反转录和逆转录的区别
分子生物学
整合(Integration) or 环化(circulation)
整合
整合酶
5. Transcription
From provirus to RNA
Poly (A)
U3携带一个启动子。多数情况下，只有左边LTR 的启动子具有活性，负责前病毒的起始转录
LTR同样可携带一个增强子 polyA主要生成位点位于右边LTR的R与U5的交界 处
Retrovirus/retroposon Reverse transcriptase Endogenous/Integration Open reading frame
siRNA miRNA piRNA
特点 产生 功能
特点
逆转录病毒 序列
逆转座子 逆转录酶
逆转录—— 整合
in E.coli
主要途径
repeats (δ) at each end
2 mRNA of Ty: 2 开放阅读框(Open reading frame, ORF) TyA: DNA结合蛋白; TyB: 具有RTase, protease, integrase活性
病毒样 颗粒
病毒样颗粒(Virus-like particle, VLP)
Transducing virus 携带癌基因(v-onc gene) 癌基因(v-onc gene)来自于宿主细 胞(host cell)的原 癌基因(c-onc gene)
7. 逆转座子Retroposon
LTR逆转座子:
1.也称为病毒超家族(viral superfamily) 2.序列组成和转座机制类似于逆转录病毒 3.失去感染性
Copia
序列特点: ~5kb; direct terminal repeat of 276 bp; 5 bp generated when integrated
分子生物学课件 第六章 转录与逆转录
⑷RNA聚合酶与启动子区的结合 原核生物：RNA聚合酶ββ’与-10区结合（σ 因子作用下） 真核生物：RNA聚合酶与TATA区结合（反式因 子作用下）
※增强子 • • • • 定义、结构： 作用机制： 特点： 代表：β-珠蛋白基因
四 终止子与抗终止 • 不依赖ρ因子的终止子：RNA3’成茎环，又 称内在终止子、强终止子
依赖ρ因子的终止
3.转录延伸：RNA聚合酶释放σ因子，核心酶 沿着模板DNA移动并使新生RNA 链不断伸长的过程。
• 4.转录终止：当RNA链延伸到终止位点时， RNA停止合成，转录泡瓦解， DNA链复原，新生RNA链和RNA 聚合酶将被释放下来。
※转录所需的酶与复合物
• RNA聚合酶：是转录过程中最关键的酶，主 要以双链DNA为模板，以4种核 苷三磷酸作为活性前体，并以 Mg2+/Mn2+为辅助因子，催化 RNA链的起始、延伸和终止， 它不需要任何引物，催化生成 的产物是与DNA模板链互补的 RNA。 ※原核生物只一种RNA聚合酶，真核生物有三种
第六章 转录与逆转录
重难点
转录后加工、真原核转录过程、增强子、终止与抗终止、 RNA聚合酶（真原核）、转录起始复合物
㈠转录 一 转录的定义与特点 1.转录的定义：以DNA为模板，在依赖DNA的 RNA聚合酶的催化下，以4种 NTP（ ATP、CTP、GTP和UTP ） 为原料，合成RNA的过程。
2.转录的特点： • 转录的不对称性：在RNA的合成中，DNA的两条链 中仅有一条链可作为转录的模 板。且多基因DNA中正负链可 相间排列 • 转录单向性：RNA5’→3’合成 • 转录连续性：共线性，RNA与DNA序列一一 对应,RNA链连续合成
• 依赖于ρ因子的终止：ρ结合RNA富C区， 发挥ATP酶、解旋酶 活性，又称弱启动子 ※真核的转录终止：终止修饰点处切离加尾 有些终止点的DNA序列缺乏共性，不能诱导转 录的自发终止，需要ρ因子的参与。 大肠杆菌ρ-依赖型终止子占所有终止子的一 半左右。
逆转录的概念
逆转录的概念
逆转录是一种生物学过程，指的是将RNA模板转化为DNA
的过程。
在逆转录过程中，逆转录酶（reverse transcriptase）
催化RNA的逆转录反应，将RNA转录成为相应的DNA串。
这个过程与正常的转录过程相反，正常的转录过程是将DNA
模板转录为RNA。
逆转录在病毒和某些真核生物中普遍存在。
在病毒中，逆转录是病毒复制过程中的关键步骤。
病毒通过侵害寄主细胞，将其RNA转录成为DNA，并将这段DNA插入
寄主基因组中，从而在细胞分裂过程中被复制并传递给细胞的后代。
在某些真核生物中，逆转录也扮演着重要的角色。
例如，在人类体内，逆转录酶参与垂直传递病毒（如HIV）和转座子
（如长末端重复元件，也称为LINE和SINE）的遗传物质。
逆转录是重要的研究工具，可以用于合成cDNA（互补DNA），这是一种重要的实验室技术，用于将RNA转录为相
应的DNA，以便进行基因表达和功能研究。
此外，逆转录酶
还在分子生物学的研究中用于扩增和克隆基因序列。
RT-PCR实验报告
逆转录pcrrt-pcr 为反转录rcr（reverse transcription pcr ）和实时pcr（real time pcr）共同的缩写。
逆转录pcr，或者称反转录pcr(reversetranscription-pcr, rt-pcr)，是聚合酶链式反应(pcr)的一种广泛应用的变形。
在rt-pcr中，一条rna链被逆转录成为互补dna，再以此为模板通过pcr进行dna扩增。
由一条rna单链转录为互补dna(cdna)称作“逆转录”，由依赖rna的dna聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，dna的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖rna的dna聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的pcr。
原先的rna模板被rna酶 h降解，留下互补dna。
