鲑鱼返乡
鲑鱼返乡
简介
鲑鱼是洄游鱼类，每年会从海里游回上游的淡水江河产卵，而这里正是她出生的地方，所以叫鲑鱼返乡。
在社会生活中，人们把资本、人才等回到其输出地，形象地比喻为“鲑鱼返乡”。
起源
中国大陆和台湾签订ECFA后，在大陆投资的台商出现了回台投资的意愿和行动，台湾人形象地称之为“鲑鱼返乡”。
“鲑鱼返乡”已经被扩大到运用到比喻更多领域的资本、人才回流现象。
概况
促使“鲑鱼返乡”的主要动因，是两岸签署ECFA的效益持续发酵。从2008年开始，连续3年每年超过100家台商回流。吸引台商回台投资，已被台湾当局列为重要施政项目，官方鼓励他们善用台湾的产业研发优势，回台设立研发中心、生产高附加值产品或设立营运总部，当局则提供投资服务、土地、租税、融资、关税等一揽子优惠政策，促请台商与故乡联结。
效果已初步显现。2011年台商回台投资金额469亿元（新台币，下
同），比上年成长了15%，2012年目标提高至500亿元，前8个月已达419亿元。2012年底台经济部门又加码，提出一年吸引回流台资1000亿元，要创8万个工作岗位。
台当局也开始充当起招商的角色，经济主管部门直接与台商签署投资意向书。官方“全球招商联合服务中心”应运而生。从立项到设立，专人专责，全程服务。
效率不高“鲑鱼”难适应
并非人人都能华丽转身。台商回台投资，搬迁、迁徙，究竟要西进还是北移，南下还是返乡，很多人踌躇在三岔路口。易地创业，难上加难，连最熟悉的台湾家乡，好像水性也变了。
一是缺人。自行车胎制造大厂建大工业的总经理张宏德感叹：工人不好找，我们薪水不低，但因为要轮大夜班，年轻人不愿意。而很多厂家苦恼的是，台湾年轻人都去读大学，不愿当生产线工人。有的几年前买地要盖工厂，因找不到劳工，现在地还荒在那儿。的确，有很多工作台湾人现在都不做了，如果抱着在大陆招工的心态，一定会踢到铁板。
二是土地难找。在台湾取得用地，要经过很多单位盖无数的章。各地环保争议不断，不少投资案受环保因素影响而夭折，就算买下土地，建厂的环评及土地变更程序冗长。
三是办事难。台湾工商协进会理事长骆锦明说，岛内公务员高层不敢正面协助业者，怕招来“图利他人”的批评，“官员效率低、防卫心太重让人头痛”。一位台商表示，你看朝野、社会、媒体经常吵成一
片，拖慢了决策效率，连油电涨价、涨薪问题都搞不定，更何况解决台商回流这个牵动两岸产业链的复杂问题了。
美国版的“鲑鱼返乡”https://www.360docs.net/doc/3113289823.html,/article/opinions/idCNCNE8BC00J20121213路透中文
“鲑
鱼返乡”遭遇水土不服https://www.360docs.net/doc/3113289823.html,/24hour/n/2012/1212/c25408-19865965.ht ml人民网
2012年鲑鱼返乡计划—第一届台湾教育展https://www.360docs.net/doc/3113289823.html,/f/page_viewtopic/t_193680.html洛杉矶华人资讯网
鲑鳟鱼养殖技术基本要点
鲑科鱼类，习惯上有的被称作鲑，有的称为鳟，统称为鲑鳟。鲑鳟鱼是一种高蛋白、低脂肪、无肌间刺的鱼类，因其品质好、营养价值高，有助于健脑，预防心脑血管等疾病，因而，具有很高的食用价值。是联合国粮农组织向世界推广的优良淡水养殖品种之一，随着国民经济的快速发展和人民生活水平的不断提高，它近年受到市场热捧，走俏餐桌。鲑鳟鱼在我国的养殖前景看好，现将鲑鳟鱼养殖技术基本要点介绍如下。 1选择与鲑鳟鱼类生物学特性相适应的水域进行养殖1.1水温水温是影响养殖效果的重要因素，鲑鳟鱼养殖需要低温的水域环境。在适温范围内，水温越高生长越快，水温越高，溶解氧越低，当水温达到22℃时，水中的溶解氧会降到5～6mg/L，这时水环境出现了水温偏高和氧量偏低两个不利因素，鱼体代谢强度和饵料效率都会降低，长此下去会严重地影响生长，甚至引起死亡。水温18℃以下，生长一般不会受到水温和溶解氧的影响。因此在鲑鳟鱼养殖选择水源时要选择泉水和水质清新的河水，水温以10～18℃为宜。 1.2溶解氧鲑鳟鱼喜栖高溶解氧水域，当水中溶氧低于3mg/L时，会出现大批死亡,该值为夏季的致死点；低于5mg/L时，呼吸频率加快，感觉不适；要使鲑鳟鱼良好生长，水中溶氧最好在6mg/L以上；到9mg/L以上生长速度较快。掌握饲育用水溶解氧的变化规律并适时予以调节，避免各种因素的刺激，保持安全的溶解氧环境是保证养殖效果的关键。 1.3水质影响鲑鳟鱼生长的水质因素很复杂，主要是水的酸碱性和氨氮（NH3）浓度。鲑鳟鱼对pH的耐受范围是5.50～9.20，适宜范围是6.50～7.50，酸性特别是强酸性环境会使鲑鳟鱼生长受到抑制。建设鲑鳟鱼养殖场时，应对水源的环境情况进行全面的了解。 2建设符合健康养殖需求的鱼池结构 鲑鳟鱼养殖池以长方形、四角圆钝的结构为佳，没有死角,走水合理，鱼可在垒池均匀分布，鱼池宽4m，长不超过l5m为好。鱼池排水口设置一层拦鱼栅,两层闸板，采用倒虹吸式排水，这样有利于底部污物排出。鱼池供水应采用并联供水方式,减少鱼体发病交叉感染机会。鱼池供水条件不好，采用串联鱼池供水的，应在排水口下方设沉淀池,减少残饵、鱼粪等代谢物对下方池鱼的危害。3确定合理的放养密度 鲑鳟鱼放养密度可以随水交换量、溶氧量增加而加大，但放养密度在l6kg/m3以上时，鱼体的代谢物增加,将使水化指标上升，鲑鳟鱼只能保证平时的摄食活动，生长缓慢，抵御疾病能力将会降低。