实验四 高效液相色谱法测定水体中的苯酚及α-萘酚
水样中苯酚测定

反相色谱法测定环境水样中苯酚的含量
一.实验目的
1. 熟悉液相色谱仪的基本构造和操作方法
2. 学会利用内标法对物质进行色谱定量分析
二.仪器与试药
仪器:
高效液相色谱仪(日本岛津10AVP型)、溶剂过滤器、样品溶液过滤器、微量进样器
试药:甲苯(分析纯)、苯酚(分析纯)、甲醇
三、色谱条件
色谱柱:C18(250×4.6,5um)
流动相:甲醇-水=70:30 (v/v)
检测器及检测波长:紫外检测器254nm
流速:1.0ml/min
四、实验操作
1. 内标物溶液的配制:准确称取一定量的甲苯,加甲醇溶解后制成0.5 mg/mL的内标溶液。
2.对照品溶液的配制:准确称取苯酚对照品适量,加甲醇溶解后制成0.4 mg/mL的对照品溶液。
3. 调用或创建咖啡因测定方法并运行方法
4. 测定
⑴校正因子的测定:取400uL内标溶液和200uL对照品溶液混合。
待基线平稳后,吸取5μL 进样。
⑵样品测定:取400uL内标溶液和200uL样品溶液混合。
待基线平稳后,吸取5μL进样。
五、数据处理及计算
六、思考题
1.如何判断第一个色谱峰就是苯酚的峰?
2.简述三种定量方法的优缺点。
高效液相色谱法测定水中α-萘酚和β-萘酚

高效液相色谱法测定水中α-萘酚和β-萘酚张国祯;李丹丹;马可婧【摘要】建立了液液萃取—高效液相色谱法测定水样中α-萘酚和β-萘酚的分析方法.对流动相组成及流速、柱温、萃取剂种类、色谱柱类型等条件进行了优化.选用三氯甲烷为萃取剂,乙腈:水(0.1%乙酸)=50:50为流动相,流速1mL/min,柱温40℃,作为色谱条件.在1L空白水样中添加低浓度水平的萘酚标准溶液(加标量为0.2μg),测定平行样品7份,α-萘酚加标回收率为92%~117%,标准偏差为5.5%;β-萘酚加标回收率为96%~121%,标准偏差为5.1%.当萃取体积为1L,浓缩至1mL,进样量为10μL时,α-萘酚和β-萘酚的方法检出限分别为0.15μg/L和0.17μg/L.【期刊名称】《甘肃科技》【年(卷),期】2016(032)018【总页数】3页(P47-49)【关键词】液液萃取;高效液相色谱;α-萘酚;β-萘酚【作者】张国祯;李丹丹;马可婧【作者单位】甘肃省环境监测中心站,甘肃兰州730020;甘肃省环境监测中心站,甘肃兰州730020;甘肃省环境监测中心站,甘肃兰州730020【正文语种】中文【中图分类】X832萘酚属于多环芳烃类物质的一种,由于羟基位置的不同有两种同分异构体,分别为α-萘酚和β-萘酚,是医药、农药、染料、化妆品生产合成等行业的重要中间体,有毒,对皮肤、黏膜有强烈的刺激作用,易于经皮肤吸收。
在我国环境行业,《地表水环境质量标准》(GB3838-2002)、《污水综合排放标准中》(GB8978-1996)以及医药等行业排放标准中,水环境萘酚的各类水质限量标准和标准检验方法尚未建立,目前仍将其归类于挥发酚中。
2015年环保部组织征集水体中萘酚类化合物的测定方法。
因此,研究水中萘酚类化合物的的测定方法具有重要的意义。
目前,α-萘酚和β-萘酚的测定方法主要有紫外光谱法[1]、荧光光谱法[2-5]、高效液相色谱法[6-8]、电化学分析法和联用技术[9]。
苯酚含量的测定方法

苯酚含量的测定方法主要有以下两种:一、高效液相色谱法:1.样品制备:量取适量待测溶液,使用孔径为0.45μm的滤膜过滤,得到待测样品。
2.仪器检查:按洗脱的初始体积比将流动相A(如1.0‰TFA-乙腈溶液)和流动相B(如1.0‰TFA-水溶液)接入高效液相色谱仪的C色谱柱中平衡,检查仪器各系统,确保仪器正常。
3.检测前准备:设置高效液相色谱仪的色谱条件,包括压力警戒、检测波长、流速、进样量、柱温等参数。
随后继续按初始体积比将流动相A和流动相B 接入C色谱柱中,直至C色谱柱内的各物质含量达到动态平衡。
4.苯酚洗脱:将步骤1中得到的样品加入至已平衡的C色谱柱中,按流动相A和流动相B之间的体积比的不同分成多个洗脱阶段,依次对样品中的苯酚进行梯度洗脱,记录色谱图。
5.绘制线性回归方程:精密量取不同浓度的苯酚标准溶液作为标准对照液,按照上述洗脱阶段进行梯度洗脱,记录色谱图,测得标准对照液的吸收峰面积。
以标准对照液浓度为横坐标、以吸收峰面积为纵坐标制作的线性回归方程。
