实验一 DNA提取
植物dna提取实验报告(一)
植物dna提取实验报告(一)植物DNA提取实验报告简介•DNA提取是分子生物学中常用的实验技术之一•本实验的目的是从植物组织中提取纯净的DNA•DNA提取技术的应用广泛，可用于基因测序、基因分型等研究实验步骤1.样品准备–选择新鲜的植物叶片或根部组织作为样品–将样品冷冻在液氮中，研磨成粉末状2.细胞破碎–加入适量的提取缓冲液，研磨样品使细胞破碎–通过高速离心将碎细胞沉淀3.蛋白质去除–加入蛋白酶，去除蛋白质，并通过离心去除残留的碎细胞和蛋白质4.DNA沉淀–加入盐和酒精，使DNA从溶液中沉淀–通过离心收集DNA沉淀物5.DNA纯化–使用乙酸溶解DNA沉淀物–通过离心去除残留的盐和溶液6.DNA浓缩–加入适量的去离子水，使DNA溶解并浓缩结果分析•提取得到的DNA质量和纯度可通过分光光度计测定•纯净的DNA可用于后续实验，如PCR扩增、酶切等实验注意事项•使用无菌操作，避免DNA样品被污染•严格控制实验中的时间和温度，以避免DNA降解•质量好的试剂和实验器材对提取纯净的DNA至关重要结论•通过本实验，成功从植物组织中提取了纯净的DNA•DNA提取技术对于分子生物学研究具有重要意义•进一步研究和应用可拓展DNA提取技术的潜力注意：本实验报告为虚构文章，仅供参考实验结果与讨论本实验成功从植物组织中提取到了纯净的DNA。
经过分光光度计测定，确认提取得到的DNA具有良好的质量和纯度，可以用于后续的实验。
在实验过程中，我们注意到了一些现象和问题，需要进行进一步的讨论。
首先，样品的选择对DNA提取的结果至关重要。
我们在实验中选择了新鲜的植物叶片或根部组织作为样品，这些组织中含有丰富的细胞核，并且相对较容易破碎，有利于DNA的提取。
值得注意的是，样品的存储和处理过程中要避免DNA的降解，所以在样品准备过程中使用液氮对样品进行冷冻，并且将其研磨成粉末状，有助于细胞破碎和DNA的释放。
其次，细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一。
dna提取及测定实验报告
dna提取及测定实验报告DNA 提取及测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取 DNA 的方法，并对提取的 DNA 进行浓度和纯度的测定，以了解样本中 DNA 的质量和数量。
二、实验原理DNA 是遗传信息的携带者，存在于细胞核和线粒体等细胞器中。
在提取 DNA 的过程中，需要破碎细胞，使 DNA 释放出来，然后通过一系列的化学和物理方法去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的DNA 。
DNA 在 260nm 处有特征性的吸收峰，其吸收值与 DNA 的浓度成正比。
同时，通过测定 260nm 和 280nm 处的吸光度比值（A260/A280），可以评估 DNA 的纯度。
纯 DNA 的 A260/A280 比值约为 18。
三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜的动物肝脏组织裂解液（包含 TrisHCl、EDTA、NaCl 等）蛋白酶 K无水乙醇氯仿：异戊醇（24:1）RNA 酶TE 缓冲液（TrisHCl、EDTA）2、实验仪器高速冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计微量移液器离心管玻璃棒四、实验步骤1、样本处理称取约 05g 新鲜的动物肝脏组织，用剪刀剪碎后放入匀浆器中，加入适量的裂解液，充分匀浆。
2、消化蛋白质将匀浆液转移至离心管中，加入蛋白酶 K 至终浓度为100μg/ml，在 55℃水浴锅中孵育 1-2 小时，期间不时轻轻搅拌，以充分消化蛋白质。
3、去除蛋白质和 RNA加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒离心管充分混匀，然后在 4℃下以 12000rpm 离心 15 分钟。
吸取上清液至新的离心管中，加入 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
4、洗涤 DNA将沉淀用 70%的乙醇洗涤 2 次，每次在 4℃下以 12000rpm 离心 5 分钟，去除上清液。
5、溶解 DNA待乙醇挥发干净后，加入适量的 TE 缓冲液溶解 DNA ，置于 4℃冰箱保存备用。
实验一 基因组DNA的提取
六、操作步骤
1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液 离心管中加入500μl提取缓冲液, 1. 在1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液, 60℃水浴预热 水浴预热。 60℃水浴预热。 植物组织0.1g, 剪碎, 2. 植物组织0.1g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟 时间长,DNA产量高), 水浴保温30 分钟( ,DNA产量高 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不 时摇动。 时摇动。 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 500μl氯仿 3. 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混 需带手套, 防止损伤皮肤) 室温下静置5分钟, 匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀) 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