因此，鲑鳟鱼的放养密度应保持在l0～l4kg/m3范围内，这样即可最大限度地利用水体又可提高鱼体对疾病的抵抗力。 4精心饲养,严格管理 4.1饲料投喂鲑鳟鱼养殖所用饲料成本约占养殖成本的60%左右。确定科学的投喂方式是取得理想效益的基本保证。在鲑鳟鱼类饲养过程中必须保证饵料成份的营养平衡和品质质量，投饵量不足会造成饥饿，使鱼成长参差不齐，导致寄生性疾病发生；投喂饵太多易发生残饵污染，增加氧气的消耗量及各种传染病发生机会。必须根据水温、鱼体状况、溶氧等因素科学合理地投喂。在适宜的条件下鱼种日投饵量占鱼体重的9％左右，日投铒次数6～8次；成鱼日投饵量占鱼体重的2.50％左右，日投饵次数3～4次。并且要注意饵料粒径与鱼体规格相适应，一般饵料粒径为所喂鱼口裂2/3为佳。 4.2日常管理在养殖过程中，日常必须坚持勤观察、勤巡塘，观察水质变化、鱼类的活动、摄食情况、有无病害等情况，发现问题及时处理并做好各项工作记录。残饵及粪便里的氨氮和亚硝酸盐，是鲑鳟鱼的致毒物质，容易引发与缺氧状态相同的厌食症状，因此应定期清洗池底(每周1次)。饵料投喂前要过筛，筛出碎料粉，减少饵料对水环境的污染和对鱼类鳃部附着的危害。水源不足、池水水温高时，可利用增氧设备和补充地下水增加水中溶氧，降低水温。要经常清除鱼池周围的垃圾、水面上的漂浮物等，改善和保持鱼池周边环境条件，减少周围环境对鲑鳟鱼生长的不良影响。 5做好鱼病防治 鲑鳟鱼常见的疾病有营养性疾病、体外寄生虫病、水霉病、细菌性烂鳍病、烂腮病、肠炎等，其中以营养性疾病最为常见，其次是小瓜虫病和三代虫病。 当鱼健康状况不佳时，鱼会离开群体，游到排水处或在池壁、池底缓慢游动。不健康的病鱼体色发暗或变黑，摄食迟钝，食量减少，游泳方式异常或者出现腹部膨胀、腮盖外张、鱼体表面局部浮肿，出现白点和白云状黏 水产养殖 44农业科技与信息 2009年第17期鲑鳟鱼养殖技术基本要点 周蓉 （甘肃省水产科学研究所，甘肃兰州730030）
各种缓冲液配方
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法1. 2. 3.加入57.1 ml 的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L 后，室温保存。 10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度890 mM Tris- 硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法l. 2. 3.加去离子水将溶液定容至l L 后，室温保存。 10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法1.称41.8 g MOPS，置于1 L 烧杯中。 2.加约700 ml DEPC 处理水，搅拌溶解。 3.使用2 N NaOH 调节pH 值至7.0。 4. 5.用DEPC 6.用0.45 m 滤膜过滤除去杂质。 7.室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 溴乙锭(10 mg/ml) 组份浓度10 mg/ml 溴乙锭配制量100 ml 配制方法 1.称量 1 g 溴乙锭，加入到100 ml 容器中。 2.加入去离子水100 ml ，充分搅拌数h 完全溶解溴乙锭。 3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml 。 注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose 凝胶 配制方法1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是0.5×TBE 或 1×TAE）。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量）。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加 热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。小心 摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖 完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起 泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度 不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔 化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液（终浓 度0.5 μg/ml）。并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚 度一般在3~5 min 之间。 7.在室温下使胶凝固（大约30 min~1 h），然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在 4 ℃下保存， 一般可保存2~5 天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA 的最佳分辨范围 配制方法1. 3.加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4.用去离子水定容至500 ml 后，室温保存。
