dna粗提取的实验步骤
实验05DNA的粗提取与鉴定(原卷版)
专题05DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1．提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。
2．鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
二、方法步骤1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液3．DNA方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干4.DNA取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。
将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
三、操作提示1．以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
四、关键点拨1．利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接使其吸水涨破。
2．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
生物趣味实验——DNA的粗提取
（二）从唾液中提取自己的DNA 1、取自己的唾液，置于烧杯中，加入几滴洗洁精； 2、倒入一些橙汁，同时往烧杯里撒入一些盐，摇晃 均匀； 3、向滤液中缓缓加入预冷的酒精，并观察现象。
实验步骤
（一）从水果中提取DNA 1、往烧杯中加入20ML清水和3ML洗洁精，少许食盐 （3g左右），将混合液搅拌均匀备用； 2、将香蕉剥皮，放置于封口塑料袋中，倒入配制的混合 液，用手轻轻挤压破坏细胞，使DNA释放出来； 3、倒出香蕉并过滤，取出滤液； 4、向滤液中缓缓加入预冷的酒精，并观察现象。
DNA的粗提取
实验原理
1、水果的细胞里含有DNA，香蕉更易碾碎、不必 削皮，使实验更加简化； 2、食盐里的钠离子和氯离子可以中和DNA上的电 荷，使DNA变形聚集，更易沉淀出来； 3、洗洁精里有表面活性剂，可以破坏细胞膜和核 膜，使DNA释放出来； 4、橙汁里含有蛋白酶，可把和DNA紧密结合的蛋 白质分解，使得到的DNA更纯； 5、DNA可以溶于水但不溶于酒精，在高浓度酒精 下相互吸附形成沉淀。
DNA的粗提取与鉴定(鸡血)
DNA 的粗提取与鉴定一、实验目的：初步掌握DNA 的粗提取和鉴定的方法。
二、实验原理：1．DNA 的溶解性：2．DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA 没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA 在80℃以上才会变性。
洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA 没有影响。
3．DNA 的鉴定：（1）DNA+二苯胺→蓝色（沸水浴）（2）DNA+甲基绿→ 绿色三、实验材料：鸡血柠檬酸钠100mL+新鲜鸡血100mL ，离心取沉淀物 鸡血细胞液10mL+蒸馏水50mL （1：5） 2层纱布过滤，取滤液滤液+2mol/L 的NaCl 溶液40mL ，同一方向，缓慢，玻璃棒不能直插底部；2层纱布过滤，取滤液 约470mL 蒸馏水，直至丝状物不再析出圈，同一方向，缓慢，玻璃棒不能直插底部层纱布过滤，取黏稠物 2mol/L 的NaCl 溶液20mL ，过滤，2层纱布，取滤液 ，同一方向，缓慢，玻璃棒不能直插底部冷却的酒精50mL的NaCl 溶液5mL+DNA ，搅拌；再加二苯胺试剂5mL ，沸水浴5-15min 。
五、总结：六、注意事项：1、巧记：1次加冷酒精，2次加蒸馏水；3个NaCl溶液浓度，4次过滤； 5种溶液(柠檬酸钠溶液,酒精溶液,二苯胺试剂,2mol∕L NaCl 溶液,0.015 mol∕L NaCl溶液)；6次搅拌。
2、实验中为减少提取过程中DNA的损失，最好使用塑料的容器。
3、DNA的鉴定中应设计对照实验，以排除NaCl溶液对实验结果的影响。
4、若提取DNA时，玻璃棒不易卷起含DNA的丝状物，可以改用不尖锐的牙签，轻轻将丝状物缠绕其上。
5、若丝状物足够多，还可以增加一个实验：蛋白质+双缩脲试剂→紫色6、析出DNA时，应加蒸馏水的体积：根据M1V1=M2V2，溶液的总体积为V2= M1V1/ M2=约570mL。
DNA的粗提取与鉴定
DNA 的粗提取与鉴定
一、实验原理：
1、析出DNA 的原理：DNA 在NaCL 溶液中的溶解度是随着NaCL 浓度的变化而变化的，当NaCL 的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA 的溶解度最低，高于或低于这一浓度溶解度都会增高。
如图：
2、提纯DNA 的原理：
DNA 不溶于冷酒精，而细胞中某些物质可溶于冷酒精。
3、鉴定原理：DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。
二、方法步骤：
材料准备：常用鸡血细胞液
柠檬酸钠(抗凝剂)+鸡血−−−→静置或离心
血浆(弃去)+鸡血细胞液。
如图：
说明：①柠檬酸钠防止血液凝固。
②弃去上清液，是因为DNA 存在于血细胞中，血浆很少(没有)。
③用鸟类血细胞是因为鸟类成熟红细胞含DNA ，而哺乳动物成熟红细胞不含DNA ，所以不能用。
④本实验还可以用菜花或动物肝脏等作实验材料。
第一次在2中，使DNA与蛋白质分离
①两次加入高浓度NaCL
第二次在5中，DNA再溶解
第一次在1中，使细胞吸水涨破
②两次加入蒸馏水
第二次在3中，降低DNA的溶解度
第一次在1中，取滤液(含核物质)
③三次过滤第二次在4中，取黏稠物质
第三次在6中，取滤液
说明：在第一、三次取滤液时，纱布1—2层，第二次取黏稠物时纱布应多层。
④5次搅拌均要求超一个方向，轻缓，防止DNA断裂。
(二
璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
方法步骤：
1.溶解鸡血细胞核内的DNA
取一个125mL烧杯，注入15mL蒸馏水，注入1mL制备好的鸡血细胞液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向快速搅拌5min，血细胞吸入大量水分而被胀破（搅拌加速破开裂），释放出DNA。
向烧杯中注入20mL 2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向搅拌1min，混合均匀，DNA溶解。
2.析出含DNA的粘稠物
取150mL蒸馏水，沿烧杯壁缓慢加入，同时，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向缓慢不停地搅拌，大量含DNA的粘稠物逐渐析出，并吸附在玻璃棒周围，此时，溶液中NaCl浓度为0.14mol/L.