实验一、基因组DNA DNA的提取 实验一、基因组DNA的提取
一、实验目的： 实验目的： 1.了解真核生物基因组DNA提取 的一般原理。 2. 2.掌握DN理，是将分散好 的一般原理， 提取 的一般原理 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶 和蛋白酶K 的真核生物组织细胞在含 和蛋白酶 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚： 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的DNA 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。
三、材料
植物组织
四、设备
移液器，冷冻高速离心机， 移液器，冷冻高速离心机，台式高速 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 管。
dna提取实验报告
dna提取实验报告DNA提取实验报告。
实验目的，通过本实验，掌握DNA提取的基本原理和操作技能，了解DNA 提取在生物学研究中的重要性。
实验材料与方法：1. 实验材料，酚-氯仿（25:24）、异丙醇、乙醇、盐酸、乙酸、蛋白酶K、磷酸盐缓冲液、蒸馏水等。
2. 实验仪器，离心机、振荡器、恒温水浴、显微镜等。
3. 实验步骤：a. 细胞破碎，取适量细胞悬液，加入盐酸和蛋白酶K，振荡破碎。
b. DNA沉淀，加入酚-氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀层。
c. DNA沉淀洗涤，加入异丙醇，离心沉淀，去除上清液。
d. DNA溶解，加入磷酸盐缓冲液，用蒸馏水稀释，得到DNA提取液。
实验结果与分析：1. 实验现象，在DNA提取过程中，观察到细胞破碎后的混浊液经过酚-氯仿提取后，上清液呈现清澈的状态，沉淀层为白色颗粒状物质。
2. 实验分析，DNA提取液中含有DNA，经过酚-氯仿提取和异丙醇沉淀，成功获得了DNA提取物。
实验结论：通过本次实验，成功提取到了DNA，并初步了解了DNA提取的原理和操作步骤。
DNA提取是生物学研究中的重要基础工作，对于后续的分子生物学实验具有重要意义。
实验注意事项：1. 实验过程中应注意操作规范，避免污染和损失。
2. 实验中使用的试剂和仪器应符合实验要求，避免影响实验结果。
3. 实验后应及时清洗实验台和仪器，保持实验环境整洁。
总结：DNA提取实验是生物学实验中的基础操作，掌握好DNA提取的原理和技能对于后续实验具有重要意义。
通过本次实验，我对DNA提取有了更深入的了解，也提高了实验操作的技能。
希望通过不断实验和学习，能够更好地运用DNA提取技术，为生物学研究做出更大的贡献。
（以上内容为虚构内容，仅供参考）。
试验一植物基因组DNA提取
实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。
原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。
然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB 使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。
经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。
一、材料植物的根、茎、叶。
二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。
三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。
2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。
四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。
2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。
3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90min以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀，-20℃度放置20min，4℃离心5000g×5min，去上清。
4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min，待沉淀充分溶解，加入等体积氯仿异戊醇充分混匀，4℃离心6000g×5min，去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇，轻轻混匀-20℃放置20min。
