微生物学实验指导
微生物学实验指导大全
微生物学实验指导黄文芳张松编著华南师范大学生命科学学院第一部分基础实验实验1 培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
内容：1．牛肉膏蛋白陈培养基的配制。
2．高氏1号培养基的配制。
3．马丁氏培养基的配制。
二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。
三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.61．称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
2．加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
3．调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4．过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
医学免疫学与微生物学 实验指导
《医学微生物学与医学免疫学》实验指导前言医学微生物学与免疫学是医学院校必设的基础课程之一，该学科具有理论与实践紧密结合的特点及实验教学在学科中的重要性。
本课程设置要求学生不仅要掌握基础理论、基本知识，而且要学习和掌握各项基本技能。
本书结合中药学专业的教学工作实际，编实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，并附有一定量的思考题。
本书依教学进程安排实验次序，可帮助学生巩固基础理论知识，培养学生基本技能，提高教学效果。
实验学时：4学时形态二《医学微生物学》实验指导实验一细菌分布检测、理化及药物因素对细菌影响的检测（一）细菌分布的检测【实验目的与要求】1.掌握无菌操作技术。
2.熟悉细菌菌落的观察及计数方法。
3.了解微生物在自然界及正常人体的分布，增强无菌观念。
【实验原理】细菌广泛分布于自然界中，人的体表和与外界相通的腔道中也有细菌存在。
通过本次实验理解微生物学科实验中强调无菌操作、防止污染和感染的重要性，为今后在医疗实践中建立牢固的无菌观念打下基础。
【实验仪器、器材与试剂】1.实验仪器和器材：无菌平皿、普通琼脂平板、血平板、高层琼脂培养基、微波炉、无菌吸管、胶帽、酒精灯、打火机、无菌试管、试管架等。
2.实验试剂：自来水或纯净水、生理盐水等。
【实验项目、方法与步骤】1.空气中细菌分布的检测——沉降法（1）取一个普通琼脂平板并作好标记。
（2）置于实验室某处，揭开盖。
操作时不要用手接触培养基，以免造成结果误差。
（3）让培养基暴露在空气中30min，然后盖好皿盖，置37℃生化培养箱内培养18～24h。
（4）取出观察并纪录结果。
2.水中细菌分布的检测——倾注培养法（1）取已灭菌的吸管，套上胶帽。
（2）右手持吸管带胶帽的一端，其余部分迅速通过火焰，以杀灭吸管表面可能存在的细菌。
（3）以挤压胶帽的办法，吸取1ml自来水或纯净水，置于无菌平皿中（注意：不要错放入平皿盖内）。
（4）取已融化并冷却至50℃左右（手握感觉热而不烫手）的高层琼脂培养基，迅速倾15～20ml 入已盛有1ml待测水的平皿中，立即加上平皿盖，在实验台上轻轻水平摇动，使琼脂与水样充分混合，静置于台面，等待琼脂凝固。
土壤微生物学实验指导
土壤微生物学实验指导实验一培养基的制备和灭菌4学时一、实验目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法和培养基的制备方法。
2.了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。
二、实验方法及原理(一)培养基的制备培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配置而成的一种混和营养基质，用以培养或分离各种微生物。
因此，营养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素）和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
微生物的生长繁殖除需一定的营养物质以外，还要求适当的pH范围。
不同微生物对pH 要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基是中性或偏碱性的。
所以配制培养基时，都要根据不同微生物对象用稀酸或稀碱将培养基的pH调到合适的范围。
但配制pH低的琼脂培养基时，如预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固，因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌后，在调整pH。
此外，由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有各种微生物，此外，已配制好的培养基必须立即灭菌，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基的酸碱度而带来的不利影响。
