4细胞生物学研究方法答案
细胞生物学问答(全)
>> 1. 细胞概述1. 胡克和列文虎克发现细胞的动机是不同的，你对此有何感想?（答案）答：胡克当时的目的只是想弄清楚为什么软木塞吸水后能够膨胀，并且能够堵塞住暖水瓶中的气体溢出而保温。
列文虎克是为了保证售出的布匹质量，用显微镜检查布匹是否发霉。
正是由于他们的观察力和对自然现象的好奇心，以及对事业的责任感才导致细胞的发现。
2. 为什么恩格斯对细胞学说给予与此高的评价?（答案）答：因为细胞学说的提出解决了生命的共同起源，即生命的同一性问题。
3. 如何理解人才、理论和技术在科技发展中的作用?（答案）答：从细胞的发展史可看出: 人才是关键，是原动力，理论是指导，指引方向，技术是突破点。
4. 证明最早的遗传物质是RNA而不是DNA的证据是什么?（答案）答：核酶的发现。
所谓核酶就是具有催化活性的RNA分子。
5. 举例说明细胞的形态与功能相适应。
（答案）答：细胞的形态结构与功能的相关性与一致性是很多细胞的共同特点。
如红细胞呈扁圆形的结构，有利于O2和CO2的交换;高等动物的卵细胞和精细胞不仅在形态、而且在大小方面都是截然不同的，这种不同与它们各自的功能相适应。
卵细胞之所以既大又圆，是因为卵细胞受精之后，要为受精卵提供早期发育所需的信息和相应的物质，这样，卵细胞除了带有一套完整的基因组外，还有很多预先合成的mRNA和蛋白质，所以体积就大; 而圆形的表面是便于与精细胞结合。
精细胞的形态是既细又长，这也是与它的功能相适应的。
精细胞对后代的责任仅是提供一套基因组，所以它显得很轻装; 至于精细胞的细尾巴则是为了运动寻靶，尖尖的头部，是为了更容易将它携带的遗传物质注入卵细胞。
6. 真核细胞的体积一般是原核细胞的1000倍，真核细胞如何解决细胞内重要分子的浓度问题?（答案）答：出现了特化的内膜系统，这样，体积增大了，表面积也大大增加，并使细胞内部结构区室化，一些重要分子的浓度并没有被稀释。
7. 相邻水分子间的关系是靠氢键维系的，这种氢键赋予水分子哪些独特的性质，对于生活细胞有什么重要性?（答案）答：首先，氢键能够吸收较多的热能，将氢键打断需要较高的温度，所以氢键可维持细胞温度的相对稳定。
第三章细胞生物学研究方法习题及答案
第三章细胞生物学研究方法习题一、选择题1 正常细胞培养的培养基中长需加入血清，主要是因为血清中含有（C ）A. 氨基酸B. 核酸C.生长因子D.维生素2 冷冻蚀刻技术主要用于（A ）。
A.电子显微镜B. 光学显微镜C.原子力显微镜D.激光共聚焦显微镜3 建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞是通过下列哪种技术构建的？（A ）A. 细胞融合B. 核移植C. 病毒转化D. 基因转移4 关于光镜的使用，下列哪项有误？（C ）A. 观察标本时，应双眼同时睁开、双手并用B. 按照从低倍镜到高倍镜到油镜的顺序进行操作C. 使用油镜时，需要在标本上滴上香柏油，将聚光器降至最低，光圈全部开放。
5 为了实现细胞内某种蛋白质的亚细胞精细定位，可对该蛋白进行标记，下面哪种标记可行（C）A. GFP标记B. 免疫荧光标记C. 免疫电镜技术D. 荧光染料直接染色6 为了提高雌性乳牛出生的比例，可在体外将携带X染色体和Y染色体的镜子分离开，进行人工授精。
