专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
➢实验目的 从土壤中分离分解尿素的细菌并计数
培养基中以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生
➢实验原理 物才能分解尿素，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿
素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所 以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
➢实验材料 小铁铲、培养皿、试管、移液管、锥形瓶等
（二）制备培养基 实验组：制备选择培养基 （尿素为唯一氮源的培养基）
筛选出能够分解尿 素的细菌
对照组：制备完全培养基 （牛肉膏蛋白胨培养基）
与选择培养基做对照， 检测选择培养基是否具 有选择作用
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
判断选择培养基是否 具有筛选作用
选择培养基 完全培养基
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液
第一次做该实验时，可以将稀释的范围放宽一点，如可 以将103 ~ 107分别涂布到平板上培养。保证获得菌落数 在30～300之间、适于计数的平板
➢4】微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
➢实验步骤 实验结果
实验流程：
土壤取样 制备培养基 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察
菌落计数
（一）土壤取样 从富含有机物、潮湿、酸碱度适中的土壤中取样。铲 去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的
信封中。 铁铲和信封都要灭菌
“微生物的天然培养基”
数量最大、种类最多
大约70%—90%是细菌 细菌适宜在富含有机质，酸碱度接近中性的潮湿土壤 中生长，绝大多数分布在约3~8cm的土壤层。
专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(打印)
雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名1专题２ 课题2 测定微生物的数量雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名2雪宫中学学案：生物技术实践班级姓名Array3雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名4四． 实验中应注意的问题1． 设置对照。
怎样设置对照？ 2． 无菌操作(1)建立“有菌观念”。
实验器材、实验室、实验者、空气都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格消毒灭菌。
(2)整个实验操作过程要严格无菌操作，实验器材灭菌，包括取土样的小铁铲和盛土样的信封使用前也要灭菌。
(3)应在火焰旁称取土壤。
在火焰附近将称好的土样倒人烧瓶中，塞好棉塞。
(4)在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。
(5)操作过程中呼吸不要频繁，不要讲话，以免空气和口腔中的微生物随气流而进入试管、培养皿等。
(6)研究未知的微生物，一定要注意进行规范的无菌操作，以防被致病的微生物感染。
实验后，一定要洗手。
五．结果分析与评价1．如果对照组有杂菌菌落，则实验的实则值 （偏高、偏低） 如果培养基中混有了其它氮源，则实验的实则值 （偏高、偏低），此时，能否筛选出能分解尿素的微生物？2．如果同一稀释浓度下的三个培养皿上菌落数相差过大，反应了什么问题？雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名5练习题1．在培养基中加高浓度的生理盐水、甘露糖醇和酸碱指示剂可以选择鉴别A ．酵母菌B ．霉菌C ．大肠杆菌D ．金黄色葡萄球菌 2．测定土壤中细菌的数量一般选用多大倍数稀释液进行平板培养A ．101、102和103倍 B ．102、103和104倍 C ．102、104和106倍 D ．104、105和106倍 3．用以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将 A ．变蓝色 B ．变红色C ．变黑色D ．变棕色4．用101、102和103倍稀释液进行涂布培养细菌后，其菌落平均数为2 890、271和50则菌落总数为A ．2.89×104个／mLB ．2.71×104个／mLC ．6.0×104个／mLD ．3.85×104个／mL 5．在一个“淀粉一琼脂”培养基的5个圆点位置，分别用不同方法处理，将此实 验装置放在37℃恒温箱中，保温处理24h 后，将碘液滴在培养基的5个圆点上，其实验结果记录于下表：的面包霉的分泌物分别是 A ．棕黄色、棕黄色、淀粉酶 B ．蓝黑色、棕黄色、麦芽糖酶 C ．棕黄色、蓝黑色、淀粉酶 D ．棕黄色、蓝黑色、麦芽糖酶6．实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与下图中的链霉素带接触)，将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
2.制备培养基：
制备两种培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基（完全培养基）—对照组 尿素为唯一氮源培养基（选择培养基）-实验组
将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨 培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养 基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以 作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选 择作用。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 大肠杆菌的菌落呈黑色,有或无金属光泽
六.结果分析与评价
（一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明 培养基没有被杂菌污染；
牛肉膏蛋白胨培养基(完全培养基)中菌落数目 明显多于选择培养基，说明选择培养基已筛选出一 些菌落。
因此，还需借助生物化学方法对分离的细菌 作进一步的鉴定。(筛选后必鉴定)
五、课外延伸
1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还 需要借助 生物化学 的方法。
2、在细菌分解尿素的化学反应中，细 菌合成的 脲酶 将尿素分解成了 氨 。 氨会使培养基的碱性 增强 ，PH 升 高 。因此，我们可以通过检测培养 基 pH 变化来判断该化学反应是否发 生。
以防被
致病微生物
感染，实验
后一定要洗手。
当堂训练
1.使用选择培养基的目的是（ C ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加
以区别
2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分
别是( D )
A.CO2和N2 C.CO2和尿素
B.葡萄糖和NH3 D.葡萄糖和尿素
（二）统计菌落的数目
采用什么方法可以统计每克土壤样品中究 竟含有多少这样的细菌呢？
2-2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数研究思路（一）筛选菌株1、尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。
2、PCR技术中使用的耐高温的酶是，它是从中分离出来的。
