2.课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【课程标准】研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定【学习重点】对土样的选取和选择培养基的配制。
【学习难点】对分解尿素的细菌的计数。
【自主阅读】一、研究思路（一）筛选菌株1．实验室中微生物的筛选主要是指人为提供有利于目的菌株生长的，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．分解尿素的细菌主要有，，。
3．选择培养基是指。
加入可以分离出，。
加入可以分离出。
（二）统计菌落数目4．统计菌落数目的方法主要有，，。
5．统计菌落数目的理论依据是当样品度足够高时，。
6．为保证统计结果准确，通常将涂布在平板上，培养后再选择的平板进行计数。
7．在设计实验时，一定要涂布至少个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。
（三）设置对照8．设置对照的主要目的是，。
9．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的研究思路是，。
二、实验设计10．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验流程是，，，，，。
11．土壤中的微生物大约有的细菌，绝大多数分布在。
12．测定土壤中细菌的数量一般选用倍的稀释液进行平板培养，一般在温度下培养天，每隔，小时统计一次菌落数目，选取时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足导致遗漏菌落数目。
13．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数操作中需要注意的问题是，，。
14．准确鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入，出现的现象是。
【典例分析】试验目的：略实验材料和用具：略实验方法和步骤：（1）接种①接种前，准备好盛有上述配方的培养基，放入培养皿中并灭菌，供试验用②取10g土壤，放在无菌研钵中，注入5ml水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用③将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。
将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿，将接种环放在培养基边缘处冷却。
然后，用接种环沾取少许泥浆，轻轻的点接在培养基表面上，共点接15－20处④接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在试验桌上。
专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
➢实验目的 从土壤中分离分解尿素的细菌并计数
培养基中以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生
➢实验原理 物才能分解尿素，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿
素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所 以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
➢实验材料 小铁铲、培养皿、试管、移液管、锥形瓶等
（二）制备培养基 实验组：制备选择培养基 （尿素为唯一氮源的培养基）
筛选出能够分解尿 素的细菌
对照组：制备完全培养基 （牛肉膏蛋白胨培养基）
与选择培养基做对照， 检测选择培养基是否具 有选择作用
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
判断选择培养基是否 具有筛选作用
选择培养基 完全培养基
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液
第一次做该实验时，可以将稀释的范围放宽一点，如可 以将103 ~ 107分别涂布到平板上培养。保证获得菌落数 在30～300之间、适于计数的平板
➢4】微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
➢实验步骤 实验结果
实验流程：
土壤取样 制备培养基 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察
菌落计数
（一）土壤取样 从富含有机物、潮湿、酸碱度适中的土壤中取样。铲 去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的
信封中。 铁铲和信封都要灭菌
“微生物的天然培养基”
数量最大、种类最多
大约70%—90%是细菌 细菌适宜在富含有机质，酸碱度接近中性的潮湿土壤 中生长，绝大多数分布在约3~8cm的土壤层。
2.2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数11
计算方法：
每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的 平均菌落，V代表涂布平板时所用的稀释 液的体积（mL），M代表稀释倍数。
例题：在稀释度105下求出3个平板上菌落
的平均值是63，那么每克样品的菌落数是
多少？
6.3 × 107
第 二 位同学的结果接近真实值。
这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需设 置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数第一个 与后两个相差太大，说明操作有误，需重新实验。
生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以 通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生 物。
〖思考1〗在该培养基的配方中，为微生物的生长提供 碳源和氮源的分别是什么物质？
在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是 葡萄糖 ，提供氮源的的是 尿素。
〖思考2〗课本P22的培养基配方对微生物是否具有选 择作用？如果具有，是如何进行选择的？
由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，
因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍
数为( 103－)1每07个稀释度下需要( )
选3择个培养基，测定土壤中细菌一般选用的
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
稀释度为（
104、105、）1，06 放线菌为
（ 103 104 ）10、5、真菌为
（ 102、103、104 ）。
将10 g土样加入盛有90mL水的锥形瓶中
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1 、什么是尿素 ？ 2、为什么从热泉中能把耐热细菌筛选出来？ 3、如何统计菌落数目？方法有哪些？ 4、如何设置对照？
尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用， 但土壤中有能分解尿素的细菌，细菌的作用是能够合
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识梳理1.选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时其他种类微生物生长的培养基。
（依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计，从众多微生物中分离所需的微生物。
）★利用选择培养基分离微生物通过控制培养基的，使营养缺陷型微生物不能正常生长：培养基可以分离自生固氮微生物；作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；筛选尿素分解菌时使用以为唯一氮源的培养基进行培养。