最好的分离方法使（A ）A. 流式细胞分选术B. 离心技术C. 细胞电泳D. 层析7 为了观察病毒，可通过何种方法进行观察（B ）A. 相差显微镜观察B. 负染色后用电镜观察C. 激光共聚焦显微镜观察D.以上都错8 以下哪些技术一般不用于分离活细胞？（CD ）（可多选）A. 流式细胞技术B. 细胞电泳C. 超速离心D.差速离心9 某研究生为了研究一特定膜蛋白的胞质结构域的功能，需要制备和分离外翻的细胞膜泡，为了获得无污染的外翻膜泡，下列选项中，哪些是他在实验中有可能使用到的?（BD ）（可多选）A. SDSB. 凝集素C.流式细胞仪D. 柱层析10 绿色荧光蛋白GFP（Green Fluorescent Protein）基因与目的基因融合后，转入细胞后可以（ABD ）（可多选）A. 检测融合蛋白在细胞中的准确定位B. 检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的含量C. 检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的分子结构D. 检测目的蛋白质在细胞中的表达量E. 以上答案都不对二、填空题1 流式细胞仪可以定量测定细胞中的DNA，RNA或某种特异蛋白的含量及细胞群体中上述成分含量不同的细胞数量。
细胞生物学研究方法
一、填空题1.透射电子显微镜由、、三部分所组成。
2.在酵母人工染色体制备过程中，要使用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为，并且进行观察和计数。
3.观察贴壁生长的培养动物细胞可用。
4.电子显微镜使用的是透镜，而光学显微镜使用的是透镜。
5.物质在紫外光照射下发出的荧光可分为和两种，其中需要将被照射的物质进行染色。
6.用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这是因为。
7.相差显微镜与普通显微镜的区别是用替代可变光阑，用代替普通物镜。
8.倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其。
9.显微镜的分辨本领是指能够能力，用来表示。
10.电子染色是用来增强电子的散射能力。
11.在光学显微镜下见到的结构称为，在电子显微镜下见到的结构称为。
12.细菌质膜的多功能性主要表现在:具有的呼吸作用，具有的分泌作用，具有的信号传导作用。
13.显微镜的分辨率约等于光波长的，通常把这一数值看成是光学显微镜分辩力的。
14.在同位素追踪技术中，用于研究DNA的同位素标记的前体物是。
15.单克隆抗体技术是将与无限繁殖的肿瘤细胞杂交的技术。
16.可用技术来研究质膜结构的不对称性。
17.乙醇沉淀DNA的主要原理是。
18.动物细胞培养所用的合成培养基中除含多种、和外，一般还需加入。
19.用荧光显微镜观察细胞时，经吖啶橙染色的细胞中的DNA发荧光，而RNA发荧光。
20.适于观察活细胞的光学显微镜有、和等。
21.分辨率是指人的肉眼或显微镜在25cm处能够分辨到的相邻两个物体间最近距离的能力。
人眼为，普通光学显微镜为，透射电子显微镜为，扫描隧道显微镜为，以紫外光为光源的光学显微镜为。
22.光学显微镜的组成主要分为、和三大部分，光学显微镜的分辩率由、和三种因素决定。
23.用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这是因为。
24.荧光显微镜是以为光源，而电子显微镜则以作为光源。
25.电子显微镜按工作原理和用途的不同可分为和。
26.利用超速离心机对细胞组分进行分级分离的常用方法有和。
完整最新细胞生物学第四版课后习题答案
答1838-1839年，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺提出一切动植物都由细胞发育而来，并由细胞和细胞产物所构成；每个细胞作为相对独立的单位，但也与其他细胞相互影响。1858年Virchow对细胞学说做了重要的补充，强调细胞只能来自细胞。
病毒与细胞的区别：
（1）病毒很小，结构极其简单；
（2）遗传载体的多样性
（3）彻底的寄生性
（4）病毒以复制和装配的方式增殖
4.试从进化的角度比较原核细胞﹑古核细胞及真核细胞的异同。
要 点 原 核 细 胞 真 核 细 胞 细胞核 无膜包围，称为拟核 有双层膜包围 染色体形状