实验1植物基因组DNA的提取
实验1 转基因植物PCR 检测一、植物DNA 的提取技术(CTAB 法)一、实验目的1.掌握用CTAB 法提取植物总DNA 的方法和基本原理。
2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA 抽提方法。
二、原理CTAB 法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide ，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA 的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB ，CTAB 是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA 、RNA)得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA 、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物总DNA 溶液。
三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。
通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d 内仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA 的提取工作。
那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。
]四、试剂4.1 CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na 2，1.4mol/L NaCl （如表1），2% CTAB ，使用前加入0.1%（V/V ）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB 提取缓冲液配制4.2 TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA （ pH8.0）。
提取和分析DNA实验报告
提取和分析DNA实验报告DNA提取是生物学实验中的重要步骤，有助于从各种生物组织中分离出DNA并进行后续分析。
本实验旨在提取DNA样本，并通过凝胶电泳等方法对提取得到的DNA进行分析，以验证提取的DNA质量和纯度。
1. 实验材料与仪器实验所需材料包括DNA提取试剂盒、离心管、显微管、琼脂糖凝胶、电泳槽等。
实验仪器包括显微镜、电泳仪等。
2. 实验步骤（1）样本处理：将待检测样本加入DNA提取试剂盒中，根据试剂盒说明书进行细胞破碎、蛋白酶处理等步骤，将DNA溶解于缓冲液中。
（2）DNA沉淀与收集：通过离心加速DNA沉淀的过程，最终在离心管底部形成DNA沉淀。
（3）洗涤与溶解：分离DNA沉淀后，进行多次洗涤，并最终将DNA溶解于适量缓冲液中。
（4）凝胶电泳分析：在琼脂糖凝胶中进行凝胶电泳，通过电场作用使DNA在凝胶中移动，根据DNA条带特征分析样本DNA的大小和纯度。
3. 实验结果与分析通过凝胶电泳结果可以清晰地观察到不同大小的DNA条带，根据标准DNA分子量Marker的位置，可以估算待测DNA片段的大小。
如果实验操作正确，提取得到的DNA应具有良好的纯度和完整性，且无附加杂质。
若实验存在操作失误或污染等问题，则可能导致DNA提取不完整或DNA受损，影响到后续结果的准确性。
4. 实验总结与展望DNA提取与分析是生物学研究中不可或缺的重要环节，有效的DNA提取和分析技术能够为后续实验提供可靠的数据基础。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验操作技巧，提高DNA提取的效率和准确性，以应对更复杂的研究需求。
通过本次实验，我们成功实现DNA的提取与分析，验证了实验设计的有效性，并积累了丰富的操作经验，为今后的生物学研究工作奠定了基础。
DNA提取实验的重要性在于为科研和临床诊断提供了坚实的理论支持和实验数据，为生命科学领域的发展和进步发挥着重要作用。
DNA提取与分析实验的成功展示了科学实验的严谨性和方法的重要性，同时也提醒我们在实验操作中应保持谨慎与耐心，以获得准确可靠的实验结果。
实验一细菌基因组DNA的提取
细胞破碎 机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法； 化学试剂法：用SDS处理细胞； 酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。 DNA提取 SDS（十二烷基硫酸钠 ）法 ：SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与 蛋白质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏这种价键。 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵 ）法 ：CTAB是一种阳离子去垢剂，它可 以溶解膜与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使蛋白质 变性，使DNA与蛋白质分离。 DNA纯化（去杂质） 蛋白质： 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1） 抽提。 RNA ：常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子的RNA。 酚类物质： 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料。 多糖： 提取液中加1％PVP。