6.苯酚含量测定:将待测样品的苯酚的吸收峰面积代入线性回归方程中,计算得到样品中苯酚的含量。
二、氧化还原滴定法:1.原理:供试品加水溶解后,取适量置碘瓶中,加入溴滴定液和盐酸,摇匀后静置,再加入碘化钾试液和硫代硫酸钠滴定液进行滴定,根据滴定液的使用量计算苯酚的含量。
2.试样制备:制备溴滴定液、碘化钾试液、淀粉指示液和硫代硫酸钠滴定液等所需试剂。
3.操作步骤:按照上述原理中的步骤进行操作,记录滴定结果,并用空白试验校正。
根据滴定液的使用量计算苯酚的含量。
以上两种方法各有特点,可以根据实际需求和实验条件选择适合的方法进行苯酚含量的测定。
高效液相色谱法测定水样中的苯酚

实验三高效液相色谱法测定水样中的苯酚一、实验目的1.1熟悉HPLC仪器的各个部件及熟悉操作方法;1.2掌握应用高效液相色谱法对苯酚的定性、定量分析;1.3掌握水样中苯酚的测定。
二、实验原理HPLC原理高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9´107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。
特点1.高压:液相色谱法以液体为流动相(称为载液),液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。
一般可达150~350×105Pa。
2. 高速:流动相在柱内的流速较经典色谱快得多,一般可达1~10ml/min。
高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多,一般少于1h 。
3. 高效:近来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高。
4.高灵敏度:高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。
另外,用样量小,一般几个微升。
5.适应范围宽:气相色谱法与高效液相色谱法的比较:气相色谱法虽具有分离能力好,灵敏度高,分析速度快,操作方便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。
而高效液相色谱法,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的75% ~80% )原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。
据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70~80%。
高效液相色谱仪一般分为四个部分:高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。
高效液相色谱法测定酚类化合物

同淋 洗梯 度 对 出峰 时 间的影响 作 了探 讨 。
关键 词 :高效 液相 色谱 法 ;酚类化 合物 ;梯 度 ;出峰 时 间
中图分 类号 :X 3 8
l 引言
文献 标识 码 : A
文 章编 号 : 6 3—9 5 ( 0 2 4— 13— 2 17 6 5 2 1 )0 0 0 0
酚 类 化 合 物是 造 成 环 境 污 染 的重 要 工业 化 学 品 ,不但 有 毒 ,而 且 它 可 使 水 带 有 讨 厌 的气 味 和
颜色 ,因 而 水 中 酚 类 物 质 测 定 具 有 重 要 意 义 … 。
目前水质分析 中常用 4一 氨基安替 比林萃取光度法 测定 挥 发酚 ] ,而 用 高 效液 相 色 谱 测 对 苯 酚 、 间
进 样 量 :1 。检 测 器 :U 2 0 m 。 0 V一 8 n 2 3 标 准 溶液 配制 .
泵 、进样器 、色谱柱 、检测器和记录器组成 ,其整 体组成类似于气相色谱 , 但是针对其流动相为液体 的特点作 出很多调整。H L P C的输液泵要求输液量 恒定 平稳 ;进 样 系统 要求进 样 便利 切换 严 密 ;由于 液体 流 动相 粘度远 远 高 于气体 ,为了减 低柱 压 ,高
(0 8 %A+2 % B) 1 i ( 0 0 ,2 m n 3 %A+ 0 B) 5 n 7% ,2 mi
(0 3 %A+ 0 ) 7 %B ,流速 :10 m/ i。 .0 lm n
2 1 主要 仪器 和试 剂 .