数目
组成
1．根据细胞生物学研究的内容与你所掌握的生命科学知识，客观、恰当地评价细胞生物学在生命科学中所处的地位，以及它与其他学科的关系。
答细胞生物学是一门从细胞的显微结构、超微结构和分子结构的各级水平研究细胞的结构与功能的关系，从而探索细胞生长、发育、分化、繁殖、遗传、变异、代谢、衰亡及进化等各种生命现象规律的科学。
2.载体蛋白参与的有主动运输和协助扩散，在运输过程中与相应的分子结合，并且会移动。在主动运输过程中由低浓度侧向高浓度运动，且消耗代谢能量；在协助扩散过程中，由高浓度侧向低浓度侧运动，不消耗代谢能。（注;协助扩散也属于被动运输）
载体蛋白：通透酶
多次跨膜蛋白
通过构象改变进行跨膜转运
高度特异性，可饱和性，存在竞争性及非
功能：实现红细胞质膜的刚性与韧性，维持红细胞的形态
第五章
1.比较载体蛋白与通道蛋白的特点。
相同点：化学本质均为蛋白质、分布均在细胞的膜结构中、都有控制特定物质跨膜运输的功能
细胞生物学第四版课后题答案全
细胞生物学（第四版）课后思考题答案仅供参考目录第一章绪论 (1)1、根据细胞生物学研究的内容与你掌握的生命科学知识，恰当的评价细胞生物学在生命科学中所处的地位，以及它与其他学科的关系。
(1)2、如何认识细胞学说在细胞学乃至生物学发展简史中的重要意义？ (1)3、试简明扼要地分析细胞生物学学科形成的客观条件，以及它今后发展的主要趋势。
..14、当前细胞生物学研究的热点课题中你最感兴趣的是哪些？为什么？ (1)第二章细胞的统一性和多样性 (1)1、如何理解“细胞是生命活动的基本单位”这一概念？ (1)2、为什么说支原体可能是最小最简单的细胞存在形式？ (2)3、怎样理解“病毒是非细胞形态的生命体”？试比较病毒与细胞的区别并讨论其相互的关系。
(2)4、试从进化的角度比较原核细胞。
古核细胞及真核细胞的异同。
(2)第三章细胞生物学研究方法 (3)1、举例说明电子显微镜技术与细胞分子生物学技术的结合在现代细胞生物学研究中的应用。
(3)2、光学显微镜技术有哪些新发展?它们各有哪些突出优点? 为什么电子显微镜不能完全代替光学显微镜? (3)3、为什么说细胞培养是细胞生物学研究的最基本的技术之一？ (3)4、研究细胞内大分子之间的相互作用与动态变化涉及哪些实验技术？他们各有哪些优缺点？ (3)5、什么是模式生物？举例说明模式生物的使用在细胞生物学研究中的作用。
(3)6、功能基因组学的基本研究思路与基本方法是什么？为什么说它与细胞生物学的发展密切相关？ (4)第四章细胞质膜 (4)1、从生物膜结构模型的演化，谈谈人们对生物膜的认识过程。
(4)2、膜脂有哪几种基本类型？他们各自的结构特征和功能是什么？ (4)3、何谓内在膜蛋白? 内在膜蛋白以什么方式与膜脂相结合? (4)4、生物膜的基本结构特征是什么？这些特征与它的生理功能有什么联系？ (4)膜的流动性：生物膜的基本特征之一，细胞进行生命活动的必要条件。
第二章细胞生物学研究方法
第二章细胞生物学研究方法1．举例（3～5个）说明研究方法的突破对细胞生物学发展的推动作用。
答：①细胞培养技术，…②离心分离技术，…③流式细胞分离技术，…④基因敲除技术，…⑤干细胞培养技术，…⑥……2．为什么说细胞培养是细胞生物学研究的最基本技术之一？3．用什么方法追踪活细胞中蛋白质合成与分泌过程？包括哪几个步骤？答：追踪活细胞中某种蛋白质合成与分泌的过程一般采用同位素示踪技术。
其基本步骤是：①将放射性同位素标记的氨基酸(3H－亮氨酸)加到细胞培养基中，在很短时间内使这些与未标记的相应氨基酸化学性质相同的标记分子进入细胞(称为脉冲标记)；②除去培养液并洗涤细胞，再换以未标记氨基酸的培养基培养细胞，已进入细胞的标记氨基酸将被蛋白质合成系统作为原料加以利用，掺入到某种新合成的蛋白质中；③每隔一定时间取出一定数量的细胞，利用电镜放射自显影技术探查被标记的特定蛋白质在不同时间所处的位置。