rt-pcr的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的rna。
rt-pcr广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种rna的含量。
（检测基因表达的方法，参见northern blot法。
）rt-pcr有时候也会指代实时pcr(real-time pcr)。
为了与逆转录pcr相区别，通常被写作“定量pcr”(quantitative pcr)或者rtq-pcr(real-time quantitative pcr)。
实时pcr 实时pcr(real-time pcr)，属于定量pcr（q-pcr）的一种，以一定时间内dna的增幅量为基础进行dna的定量分析。
real time pcr 的定量使用萤光色素，目前有二种方法。
一种是在ds dna中插入特异的萤光色素；另一种使用一种能与增幅dna序列中特定寡核酸序列相结合的一种萤光探针（probe）。
real time pcr 与 reverse transcription pcr 相结合，能用微量的rna来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。
这两种rt pcr的组合又被称之为“定量rt-pcr（quantitative rt-pcr）”rt-pcr技术相关试剂oligo: 多聚体，相当于mrna引物amv（m-mlv）：逆转录酶dntp：脱氧核苷酸rnase：rna酶抑制剂pcr buffer：rt-pcr缓冲液mgcl2：2价镁离子pcr各步骤的目的（一）预变性：破坏dna中可能存在的较难破坏的二级结构。
分子生物学-名词解释
名词解释：核酸构造，性质与功能分子生物学:是从分子水平研究生命现象、生命的本质、生命活动及其规律的科学。
医学分子生物学:是从分子水平研究人体在正常和疾病状态下生命活动及其规律的一门科学。
它主要研究人体生物大分子和大分子体系的构造、功能、相互作用及其同疾病发生、开展的关系。
基因：是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位，是指DNA特定区段，是RNA和蛋白质相关遗传信息的根本存在形式。
大局部生物中构成基因的核酸是DNA, 少数生物〔如RNA病毒〕是RNA。
核酸的一级构造：核酸中核苷酸的排列顺序。
组成DNA分子的脱氧核糖核苷酸(dAMP, dGMP, dTMP, dCMP)的排列顺序。
组成RNA分子的核糖核苷酸(AMP, GMP, UMP, CMP)的排列顺序。
由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。
DNA的一级构造：四种脱氧核糖核苷酸(dAMP, dGMP, dTMP, dCMP)或四种碱基的排列顺序。
DNA三级构造：DNA分子在形成双螺旋构造的根底上，进一步折叠成超螺旋构造(supercoil) (原核细胞)，或在蛋白质的参与下，进展精细的包装(真核细胞)，所形成的空间构造。
超螺旋构造(superhelix 或supercoil)：DNA双螺旋链再盘绕即形成超螺旋构造。
正超螺旋(positive supercoil)盘绕方向与DNA双螺旋方同一样；负超螺旋(negative supercoil)盘绕方向与DNA双螺旋方向相反。
构造基因：在基因片段中，贮存着一个特定的转录RNA分子的DNA序列，这段序列决定该RNA分子的一级构造，就称为构造基因。
外显子〔exon):构造基因中在成熟RNA分子中保存的相对应的序列内含子(intron):是指RNA分子剪接时删除局部相对应的构造基因序列基因转录调控序列:与转录相关的、构造基因以外的序列启动子〔promoter):是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，位于构造基因转录起始点的上游，偶见位于转录起始点的下游。
逆转录
逆转录科技名词定义中文名称：逆转录英文名称：reverse transcription;RT其他名称：反转录定义：以RNA为模板，依靠逆转录酶的作用，以四种脱氧核苷三磷酸(dNTP)为底物，产生DNA链。
常见于逆转录病毒的复制中。
所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；基因表达与调控（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布图示逆转录reverse transcription：以RNA为模板合成DNA的过程，是RNA 病毒的复制形式，需逆转录酶的催化。
其过程先以经剪切作用除去内含子的成熟mRNA为模板，合成RNA/DNA杂化双链，然后水解RNA链，再以剩下的DNA单链为模板合成DNA双链。
多次复制后形成多个DNA双链,然后以这些DNA双链中的每双链的其中的单条(该条与原始病毒RNA链互补)为模板,复制出RNA(该RNA与原始病毒RNA相同,不考虑遗传变异)艾滋病病毒(HIV)就是一种逆转录病毒.1．概念逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式。
[注]：逆转录与反转录不等同。
逆转录是RNA类病毒自主行为，在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程；反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之为模板人工合成DNA的过程。
二者虽同为RNA→DNA的过程，但地点不同，相对性的来说，逆转录在体内，反转录在体外。
2．逆转录酶与逆转录过程逆转录过程由逆转录酶催化，该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。
合成的DNA链称为与RNA互补DNA （cDNA）。