科学家能从中把筛选出来是因为，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是_ 。
点评：生物适应一定环境，环境对生物具有作用。
所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
〖本课题使用的培养基——见旁栏资料〗〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的的是，琼脂的作用是。
〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。
如果具有，其选择机制是。
3、选择培养基是指特定种类的微生物生长，同时其他种类微生物生长的培养基（二）统计菌落数目1、在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是。
除此之外，也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量2、统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够时，_ 。
通过统计，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
因此，恰当的是成功地统计菌落数目的关键。
3、．为保证统计结果准确，通常将都涂布在平板上，培养后再选择的平板进行计数。
4、在设计实验时，一定要涂布至少个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。
在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果，结果，意味着操作有误，需要重新实验。
〖思考3〗统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是_ 〖思考4〗第位同学的结果接近真实值。
你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需；第二位同学_ 。
5、统计的菌落数比活菌的实际数目。
因为当两个或多个细胞时，平板上观察到的只是菌落。
因此，统计结果一般用来表示。
专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(第1课时)
专题2 微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（高二生物）第1课时研究思路分离原理【学习目标】1 学生预习教材P21 “（一）筛选菌株”，能够整理归纳出实验室筛选微生物的原理，能简单描述如何能得到耐高温的DNA聚合酶，如何分离Taq细菌。
2 学生预习教材P22结合右侧培养基配方基的内容，结合培养基配置及分类能整理归纳选择性培养基的原理及配制要求3学生预习教材P21“课题背景”内容结合选择性培养基的作用能阐述分离分解尿素的细菌的原理及培养基配置中各物质提供的成分3学生预习教材P22，整理归纳统计菌落数目的方法4课堂上通过教师提示，学生合作探究，学生能够对统计菌落数目的方法进行区别,填表整理归纳两种方法的比较5课堂上通过观看视频，学生能够掌握统计菌落数目的正确操作与计算6课堂上通过教师提示，学生合作探究，学生能够正确的设置实验对照重点选择性培养基的配制，菌落数目的统计难点菌落数目的统计【课前预习】一筛选菌株阅读教材P21 “（一）筛选菌株”，整理归纳出筛选菌株的基础知识1筛选菌株(1) 自然界中目的菌株的筛选①原理：根据目的菌对的要求，到相应的环境中去找。
②实例：DNA多聚酶链式反应（PCR）是一项的技术，要求使用。
能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的就是从热泉中筛选出来的(2)实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时________或________其他微生物生长。
(2)分解尿素的细菌的分离原理尿素是一种农业，只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成________，将尿素分解的反应式是_________________________________________。
2选择培养基在微生物学中，将允许__________种类的微生物生长，同时________或________其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
【土壤中分解尿素的细菌的分离和计数】一、研究思路1．筛选菌株尿素是一种重要的肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为和CO2，才能被植物利用，土壤中的这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。
可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。
(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_____ _生长的条件(包括营养、、pH等)，同时____ _或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
2．统计菌落数目(1)常用来统计样品中数目的方法是__________ _______。
即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中。
通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
例如每克样品中的菌株数= ,C代表 ,V代表 ,M代表。
通常统计出的菌落数比活菌的实际数目。
这是因为。
因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。
(2) 也是测定微生物数量的常用方法。
(3)细菌的数目还可以通过法来测定。
例如，测定饮水中大肠杆菌的数量，可将的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现色，可以根据培养基上的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。
在该实验中至少应取___个水样。
3．设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中___________对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需用______________________________ 作为空白对照。
(2)对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。
二、实验设计实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。
关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：1．土壤取样土壤微生物约70%～80%为，主要分布在距地表的近性土壤中。
2020-2021高二生物1学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析
2020-2021学年高二生物人教版选修1学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点一菌株的筛选与选择培养基1．筛选菌株(1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（2）实例：从热泉中筛选出Taq细菌。
热泉70～80 ℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。
（3）方法:利用选择培养基分离。