（二）干热和高压蒸汽灭菌原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160-170℃），时间长（1-2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
食品微生物学实验指导书
食品微生物学实验指导（食工、烹饪专业用）目录实验一显微镜的构造及使用方法 (5)实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 (9)实验三霉菌的形态观察 (11)实验四细菌的简单染色与形态观察 (13)实验五细菌的革兰氏染色与芽孢染色 (14)实验六培养基的制备与灭菌 (16)实验七细菌的分离培养及培养性状的观察 (22)实验八酵母菌细胞计数 (30)实验九食品中细菌总数的测定 (32)实验十食品中大肠菌群数的测定 (37)附录一常用染色液 (44)附录二常用培养基配方 (45)实验室安全守则1.进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。
2.在进行高压、干燥、消毒等工作时，实验人员不得擅自离开现场，认真观察温度、时间，蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。
3.严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液、病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方能离开现场。
4.实验完毕，两手用清水肥皂洗净，必要时可用（杀菌剂）新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。
5.实验完毕，及时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理，并填写日常工作记录。
6.每日实验结束，认真检查水、相关电源是否关闭和正在使用的设备运转是否正常，并认真记录。
关好门窗，方可离去。
实验室检验总则一、样品的采集（一）采样目的确保采集的样品能代表全部被检验的物质，使检验分析更具代表性。
（二）采样原则1.采集的样品要有代表性，采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查，检查是否有污染源存在，同时能反映全部被检食品的组成、质量和卫生状况。
2.应设法保持样品原有微生物状况，在进行检验前不得污染，不发生变化。
3.采样必须遵循无菌操作程，容器必须灭菌，避免环境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新洁尔灭、酒精等消毒物灭菌，更不能含有此类消毒药物，以避免杀掉样品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可使用。
微生物学类实验指导书(下)
实验一产酶微生物的分离、纯化与选育酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。
由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。
目前，能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶，葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的。
通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。
1. 淀粉酶产生菌的分离与纯化1.1 实验目的学习从自然界中分离淀粉酶产生菌，并进行分离与纯化。
1.2 实验原理淀粉是由葡萄糖通过α-1，4糖苷键构成的直链淀粉和α-1，6位有分支的支链淀粉组成的。
按照水解淀粉方式的不同，主要的淀粉酶可分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶（或异淀粉酶）4大类。
产淀粉酶的微生物有细菌、霉菌和酵母菌等。
利用淀粉遇碘液变为蓝色的特性，将分离的芽孢杆菌（或其他微生物）接种在含有淀粉的固体培养基表面进行培养，利用滴加碘液后菌落周围出现的透明圈判断该菌是否产生淀粉酶及初步判断淀粉酶活力的高低。
1.3实验仪器与材料土壤样品或其他富含淀粉质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、淀粉培养基平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。
1.4 实验方法与步骤1.4.1分离1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液；2）取1：10土壤悬液5 ml，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75-80 ℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置，于30-32 ℃培养24-48 h；4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。