鲷鱼和三文鱼哪个好吃
鲷鱼和三文鱼哪个好吃 钓鱼广阔的分布于运河，或者是河流速度比较慢的一些地区，和三文鱼有一定的区别，从口感来说，它们各有特色，都是营养价值比较高的水产品，鲷鱼的营养价值也比较高，它的肉质细嫩，富含胶原蛋白，有很好的提高免疫力的作用，三文鱼更是如此，它属于深海鱼类，没有污染。 鲷鱼和三文鱼哪个好吃 1、鲷鱼这些欧洲的鲤科鱼类主要都是底食泥鱼。鲷鱼广泛地分布于止水、运河及流速缓慢的深河中，软口鱼偏好流速较快的河川中游，文鳊则栖息于大而流速缓慢的河川中下游。其中分布最广泛且最受钓鱼者欢迎的是青铜鲷。 2、三文鱼 最早由港台地区提出，是英文名salmon的音译名，这是因为salmon的英文发音近似于三文,而salmon标准的中文译名应是大马哈鱼或者是鲑鱼。三文鱼不是鱼类分类名称，而是某些鲑科鱼类或鲑鳟鱼类的商品名称.作为三文鱼，他的肌肉必须坚实而富有弹性，且白色纹理清晰，色泽还要呈现深红色或桔红色。所以准确地说三文鱼应该是桔红色的鲑科鱼、鲑鱼肉、鲑鳟鱼。 国际上对鲑鳟鱼类的称呼较为混乱习惯上将鲑科鱼类称之为鲑鳟鱼类。在不同国家的消费市场三文鱼涵盖不同的种类，挪威三文鱼主要为大西洋鲑，芬兰三文鱼主要是养殖的大规格红肉虹鳟，美国的三文鱼主要是阿拉斯加鲑鱼。
鲷鱼的营养价值 鲷鱼的种类很多，鲷鱼的叫法也只是一种统称。鲷鱼是海鱼，沿海均有鲷鱼产值。这种鱼类肉质鲜美细嫩，含有丰富的蛋白质和胶质，而且没有刺。特别适合生长需要的儿童和爱美的女性朋友。改善人体的新陈代谢。 1、由于鲷鱼生长在深海，特殊的生存环境使得它无污染，营养成分活性极高，易被人体吸收。因为其胶原蛋白含量高，活性强，对皮肤更是有着特殊的美容功效。 2、鲷鱼中的可溶性胶原蛋白，具有极高的细胞黏结性、高保湿性及良好的感官性能，且活性高易吸收，无臭透明，不产生刺激性。分子最小、活性最佳、纯度最高，效果最好。 3、从鲷鱼中提取的胶原蛋白，不但能延缓皮肤衰老，减少皱纹、色斑等岁月问题，更能改善人体新陈代谢，让人具有更年轻的身体状态。 4、鲷鱼营养丰富，富含蛋白质、钙、钾、硒等营养元素，能为人体补充丰富蛋白质及矿物质。
缓冲液的配制方法
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7.室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 溴乙锭(10 mg/ml) 组份浓度10 mg/ml溴乙锭 配制量100 ml 配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。 2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。 3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose凝胶 配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。 2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中 加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。 小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直 至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长， 每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造 成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须 保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓 度0.5 μg/ml)。并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶 厚度一般在3~5 min之间。 7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存， 一般可保存2~5天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 6× Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度 配制量 配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
三文鱼(虹鳟鱼,金鳟鱼)