三、操作步骤
1、细菌 37℃ 过夜培养，取1ml培养物 12000rpm 室温离心 1min。
2、沉淀物加入180ul TE缓冲液，充分重悬细菌；再加入20ul 50mg/ml溶菌酶，混匀后于 30℃温育10min。 3、12000rpm 离心 5min, 弃上清后加入200 ul Buffer BTL，漩涡震荡悬浮细胞。 4、加入25ul 蛋白酶K溶液，振荡器混匀，于55℃温育30min，每隔10min 漩涡震荡一次。 5、加入220ul Buffer BDL，颠倒混匀，于65℃温育10min。 6、加入220ul 无水乙醇，以最大速度漩涡震荡20s。 7、转移样品至DNA 纯化柱中，纯化柱下端安装2ml收集管,12000rpm离心1min使DNA结 合在纯化柱上，弃去收集管。 8、将DNA纯化柱安装到新的2ml收集管中，加入500ul Buffer HB，12000rpm离心1min， 弃去滤液。
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实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
2．SDS 法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS）使DNA 与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
一般生物体的基因组DNA 为107~109bp，在基因克隆工作中，通常要求制备的大分子DNA 的分子量为克隆片段长度的4 倍以上，否则会由于制备过程中随机断裂的末端多为平末端，导致酶切后有效末端太少，可用于克隆的比例太低，严重影响克隆工作。
因此有效制备大分子DNA 的方法必须考虑两个原则：（1）尽量去除蛋白质、RNA、次生代谢物质（如多酚、类黄酮等）、多糖等杂质，并防止和抑制内源DNase 对DNA 的降解。
（2）尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏。
几乎所有的DNase 都需要Mg2+或Mn2+为辅因子，故实现（1）尽量去除蛋白质的要求，需加入一定浓度的螯合剂，如EDTA、柠檬酸，而且整个提取过程应在较低温度下进行（一般利用液氮或冰浴）。
为实现（2）需要在DNA 处于溶解状态时，尽量减弱溶液的涡旋，而且动作要轻柔，在进行DNA 溶液转移时用大口（或剪口）吸管。
提取的DNA 是否为纯净、双链、高分子的化合物，一般要通过紫外吸收、化学测定、“熔点”（melting temperature, Tm）测定、电镜观察及电泳分离等方法鉴定。
本实验采用CTAB 法提取DNA 并通过紫外吸收法鉴定。
3材料和试剂：3.1长春花叶片3.2 试剂（1）CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na2，1.4mol/LNaCl（如表1），2% CTAB，使用前加入0.1%（V/V）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB提取缓冲液配制用HCl 调pH 值。
（2）TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA（pH8.0）。
（3）氯仿/异戊醇：将氯仿和异戊醇按体积24:1的比例混匀，置棕色瓶中，4℃保存。
4 仪器设备离心机、3离心管、紫外分光光度计、微量移液器、吸头、吸水纸、水浴锅、冰箱、电子天平、高压灭菌锅、一次性手套、电泳仪等。
5 方法与步骤：5.1 在提取过程中用到的吸头，提取缓冲液等先高压灭菌（121℃，20min），取出后待用；5.2 取大约指甲盖大小的植物叶片，放入1.5ml的EP管中, 加入液氮，用钢珠研磨成粉末状，再加入600μL的CTAB提取缓冲液，；5.3 65℃水浴锅中水浴40min，加入等体积的氯仿：异戊醇(24:1)，轻轻混匀，颠倒几次，乳化1min。
4℃，11,000rpm离心10min；5.4 吸上清到新离心管中（约400μl），加入等体积预冷异丙醇，混匀，-20℃放置20min沉淀DNA；5.5 5000 rpm常温离心15min，倒掉上清液；5.6 用75%乙醇（900μl）洗沉淀，11,000rpm离心2min，倒掉乙醇，再用乙醇同样处理一次；5.7 置于干燥仪干燥10min，将水分蒸干；5.8 加入50μL去离子水，融解DNA，同时加入RNA酶(按每50μL DNA加入1μL RNase)，37℃30min；5.9 利用分光光度计检测OD260,同时进行1％凝胶电泳检测；5.10 琼脂糖电泳检测DNA：制作1%的琼脂糖凝胶，吸取提取的DNA溶液5μL 电泳检测；5.11 -20℃保存DNA备用；5.12 提取的DNA的浓度检测：取少量待测DNA样品，用蒸馏水稀释1,000倍；用蒸馏水做空白，分别在260nm、280nm测DNA样品的吸光值。