3.洗涤粘稠物——提取含杂质较少的DNA
取一个100mL的烧杯，注入25mL 95%酒精（常温），持玻璃棒连同吸附的粘稠物转移到注入酒精的烧杯中，沿顺（或逆）时针方向搅拌1—2min，血色及大部分杂质被洗去，缠绕在玻璃棒上的丝状物，其主要成分是DNA（含杂质较少）。
4.DNA的鉴定
取两只试管，分别加入2mL 0.015mol/L NaCl溶液，1号试管中加入丝状物，用玻璃棒搅拌，混合均匀，两只试管中分别加入2mL二苯胺试剂，振荡，水浴3min，1号试管变深蓝色（说明DNA 的量多），冷却后蓝色略深，2号试管无颜色变化。
注意：操作步骤2中搅拌不能快，以免析出的粘稠物被搅碎，搅拌后难以进行后面的操作。
dna粗提取步骤
DNA粗提取步骤一、目的要求本实验旨在使学生掌握DNA粗提取的基本原理和操作步骤，了解DNA的物理、化学性质以及其在生物科学研究中的应用。
通过实验，要求学生能够独立完成DNA的粗提取，并对实验结果进行分析和解释。
二、实验原理DNA粗提取的原理基于DNA在不同物理和化学环境中的稳定性。
在一定浓度的盐溶液和适当的温度条件下，DNA的溶解度会发生变化，从而实现DNA 的分离和提取。
本实验采用盐析法进行DNA粗提取，具体操作步骤如下：1.细胞破碎：通过物理或化学方法破碎细胞，释放出细胞内的DNA。
常用的破碎方法包括机械破碎（如研磨、匀浆等）、化学破碎（如用酸、碱或酶处理）和冷冻破碎等。
2.去除杂质：通过离心、过滤等方法去除细胞碎片、蛋白质和其他杂质，使DNA充分溶解在溶液中。
3.调节盐浓度：通过调节盐浓度，使DNA在盐溶液中的溶解度发生变化，从而实现DNA的分离和提取。
常用的盐溶液包括氯化钠、氯化钾、氯化钙等。
4.沉淀DNA：通过降低pH值、加入乙醇或异丙醇等方法，使DNA从溶液中沉淀析出。
5.洗涤与干燥：用70%乙醇或无水乙醇洗涤DNA沉淀，去除残留的盐分和杂质，然后干燥得到粗提取的DNA。
三、实验步骤1.准备实验材料与试剂（1）实验材料：鸡血细胞；（2）试剂：氯化钠、柠檬酸钠、蒸馏水、95%乙醇、70%乙醇；（3）仪器与器皿：离心管、离心机、滴管、玻璃棒、烧杯。
2.操作步骤（1）制备鸡血细胞溶液：取适量鸡血细胞，加入等体积的柠檬酸钠溶液，混合均匀后离心，去除上清液，得到鸡血细胞沉淀。
（2）破碎细胞：将鸡血细胞沉淀重新悬浮于适量蒸馏水中，加入适量的玻璃珠或石英砂，搅拌破碎细胞。
也可以采用匀浆、超声破碎等方法破碎细胞。
（3）去除杂质：将破碎后的溶液离心，去除上清液，得到的沉淀物为富含DNA的细胞碎片。
可以进一步用蒸馏水冲洗沉淀物，去除残留的蛋白质和其他杂质。
（4）调节盐浓度：向沉淀物中加入适量的氯化钠溶液，搅拌均匀，使DNA充分溶解在盐溶液中。
dna的粗提取实验报告
dna的粗提取实验报告DNA的粗提取实验报告引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体中负责遗传信息传递的分子，它的提取是进行分子生物学实验的基础步骤之一。
本实验旨在通过简单的方法提取DNA，并观察提取效果。
材料与方法材料：- 植物组织（如洋葱、豆芽等）- 高渗盐溶液（含有盐分的溶液，如食盐溶液）- 咖啡过滤纸- 酒精（酒精浓度为70%）- 水方法：1. 将植物组织切碎，使细胞破裂，释放DNA。
2. 将切碎的植物组织放入一个容器中，加入高渗盐溶液，搅拌均匀。
3. 将搅拌后的溶液过滤，使细胞碎片和其他杂质被滤掉，得到澄清的液体。
4. 将澄清的液体倒入一个试管中，加入等量的酒精，并缓慢倾斜试管，使酒精与液体缓慢混合。
5. 观察酒精与液体的交界面，可以看到白色的DNA沉淀。
6. 使用酒精漂浮在DNA沉淀上方的方法，将DNA转移到另一个容器中。
7. 加入适量的水，溶解DNA。
结果与讨论通过上述方法，我们成功地从植物组织中提取到了DNA。
观察到的白色沉淀物就是DNA，其形状呈线状或颗粒状。
实验过程中，我们注意到以下几个现象：1. 细胞破裂：切碎植物组织的过程中，细胞膜被破坏，使DNA从细胞内释放出来。
这一步骤的重要性在于提供了DNA的来源。
2. 高渗盐溶液：高渗盐溶液的作用是破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞内释放出来。
高渗盐溶液中含有盐分，可以改变细胞内外的渗透压，进而破坏细胞膜和核膜。
3. 过滤：通过过滤，我们可以去除细胞碎片和其他杂质，得到澄清的液体。
这一步骤的目的是减少后续操作中DNA沉淀的杂质。
4. 酒精沉淀：加入酒精后，DNA会从溶液中沉淀出来。
酒精与溶液的混合过程中，DNA会聚集在交界面上形成白色沉淀物。
这是因为DNA在酒精中不溶，而且比较重，所以会沉淀下来。
5. DNA的溶解：将DNA从酒精中转移到水中后，加入适量的水，使DNA溶解。
DNA在水中溶解后，呈现出透明的溶液。
本实验采用的是粗提取方法，所得到的DNA并不纯净。
DNA的粗提取
实验小结 1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”
2. 加入“两次蒸馏水， 三次 NaCl 溶液 ，一次酒精”
（二）DNA的鉴定
1. DNA的鉴定的原理
试剂： 二苯胺 条件： 沸水浴 现象： 沸水浴条件下， DNA遇二苯胺被染成蓝色
2. DNA的鉴定
⑴ 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml
5.滤取含 DNA 的黏稠物
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 7.过滤含 DNA 的 NaCl 溶液 8.提取含有杂质较少的DNA 冷却的 95％的酒精 50 mL A:(1)向试管中加入0.015 mol／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)加入 DNA 9.DNA 的鉴定 (3)4 mL 二苯胺试剂 B:(1)向试管中加入0.015mol／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