鲑鱼 [salmon],音译为三文鱼。 属于鲑科(Salmonidae)的若干种鱼的共同名称。在鲑科中，称为salmon的种类集中在两个属，即大马哈鱼属和鲑属，分别由八个种组成， 其中最有名的是太平洋大麻哈属中的六种：王大麻哈（王鲑）、红大麻哈（红鲑）、银大麻哈（银鲑）、驼背大麻哈（细鳞鲑）、马苏大麻哈和秋大麻哈（秋鲑）和鲑属中的一种：大西洋大麻哈（大西洋鲑）。 鲑鱼原指大西洋鲑，学名为Salmo salar，但后来泛指一切鲑科鱼类，尤指构成大麻哈鱼属的太平洋鲑。 此外，由过去的鲑属划入现在大麻哈鱼属的虹鳟，是一种世界性的养殖鱼类。 金鳟原为虹鳟鱼的变种，因全身金黄，所以称为金鳟，同虹鳟一样为冷水养殖的鱼类。 科——鲑科（即鲑鱼，三文鱼，大致有太平洋鲑和大西洋鲑两类） 属——1：大麻哈鱼属（即太平洋鲑）2：鲑属 种——大麻哈鱼属有6个种（分别是：红大麻哈鱼，银大麻哈鱼，大麻哈鱼(即狗鲑)，大鳞大麻哈鱼(即春鲑、奇努克鲑、王鲑)，细鳞大麻哈鱼(即驼背鲑，粉红鲑)，樱桃鲑） 在不同国家的消费市场三文鱼涵盖不同的种类： 挪威三文鱼主要为大西洋鲑， 芬兰三文鱼主要是养殖的大规格红肉虹鳟， 美国的三文鱼主要是阿拉斯加鲑鱼。 营养价值： 个体较大，喜栖冷水中，肉质鲜美，商品价值高，含有丰富的ω3脂肪酸（20碳5烯酸EPA、22碳6烯酸DHA和22碳5烯酸DPA）是脑黄金和深海鱼油的主要成分。因而是当今世界范围的高档水产消费品。 上述作为商品统称的三文鱼目前已经成为世界水产品中贸易量最大的一个群体。野生捕捞的的鲑鱼资源有限，远不能满足世界市场需求，由此在世界范围内形成鲑鱼的养殖热潮，最早大量人工养殖的是虹鳟和大西洋鲑以及银鲑，国外三文鱼的虹鳟养殖多用全雌养成大型鱼，是便于制成鱼片、鱼排和鱼段供应超市，少量小规格为150--250克。中国大陆消费市场最受欢迎的规格是750克左右，适于普通家庭和宴席一次性消费。我国早期进口的三文鱼多来自北欧，主要是挪威。年进口冰鲜大西洋鲑（不是活大西洋鲑）总量在2万吨上下，因此有人习惯称挪威三文鱼。近年中国大陆正在进行银鲑、王鲑和大西洋鲑以及虹鳟海水养殖的规模化生产。预计，我国自行生产的鲜度高，价廉物美的三文鱼不久将会占领中国大陆的主要消费市场。
鲑精DNA配制
鲑精DNA配置 溶解DNA pH要调到8左右。要用DNase free的水。室温就可以。不要过度震荡和抽吸。以防DNA链断裂。最后加入终浓度为1 mM EDTA。 1 把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA 浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA 2 （1）在50ml灭菌聚乙烯管中加入1g鲑精DNA，加入15ml DEPC水使其浸泡5min至2h； （2）加入2.5ml 2mol/L HCl，室温放置，DNA形成白色沉淀，充分振摇至沉淀物相互缠绕在一起，用吸头尖端使之形成一球团状（2～3min）； （3）加入5.0ml 2mol/L的NaOH。摇动小管使DNA悬浮、溶解，将小管置50℃15min助溶； （4）用DEPC水将混合物稀释至175ml（总体积），充分混合，注意确保管内已无颗粒状； （5）加入20ml/l 1mol/L的Tris-HCl缓冲液（pH7.4）； （6）用2mol/L的HCl滴定至DNA溶解pH为7.0～7.5； （7）用无菌微孔滤膜过滤液体，去除颗粒。260nm测定溶液的OD值，方法是：取20μl DNA液混合于980μl水中，混匀后测定，吸收值乘以50即为DNA浓度（μg/ml）； （8）制备好的DNA液储于-20℃备用，用前取出冻融后煮沸
Southern blotting实验方法
Southern 杂交的实验方法 Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时，所以现在有一些其他的方法可以代替Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处，是目前其他方法所不能替代的，如限制性酶切片段的多态性(RFLP)的检测等。 一、基因组DNA的制备（前述） 二、基因组DNA的限制酶切 根据实验目的决定酶切DNA的量。一般Southern杂交每一个电泳通道需要10-30μg的DNA。购买的限制性内切酶都附有相对应的10倍浓度缓冲液，并可从该公司的产品目录上查到最佳消化温度。为保证消化完全，一般用2-4U的酶消化1μg 的DNA。消化的DNA浓度不宜太高，以0.5μg /μl 为好。由于内切酶是保存在50%甘油内的，而酶只有在甘油浓度<5%的条件下才能发挥正常作用，所以加入反应体系的酶体积不能超过1/10。 具体操作如下：在1.5ml离心管中依次加入 DNA（1μg /μl） 20 μg
10×酶切buffer 4.0 μl 限制性内切酶（10U/μl） 5.0 μl 加ddH2O 至 500 μl 在最适温度下消化1-3hr。消化结束时可取5μl电泳检测消化效果。如果消化效果不好，可以延长消化时间，但超过6hr已没有必要。或者放大反应体积，或者补充酶再消化。如仍不能奏效，可能的原因是DNA样品中有太多的杂质，或酶的活力下降。 消化后的DNA加入1/10 体积的0.5M EDTA，以终止消化。然后用等体积酚抽提、等体积氯仿抽提，2.5倍体积乙醇沉淀，少量TE溶解（参见DNA提取方法，但离心转速要提高到12000g，以防止小片段DNA的丢失）。 如果需要两种酶消化DNA，而两种酶的反应条件可以一致，则两种酶可同时进行消化；如果反应条件不一致，则先用需要低离子强度的酶消化，然后补加盐类等物质调高反应体系的离子强度，再加第二种酶进行消化。 三、基因组DNA消化产物的琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是目前分离核酸片段最常用的方法，制备简单，分离范围广（200bp-50kb），实验成本低。下表列举了不同浓度琼脂糖凝胶能分离的DNA片段范围。 表：不同浓度琼脂糖凝胶分离DNA片段的范围
