实验 __DNA的粗提取与鉴定
实验九DNA的粗提取与鉴定
【实验九】DNA的粗提取与鉴定陈小珺（江西省赣州市第三中学341000）1 教学建议在本实验的教学中，教师应注意以下几点。
1.1 实验材料必须准备充足。
本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。
每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。
宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。
也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。
（每100ml鸡血加入3g柠檬酸钠）1.2 盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。
因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。
1.3 获取较纯净的DNA的关键步骤。
1.3.1 充分搅拌鸡血细胞液：将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。
1.3.2沉淀DNA时必须用冷酒精：体积分数为95%的酒精在冰箱中至少存放24 h。
1.3.3正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。
教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA 分子。
进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5 min。
2 实验原理的补充介绍2.1 DNA的释放本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为鸡血细胞核的DNA 含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。
DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。
为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。
蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。
实验九 DNA的粗提取与鉴定
实验九 DNA的粗提取与鉴定【学习目标】1.初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法2.观察提取的DNA【重点难点】▲学习重点：实验原理、方法步骤、实验现象及解释▲学习难点：⑴实验材料的选择和试剂的作用。
⑵实验中两次加入蒸馏水、三次用纱布过滤、三次加氯化钠溶液、六次搅拌的目的比较。
【知识链接】在学习本实验时，实验材料必须准备充足。
实验所用的鸡血细胞液由活鸡的鲜血经沉淀后获得，但所用烧杯必须提前放入抗凝剂。
盛放鸡血细胞液的容器最好是塑料容器，因为玻璃容器易吸附DNA。
鸡血细胞因吸水、搅拌破裂后（细胞膜和核膜破裂）释放出DNA，当然也有RNA,而且它们往往与蛋白质结合在一起。
在浓度较高的氯化钠溶液中（2M）,核蛋白容易解聚，游离出DNA。
而DNA在浓度较高的氯化钠溶液中溶解度很高，Na+与带负电的DNA结合成DNA钠盐，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
利用DNA在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理，向含有DNA的浓度较高的氯化钠溶液中加入大量（约500ml）蒸馏水，稀释氯化钠溶液，使DNA的溶解度下降，而蛋白质的溶解度增高，从而使二者分离。
加上搅拌，使DNA呈丝状析出。
【学习过程】一. 实验原理1.粗提取：DNA在氯化钠溶液中的溶解度随氯化钠溶液的浓度而改变。
DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中的溶解度最低。
利用此原理可使溶解于氯化钠溶液中的DNA析出。
2.纯化：DNA不溶于酒精而细胞中其他物质可溶于酒精。
利用此原理可提取含杂质较少的DNA.沸水浴3. 鉴定：DNA +二苯胺呈蓝色（用于DNA的鉴定）二.材料用具鸡血细胞液（约5～10ml）、体积分数为95％的酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）、蒸馏水、质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液、物质的量浓度分别为2mol/L、0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺试剂。
三、方法步骤1、制备血细胞液⑴选材:选用血细胞中含有的动物。
（如鸡）⑵取血：宰杀所选动物收集其血液，加入，防止凝血。
DNA的粗提取和鉴定分析
加热 加热
4、植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。
植物细胞需要先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁 精等）溶解细胞膜。
•洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是： 洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱， 它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性， 使蛋白质与DNA分离开来。利于DNA 的释放。
• 动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂） 破坏的，因为动物细胞膜外面没 有细胞壁的保护，放在清水中自 然的就会吸水而胀破，释放出其 中的DNA等物质。
3、方法与过程
1).制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，