通过比较不同时间细胞取样的电镜照片就可以了解细胞中蛋白质合成及分泌的动态过程。
4. 图2-3的解释。
答：两个儿童共同振动一根绳子产生的波动类似于光子光子和电子形成的波，以此说明物体的大小对波的干扰。
(a)两个儿童振动绳子产生的特征波长;(b)向绳子波中扔进一个球或一个物体，如果扔进物体的直径与绳子波长相近，就会干扰绳子波的移动;(3)如果扔进一个垒球或其他物体比绳子波长小得多，对绳子波的移动只有很小或没有干扰;(d)如果将绳子快速振动，波长就会大大缩短;(e)此时扔进垒球就会干扰绳子波的移动。
5．为什么电子显微镜需要真空系统(vacuum system)?答：由于电子在空气中行进的速度很慢，所以必须由真空系统保持电镜的真空度，否则，空气中的分子会阻挠电子束的发射而不能成像。
用两种类型的真空泵串连起来获得电子显微镜镜筒中的真空，当电子显微镜启动时，第一级旋转式真空泵(rotary pump)获得低真空，作为二级泵的预真空；第二级采用油扩散泵(oil diffusion pump)获得高真空。
《细胞生物学》学习题解答
第一章：绪论1、填空题：1、细胞生物学是细胞整体、超微结构和分子水平上研究及其规律的科学。
、2、名词解释：1、细胞学说（cell theory）3、选择题：1、现今世界上最有影响的学术期刊是。
a：Natune b: Cell c: PNAS d: Science2、自然界最小的细胞是（a）病毒（b）支原体（c）血小板（d）细菌4、是非题：1、现代细胞生物学的基本特征是把细胞的生命活动和亚细胞的分子结构变化联系起来。
…………………………………（）5、问答题：1. 当前细胞生物学研究的热点课题哪些？2. 细胞学说的基本要点是什么？细胞学说在细胞学发展中有什么重大意义？3. 细胞生物学的发展可划分为哪几个阶段？各阶段的主要特点是什么？第二章：细胞基本知识概要1、名词解释：1. 血影（Ghost）2. 通道形成蛋白（Porin）3. 纤维冠（fibrous corona）2、选择题：1、立克次氏体是（a）一类病毒（b）一种细胞器（c）原核生物（d）真核生物2、原核细胞的呼吸酶定位在（a）细胞质中（b）质膜上（c）线粒体内膜上（d）类核区内3、最小的细胞是（a）细菌（b）类病毒（c）支原体（d）病毒4、在英国引起疯牛病的病原体是：（a）朊病毒（prion）（b）病毒（Virus）（c）立克次体（rickettsia）（d）支原体（mycoplast）5、逆转病毒（retro virus）是一种（a）双链DNA病毒（b）单链DNA病毒（c）双链RNA病毒（d）单链RNA病毒6、英国疯牛病病原体是（a） DNA病毒（b） RNA病毒（c）类病毒（d）朊病毒7、线虫基因组的全序列测定目前已接近尾声，发现其一共约有（）种的编码基因（a） 6000（b） 10000（c） 20000（d） 500008、原核细胞与真核细胞虽有许多不同，但都是（a）核仁（b）核糖体（c）线粒体（d）内质网9、前病毒是（a） RNA病毒（b）逆转录RNA病毒RNA病毒（c）整合到宿主DNA中的逆转录DNA（d）整合到宿主DNA中的DNA病毒3、是非题：1.类病毒仅由裸露的DNA所构成，不能制造衣壳蛋白。
细胞生物学研究方法第四部分
视紫红质C端多位点的Ser/Thr残基磷酸化 抑制蛋白识别光受体的上述磷酸化位点
胞内受体 细胞表面受体
不同细胞对同一信号可能有不同受体，例如乙酰胆碱的骨骼 肌受体引起收缩，心肌受体则降低收缩频率。
同一信号在不同细胞可能引起不同的反应。
不同信号与各自受体结合后可能引起相同的反应。例如肝细 胞肾上腺素或胰高血糖素激活各自受体后，都能使糖元降解
通过细胞内受体介导的信号传递
以上功能并不是由Ca2+单独实施的，而是必需依赖于各
种钙结合蛋白。
CALMODULIN
钙调素广泛存在于动 植物细胞和原生动物， 是真核细胞的保守蛋 白之一。