TaqDNA聚合酶
TaqDNA聚合酶 科技名词定义 中文名称：TaqDNA聚合酶 英文名称：Taq DNA polymerase 定义：编号：EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可 在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延 伸引物，合成双链DNA。这个酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶 活性，缺少3′→5′的外切酶活性。 目录 Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是一种嗜热真细菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75～80℃时 每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸，70℃延伸率大于60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上) 或过低(22℃)都可影 响Taq DNA聚合酶的活性，该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成，但确有良好的热稳定性，在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃ 、97.5℃时，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min，40min 和5～6min后，仍可保持50%的活性，实验表明.PCR反应时变性温度为95℃～20sec，50个循环后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条件，也是PCR反应能迅速发展和广泛应用的原因.Taq DNA聚合酶还具有逆转录活性，其作用于类似逆转录酶.此活性温度一般为65～68℃，有Mn2+存在时，其逆转录活性更高. 催化活性
酵母双杂交protocol
3.1实验材料 3.1.1 菌株 酵母菌株AH109，带有四个报告基因，ADE2，HIS3，MELI和lacZ，在三个不同的GAL4上游激活序列和TATA box的控制下ADE2和HIS3提供了营养选择标记，可以减少假阳性克隆的机率：MELI编码α-半乳糖苷酶，当底物X-α-Gal存在时，阳性克隆就会变成蓝色；lacZ编码β-半乳糖苷酶，当底物为X- Gal存在时，阳性克隆就会变成蓝色。该菌株具体特点见图3-1，3-2。 图3-1 酵母菌株AH109的报告基因 图3-2 酵母菌株表现型 3.1.2 质粒载体 阳性对照质粒pGBKT7-53； 阴性对照质粒pGBKT7-Lam；
对照的AD质粒载体pGADT7-RecT均为clontech公司提供。 Herring testes carrier DNA（10mg/ml）购自invitrogen公司。 载体信息见表3-1。 表3-1 本实验所用酵母双杂交载体信息 3.1.2 培养基 ⑴YPDA培养基 Tryptone 20g/L Yeast extract 10g1L Adenine hemisulfute 30mg/L Agar 20g/L 定容至950ml，PH=5.8 116℃高压灭菌15min，冷却至55℃时加入50m1过滤灭菌的40%的葡萄糖。 ⑵营养缺陷培养基（1L） YNB（Yeast nitrogen base without amino acids） 6.7g/L Agar 20g/L 根据不同的营养选择性培养基加入如下的dropout Solution粉剂：
SD/-Leu-Trp（二缺）：在不含任何氨基酸的SD培养基中加入二缺粉剂0.64g/L。 SD/-His-Leu-Trp (三缺)：在不含任何氨基酸的SD培养基中加入三缺粉剂0.62g/L。 SD/-His-Leu-Trp-Ade（四缺）：在不含任何氨基酸的SD培养基中加入四缺 粉剂0.60/L 定容到950ml，高压灭菌后加入灭菌的40%葡萄糖50ml，倒平板，于4℃保存。 3.1.3 主要试剂 ⑴1×TE/LiAc 10×TE 1ml 10×LiAc 1ml ddH20 8 ml 合计10ml ⑵1×PEG/LiAc（现配现用） 50% PEG 4000(polyethylene glycol) 8ml 10×TE 1ml 10×LiAc 1ml 合计10ml ⑶Z buffer: Na2HPO4·7H2O 16.1g/L NaH2PO4·H2O 5.5g/L KCl 0.75g/L MgSO4·7H2O 0.246g/L ⑷X-gal stock solution：X-gal溶于DMF中，终浓度20mg/ml。 ⑸Z buffer/X-gal solution： Z buffer 100ml β－ME 0.27ml X-gal stock solution 1.67m1