在完全培养基中加入加入可以分离出酵母菌和霉菌等真菌，同时抑制细菌的生长；加入高浓度的可以选择培养金黄色葡萄球菌。
改变微生物的。
在环境中培养可以得到耐高温的微生物；将培养基调至较低水平可以得到耐酸的微生物等。
鉴别培养基：依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计。
用于鉴别不同种类的微生物。
___________培养基可以鉴别大肠杆菌2.统计菌落数目： (1)常用方法：。
①原理：当样品的___________足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个_________。
通过统计平板上的___________来推测样品中大约含有的活菌数。
②实验计数要求：为了保证结果准确，一般选择菌落数在____________的平板进行计数。
③公式：每克样品中的菌株数= C：某稀释度下平板上生长的_________；V：涂布平板时所用的稀释液的_______(mL)； M：__________。
④误差：统计的菌落数比活菌的实际数目。
原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是。
(2)显微镜直接计数法①原理：利用或，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
②误差：统计的菌落数比活菌的实际数目。
（不能区分细胞死活）3.实验流程：土壤取样→→微生物的培养与观察→细菌的计数(1)土壤取样：①取样原因：土壤有“微生物的___________”之称，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量_____，种类_____。
专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
3．重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该 接近 。 _____ 四、操作提示 1．无菌操作 灭菌 。 (1)取土样的用具在使用前都需要_____ (2)应在火焰旁称取土壤，并在火焰附近将土样倒 入烧瓶中，塞好棉塞。 稀释 土壤溶液的过程中，每一步都要在 (3)在_______ 火焰 旁操作。 _____
2．实验室中目的菌株的筛选 (1)理论依据 目的菌株 人为提供有利于 ____________ 生长的条件 ( 包括营
养、温度、 pH等 ) ，同时抑制或阻止其他微生物生
长。
(2)选择培养基
特定种类的微生物生长， 指在微生物学中，允许_____
抑制 或阻止其他种类微生物生长的培养基。 同时_____
解析：选D。在设计实验时，一定要涂布至少3
个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力
与准确性，所以A、B两项不正确。C项虽涂布
了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与
另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现
了错误，因此，不能简单地用 3 个平板的计数
值求平均值。
知能过关演练
本部分内容讲解结束
按ESC键退出全屏播放 点此进入课件目录
2．做好标记 平板 和试管比较多，为避免混 本实验使用的 ______ 淆，最好在使用前就做好标记。 3．规划时间 对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间， 以便提高工作效率，在操作时更加有条不紊。 五、课题延伸 细菌合成的_____ 脲酶 将尿素分解成氨，使培养基 的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中 红， 加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变___ 可确定该种细菌能够分解尿素。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课标领航 1 ．举例说明什么是选择培养基，并研究培 养基对微生物的选择作用。 2 ．设置重复组和对照组，对土壤中分解尿 素的细菌进行分离和计数。 【重点】 选择培养基的作用。 【难点】 菌落数目的统计。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
【土壤中分解尿素的细菌的分离和计数】一、研究思路1．筛选菌株尿素是一种重要的肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为和CO2，才能被植物利用，土壤中的这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。
可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。
(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_____ _生长的条件(包括营养、、pH等)，同时____ _或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
2．统计菌落数目(1)常用来统计样品中数目的方法是__________ _______。
即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中。
通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
例如每克样品中的菌株数= ,C代表 ,V代表 ,M代表。
通常统计出的菌落数比活菌的实际数目。
这是因为。
因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。
(2) 也是测定微生物数量的常用方法。
(3)细菌的数目还可以通过法来测定。
例如，测定饮水中大肠杆菌的数量，可将的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现色，可以根据培养基上的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。
在该实验中至少应取___个水样。
3．设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中___________对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需用______________________________ 作为空白对照。
(2)对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。
二、实验设计实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。
关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：1．土壤取样土壤微生物约70%～80%为，主要分布在距地表的近性土壤中。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(三)设置对照： 设置对照：
主要目的： 主要目的：
是排除实验组中非测试因素对实验结 果的影响，提高实验结果的可信度。 果的影响，提高实验结果的可信度。
三.实验的具体操作 实验的具体操作
（一）土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土 左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要 灭菌。 灭菌。
细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105， 细菌稀释度为10 放线菌稀释度为10 真菌稀释度为10 真菌稀释度为102、103、104。