梯度 淋 洗 4:开 始 ( 0 A +7 % B) 5 i 3% 0 ,2 m n (0 8 %A+2 % B) 6 i (0 O ,2 m n 3 %A+7 % B) 0 i 0 ,3 m n
高效液相色谱法测定酚类物质的探讨

[1] 周 晓 珍,肖 熳.高 效 液 相 色 谱 法 测 定 水 中 六 种酚 类 化 合 物 [J].南 昌 高 专 学 报,2005,1 (56):103-105.
[2] 刘桂明,邓义敏.水 中 苯 酚、五 氯 酚、2,4,6三氯酚 的 高 效 液 相 色 谱 法 [J].云 南 环 境 科 学 ,2005,4(19):59-61.
方法二:流动相为70% 乙 腈—1% (v/v)乙 酸 水 溶液;流速为1ml/min;柱温 箱 温 度 为 35℃;进 样 量 为 10μL,测 定 波 长 在 254nm。 2.2.2 定性标准溶液的配制
本项目旨 在 确 定 碎 煤 加 压 气 化 酚 氨 回 收 水 中 酚类的检验 方 法,因 此,本 实 验 选 择 了 样 品 中 可 能 存在的 20 中 酚 类 物 质,利 用 标 准 物 质 进 行 定 性 分析。
在反相色谱分 析 体 系 中,待 测 的 酚 类 物 质 在 反 向固定 相 和 流 动 相 之 间 进 行 一 定 比 例 的 分 配,此 时,可以通 过 改 变 流 动 相 的 种 类 以 及 组 成 比 例,或 者是流速,来改变或 者 控 制 待 测 物 质 在 色 谱 柱 上 的 保留时间,以达 到 待 测 物 质 有 效 分 离 的 目 的。 通 过 查询文献 发 [2] 现 多 数 采 用 甲 醇 或 者 乙 腈 作 为 流 动 相,而且在流 动 相 中 加 入 1% 的 冰 乙 酸 能 够 有 效 的 改善目 标 物 峰 形 并 且 降 低 峰 宽,获 得 更 好 的 分 离 度。本文 中 选 用 两 种 流 动 相,一 种 是 70% 甲 醇— 1%(v/v)乙酸水溶液,另 一 种 是 70% 乙 腈—1%(v/ v)乙 酸 水 溶 液 。 2.3.2.3 酚类化合物色谱分析结果
HPLC测定酚类化合物实验报告

实验题目:液相色谱测定酚类化合物实验报告环境工程刘鹏12333511.实验目的(1)了解仪器各部分的构造和功能及分析的原理(2)掌握样品、流动相的处理、仪器的维护等基本知识(3)学会简单样品的分析操作过程(4)掌握HPLC分析的定性、定量方法2.基本原理高效液相色谱仪以液体作为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术,在基本理论方面与气相色谱没有显著不同,它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。
与气相色谱相比,高效液相色谱对样品的适用性强,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,可以弥补气相色谱法的不足。
对于酚类化合物的测定,其基本原理是这样的:先用固相小柱吸附水中酚类化合物,然后用溶剂洗脱,经氮吹气浓缩至一定体积后,用反相高压液相色谱法分析。
在反相色谱柱上以甲醇/(水+乙酸)为流动相把经预处理的酚类化合物分离,用二极阵列检测器或紫外检测器,测定各种酚的峰高或峰面积,以外标法定量。
3.仪器与试剂3.1仪器:高效液相色谱仪:可编程紫外检测器微量注射器:50μL、100μL色谱柱:C18或C8柱化学工作站尖底浓缩瓶:10ml 具刻度富集柱3.2试剂:流动相:甲醇/高纯水(需Φ0.22μm滤膜过滤)标准物:六种酚类混合物洗脱液:正己烷、四氢呋喃(需重蒸)硫酸冰醋酸无水亚硫酸钠4.所用仪器的主要组件(1) 高压输液泵♥主要部件之一,压力:150×105~350×105 Pa。
♥为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm),液体的流动相高速通过时,将产生很高的压力,因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。
♥应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。
(2) 梯度淋洗装置外梯度(高压梯度):用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。