甲基化
1。NaHSO3的pH必须严格调到5.0。我们实验室是用pH计测的，应该算是比较准的。pH对实验结果的影响比较大。 2。DNA变性要彻底。我在NaOH处理之前，用枪头对样品反复吹打，并用沸水煮2min，然后NaOH 42℃40min。一般来说，我是不会去避免DNA断裂的，私下以为一定程度的断裂反而有利于变性完全。很多文献在DNA变性处理这一步前也是先用酶切处理的。 3。bisulfite处理一步，先加hydroquinone 再加NaHSO3。为了避免反应过度造成假阳性以及DNA断裂，我是用50℃处理。试过14～16h都ok。 4。DNA乙醇沉淀一步我是-20℃过夜沉淀的，没有另外加助沉剂，用14000rpm收集沉淀。最后用TE溶解。 5。很多时候，MSP不成功是由于PCR失败。设计一对适合工作的MSP引物并不容易。我们实验室有时对一个基因要设计3、4对引物才能得到比较好的实验结果。所以验证自己的MSP是否成功，有一对肯定可以工
作的引物是最重要的。同时设置一个阴性对照，就是用根据未修饰序列设计的引物做PCR，一般情况下也可以扩出东西，起码说明回收的东西里面有可以进行PCR的DNA，以及可以看出bisulfite处理的效果。 1.修饰前DNA是否需要打断。我曾经问过国外一个实验室的老板，他说无须事先酶切，～2微克的DNA/50微升体系，修饰16小时是可以的。当然，理论上先酶切或是反复抽吸打断DNA似乎有利于修饰完全。 2.修饰前NaOH的处理其实37度15分钟就已经够了。文献报道这一步所用的温度和时间版本较多，但是37度15分钟似乎是底线，实际上也够了。有人高温再迅速冰却，理论上更好啦，因为目的只是解链。 3.pH的问题。跟战友讨论过，对苯二酚和醋酸铵无须调节pH了，亚硫酸氢钠还是要调节到5.0的。以前我用精密试纸，现在用电子pH计，事实上两者似乎差异较大。前者主观判断上可能有差异，后者就是标准液要小心。总之pH调节准确很关键。 4.反应时间。我现在用的55度16小时，修
细胞遗传学
细胞遗传学 一、名词解释 1.组成型异染色质：指除复制期外均处于聚缩状态的染色质。 兼性异染色质：在一些组织中不表现异固缩现象（想常染色质一样正常表达），而在其他组织中表现异固缩现象（完全不表达）；或者只在一定时期有功能的染色质--------巴氏小体。 2.染色体的侧环：由螺线管中特定区域与细胞核基质结合后收缩形成的环。 3.C带和R带：染色体复性处理后，用吉姆萨染料染色，染色体的不同部分就会出现深浅不同的带纹，把深色带纹区称为C带，把浅色带纹区称为R带。P43 4.单端单体：当某对染色体缺失但保留有其1条染色体臂的端着丝粒染色体时，称为单端单体。 双端二体：当某对染色体被它的1对长臂端着丝粒染色体和1条短臂端着丝粒染色体取代时，称为双端二体。 5.单体异附加系：在一个品种原有染色体组的基础上增加1条异源染色体，这个被增加的品种称为单体异附加系。 代换系：当一个品种的一对同源染色体为另外一个品种所代换，这个被代换的品种称为代换系（substitute line）。P169 6.同源联会：指来自来自同一物种的两条染色体在减数分裂偶线期发生联会配对的现象称为同源联会。 异源联会：指来自不同物种的两条染色体在减数分裂偶线期发生联会配对的现象称为异源联会。 7.遗传标记：指可追踪染色体、染色体某一节段、某个基因座在家系中传递的任何一种遗传特性。它具有两个基本特征，即可遗传性和可识别性，因此生物的任何有差异表型的基因突变型均可作为遗传标记。 分子标记：是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是 DNA 水平遗传多态性的直接的反映。 8.核型雄性不育：是一种细胞核内染色体基因决定的雄性不育型，表现为细胞核遗传。 质核互作雄性不育：是由细胞质和核共同控制的雄性不育类型，表现为核质互作遗传。 9.遗传图谱（P37)：根据连锁遗传测验的交换值，把各条染色体上的基因依顺
Southern 杂交
Southern 杂交 Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。(Q往圣科技3452125268提供12万种免费质粒)通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时，所以现在有一些其他的方法可以代替Southern杂交。但该技术也有它的独特之处，是目前其他方法所不能替代的，如限制性酶切片段的多态性(RFLP)的检测等。 一、基因组DNA的制备（前述）(Q往圣科技3452125268提供Science的CRISPR/cas9免费送)二、基因组DNA的限制酶切(Q往圣科技3452125268提供12万种 CRISPR/cas9免费送)根据实验目的决定酶切DNA的量。(Q往圣科技3452125268提供张峰Science的CRISPR/cas9免费送)一般Southern杂交每一个电泳通道需要10-30μg的DNA。购买的限制性内切酶都附有相对应的10倍浓度缓冲液，并可从该的产品目录上查到最佳消化温度。