环境微生物学实验指导
微生物实验室安全守则基本原则：1.在实验台上不可放臵任何非实验必须的物件或私人用品。
2.每次工作开始及终止时，必须清理并用杀菌液擦拭实验台面 (杀菌液的种类及浓度可参考表1中所列，最常用的为 70% 酒精水溶液) 。
表1、常用杀菌药品名称及其溶液的浓度3.在操作过程中绝不可抽烟、吃东西。
4.在操作过程中必须穿上清洁的实验服，若蓄长发须将长发束好，在实验室中任何时候皆应有整齐的装束。
5.实验室内的各种培养基、仪器，尤其是各种实验的样品及微生物培养，皆不可任意移至实验室外。
6.实验室內任何一种微生物样品，在处理时均须遵守下列事项：◎决不可用口吸取任何一种微生物样品。
◎如果微生物样品打翻，必須以吸满杀菌液的卫生纸加以覆盖 15 分钟后，卫生纸才可移除，并依照一般微生物实验室的废弃物加以处理。
◎任何微生物样品在室內搬移时都必须加盖。
7.在任何操作过程的开始前及终止后，双手都必须用清洁剂清洗（例如：70 % 的酒精水溶液）。
微生物实验室內，任何微生物的样品、废弃物 (对具感染性的废弃物应特别注意) 都必须高温高压灭菌后，才能以一般垃圾处理。
操作时注意事项:1.机器运转中如有不正常现象，应立即报告实验老师或任课教师，若时间急迫，可先切断电源。
2.发现仪器故障者，应在机器上清楚标示，尽到告知义务，以免发生危险。
3.任何药品使用前需详知其性质及使用方法，配制或使用有毒物品需戴手套口罩等操作，挥发性溶剂则需在通风柜内使用，并应随时加盖，以免发生危险。
4. 挥发性溶剂如酒精、丙酮、乙醚、苯、二硫化碳、冰醋酸、石油醚、甲苯、二甲苯等均易燃烧，故切勿靠近火焰。
不溶于水的有机溶剂着火时，切勿以水灭火，以免更助长火势蔓延。
5.不得将纸屑、玻璃碎片等流入排水管。
6.当加热试管内物质时，为避免烧破试管或致使试管內物质喷出，应常旋转试管或避免仅加热一处，切勿将试管口对着自己或邻座同学，以免试管内物质喷出伤害自身或其他同学。
7.稀释浓硫酸或其他强酸应徐徐将浓硫酸加入水中，并轻轻摇晃混合，切勿加水于酸中，以免因稀释时产生大量的热，致硫酸因沸腾而溅出。
医学微生物学与免疫学实验指导
医学微生物学与免疫学实验实验目的和要求一、实验前务必做好预习，明确实验目的、内容及理论依据等，避免或减少错误的发生，以保证实验在预期内完成。
二、实验操作严格按要求进行，严防污染和感染。
三、对示教实验联系理论认真观察。
对光镜下标本不得擅自挪动视野，其他示教标本看后必放回原处。
对录像教学应作重点、简要的笔记。
四、客观真实地记录实验结果并进行分析，若与理论不符，要加以分析讨论，找出原因，必要时重复实验。
五、在规定时间内完成实验报告，报告要求字迹清楚，说明问题简单扼要。
实验室规则1. 非实验必需品禁止带入实验室。
2. 穿白大衣，按规定就坐。
3. 实验室应保持安静和良好的秩序，不得高声谈笑、乱动物品或随便走动。
4. 实验室内严禁吸烟、进食、饮水或用嘴湿润铅笔和标签等，也不要用手搔抓抚摸机体。
5. 实验时若不慎发生皮肤创伤，或病原菌污染衣物、卓（地）面等事故，应立即报告指导老师，进行紧急处理。
6. 实验所用的玻片、试管、吸管等，用后应随即投放盛有消毒剂的指定容器内，不得放在桌上，也不可在水池中冲洗。
7. 每次实验完毕，按实验要求应及时清理实验物品，清扫卫生；离开实验室时，消毒洗手后离开实验室；对白大衣经常清洗消毒。
油镜的使用和维护目的：掌握油镜的使用与维护，熟悉油镜的使用原理。
材料：显微镜，拭镜纸，液体石蜡油，二甲苯原理：油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射入镜筒的光线极少，视野暗，物象不清晰。
如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物象。
步骤：显微镜油镜的使用和维护1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。
识别油镜头：标有100×、OIL、HI等字样。
2. 打开电源，用低倍镜对光，打开光圈，调节聚光镜的位置，使视野光线充足。
3. 标本上加镜油一滴，转动粗螺旋，使油镜头缓缓下降，用眼从侧面观察，直到油镜头浸入油中接近玻片为止。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
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农业微生物学实验指导北京农学院食品科学系授课教师刘一倩高秀芝2006年3月实验1显微镜的使用及细菌形态的观察1目的要求(1)了解普通光学显微镜的构造，各部分的功能和使用方法。
(2)学习并掌握油镜的原理和使用方法，熟悉几种常见微生物的基本形态。
2普通光学显微镜的构造与油镜的工作原理2.1普通光学显微镜的构造 显微镜的构造可分为机械装置和光学系统两大部分。
机械装置包括镜座、镜筒、镜臂、物镜转换器、载物台、推进器、粗调螺旋、微调螺旋、光圈等部件；光学系统由接目镜、接物镜、聚光器、反光镜等组成(图1-1)。
(1)镜座 镜座是显微镜底座，用以支撑全镜，呈长方形。