归纳总结：选择培养微生物的方法通常有两种：(1)可利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好"的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基；（2)可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质,经培养后，其他微生物生长受抑制,而分离对象却可乘机大大繁殖，在数量上占优势.2．选择培养基(1)概念：选择培养基指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
（2）选择培养基的制备原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某一化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。
(3)选择培养基的制备方法：在培养基中加入某种允许特定种类微生物生长，抑制或阻止其他种类微生物生长的化学成分。
（4)选择培养基的用途：使混合菌株中的目的菌变成优势菌，提高该菌的筛选率。
（5)实例:在培养基中以尿素为唯一的氮源可得到能利用尿素的微生物；在培养基中加入青霉素可分离得到酵母菌和霉菌。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基配方培养基组成提供的营养或作用KH2PO4 1.4 g、Na2HPO4 2。
1无机盐g、MgSO4·7H2O 0。
2 g葡萄糖10.0 g碳源尿素1.0 g氮源、碳源琼脂15.0 g凝固剂用蒸馏水定容至1 000 mL氢元素、氧元素尿素，以尿素为氮源,缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，会因缺乏氮源而不能生长繁殖，所以，用该培养基能够筛选出可分解尿素的微生物。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一、筛选菌株的思路1、自然界中目的菌株的筛选（1）原理：根据对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
2、实验室中目的菌株的筛选（1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
（2）方法：利用选择培养基分离。
选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。
尿素是一种重要的农业氮肥，尿素不能直接被农作物吸收，只有通过土壤中的细菌将尿素分解为氨后，才能被植物利用，土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。
可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。
（3）实例：①以尿素作为唯一氮源的培养基可以分离出分解尿素的细菌，因为只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用其中的氮元素。
②加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
③加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
④无氮源培养基可以分离固氮微生物。
⑤石油是唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。
⑥将培养基放在高温环境中培养，分离耐高温的微生物。
二、统计菌落数目1、常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。
（1）原理：样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有的活菌数。
(2)计算公式：每克样品中的菌株数＝培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积，即(C÷V)×M。
（3）注意事项:a．为了保证结果准确，每个稀释度涂布至少 3 个平板作为实验重复，求其平均值（平行重复原则）。
选择菌落数在 30～300 的平板进行计数。
设置重复实验的目的是：排除偶然因素对实验结果的影响。
b．稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
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2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生 物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特 点，包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
判断培养基中是否有杂菌污染：
将未接种的培养基同时进行培养。
判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。
设置对照的方法：
空白对照：不给对照组任何处理因素。 条件对照：给对照组施以部分实验因素，但不 是所要研究的处理因素。 自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上 进行。 相互对照：不单设对照组，而是几个实验组相 互对照。
③此配方能否筛选出产生脲酶的微生物？为什么？
能。只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素， 以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不 能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖， 而受到抑制。
选择培养基：在微生物学中，将允
许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻 止其他种类微生物生长的培养基。
菌株： 纯且活状态所保存的菌种 。
课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。 2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)2 + H2O
脲酶
2NH3 + CO2
3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌 也能分解尿素。 4、课题目的
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数 的平板
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素 的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中： 好氧及兼性厌氧细菌数约为 2 185万，放线菌数 约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不 同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件。
[二]做好标记
注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。
[三]制定计划
四、结果分析与评价 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 否筛选出菌落？
对照的培养皿无菌落说明培养基没有污染。
牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显大于选择
培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一
些菌落。
四、结果分析与评价 2.获得某一稀释度下，菌落数30～300的平板， 在这一稀释度下是否至少有两个平板的菌落数相 接近？