Ca2+-CaM 复合体 可以 与蛋白激酶,离子通道, 或质膜的钙转运体系 相互作用。
细胞中某一微区Ca2+探针Fluo-3的荧光强度骤升一倍， 随后又在20ms内消失，故称钙火花。
IgE-抗体复合物、f-蛋氨酸多肽、乙酰胆碱等 G蛋白偶联的受体介导的细胞信号通路
cAMP信号通路 磷脂酰肌醇信号通路
G 蛋白
GTP结合蛋白 有小分子G蛋白（Ras）和异源三聚体G蛋白。前者
为单一肽链，在受体酪氨酸激酶的信号转导通路中 作为分子开关；后者由αβγ亚基组成，α亚基具 GTP酶活性。 具分子开关作用：α-GDP为“关”；α-GTP为“开”
为什么硝酸甘油能用于治疗心绞痛患者？
由 神经元产生的NO刺激突触前末梢使谷氨酸递 质不断释放，导致记忆的增强
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第二章细胞生物学研究方法一、名词解释1、resolution：分辨力是指显微镜或人眼在25cm的明视距离处，能清楚地分辨被检物体细微结构最小距离的能力。
能够区分的两点间的距离越小，表示分辨力越高。
2、显微结构：通过光学显微镜所观察到的样品的各种结构，如细胞的大小、外部形态以及细胞核、线粒体、高尔基复合体、中心体等内部构成都属于显微结构。
3、超微结构：也称亚显微结构。
指在电子显微镜下所观察到的细胞结构，如细胞核、线粒体、高尔基复合体、中心体、核糖体、微管、微丝等细胞器的微细结构。
4、细胞培养：指活细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞、模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养皿中继续生存、生长和繁殖的方法。
5、原代培养：指从机体组织中取材后接种到培养基中所进行的细胞培养，即直接取材于机体的细胞培养。
所形成的细胞称原代细胞，它是在体外培养任何一种体细胞所必须经历的阶段和传代培养的基础。
6、传代培养：指当原代培养的细胞在培养瓶中生长、增殖到一定密度后，一分为二或以其他比例分装或转移到2个以上的培养瓶中所进行的再培养。
7、细胞融合：又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，2个或2个以上的细胞合并成为一个细胞的现象。
8、cell line ：原代培养首次传代成功后，则称之为细胞系。
如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力，能持续生存的细胞系，则称为连续细胞系或无限细胞系。
二、选择题【A1型题】1、A；2、B；3、B；4、A；5、C；6、D；7、A；8、D；9、C；10、D；11、C；12、A；13、A；14、B；15、C；16、A；17、E；18、A；19、C；20、D；21、C；22、E；23、A；24、D；25、B；26、E【A2型题】1、E；2、D；3、C；4、D；5、A；6、B；7、C；8、D；9、D；10、A【X型题】1、ACE；2、CDE；3、AE；4、CE；5、ABCD；6、ABC；7、ABCED；8、ACD；9、ABCD三、填空题1、普通显微镜相差显微镜暗视野显微镜荧光显微镜2、照明系统光学放大系统机械装置系统3、电子照明系统电磁透镜成像系统真空系统记录系统电源系统4、物镜和照明系统的位置颠倒5、扫描电子显微镜透射电子显微镜6、0.1μm 0.1mm 3nm7、差速离心法密度梯度离心法8、0.2μm R=0.61λ／N.A. N.A.=n·sinα／29、细胞化学法荧光细胞化学和免疫荧光镜检术放射自显影技术细胞显微分光光度测定技术流式细胞计量术细胞组分的分级分离法10、冰冻蚀刻11、原代培养传代培养12、单层生长形态变成多态性具有接触抑制现象13、体外环境不能与体内的条件完全等同四、判断题1、√；2、×；3、√；4、×；5、√；6、×；7、√；8、√；9、√；10、×；11、√；12、×；13、×；14、×五、简答题1、光学显微镜上调节光线强弱的装置有反光镜、聚光镜和光阑。