DNA的粗提取
一、提取DNA的原理 ⑴ DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶 液中溶解度不同
选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，使杂 质沉淀；或让其他成分溶解，DNA析出
⑵ DNA不溶于酒精溶液 DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯 中加入蒸馏水的作用是( B )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
2.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液?
答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于 上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以 要除去上清液(含有蛋白质)。
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实验步骤——以洋葱为实验材料：
1、称取30克已切碎的洋葱，放入研钵中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化钠溶液，充分研磨。
洋葱含有挥发性刺激物，有效减少刺激，才能使实验顺利进行。
上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰；或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，可以减轻刺激。
然后将洋葱切碎备用。
研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。
研磨时，切忌使用搅拌器（榨汁机）。
使用搅拌器虽可以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。
只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，DNA藏在其中，无法分辨。
学生看不到白色纤维状粘稠物的DNA。
2、研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。
3、向滤液中加入95%的酒精溶液20mL，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。
此时，烧杯中的液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。
实例: 用鸡血细胞液粗提取DNA 并鉴定步骤
1、提取鸡血细将制备好的鸡血细胞液(已在课前配好) 5~10mL，注入到50ml 烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20mL，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min，然后，用放有纱布的漏斗将血细胞过滤至1000mL 的烧杯中，取其滤液。
图示胞的细胞核物质
2、溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为2mol/ L 的NaCl 溶液40 mL 加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA 在溶液中呈溶解状态。
3、析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现。
继续加入蒸馏水，溶液中出现的黏稠物会越来越多。
当黏稠物不再增加时停止加入蒸馏水。
4、滤取含DNA的粘稠物用放多层纱布的漏斗，过滤溶液至1000 mL 的烧杯中。
取纱布上的黏稠物。
5、将DNA 的粘稠物再溶解取一个50 mL 烧杯，向烧杯内注入物质的量浓度为2mol/ L 的NaCl 溶液20 mL。
用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至NaCl 溶液中，用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3min，使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。
6、过滤含DNA的氯化钠溶液取一个100 mL 烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤以上溶液。
取其滤液(DNA 溶于滤液中)。
7、提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中，加入冷却的、体积分数为95% 的酒精溶液50 mL(加入时动作要慢)，并用玻璃棒沿一个方向搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。
当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌，至不再增加时，用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。
取两支20 mL 的试管，各加入物质的量浓度为L 的NaCl 溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。
然后，向两支试管中各加入 4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，等试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。