活鸡鲜血180mL
离心或静置沉淀。
血浆
血细胞 离心或静置后去掉上清液
2)实验方法步骤：
提取细胞核物质：利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。 血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。
（3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们按 实验要求完成实验步骤后，结果是 在实验中很难提取到DNA， 这是因为 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠，白细胞
和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到
但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以顺利进行，这是因 为肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易。被破坏，有利于DNA的提取 （4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加 若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。程 序，使组织细胞更易分离。
关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较， 最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：
（新1陈）代鸡谢血旺中盛红，细因胞而含血有液完中整红的、细成胞形数的目细较胞多核，，可家以鸡提属供于丰鸟富类的，
高中生物实验—DNA的粗提取和鉴定
鉴定
自变量
比较
加入物质
结果
图示
实验组 对照组
均加入：
丝状
①4 mL二苯胺 物
试剂
(DNA)
②2mol/LNaCl
溶液5 mL
——
溶液逐渐 变蓝
不变蓝
鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 取少许丝状物，置玻片中央，
加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。
鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。
这是因为 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠，白细胞
和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到
但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以顺利进行，这是因 为肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易。被破坏，有利于DNA的提取
（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加 若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。程
用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。 洋葱的鳞片叶表皮细8 胞
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注意事项 ①制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上 层是血清，下层为所需要的血细胞。 ②整个实验中加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精” 两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。 酒精最好用95%的冷酒精; ③加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。 保证DNA分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。 ④鉴定DNA时需沸水浴加热。 ⑤二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有 毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位. ⑥盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放的 DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA的损失）
DNA的粗提取与鉴定
二、实验原理 2.DNA的分离和提纯
DNA溶于2mol /L的NaCl溶液,但 不溶于冷酒精，细胞中的其它杂 质溶于冷酒精。
二、实验原理 3.DNA的鉴定
DNA与二苯胺作用生成蓝色沉 淀用来鉴定 DNA（沸水浴）
实验步骤
一、取材：香蕉去皮、洗洁精、食盐溶液、95％酒精等
二、DNA的释放、溶解、获取
实验材料
研磨提取粗提取、提纯恒 温 水 浴 加 热实验现象一
实验现象二及比较
作业： 1.如果选用实验材料是鸡的血细 胞，请写出实验操作步骤； 2.你做的实验现象是怎样的？请 分析或推测原因，并拟定证明你 的推测的进一步实验方案。
1.往研钵香蕉加入10mlNaCl溶液和少量的洗洁进行研磨； 2.用漏斗一层纱布过滤，取滤液； 3.往滤液中加入等量的95%的酒精，静置2--3分钟； 4.用玻棒卷起白色絮状物，用吸水红吸去水分后放入试 管，加入4ml 2mol /L的NaCl溶液充分溶解。
三、DNA的鉴定：找实验老师加4ml二苯胺溶液，在 恒温水浴锅加热2--3分钟，观察现象并分析实验结果。
一、实验目标 1.用15分钟左右的时间尝试对
香蕉组织中的DNA进行粗提取； 2.学会用二苯胺对粗提取的DNA
进行鉴定； 3.能对实验结果进行分析评价。