（1）反光镜：反光镜是安装在镜台下面、镜柱前方的—面可转动的圆镜。
用来调节光线，能将来自不同方向的光线收集起来反射到聚光镜中。
（2）聚光镜：聚光镜是位于镜台下方的—组透镜，用以汇集光线使其成束，增强照明度和视野的亮度。
（3）光阑：光阑是位于聚光镜底部的一个圆环状结构，装有多片半月形的薄金属片，叠合在中央形成弧形孔。
圆环外源的突起小柄可调节金属片的分开或合拢，作用是调节光线强弱，使物像变得清晰。
2、电镜和光镜从光源、透镜、成像和分辨力四方面不同。
（1）光源的不同：光学显微镜利用可见光作为光源，照明部分包括反光镜、聚光镜和光阑，可对入射光线进行集光并调节其强弱。
电镜是以电子束代替光源，以一根钨丝作为阴极发射电子，电子受到阳极吸引而加快速度，加速的电子通过阳极的微孔形成电子束，构成照明源。
（2）透镜的不同：光学显微镜的透镜由物镜、目镜组成，每种镜头由2～3个玻璃透镜构成，由于可见光能在空气中直线前进，所以玻璃透镜可直接在空气中工作。
电子显微镜使用产生轴对称磁场的精密线圈作为电磁透镜，以电磁场透镜代替玻璃透镜，但因为电子撞击空气分子将发生散射而不能直线前进，所以，镜筒中的空气必须抽出，保持高度真空。
（3）成像的不同：光学显微镜是通过物镜和目镜的—组玻璃透镜将标本上的微小物体放大成像。
在电子显微镜下，标本通过一个气闸送入真空镜筒，经聚光镜汇聚的平行电子束被物镜、中间镜和投影镜多级放大，最后在荧光屏上成像即时观察，或投射到照相底片上成像使底片感光作为永久记录。
（4）分辨力不同：光学显微镜分辨力可达200nm（油镜），电子显微镜分辨力为0.1 nm。
3、如果含有很多的其他分子，会与电子发生碰撞，使电子散射，引起眩光，影响成像质量；碰撞也会使电子束不稳定，产生闪烁现象；灼热的灯丝遇气体也易腐蚀和断裂。
4、因为电镜是电子成像。
肉眼无法观察带有“样品信息”的电子束。
所以要有记录系统来记录成像结果。
5、照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人的眼睛。
6、冰冻蚀刻技术亦称冰冻断裂。
标本置于干冰或液氮中，进行冰冻。
然后用冷刀骤然将标本断开，升温后，冰在真空条件下迅即升华，暴露出了断裂面的结构。
冰升华暴露出标本内部结构的步骤称为蚀刻。
蚀刻后，再向断裂面上喷涂一层蒸气碳和铂。
然后将组织溶掉，把金属薄膜剥下来，此膜即为复膜。
复膜显示出了标本蚀刻画的形态，可置于电镜下观察。
电镜下的影像即代表标本中细胞断裂面处的结构。
7、高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。
但是如果把活细胞拿到体外培养进行观察和研究，则要方便得多，培养中的细胞不受体内复杂环境的影响，人为改变培养条件（如物理、化学、生物等外界因素的变化）即可进一步观察细胞在单因素或多因素影响下的生理功能变化。
活细胞离体后要在一定的生理条件下才能存活和进行生理活动，特别是高等动植物细胞要求的生存条件极其严格，稍有不适就要死亡。
所以，细胞培养技术就是选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的最基本技术之一。
8、体外细胞培养技术的一般过程是：①准备工作，包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。
②取材：在无菌环境／从机体取出某种组织细胞，经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接人培养器血中，这一过程称为取材。