内梯度(低压梯度):一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质

高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质一、实验目的1.掌握高效液相色谱法分离检测有机化合物的原理及操作步骤;2.熟悉水中分离化合物的分离检测方法。
二、实验原理酚类化合物是指芳香烃中苯环上的氢原子被羟基取代所生成的化合物,根据其分子所含的羟基数目可分为一元酚和多元酚。
酚类化合物具有强烈的杀菌作用。
酚是一种中等强度的化学毒物。
低浓度时使细胞变性,高浓度时使蛋白质凝固。
酚类化合物可经皮肤粘膜、呼吸道及消化道进入体内。
低浓度可引起蓄积性慢性中毒,高浓度可引起急性中毒以致昏迷死亡。
采用高效液相色谱法测定酚类化合物可以保持原化合物的组成不变,直接测定,对各种不同取代基的酚类化合物可以同时进行分离和分析,此法具有重现性好,选择性好,灵敏度高,操作简便的优点。
高效液相色谱是以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
三、仪器条件1、仪器:高效液相色谱仪、高压泵、紫外光度检测器、六通进样阀、色谱工作站2、试剂:苯酚、甲酚、间苯二酚为分析纯;甲醇为色谱纯;纯水为重蒸水.标准溶液的配制:分别配制苯酚、甲酚、间苯二酚浓度为250 mg/L,甲醇溶液10.0 mg/L。
3、实验条件:色谱柱:C18 柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm) ,柱温:28 ℃流动相:甲醇:水= 45:55,流量:1.0 ml·min-1紫外分光检测器:测定波长233、274 nm进样量:20μl四、实验步骤1. 将配制好的流动相于超声波清洗器上脱气15 min 。
2. 根据实验条件,将仪器按照仪器的操作步骤调节至进样状态,待仪器液路和电路系统达到平衡,基线平直时,即可进样。
3. 吸取20μl 标准溶液进样,记录色谱图,重复进样。
4. 检测废水的酚类物质的含量。
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高效液相色谱法测定水体中的苯酚和α-萘酚
一、实验目的
1、了解色谱法的分离原理,初步学会使用高效液相色谱仪;
2、利用高效液相色谱仪分离测定水体中的苯酚及α-萘酚。
二、实验原理
1、色谱法的分离原理
溶于流动相中的各待测组分经过色谱柱固定相时,由于各组分与固定相发生作用(吸附、分配、离子吸收、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出,达到分离的目的,又称色层法、层析法。
2、高效液相色谱仪使用原理
高效液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成四个系统即高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
正是根据物质的定性与定量关系,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。
3、苯酚及α-萘酚的分离原理及标准溶液准备
对于一些组分比较简单的已知范围的混合物,或无已知物的情况下,可以利用保留值定性。
保留值的大小取决于分配系数之比,即与组分的性质、固定液的性质及柱温有关,与固定液的用量、柱长、流速及填充情况无关。
在一定操作条件下,用对照品配成不同浓度的对照液,定量进样,用峰面积或峰高对对照品的量(或浓度)做校正曲线,求回归方程,然后在相同条件下分析试样,计算含量,这种方法称为校正曲线法。
通常截距近似为零,若截距较大,说明存在一定的系统误差。
本实验,苯酚的波长为270nm,α-萘酚的波长为295nm。
使得两种物质
的吸收峰达最大值,最终选定在254nm条件下。
分别配置单样和混合液浓度为100mg/L、80mg/L、60mg/L、40 mg/L、20mg/L标准溶液,分别进样,记录保留时间和出峰面积,用于定性分析。
绘制标准曲线,用于定量分析,计算出样品浓度。
三、实验仪器和药品
高效液相色谱仪;流动相过滤器;超声波清洗器;分析天平;