为保证消化完全，一般用2-4U的酶消化1μg 的DNA。消化的DNA 浓度不宜太高，以0.5μg /μl 为好。由于内切酶是保存在50%甘油内的，而酶只有在甘油浓度<5%的条件下才能发挥正常作用，所以加入反应体系的酶体积不能超过1/10。 具体操作如下：在1.5ml离心管中依次加入 DNA（1μg /μl）20 μg 10×酶切buffer 4.0 μl 限制性内切酶（10U/μl） 5.0 μl 加ddH2O 至500 μl 在最适温度下消化1-3hr。消化结束时可取5μl电泳检测消化效果。如果消化效果不好，可以延长消化时间，但超过6hr已没有必要。或者放大反应体积，或者补充酶再消化。如仍不能奏效，可能的原因是DNA样品中有太多的杂质，或酶的活力下降。 消化后的DNA加入1/10 体积的0.5M EDTA，以终止消化。然后用等体积酚抽提、等体积氯仿抽提，2.5倍体积乙醇沉淀，少量TE溶解（参见DNA提取方法，但离心转速要提高到12000g，以防止小片段DNA的丢失）。 如果需要两种酶消化DNA，而两种酶的反应条件可以一致，则两种酶可同时进行消化；如果反应条件不一致，则先用需要低离子强度的酶消化，然后补加盐类等物质调高反应体系的离子强度，再加第二种酶进行消化。
人类ADAM家族成员ADAM23a的克隆
第41卷第1期2002年2月 复旦学报(自然科学版) Journal of Fudan U niversity(N atural Science) Vo l.41N o.1 F eb.2002 文章编号:0427-7104(2002)01-0070-05 人类ADAM家族成员ADAM23a的克隆 张坚,王丰,沈蓉来,邓可京,乔守怡 (复旦大学遗传学研究所,上海生命科学研究中心联系实验室,上海20043) 摘要:应用与A DA M家族成员高度同源、来自人胎脑的EST(ex pressed sequence tag)为探针,从人22周胎脑cDNA文库中分离到3.0kb长的cDNA片段,除了C末端缺少91nt外,与ADAM23同源性达100%,编码的蛋 白未能形成明显的跨膜区,定名为A DA M23a.在检测中发现,该基因与ADAM23的C末端相同位置的氨基酸 序列中,分析其金属蛋白酶功能域(metallo proteinase domain),不含有结合Zn的活性位点,去整联蛋白功能域(disintegr in domain)与ADAM部分成员具有同源性.在人16种组织的N orther n blot检测,ADAM23a仅在心脏 和脑中表达.由于2种cDNA从不同发育时期的胎脑及脑中分离得到,有可能是在发育过程受到了调节,可能通 过去整联蛋白功能域与脑和心脏中的整联蛋白(integrin)相互作用. 关键词:ADAM;EST;基因克隆;跨膜区 中图分类号:Q785文献标识码:A ADAM(a disintergrin and metalloproteinase)是近年发现的一类细胞表面粘附分子,它与蛇毒金属蛋白酶SVMP(snake venom metalloproteinase)家族同源性很高,与细胞-细胞及细胞-基质的粘连融合有关,参与多种生理及病理过程[1~3].迄今为止,ADAM家族有33个成员,在哺乳动物、爪蟾、果蝇、线虫的各种组织中都有表达.但在单细胞真核生物、植物、细菌和酿酒酵母中尚未发现该家族成员的表达.ADAM家族成员具有多个功能域,分别是:前导区(pro-dom ain)、类金属蛋白酶功能域(metalloproteinase-like domain)、类整联蛋白功能域(disinteg rin-like domain)、富含半胱氨酸功能域(cysteine-rich domain)、类表皮生长因子功能域(epidermal growth factor-like domain)、跨膜区(transm embrane domain)和胞质尾区(cytoplasmic tail).已有部分成员被证明其类金属蛋白酶域具有水解活性,能降解专一的底物.果蝇ADAM成员Kuzbanian在神经发育中能激活Notch的受体[3,4],人ADAM/ADAM10及TNF A转化酶(TACE)通过水解作用产生可溶性的T NF A[5~7].类整联蛋白功能域推测作为整联蛋白(integ rin)的配体,小鼠ADAM成员fertilin B/ADAM2通过其类整联蛋白功能域与卵上的A6B1整联蛋白相互作用[8]. 我们从人胎脑cDNA文库中分离到ADAM23新形式ADAM23a,并对其功能域及在不同组织中的表达进行了分析. 1材料与方法 1.1探针制备 根据已发表的ADAM家族的序列,在人EST数据库中经同源比较,挑选到一个来源于胎脑与ADAM 家族成员同源性较高,长525nt的EST序列(登录号R52569).根据此序列设计PCR引物,在人22周胎脑cDNA文库(购自Clontech公司)中扩增,对目的片段经测序确认,以其为筛选同一cDNA文库的探针.用A-32PdATP标记探针(PCR方法).PCR反应条件是:先95e变性2min,然后93e30s,58e30s, X收稿日期:2001-05-22 基金项目:国家教委博士学科点专项科研基金资助项目(97024618);上海市科委重点科技资助项目(99JC14030) 作者简介:张坚(1975)),男,硕士研究生;通讯联系人邓可京副教授.
