绿派洛宁染液:2%甲基绿水溶液(经抽提) 5ml5%派洛宁水溶液 1ml蒸馏水 12ml0.2M醋酸盐缓冲液(pH 4.8) 18ml甲基绿水溶液的抽提:甲基绿为绿色粉末,属三苯甲烷染料,这种染料是由氯代甲烷作用于结果晶紫而形成的一种化合物。