其上装有电源开关、照明光源、保险丝、光源滑动变阻器等。
(2)镜筒 镜筒上连接目镜、下连接转换器，光线从筒中通过。
安装目镜的镜筒分为可调式的单筒和固定式的双筒两种。
从镜筒上缘到物镜转换器螺旋口之间的距离称为筒长。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm ，此数字标在物镜的外壳上。
(3)镜臂 连接镜筒和镜座。
有的镜臂是固定的，有的可向后方倾斜，其作用是支撑镜筒、载物台、聚光器和调焦装置等。
(4)物镜转换器 转换器上可安装3～5个物镜，一般是3个物镜(低倍镜、高倍镜、油镜)。
转动转换器时，可以按需要调换各种物镜，将之推到使用位置上。
图1-1 光学显微镜构造示意图 (5)载物台 载物台呈长方形，中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推进器。
(6)推进器 推进器由一横一纵两个推进齿轴和齿条构成，转动其上螺旋，可使标本片向前、后、左、右移动。
研究型显微镜的纵横架杆上刻有刻度标尺，构成精密的平面坐标系。
如需要重复观察已检查标本的某一物像时，可在第一次检查时记下纵横标尺的数值，下次按数值移动推进器，就可以找到原来标本的位置。
1.物镜转换器；2.物镜；3.游标卡尺；4.载物台；5.聚光器；6.虹彩光圈；7.光源；8.镜座；9.电源开关；10.光源滑动变阻器；11.粗调螺旋；12.微调螺旋；13.镜臂；14.镜筒；15.目镜；16.标本移动螺旋(7)粗调螺旋 粗调螺旋用于粗放调节物镜和标本的距离。
老式单目镜显微镜的粗调螺旋向前扭动，镜头下降接近标本。
新式双目镜显微镜(如Motic 显微镜)镜检时，双手向后扭动使载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本远离物镜。
使用显微镜观查标本时，主要使用粗调螺旋调节。
(8)微调螺旋 用粗调螺旋只能粗放地调节焦距，难于观察到清晰的物像，因而需要用微调螺旋做进一步调节。
其每转一周，镜筒移动0.1 mm 。
新式研究型显微镜粗、微螺旋为共轴式。
原则上，微调螺旋每次旋转不超过一周。
(9)光圈 在聚光器下方，可任意开闭，用来调节射入聚光器光线强弱。
(10)接目镜目镜作用是将物镜放大了的实像进行第二次放大，形成虚像并映入眼帘。
不同的目镜上刻有5×、10×、15×等字样，以表示该目镜的放大倍数。
普通光学显微镜常用的目镜主要是惠更斯目镜。
研究型显微镜配有性能更好的目镜，如补偿目镜(K)、平场目镜(P)和广视场目镜(WF)等。
照相时选用照相目镜(NFK)。
(11)接物镜物镜安装于转换器上，入射光线通过物镜时使被检物像形成第一次放大的实像。
普通显微镜装有低倍镜(10×)、高倍镜(40×)和油镜(100×)三种消色差物镜，外壳上标有“Ach”字样，通常与惠更斯目镜配合便用。
使用低倍镜和高倍镜时，物镜与标本间的介质是空气，称之为干燥系物镜。
；而使用油镜时，物镜与标本间的介质是香柏油，称之为油浸系物镜。
油镜标有HI或Oil字样及镜头下缘刻有白环或红环。
检查细菌标本要用油镜。
研究型显微镜配有性能更好的物镜，如复消色差物镜(Apo)、平场物镜(Plan)、平场消色差物镜(Plan Ach)、平场复消色差物镜(Plan Apo)等。
(12)聚光器由聚光透镜、升降螺旋和能调节开孔大小的虹彩光圈组成，装在载物台下面，可通过升降螺旋而起落。
其作用是将光线聚光于标本之上，增强照明度。
普通光学显微镜配置的都是明视场聚光器，分为阿贝聚光器、齐明聚光器和摇出聚光器三种。
研究型显微镜(如Motic BA400显微镜)配有性能更好的消色差摇出式聚光器，能将聚光器上透镜从光路中摇出，满足低倍物镜(4×)大视场照明的需要。
齐明聚光器虽质量最好，但不适于4倍以下的物镜。
(13)反光镜早期普通光学显微镜常用自然光检视标本，在镜座上装有反光镜，由平凹两面镜子组成。
光线较强时用平面镜，光弱时用凹面镜，可自由旋转方向，以将最佳光线反射入聚光器。
新式研究型显微镜镜座上装有光源，并由电流调节螺旋来调节光照强度。
2.2油镜使用的工作原理在显微镜的光学系统中，物镜的性能直接影响显微镜的分辨率。
与其他物镜相比，油镜的放大倍数最大，使用也比较特殊，需在载玻片与镜头之间滴加香柏油，这主要有如下二方面的原因：(1)增加照明亮度油镜的放大倍数虽然可达100×，但因焦距很短，镜头直径很小，进入镜头中的光线亦较少，故所需要的光照强度最大(图1-2)。
当油镜头和标本玻片之间的介质为空气时，因空气折射率(n=1.00)与玻璃的折射率(n=1.55)不同，会有一部分光线被折射而不能进入镜头内，使视野更暗，物像显现不清。
若在镜头与标本玻片之间滴上与玻璃的折射率相仿的油类，如香柏油(n=1.52)等，则光线不发生折射，从而增加了视野的照明亮度(图1-3)。
图1-2 物镜的焦距、工作距离和虹彩光圈的关系图1-3 干燥系物镜A与油浸系物镜B的光线通路(2)增加显微镜的分辨力显微镜的分辨力或分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。
它与物镜的数值口径成正比，与光波长度成反比。
因此，当光波波长一定时，物镜的数值口径愈大，则显微镜的分辩力愈大，被检物体的细微结构也愈清晰地区别出来。