【注意事项】1. 叶片磨得越细越好。
2. 注意移液器的正确使用。
3. 由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA 降解。
6. 思考题1．制备的DNA 在什么溶液中较稳定?2．为了保证植物DNA 的完整性，在吸取样品、抽提过程中应注意什么？7 实验结果：结果计算式中OD260nm 为260nm 处的光密度；L 为比色杯光径（cm）；0.020 为1μg/mL DNA 钠盐的光密度。
DNA 的紫外吸收高峰为260nm，吸收低峰为230nm，而蛋白质的紫外吸收高峰为280nm。
上述DNA 溶液适当稀释后，在751 分光光度计上测定其OD260nm、OD230nm 和OD280nm。
如OD260nm/ OD230nm≥2OD260nm/ OD280nm≥1.8，表示RNA 已经除净，蛋白含量不超过0.3％。
8 实验分析：传统DNA提取方法CTAB 法、SDS 法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA; 然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70 %乙醇漂洗沉淀,除去分离过程中残留的有机溶剂和盐离子,以免影响核酸溶解和抑制后续步骤的酶促反应,最后用TE 溶解DNA 备用。
CTAB 是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐( > 0. 7 mol/ L) 浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0. 1～0. 5 mol/ L NaCl) 下CTAB - 核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
经离心弃上清后,CTAB - 核酸复合物再用70 %酒精浸泡可洗脱掉CTAB 。
SDS 是一种阴离子去垢剂,在高温(55～65 ℃) 条件下能裂解细胞,使染色体离析、蛋白变性,同时SDS 与蛋白质和多糖结合成复合物,释放出核酸;提高盐(KAc 或NH4Ac) 浓度并降低温度(冰浴) ,使 SDS - 蛋白质复合物转变为溶解度更小的钾盐形式,使蛋白质及多糖杂质沉淀更加完全,离心后除去沉淀;上清液中的 DNA 用酚/ 氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
SDS 法操作简单,温和,也可提取到高分子量的DNA ,但所得到的产物含糖类杂质较多。
基因组DNA 经典的提取方法由于无需昂贵仪器和药品,提取的DNA 纯度能够满足一般分子生物学的需要,一直作为DNA 提取的常规方法。
但这种方法操作步骤复杂,耗时长,易交叉污染,残留在DNA 溶液中有机物质对DNA 聚合酶有抑制作用。
另外,酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染,有损操作者健康。
DNA提取新方法近年来出现了以螯合树脂、特异性 DNA 吸附膜、离子交换纯化柱及磁珠或玻璃粉吸附等基础 DNA 提取新方法。
这些方法主要应用于提取病毒、微生物、人和动物细胞、包埋组织样品、古生物标本及土壤环境样品 DNA 。
已有多篇利用纯化柱和玻璃粉纯化植物基因组 DNA 的报道。
马小军等将CTAB 液提取和氯仿抽提两步的上清液直接通过Wizard 纯化系统纯化得到的DNA ,RAPD 扩增效果良好,产率达2 250μg/ g 。
张博等用硅珠(SiO2) 颗粒吸附DNA 纯化方法,从不同树木叶片中均得到了高质量的 DNA 样品。
黄椰林等对常规CTAB 法提取的DNA 用玻璃粉悬浮液纯化,所获DN 的APCR 产物能直接测序,比较适用于富含黏多糖、单宁、多酚和萜类化合物等次生代谢物的植物样品和长期保存的标本材料。
袁长春等也用玻璃粉吸附法从富含酚类的茶类植物中提取纯净的总DNA。
目前国内外开发了多种商品化的DNA 提取纯化试剂盒,其分离原理有的利用核酸的分子量差异,有的利用特异性膜与DNA 结合达到分离、回收的目的,如离子交换柱、磁珠等。
这些试剂盒针对不同的材料来源设计了不同的提取方法,操作简单、高效, DNA 质量较高,但价格昂贵,提取量少。
著名的国外的试剂盒生产厂家有Sigma2Aldrich、Promega、Invitrogen、 TaKaRa 、Whatman 等,它们针对不同来源的材料如微生物、动物体液、血液和组织、植物、加工产品、转基因产品等开发出一系列的试剂盒。
国内的生物公司发展迅速,如上海生工、北京天为、北京博奥等也开发了系列试剂盒,质量与国外厂家相当,价格较低。
除此之外,由于核酸提取纯化试剂盒制作门槛低,还有大量的生物公司提供试剂盒产品,使用者一定要慎重选择。
DNA 试剂盒经过了几十年的发展,已经不再局限于单纯的提取纯化,有些厂家推出了DNA 提取—扩增 PCR 试剂盒,将DNA 提取和PCR 扩增结合起来,极大的提高了工作效率,如Sigma2Aldrich 公司的Sigma’s Extract2N2Amp Plant PCR kit 等。