4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中 加入（ C ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一.研究思路
㈠.筛选菌株
㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
（一）筛选菌株
提出的问题
—如何寻找耐高温的酶？
解决问题的思路
—寻找高温环境；
原理
—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，
从耐高温菌种中提取耐高温酶。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数法： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下 计算一定容积里样品中微生物的数量。
缺点：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
2.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法：稀释涂布平板法。
当样品的稀释度足够高时，培养基表 （2）原理：
五、鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基：不影响微生物的生存 1、酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨 →培养基碱性增强→ 酚红变红→脲 酶阳性 2、伊红—美蓝培养基： 鉴定大肠杆菌。 原理：代谢产物与伊红—美蓝 结合→菌落呈黑色并带有金属光泽。
（一）空气中微生物总数的检测
（二）水中细菌总数的检测 （三）牛奶中细菌的分离与计数 （四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数
二.实验设计
实验流程：
土壤取样
制备培养基
样品稀释
涂布平板 微生物的培养与观察
菌落计数
实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、接近中性的潮湿土壤中取样。先 铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先 准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用
前都要灭菌。
㈡.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基 制备牛肉膏蛋白胨培养基
计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
B
（三）设置对照
主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。
③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
说明设置重复组的重要性。第一位同学没有重
复实验（至少涂布3个平板）第二位同学组结果误 差过大，不应用于计算平均值。在设计实验时， 一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强 实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一 定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果 不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30—300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到 三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计 算出菌落平均数。
巩固练习
1.使用选择培养基的目的是（
C A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别
A.CO2和N2 C.CO2和尿素 B.葡萄糖和NH3 D.葡萄糖和尿素
）
2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分 别是( )
D
3.下列说法不正确的是（ B ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶。 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。
在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及 培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落 特征。
菌落
菌落
三、操作提示
[一]无菌操作
1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶 中，塞好棉塞。
3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）
㈣.涂布平板
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板， 则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如 果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试 验不精确，需要重新实验。
每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。
思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ （对照作用）
相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长 的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因 此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判 断选择培养基是否起到了选择作用。
（三）样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
㈤.微生物的培养与观察 培养不同微生物往往需要不同培养温度和 时间 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数 目。
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基： KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基源：尿素
菌株又称品系,表示任何由一个独立分离的单细胞 (或单个病毒粒子)繁殖而成的纯种群体及其后代。
4、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
是否 接种
目的
结果
以尿素为 实验组 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基
是
分离 尿素 细菌
只生长尿 素细菌
对照组
是
判断该 培养基 有无选 择性
生长多种 微生物
实例：
阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材 中
提出的问题。
同学出现此结果的可能原因？
原因：⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误 (或者是混入了其他的含氮物质)
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有 说服力，对照的设置是必不可少的。