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度 ？ 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素 的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 原因： 土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg） 原因： 土壤中各类微生物的数量（单位： /kg） 是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中： 是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中： 好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万 好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌 数约为477万 霉菌数约为23.1万 数约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论： 结论： 为获得不同类型的微生物，就需要按不同的 为获得不同类型的微生物， 稀释度进行分离， 稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提 供选择培养的条件。 供选择培养的条件。
（五）微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度 细菌：30～37℃培养 培养1 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养 培养5 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养 的温度下培养3 4d。 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 统计一次菌落数目。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为结果， 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培 养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数
目标导航 1.能利用选择培养基分离细菌。 2.能运用活菌计数法测定土壤中分解尿素细菌的数量。
1 预习导学 挑战自我，点点落实
2 课堂讲义 重点难点，个个击破
3 对点练习
即时训练，体验成功
预习导学
挑战自我，点点落实
一、研究思路
1.筛选菌株
(1)PCR技术要用到一种关键酶—— Taq DNA聚合酶 ， 这
3.2013年11月22日凌晨3点，青岛黄岛区发生石油泄漏事件， 一些微生物可以有效地分解石油，如何配制选择培养基将 这类微生物选择出来？ 答案 配制的选择培养基中，石油作为唯一的碳源，然后 用这种培养基培养多种微生物，凡是能在该种培养基上生 存的就是能分解石油的微生物。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
10
四、课题延伸 分解尿素的细菌合成的 脲酶 将尿素分解成了氨，使培养基 的碱性增强。在以 尿素为唯一氮源的培养基中加入 酚红 指示剂培养细菌，若指示剂变 红 ，可以初步鉴定该种细菌 能够分解 尿素。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
11
预习诊断
判断正误：
(1)选择培养基只允许特定的微生物生长，而抑制或阻止其他微生
一、选择培养基
1.选择培养基的制作方法
(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，依据某些微生物对某
些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生
物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可
抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可
将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线
目在30～300的平板
操作成功
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数理一理判一判1.选择培养基只允许特定的微生物生长，而抑制或阻止其他微生物的生长。
(√)2．稀释涂布平板法能分离细菌，也能计数。
(√)3．平板划线法只能纯化细菌，不能计数。
(√)4．从土壤中取样时，土层越浅越好。
(×)5．来自土壤的微生物稀释倍数越大越好。
(×)6．测定不同微生物数量时，接种的土壤悬浮液的稀释度相同。
(×)7．菌落特征是鉴别菌种的重要依据。
(√)8．以尿素为唯一氮源的培养基是选择培养基。
(√)9．可用含酚红指示剂的培养基对筛选出的尿素分解菌作进一步鉴定。
(√)悟一悟1.可利用分离对象对某种营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，并且使该营养物质成为培养基中某类基本营养物质的唯一供给者，如筛选能分解尿素的细菌，就将尿素作为培养基中的唯一氮源。
2．可利用分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质，经培养后，其他微生物生长受到抑制，而该分离对象却可大量增殖，在数量上占据优势。
3．显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，因此一般用来统计总菌数。
但是，通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来进行活菌数的统计。
4．对照实验中除测试因素(自变量)不同外，其他因素要保证和实验组相同且适宜，并遵循单一变量原则。
5．在培养基制作和保存过程中，都易出现培养基被污染、样品被污染等情况，从而对实验结果造成影响，因此必须要设置空白对照或相互对照。
感悟体会：练一练1.[2019·平遥县第二中学高二月考]在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用以尿素为唯一氮源的培养基，乙组实验的培养基中的氮源除尿素外还含硝酸盐，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养观察，则乙组实验属于()A．空白对照B．条件对照C．相互对照D．标准对照解析：生物实验中的实验可以分为空白对照，条件对照，自身对照，相互对照等。
①空白对照是指不给予对照组任何处理的对照；②条件对照是指虽给对照组施以部分实验因素，但不是所要研究的处理因素；③自身对照是指对照和实验都在同一研究对象上进行。
④标准对照是指生物生理、生化的某些项目也都有相应的标准，将观察测定的实验数值与规定的标准值相比较，以确定其正常与否的对照方法。
理清题目中的实验的相关条件，分析对照实验的类型。
根据以上分析可知，乙组和甲组实验的培养条件不同，形成了条件对照。
综上所述，B正确，A、C、D错误。
答案：B2．[2019·新绛县第二中学高二月考]以下关于分解尿素的细菌的说法，正确的是()A．能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶B．以尿素作为唯一的碳源C．环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D．以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基培养该菌后不会使酚红指示剂变红解析：能分解尿素是因为可以分泌脲酶，A项错误；筛选分解尿素的细菌时以尿素为唯一氮源，B项错误；该细菌分解尿素的特性是基因控制的，C项错误；以尿素为唯一氮源的培养基中，只有能分解尿素的微生物可以生长，该微生物可以分泌脲酶，把尿素分解成氨，但由于酸碱缓冲液的存在，培养基的pH可以维持稳定，故不会使酚红指示剂变红，D项正确。
答案：D3．[2019·贵州省思南中学高二月考]分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()①加尿素②不加尿素③加琼脂糖④不加琼脂糖⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦解析：分解尿素的细菌是异养微生物，因此培养基中应该加入有机碳源，如葡萄糖；分离分解尿素的细菌的培养基从功能上属于选择培养基，应该以尿素为唯一氮源；从物理性质上属于固体培养基，因此应加入凝固剂琼脂糖，①③⑤⑧正确；故选C 项。
