染色方法总结

mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00

AgNOR染色法:

1、试剂配制：

（1）AgNOR染色液：

甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。

乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。

（2）AgNOR工作液

取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。

2、步骤：

（1）切片脱蜡至水

（2）双蒸水洗2次

（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次

（5）脱水,透明,封固

3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。

B

鞭毛染色法:

１．试剂配制：

甲液：丹宁酸５克

氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克

福尔马林（１５％）２．０毫升

氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升

乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克

蒸馏水１００毫升

制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。

２．染色方法：

（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。

（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。

（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。

（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。

３．注意事项：

（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。

（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。

（３）防止水及培养物沾有氯化物。

（４）切忌用接种环涂抹培养物。

（５）载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２４小时，取出水洗除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用。（６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。

β－半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。

β－半乳糖苷酶的活性可以用X-gal（5-溴－4-氢－3－吲哚－β－D－半乳糖苷）等显色底物加以检测，β－半乳糖苷酶可将X-gal转变为不溶性的深蓝色沉淀。

X-gal可以做为组织染色剂，可以在所有表达β－半乳糖苷酶的植物和动物组织上产生颜色。

应该是可以用来病毒感染组织切片染色的。

C

CAE染色步骤

1、试剂配制：

（1）A液：萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml中。（2）4％副品红液：取盐酸副品红(EM级)1g，溶于蒸馏水20ml内，再加入10m1／L的HCl 5m1，稍加温以增加溶解度，过滤、贮室温下。于使用前，取等量副品红液与新鲜的4％亚硝酸钠混合，之后用淀粉碘化物试纸测试，瞬间试纸应变为蓝色才合格，如果不变色，应加入更多的亚硝酸盐。

（3）B液：o．1mol/L的Michaelis Veronal-醋酸缓冲液(PH 7.6)30ml，加入新配制的副品红液3滴，用1moI／L HCl使PH值调至6．3。

2、染色步骤：

（1）将A.、B二液混合，过滤，加入氟化钠(17mg/10ml), 使之最后浓度为0.04mol/L.

（2）切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)

（3）流水冲洗。

（4）苏木素复染。

（5）空气干燥后封固。

G

Grimelius硝酸银反应法（嗜银反应）:

1、试剂配制：

硝酸银液: 1%硝酸银水溶液 3毫升蒸馏水 87毫升

0.2M醋酸缓冲液(PH5.6) 10毫升

还原液: 对苯二酚 1克亚硫酸钠 5克蒸馏水 100毫升

2、染色步骤:

（1）切片脱蜡至蒸馏水

（2）60℃硝酸银液内3小时

（3）用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗

（4）入45℃的还原液处理1分钟

（5）蒸馏水洗

（6）5%硫代硫酸钠处理1 分钟(可不做)

（7）水洗,脱水,透明,封固

3、结果：嗜银颗粒呈棕黑色。正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞，故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断。

H

HID染色法1、染色步骤:

（1）切片脱蜡至蒸馏水

（2）放入预热的1当量盐酸中10分钟

（3）蒸馏水洗

（4）Schiff液中染10分钟

（5）自来水洗15分钟至细胞核红色（如2～5步不做，可在染好爱先蓝后染核固红2分钟）

（6）蒸馏水洗

（7）高铁二胺液 18～24 小时

（8）爱先蓝液(pH2.5)染10～20分钟

（9）蒸馏水洗

（10）脱水,透明,封固

2、结果: 硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液（唾酸粘液）物质蓝色。硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜，而小肠粘膜仅出现唾酸粘液，此法多用于确定肠化的分型。

HP（硝酸银法）

1、试剂配制：

（1）醋酸缓冲贮备液，PH3.6

0.2N醋酸缓冲液，PH3.6 10 ml

蒸馏水 240 ml

以下各液均用此液配制

（2）1 %硝酸银液

硝酸银 1 g

醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml

（3）2 %硝酸银液

硝酸银 0.2 g

醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml

（4）5 %明胶液

明胶 5 g

醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml

先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右，然后倾入明胶，于37℃温箱内慢慢溶解，搅

拌。