逆转录酶存在于一些RNA病毒中，可能与病毒的恶性转化有关。
人类免疫缺陷病毒（HIV）也是一种RNA病毒，含有逆转录酶。
在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有逆转录酶，推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。
大多数反转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性。
反转录的原理及应用
2016年11月 吴思思
RNA反转录
本实
验所
用的
酶
技术
原 理
2
4
1
3
6 5
过 程
页码
意注意Biblioteka 义事项RNA反转录原理
反转录是以RNA为模板,通过反转录酶 (Reversetranscripatase),合成DNA的过程， 是DNA生物合成的一种特殊方式。
问题1：反转录酶是指代哪些？是特定的一个还是多个酶共同作用？ 答：反转录酶有两种，一种是来源于哺乳动物，另一种来源于鸟类。哺乳类的反转录酶都是一条多肽 链；鸟类的反转录酶则由两上亚基结构。所以反转录酶是特定的一个酶，但是它具有多种活性，在反 转录不同阶段中发挥不同的作用。
步骤2 反应结束后在冰上急速冷却，并加入以下试剂：
得到cDNA
引物 RNA 酶抑制剂 反转录酶 处理过RNA酶的水
技术应用——RT-PCR
PCR仪
1、按 PCR 仪正面左下角电源开关，启动 PCR 仪。 2、放 PCR 离心管。 3、反向重复第二步骤将顶盖板向后拉，盖 好顶盖。
4、按 F2“Create”新建一个扩增的 PCR 程序。 5、按控制台面右方上下左右方向键，可随
O(∩_∩)o
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RNA反转录原理
[注]：反转录与逆转录不等同。反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因的信使 RNA，并以之为模板人工合成DNA的过程；逆转录是RNA类病毒自主行为，在整合到宿主细胞内以RNA为 模板形成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程，但地点不同，相对性的来说，反转录在体外，逆转 录在体内。
意移动编辑位置，输入需要的温度、时间、 循环数等。
逆转录PCR原理及步骤
逆转录PCRRT-PCR和逆转录PCR是同义词，已合并。
RT-PCR 为反转录PCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写。
逆转录PCR，或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
目录1mode逆转录PCR2实时PCR3RT-PCR技术相关试剂4PCR各步骤的目的1 4.1 预变性1 4.2 三种循环1 4.3 延伸时间原因1 4.4 PCR引物的选择1 4.5 注意事项1mode逆转录PCR由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。
原先的RNA模板被RNA酶 H降解，留下互补DNA。
RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。
RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。
（检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。
常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus,AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia vrius,MMLV）反转录酶。
RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)。
为了与逆转录PCR相区别，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。
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反转录和逆转录的区别
二者虽同为RNA→DNA的过程，但地点不同，相对性的来说，逆转录在体内，反转录在体外。
逆转录是某些病毒的自主行为，如逆转录病毒，它们在整合到宿主细胞内前以RNA为模板形成DNA 的过程；反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之为模板人工合成DNA的过程。
反转录和逆转录的区别
逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA 合成。
是某些病毒的复制形式，需逆转录酶的催化。
艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的逆转录病毒。
逆转录过程由逆转录酶催化，此酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。
合成的DNA链称为与RNA互补DNA。
逆转录酶存在于一些病毒中，可能与病毒的恶性转化有关。
人类免疫缺陷病毒（HIV）也是一种RNA病毒，含有逆转录酶。
在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有逆转录酶，例如端粒酶就是一种逆转录酶，推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。
反转录是以RNA为模板，通过反转录酶，合成DNA的过程。
是DNA生物合成的一种特殊方式。
反转录是进行基因工程过程中，以RNA为模板提取出DNA遗传信息的过程。