答案：C考点1 实验原理1.[2019·贵州省铜仁第一中学高二期中]下列关于统计菌落数目的方法的叙述，正确的是()A．采用平板计数法获得的菌落数往往多于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．采用平板划线法和稀释涂布平板法都可以对培养基中的菌落进行计数解析：平板划线法不能用于计数，用于计数的是稀释涂布平板法，A项错误；当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，B项正确；为了保证结果准确，一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，C项错误；稀释涂布平板法又称活菌计数，是由一个单细胞繁殖形成单个菌落这一培养特征设计的计数方法，可对微生物进行计数，而平板划线法不能用于计数，D 项错误。
答案：B2．[2019·四川树德中学高二月考]在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。
产生A同学结果的原因可能有()①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照A．①②③④B．②③④C．①③④D．①②③解析：同一稀释浓度下菌落数不同，产生A同学结果的可能的原因可能是土样不同、培养基污染，或者操作失误，未达到相应的稀释倍数。
答案：D3．[2019·广西高二期末]用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数分别是251和260，取平均值256C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析：用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
答案：D考点2 实验设计4.[2019·四川高二期末]请选出分离土壤细菌的正确操作步骤()①土壤取样②称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1 mL进行平板涂布④将菌液依次稀释至101、102、103、104、105、106、107倍A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③解析：分离纯化土壤微生物的正确的操作步骤：①土壤取样→②制备土壤溶液：称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中→④制备土壤样品稀释液：将菌液依次稀释至101、102、103、104、105、106、107倍→③涂布平板分离：吸取0.1 mL进行平板涂布。
答案：C5．[2019·贵州省铜仁第一中学高二期中]下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，错误的是() A．该实验需要设置空白对照组，以检验培养基是否受到杂菌污染B．分解尿素的细菌能产生脲酶，脲酶能分解尿素产生氮气和CO2C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30～300以内的平板进行计数D．该实验所用培养基应以尿素作唯一氮源、并加有酚红指示剂鉴定尿素分解菌解析：该实验需要设置空白对照组，以检验培养基是否受到杂菌污染，A项正确；分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解为氨和CO2，B项错误；统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30～300以上的平板进行计数，求其平均值，C项正确；用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红，D项正确。
答案：B6．[2019·吉林白城一中高二月考]在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()A．筛选出能分解尿素的细菌B．对分离的菌种作进一步鉴定C．作细菌的营养成分D．如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素解析：尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解分解为氨，使pH升高，培养基中加入酚红指示剂后，氨可以使指示剂呈红色，据此可以用酚红指示剂鉴别尿素分解菌。
答案：B7．[2019·湖北高二月考]可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入伊红—美蓝试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂解析：在以尿素为唯一氮源的培养基中，不能分解尿素获得氮源的细菌不能生长，而分解尿素的细菌能利用尿素作氮源，将尿素分解为氨，使pH升高。
若培养基中加入酚红指示剂，指示剂将变红，A项正确；伊红美蓝试剂是鉴定大肠杆菌的，不能分离出分解尿素的细菌，B项错误；苏丹III试剂是鉴定脂肪的，不能分离出分解尿素的细菌，C项错误；双缩脲试剂是鉴定蛋白质的，不能分离出分解尿素的细菌，D项错误。
故选A项。
答案：A8．人和哺乳动物的尿中含有尿素，环境中大量尿素的存在会造成污染。
土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。
某研究小组对土壤中的这类细菌进行分离，用以回收氮源，同时可净化环境。
请回答下列相关问题：(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作。
配制培养基时，灭菌与调节pH的先后顺序是________。
(2)采用________________法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。
在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在________旁进行操作。
(3)用________________培养基筛选获得能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于________培养基。
若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，其菌落周围会出现________，这是由于尿素被分解产生________，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。
变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力________。
解析：(1)配制培养基时，应先调pH，后灭菌，灭菌后再调节pH可能导致培养基的污染。
(2)将样液进行一系列的梯度稀释，应采用稀释涂布平板法接种，然后培养。
在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作，以避免污染杂菌。
(3)获得能分泌脲酶的细菌，可以用以尿素为唯一氮源的培养基筛选，从功能上划分该培养基属于选择培养基。
若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，尿素被分解后产生氨，可以使培养基中加入的酚红指示剂产生红色，使菌落周围出现红色圆环，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。
变色区域越大，表明该菌株分解的尿素越多，利用尿素的能力越强。
答案：(1)先调pH，后灭菌(2)稀释涂布平板酒精灯火焰(3)以尿素为唯一氮源选择红色圆环现象氨越强9．[2019·黑龙江大庆实验中学高二期末]某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。
实验基本步骤如下，请回答下列问题：配制培养基→灭菌、倒平板→接种→培养→观察、统计(1)分解尿素的微生物含有________________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成________使培养基的碱性增强。