二、实验原理 1.DNA的释放 洗涤剂等去污剂可以溶解香
蕉细胞的细胞壁，破坏细胞膜， 同时也能使蛋白质变性。 （教材P55)洗涤剂能够瓦解细胞 膜,但对DNA没有影响。
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、粗提取粗提取的方法是通过物理和化学方法从一个或多个生物样品中提取DNA样品，通常是为了进行DNA分子生物学分析、基因组学以及其他科学研究。
1. 用拆解液拆解细胞使用拆解液拆解细胞是最常用的粗提取DNA技术。
主要使用的拆解液有Tris-EDTA（TE buffer）、Cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB）、Sarkosyl（SDS）和NaOH溶液等。
各种拆解液的比例和温度可以根据每个实验的要求进行调整。
2. 用磁珠或磁性分选器抽提也可以使用磁珠或磁性分选器来抽提DNA样品。
这种方法可以从多种生物样品中提取DNA，如血清、血浆、细胞粗提物以及血液细胞等。
磁珠抽提的原理是利用磁性珠子来吸附DNA样品，而磁性分选器则是利用磁场将DNA分离出来。
磁珠抽提的优点是简单快捷，缺点是提取的DNA质量不够高。
3. 改良的拆解方式一些改良的拆解方式可以用来考察某一特定细胞类型。
这些方法包括冷冻破碎、湿热破裂、极限温度破裂和化学破裂等。
这些技术可以有效地提高蛋白质和DNA的提取效率，但缺点是需要较高的技术要求，而且操作步骤较多，比较耗时。
二、DNA的鉴定DNA的鉴定是指用特定的方法和技术，明确某个DNA样品的鉴定。
常见的DNA鉴定技术有定性分析、定量分析和活性检测等。
1. 定性分析定性分析是指对DNA样品进行定性鉴定，识别出它们是哪种DNA，以确定其基本性质。
常用的定性分析方法有紫外光检测和酶切检测等。
紫外光检测是将DNA浓度调整至1μg/ml，然后放置在紫外光228纳米的紫外灯管（UV lamp）下，通过分析紫外光吸收光谱来鉴定DNA 样品。
酶切检测是将DNA样品与特定的酶进行反应，用来分析DNA的特征。
常用的酶有限制性内切酶（restriction enzymes），例如EcoRI、BamHI、PstI和HindIII等。
2. 定量分析定量分析是指对某一DNA样品的浓度和数量进行测量，以了解其容量。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
方法步骤：
1.溶解鸡血细胞核内的DNA
取一个125mL烧杯，注入15mL蒸馏水，注入1mL制备好的鸡血细胞液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向快速搅拌5min，血细胞吸入大量水分而被胀破（搅拌加速破开裂），释放出DNA。
向烧杯中注入20mL 2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向搅拌1min，混合均匀，DNA溶解。
2.析出含DNA的粘稠物
取150mL蒸馏水，沿烧杯壁缓慢加入，同时，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向缓慢不停地搅拌，大量含DNA的粘稠物逐渐析出，并吸附在玻璃棒周围，此时，溶液中NaCl浓度为0.14mol/L.
3.洗涤粘稠物——提取含杂质较少的DNA
取一个100mL的烧杯，注入25mL 95%酒精（常温），持玻璃棒连同吸附的粘稠物转移到注入酒精的烧杯中，沿顺（或逆）时针方向搅拌1—2min，血色及大部分杂质被洗去，缠绕在玻璃棒上的丝状物，其主要成分是DNA（含杂质较少）。
4.DNA的鉴定
取两只试管，分别加入2mL 0.015mol/L NaCl溶液，1号试管中加入丝状物，用玻璃棒搅拌，混合均匀，两只试管中分别加入2mL二苯胺试剂，振荡，水浴3min，1号试管变深蓝色（说明DNA 的量多），冷却后蓝色略深，2号试管无颜色变化。
注意：操作步骤2中搅拌不能快，以免析出的粘稠物被搅碎，搅拌后难以进行后面的操作。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定（一）实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。
（二）实验材料（以鸡血为例）鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（三）试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
（四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。
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实验 DNA 的粗提取与鉴定 教学目的
1． 初步掌握DNA 粗提取和鉴定的方法。
2． 观察提取出来的DNA 物质。
实验原理 1．
DNA 在NaCl 溶液中的溶解度是随NaCl 的浓度变化而改变的。
DNA 在0．14mol/L 的NaCl 溶液中的溶解度最低，据此可使DNA 充分溶解而使杂质沉淀或DNA 沉淀而杂质溶解。
2． DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA 。
3． DNA 对蛋白酶、高温和洗涤剂（可以溶解细胞的细胞膜，除去脂质和蛋白质，而对DNA 没
有影响）都具有较好的耐性。
4． DNA ＋二苯胺−−
→−沸水浴
蓝色（用于DNA 的鉴定） 实验材料：
鸡血细胞液（5-10ml ），体积分数为95%的酒精溶液（冷却），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml 的柠檬酸钠溶液(抗凝剂)，物质的量浓度分别为2mol/l 和0.015mol/l 的氯化钠溶液，二苯胺试剂
实验步骤
1．材料制备
0.1g/ml 柠檬酸钠100ml
置于500ml 烧杯内→玻璃棒搅拌→1000r/min 离心2min →吸去上清
液→即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡
血细胞自行沉淀）
活鸡血180ml