分辨力可由下列公式表示：分辨力(最大可分辨距离)=λ/2NA式中λ为光波波长(0.4～0.7 µm)；NA为物镜的数值口径值。
它是光线投射到物镜上的最大角度(称为镜口角)的一半正弦，与介质的折射率之乘积，即NA=n·sinα。
式中α为光线最大入射角的半数，它取决于物镜的直径和焦距。
在实际应用中光线入射角最大只能达到120º，其半数的正弦为Sin60º=0.87。
以空气为介质时，NA=1×0.87=0.87；而以香柏油为介质时，NA=1.52×0.87=1.32，故以香柏油为介质的油镜要比用空气为介质的高倍镜分辩力高，因而细菌用油镜才可观察到。
然而，显微镜的放大倍数越高，并不等于其分辨力越高。
假如采用放大率为40×的高倍镜(NA=0.65)和放大率为24×的目镜，虽然总放大率为960×，但其分辩力只有0.42µm；若采用放大率为90×的油镜(NA=1.25)和放大率为9×的目镜，虽然总放大率为810×，但却能分辨出0.22µm之间的距离，因而显微镜的总放大倍数越高并不是其分辨力越高。
3实验材料3.1菌种细菌三型、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)等染色玻片标本。
3.2溶液或试剂香柏油、二甲苯。
3.3仪器与其他用具显微镜、擦镜纸等。
4普通光学显微镜的使用流程安置→调光源→调目镜→调聚光器→镜检(低倍镜→高倍镜→油镜) →擦物镜头→复原5操作步骤5.1观察前的准备5.1.1显微镜的安置 置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘约10cm。
镜检时姿势要端正。
一般用左眼观察，右眼绘图或记录，两眼同时睁开，以减少眼睛疲劳。
5.1.2光源调节安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度。
反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，较强的自然光源用平面镜，较弱的照明光源用凹面镜，并调节其角度，使视野内的亮度适宜、均匀。
凡检查染色标本时，光线应强；检查未染色标本时，光线不宜太强，可通过光圈、聚光器、反光镜调节适宜的光线。
5.1.3双筒显微镜的目镜调节根据使用者的个人情况，双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有屈光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。
5.1.4聚光器数值孔径值的调节正确使用聚光镜才能提高镜检效果。
聚光镜的主要参数是数值孔径，它有一定的可变范围，一般聚光镜边框上的数字是代表它的最大数值孔径，通过调节聚光镜下面可变光阑的开放程度，可以得到各种不同的数值孔径，以适应不同物镜的需要。
5.2 显微镜观察 一般情况下，特别是初学者，进行显微镜观察时，应遵守从低倍镜到高倍镜，再到油镜的观察程序。
因为低倍数物镜视野相对较大，易发现目标和确定检查的位置。
5.2.1低倍镜观察将标本片置于载物台上，用弹簧夹固定，移动推进器，使观察对象处于物镜正下方。
旋动粗调螺旋，使物镜与标本片距离约lcm(单镜筒显微镜)或0.5cm(双镜筒显微镜)，再以粗螺旋调节，使镜头缓慢升起(单镜筒)，或使载物台缓慢下降(双镜筒)，直到物像出现后再用微螺旋调节使物像清晰。
然后移动标本玻片，将观察目标移至视野中心后，仔细观察与绘图。
5.2.2高倍镜观察由低倍镜直接转换成高倍镜至正下方。
转换时，需用眼睛于侧面观察，避免镜头与玻片相撞。
调节聚光器和光圈使视野亮度适宜，而后微调细螺旋使物像清晰。
利用推进器移动标本找到需要观察的部位，并移至视野中心仔细观察或准备用油镜观察。
5.2.3油镜观察先将光圈开至最大，集光器升至最高位，调节好光源，使照明亮度最强。
在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节螺旋将镜筒远离载物台，然后在标本上滴加香柏油(切勿过多，否则视野模糊)，转换油镜头，从侧面注视，小心将之浸入油滴中，使其几乎与标本片相接触为度(注意：切不可将油镜镜头压到标本，否则不仅压碎玻片，还会损坏镜头)。
用粗螺旋缓慢升起镜筒(单镜筒)或下降载物台(双镜筒)，至物像出现后，再以细螺旋调至物像清晰。
如果油镜已离开油面而仍未见物像，可再将镜头浸入油中，重复以上操作至物像清晰为止。
5.3显微镜用后的处理观察完毕，台起镜头，立即用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸取少许二甲苯(香柏油溶于二甲苯)或乙醚乙醇混合液擦去镜头上的残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。
严禁用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头。
用绸布清洁显微镜的金属部件。
将各部分还原，将物镜转成“八”字形，再将载物台下降至最低，降下聚光器，以免与物镜相撞，反光镜垂直于镜座。
套上镜套，放回柜内或镜箱中。
6实验结果与报告(1)分别绘出用油镜观察到的细菌的形态图。