如果是细胞株的扩大培养，则无取材这一过程。
③培养：将取得的组织细胞接人培养瓶或培养板中的过程称为培养。
如进行组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。
如进行分散细胞的培养，一般应在接种于培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接种于培养器皿并直接加入培养基。
细胞种于培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。
9、体外培养细胞必须注意三个环节：物质营养、生存环境和废物的排除。
体外培养细胞所需的营养是由培养基提供的。
培养基通常含有细胞生长所需的氨基酸、维生素和微量元素。
一般培养细胞所用的培养基是合成培养基，它含有细胞生长必需的营养成分：但是在使用合成培养基时需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清为主。
这是因为血清中含有多种促细胞生长因子和一些生物活性物质。
由于血清中含有一些不明成分，对于特殊目的细胞培养是不利的。
为此，研究人员正在探索无血清培养细胞的条件，并已经取得一些进展。
由于机体内的细胞生长通常需要不同的细胞因子进行调节，所以，在无血清培养时仍然需要添加必要的因子，包括促细胞生长因子（如EGF），促贴附物（如层黏连蛋白）和其他活性物质（如转铁蛋白）。
无血清培养排除了有血清培养时血清中不明因素的干扰，使实验结果更加可靠。
体外细胞培养必须模拟体内细胞生长的环境。
环境因素主要是指无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境。
气体主要有两种，即O2和CO2。
后者对于维持细胞培养液的酸碱度十分重要。
活体内生长的细胞所产生的代谢物和废物通过一定的系统进行利用和排除。
体外培养细胞产生的代谢物和废物积累在培养液中，所以定期更换培养液，对于体外细胞培养也是至关重要的。
六、问答题1、分辨力表示的是能够区别两个点间最近距离的能力，所以广值越小，分辨力越高。
从分辨力的表达式来看，NA越大，分辨力越高，或者波长越短，分辨力越高。
当以可见光作光源，玻璃透镜的最大分辨力是多少呢？应从以下几个方面来考虑这一问题。
首先应如何尽可能地缩短波长。
可见光的波长范围是400～700nm，而可见光中的蓝色光波长最短，为450nm，所以光镜使用时应滤去其他杂色光。
第二是使NA的数值尽可能大，因为最好的玻璃透镜的镜口角是70°，所以sinα的最大值为0.94，空气的折光率（n）为1，因此玻璃透镜的最大数值孔径为0.94。
这样，我们可以计算光镜的最大分辨力了：假定用最好的玻璃透镜，角孔径为70°，用最短的可见光——蓝色光的波长为450nm，用空气作为光的折射介质，则最大分辨力为R=0.61λ／N.A.=0.61×450／0.94=292nm。
光镜中的油镜可用油作为光折射的介质，由于油的折光率为 1.5，所以用油镜时，分辨力R=0.61λ／N.A.=0.61×450／1.5×0.94=196nm=0.2μm在光学显微镜中，用紫外光作光源可使分辨率提高到0.1μm。
紫外光的波长较短，约为200～300nm。
但是，紫外光是肉眼不可见的，必须通过照相。
另外，用紫外光源时需用石英透镜，价格较高。
2、基本原理：动物高度分化的细胞核具有全套的个体遗传信息，保持着全能性，有发育为完整个体的潜在能力。
基本步骤：（1）取出一只成年母羊的乳腺上皮细胞，在低血清浓度下进行体外培养。
（2）取出卵细胞供体母羊的卵母细胞进行去核处理。
（3）利用电融合技术使乳腺上皮细胞与去核卵母细胞进行电融合。
（4）将融合细胞在体外培养至囊胚期。
（5）将囊胚移植到母羊的子宫内，使其着床和发育，直至生出小羊。
主要技术：细胞培养；细胞融合；胚胎培养和胚胎移植。