Southern杂交
Southern 杂交 （一）目的 通过分子杂交，检测重组DNA分子中插入的外源基因是否确是原供体中的某一基因片段。 （二）原理 Southern 印迹杂交是指将经凝胶电泳分离的DNA片段转移到合适的固相支持物上（通常是尼龙膜或硝酸纤维膜），再通过特异性的探针杂交来检测被转移的DNA的片段的一种技术。Southern 杂交的实验流程如下： 基因组DNA样品的限制性酶切-> 酶切样品的琼脂糖凝胶电泳-> DNA的变性、转膜与固定-> 杂交与杂交后清洗-> 杂交结果的检测 （三）材料 1.基因组DNA样品的限制性酶切： 1）样品：GFP蛋白基因 2）试剂：限制性内切酶；10x酶切缓冲液；0.5mol/L EDTA；Tris-饱和酚；氯仿/乙醇=24：1（体积比）；预冷无水乙醇和70%乙醇；TE缓冲液 3）仪器及器材：恒温水浴锅；电泳仪；水平电泳槽；微波炉；紫外透射仪 2.酶切样品的琼脂糖凝胶电泳： 1）样品：上一个实验的酶切产物 2）试剂：琼脂糖；1xTAE缓冲液；6xDNA加样缓冲液；EB溶液；DNA分子量标准（DNA Marker） 3）仪器及器材：电泳仪；水平电泳槽；微波炉；紫外透射仪；凝胶成像分析系统；微量移液器 3.DNA的变性、转膜与固定： 1）样品：电泳后的琼脂糖凝胶 2）试剂：水解液（0.25mol/L HCL）；变性液（1.5mol/L NaCl, 0.5mol/L NaOH, 0.2mol/L HCL）；中和液（1mol/L Tris-HCL pH=7.4, 1.5mol/L NaCl）；硝酸纤维膜（NC膜）或尼龙膜；碱性转移缓冲液（0.4mol/L NaOH, 1mol/L NaCl）；20xSSC（3mol/L NaCl, 0.3mol/L 柠檬酸三钠pH=7.0）；20xSSPE（3.6mol/L NaCl, 0.2mol/L NaH2PO4, 0.02mol/L EDTA pH=7.7）；50xDenhardt 试剂（5g聚蔗糖Ficoll 400, 5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白，加入无菌蒸馏水至500ml） 3）仪器及器材：印迹转膜装置（托盘、支持物、Whatman 3MM滤纸、纸巾、玻璃板、重物等），紫外交联仪 4.杂交与杂交后清洗： 1）样品：固定了DNA酶切样品的硝酸纤维膜 2）试剂：预杂交液（6xSSC, 5xDenhardt试剂, 0.5% m/V SDS, 1μg/ml polyA, 100μg/ml 鲑鱼精DNA, 50% V/V 甲酰胺） 3）仪器及器材：杂交管（瓶），杂交炉 5.杂交结果的检测：
鱼精蛋白
2011年10月12日，多地“救心药”鱼精蛋白紧缺的消息引起各方面关注。鱼精蛋白来源的紧缺、利润空间小导致生产厂家越来越少，现在只有上海医药旗下的上海第一生化药业有限公司生产。然而鱼精蛋白的需求一直较大，这种供需矛盾使得很多心脏手术无法进行。 鱼精蛋白是一种多聚阳离子肽，主要存在于各类动物成熟的精巢组织中，与DNA紧密结合在一起。其分子量小，通常在一万以下，大约为4070道尔顿，一般由30个左右的氨基酸组成，其中2/3以上都是精氨酸，等电点为10~12，可溶于水和稀酸，加热不凝固。按其氨基酸的组成，这些鱼精蛋白大致分为以下三类：（1）单鱼精蛋白（Monoprotamine）:碱性氨基酸只有精氨酸一种，这一类有鲱精蛋白、鲭鱼的鲭精蛋白，虹鳟鱼的精蛋白等；（2）双鱼精蛋白（Diprotamine）:碱性氨基酸含有精氨酸和组氨酸与赖氨酸的一种，这一类有鲤鱼的鲤精蛋白；（3）三精蛋白：此类鱼精蛋白含有全部3种碱性氨基酸，如鲟精蛋白。 使用美国国立生物技术信息中心（NCBI）的核心检索系统对蛋白质序列数据库进行鱼精蛋白序列检索，检索结果来源于鱼类。用软件对天然鱼精蛋白序列进行比对，得到其保守氨基酸残基序列。比对结果见图1. 由此看出，完全相同氨基酸残基序列为：-RRRR-SSSRP-RRRR-R-----RRRR---RRRR，即图中最后一个序列。通过多重序列完全比对得到鱼精蛋白的保守序列是：X1RRRRSSSRPX2RRRRX3X4RX5X6X7X8RRRRGGRRRR. 自1937年McClean报道了鱼精蛋白鱼油抑菌活性以来，Miller等于1942年，Negroni 和Fisher等于1944年研究发现鱼精蛋白具有阻止细菌生长的作用。之后鱼精蛋白受到越来越多的关注。鱼精蛋白不仅具有促使细胞发育繁殖的作用，而且一旦将其分离出来，就能有效抑制多种食品腐败菌的生长和繁殖，同时，它还具有降血压、促消化、抗菌消毒、抑制肿瘤生长、治疗糖尿病等多重作用。在医学领域里，鱼精蛋白也得到了广泛应用，它可延迟或阻止胰岛素释放，或作为肝素解毒剂等。鱼精蛋白作为一种食品防腐剂，因其具有很高的安全卫生性，日益受到食品加工业的青睐。 鱼精蛋白具有多方面的作用，可应用于较多领域中。本文主要从一下几个方面具体介绍鱼精蛋白的生理药理活性： 1.鱼精蛋白的抑菌作用。 鱼精蛋白具有广谱抑菌活性，能抑制枯草杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣形芽孢杆菌的生长，对革兰氏阳性菌、酵母、霉菌也具有明显抑制效果。鱼精蛋白还能抑制好气性细