100 mL容量瓶3个、250 mL容量瓶、200 mL量筒、滴管、100 μL-1000 μL 移液枪、20 μL-200 μL移液枪;
苯酚、α-萘酚、乙腈、蒸馏水。
四、实验步骤
1、开机前准备工作
查资料,确定流动相的比例,一般选用甲醇、水、乙腈按比例配制之后根据需要选择不同的滤膜,对流动相进行抽滤除杂质;再进行超声脱气泡10~20min;配制样品和标准溶液,必要时也用0.45μm滤膜过滤。
2、开机
(1)开启计算机,运行Bootp Serve程序。
(2)依次开启仪器各模块电源。
(3)待各模块自检完成后,设定参数。
菜单栏单击control→monitor instrument,单击Pump图标,出现参数设定菜单,设定Flow 1.0 mL/min,单击Pump off变为Pump on;单击Light图标后,单击Light off 变为Light on;关闭菜单栏。
3、在线检测
(1)在工作界面,选择通道,填写实验信息,在方法菜单栏上点击采样控制,设置采样时间、文件保存路径、保存方式、文件名。
(2)在方法菜单栏点击积分,选择积分参量、积分方法、样品重量、积分最小面积,时间参数等相关参数后点击“采用”按钮。
(3)在方法菜单栏点击谱图显示,设置时间显示范围、电压表示范围、谱图显示颜色、数据显示内容,点击“采用”按钮。
(4)在方法菜单栏点击仪器信息,输入相关仪器参数。
(5)在通道菜单栏点击数据采集,观察流动相基线是否平稳待,基线平稳,在检测器通过“zero”键调零。
标样谱图:用进样针抽取相应量标品,把手动进样器扳钮按逆时针方向旋至“load”处,将进样针插入进样孔,注入标液,注完将进样器扳钮按顺时针方向旋至“inject”处,同时点击外带按钮或数据采集菜单栏“采集数据”按钮。
数据采集完毕,自动积分,文件存于相应地址。
样品谱图:在方法菜单栏点击组分表,在对话框点击谱图按钮,调入标样谱图,通过鼠标拖动圈住对应峰,设定相关参数,点击采用按钮,用进样针抽取相应量样品,进样方式同标样。
点击采集按钮,采集时间结束,文件存于设定地址。
4、分析色谱图
在住界面点击Reprogress进入界面后双击右侧图标后,打开文件,点击所保存的文件名既看到图谱。
点击▓(analysist)显示保留时间和峰面积,记录数据做标准曲线。
计算标准线性方程;待测样品进样后,记录相同保留时间下的物质峰面积,代入方程计算含量。
5、关机
试验结束后用纯甲醇将色谱柱冲洗干净,一般用纯甲醇冲洗1~3h,待记录仪上无杂质峰后关机,关闭稳压电源。
五、实验结果
浓度(mg/L)苯酚保留时间
(min)
苯酚峰面积
(mv)
α萘酚保留时
间(min)
α萘酚峰面积
(mv)
5 5.870 10885 17.817 11832 10 5.885 20712 17.843 22597 20 5.838 3952
6 17.810 42753 40 6.393 85953 19.472 84744 60 6.395 132342 19.53 111818 80 6.37
7 201670 19.12
8 211266 100 6.263 218933 19.343 249168 样品
绘制苯酚、α萘酚标准曲线。
六、注意事项
1. 流动相的制备要与装置相适应,必须经过过滤、脱气并恢复到室温后使用,以防气泡的产生;
2. 样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤,以减少微粒对进样阀的磨损;
3. 转动阀芯时不能太慢,更不能停留在中间位置,否则流动相受阻,使泵内压力剧增,甚至超过泵的最大压力,再转到进样位时,过高的压力将使柱头损坏;
4. 为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中,每次分析结束后应冲洗进样阀。
通常可用水冲洗,或先用能溶解样品的溶剂冲洗,再用水冲洗;
5. 输液泵的压力必需稳定,才能取得良好的分析结果。
变动的幅度大致在0.5MPa以内范围为正常;
6. 在一段时间内不进行分析时,建议清洗柱子,并从装置上卸下,种类不同的柱子,清洗的方法也不同,必须按柱的使用说明书确认。
存放时,柱内应充满溶剂(甲醇或乙腈),两端要封死。
柱子要轻拿轻放。
七、附高效液相色谱法分析谱图
思考题
1、采用色谱法原理的分析仪器有哪些?
2、高效液相色谱法还可以对环境中的哪些污染物质进行分析检测?。