[思考]为什么要除去血液中的上清液？
2．方法步骤
取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速
搅拌，使血细胞加速破裂，纱布过滤，滤液中含DNA和
其他核物质，如蛋白质
（1）提取鸡血细胞的细胞核物质
原理：血细胞吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞
破裂
（2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌
（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现
丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液
相当于稀释到0．14mol/L）
（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上
（5）DNA粘稠物再溶解：在50ml的烧杯中注入20ml 2mol/L的NaCl溶液，缓慢搅拌3 min
使上述粘稠物尽量多的溶解在溶液中。
（6）过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA
（7）提取含杂质较少的DNA：上述溶液＋冷却的95%的酒精50ml，缓慢搅拌，出现乳白色丝状
物，用玻璃棒将丝装物卷起。
（8）DNA鉴定：
【思考】1.上述过程中两次加入蒸馏水，两次加入的作用一样吗？为什么？
2.用纱布过滤了几次？每次的目的是什么？（你要保留滤液还是纱布上的物质）
3.有几个步骤中用到了搅拌？每一次的目的是什么？
4. DNA的直径约为2nm，实验中出现的丝状物的粗细是否就表示一个DNA分子直径的大小？
【实验关键】
本实验成功的关键是获取较多、较纯净的DNA，因此应注意：
1．充分搅拌鸡血细胞液。
DNA存在于鸡血细胞核中。
将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃
棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA
2．沉淀DNA必须用冷酒精。
实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少
存放24小时。
3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。
在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要
轻缓，以便获得较完整的DNA分子。
在步骤（7），要将玻璃棒插入
烧杯溶液中间，用手缓慢转动5-10min。
【补充】
１.也可使用菜花或洋葱做实验材料，只不过实验成功率较低，实验效果与研磨液关系密切。
（1）取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天
（2）取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入10ml研磨液,充分研磨10分钟
（3）将研磨液置于离心管中，在1000r/min的转速下离心2~3分钟，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟
（4）取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。
（5）鉴定（略）
【思考】用菜花代替鸡血作为实验材料，其实验操作步骤完全相同吗？为什么？
2.在学生实际的实验过程中，在水浴后15分钟内出现明显实验现象的比例往往非常低，经常会出现整个班级没有明显鉴定结果的现象。
根据实际操作的结果，很可能的原因是：在实验过程中，经常会出现缠绕于玻璃棒末端的DNA的量过少的情况，如果溶解于氯化钠溶液中的DNA的量过少的话，与过量的二苯胺试剂共热时，出现的蓝色会比较浅。
【总结】
1.提取生物大分子的基本思路是：选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理化学性质的生物大分子。
2.破碎细胞获取DNA滤液的方法有：在鸡血细胞溶液中加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液；或者在切碎的洋葱中加入洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液
3.去除DNA滤液中杂质的方法有：通过控制NaCI溶液的浓度去除杂质；直接在含有DNA的滤液中加入嫩肉粉(含有木瓜蛋白酶，将蛋白质水解)；或者将滤液放在60℃---75℃的恒温水浴箱保温一段时间（高温使蛋白质变性后与DNA分离）
【巩固练习】
1．在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2mol／L、0．14mol／L、2mol／L、0015mol ／L的氯化钠溶液，其作用分别是（）
A．溶解、析出、溶解、溶解 C．溶解、溶解、析出、溶解
B．析出、溶解、析出、溶解 D．溶解、析出、溶解、析出
2．下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（）
3．在“DNA的粗提取与鉴定实验”中：
（1）实验中两次使用蒸馏水，第一次目的是，
第二次目的是。
（2）说明不同浓度的NaCl溶液的作用：
2mol/L NaCl的作用；
0.14mol/L NaCl的作用；
0.015 mol/L NaCl的作用；
（3）提纯DNA的原理是，所用试剂为。
搅拌要，目的。
（4）能否用哺乳动物血液代替？简述理由。
3.（1）使血细胞吸水破裂，溶解细胞核内的DNA；降低NaCl溶液的浓度，降低DNA分子在NaCl溶液中的溶解度析出DNA分子（2）溶解含DNA的核物质；使含DNA的丝状粘稠物析出DNA分子；进行DNA鉴定（3）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些盐类蛋白质可溶于酒精溶液；95%的冷却酒精；轻缓、同方向；保持DNA分子的完整性（4）不能，成熟的哺乳动物红细胞没有细胞核]。