土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)一、研究背景和意义土壤中的细菌群落对于土壤生态系统的基本功能起着至关重要的作用。
其中，土壤微生物的代表——细菌在土壤有机质的分解中是不可或缺的，其中包括尿素的分解。
尿素是一种有机氮化合物，很多植物都会把尿素当作氮素的主要来源。
但是，尿素很容易被细菌分解成为氨气，因此，如果过量的尿素进入土壤，细菌可能会分解尿素而产生氨气，而氨气毒性较强，可能对于周围的生态产生较大的负面影响。
因此，研究土壤中分解尿素的细菌的分离与计数，有助于深入了解尿素分解的生态机理，从而为保护土壤生态环境提供理论基础和技术支持。
二、实验目的1.利用培养基筛选土壤中分解尿素的细菌，并分离单种菌株。
2.利用计数法确定土壤中分解尿素的细菌群落的数量。
3.了解土壤中分解尿素的细菌群落的形态特征和特点。
三、实验步骤1.尿素培养基制备:将1000ml蒸馏水与20g尿素、0.5g葡萄糖、0.1g磷酸氢二钾、0.2g酵母提取物、0.1g镁硫酸钾、0.5g氯化钠、0.5g硫酸铵、15g琼脂、适量pH指示剂溶解在一起，灭菌后即可得到尿素培养基。
2.样品制备：取10g土壤样品加入稀溶液后混合均匀，再经过过滤器过滤掉大颗粒，得到土壤浸液样品。
3.单种菌株筛选：将土壤浸液样品接种到尿素培养基中，在28℃下培养2-3天。
筛选到单种菌株后，通过高倍显微镜观察菌落的形态和特点，然后进行相应的鉴定。
4.计数法：将稀溶液进行逐步稀释，然后取稀释液的适量体积接种在尿素培养基上，在28℃下培养2-3天，根据菌落数确定土壤中细菌的数量。
四、实验结果及分析通过尿素培养基的筛选，共分离出5种分解尿素的细菌，并进行了表征与鉴定。
通过计数法，成功地计算出了土壤中的分解尿素的细菌数量。
土壤中分解尿素的细菌群落种类多样，数量较多，这对于土壤中尿素分解的生态机理研究具有重要的意义。
同时，该实验的操作简单，成本低廉，适用于在实验室环境下大规模进行。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
5.测定细胞总氮量或总碳量
7
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
8
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中 的菌落数？
答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计 3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁 栏的公式进行计算。
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
富集一些。
检测：酚酞的灵敏度不
如酚红，因此建
议最好使用酚红，
否则效果不明显。
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培养基 类型
日期 第一天 第二天
平板细菌数（土壤稀释度）
选择性培养基
（涂布接种）
（未涂布接种）
牛肉膏蛋白胨 培养基
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
本课题知识小结:
33
12
两稀释度 菌数之比
1.6 2.2
-
菌落总数 个/g或个/ml
16400 38000 27100 513000
270 30500
报告方式 个/g或个/ml 16000或1.6×104 38000或3.3×104 27000或2.7×104 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104
102
103
104
105
106
107
101
10g土壤
9ml
无菌水
9ml 无菌水
104
105
106
107
104
105
106
107
104
105
106
107
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验方案
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验方案尿素是一种含氮有机化合物，广泛用作化肥和动物饲料。
土壤中的细菌可以通过分解尿素来获取氮元素，从而促进土壤微生物群落的生长和发展。
为了研究土壤中分解尿素的微生物群落，可以进行以下实验：
1.采集土壤样品，将其通过蒸馏水过滤器过滤，以去除大颗粒物和悬浮物。
2.将过滤后的土壤样品接种到含有尿素的培养基中，利用不同的培养条件(如温度、pH值、氧气含量等)筛选出适宜于生长的细菌。
3.将筛选出的细菌进行单一克隆培养，然后通过染色、显微镜观察和生化测试等方法对其进行鉴定和分类。
4.最后，可以利用计数板等设备对土壤中分解尿素的细菌进行计数。
实验步骤：
1.收集土壤样品，通过蒸馏水过滤器过滤。
2.制备含尿素的培养基，分别设置不同的培养条件，如温度、pH 值、氧气含量等。
3.将过滤后的土壤样品接种到培养基中，进行培养。
4.观察培养基中是否有细菌生长，记录细菌的数量和形态特征。
5.对生长的细菌进行单一克隆培养，然后进行鉴定和分类。
6.利用计数板等设备对土壤中分解尿素的细菌进行计数。
实验注意事项：
1.在实验过程中要注意卫生，避免污染。
2.制备培养基时要严格按照配方和操作步骤进行。
3.培养时要控制好温度、pH值、氧气含量等条件，以便筛选出适宜于生长的细菌。
4.鉴定和分类时要准确和细致，避免误判。
5.计数时要进行多次重复，以提高结果的精度和可靠性。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
3.重复组的结果是否一致
如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结 果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各项操 作过程中去分析、寻找可能的原因。
六、课 题 延 伸
能分解尿素的细菌的鉴定
鉴定的原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基
的pH升高。 鉴定方法：
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指 示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基 的颜色变化。
三、设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试 因素对实验结果的影响
A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有 其它氮源。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实 验方案有两种。一种方案是可以接种其它菌种，看是否 有菌落的出现，验证培养基是否混有其它氮源。另一种 方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培 养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
1.培养物中是否有杂菌污染以及选择 培养基是否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长， 说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的 菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选 择培养基已筛选出一些菌落。Leabharlann 2.样品的稀释操作是否成功
如果得到了2个或2个以上菌落数目在 30～300的平板，则说明稀释操作比较成 功，并能够进行菌落的计数。
碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选 作用？如果有，又是如何进行筛选的？
有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只有能合 成分解尿素的脲酶的细菌才能生长。
二、 统计菌落数目
原理
运用稀释涂布平板法来统计样品中的活 菌数。
统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释 度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源 于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释 度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果 准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板 上，培养后再选择菌落数在30 ～300的平板进行 计数。
2020-2021高二生物1学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析
2020-2021学年高二生物人教版选修1学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点一菌株的筛选与选择培养基1．筛选菌株(1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（2）实例：从热泉中筛选出Taq细菌。
热泉70～80 ℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。
（3）方法:利用选择培养基分离。
归纳总结：选择培养微生物的方法通常有两种：(1)可利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好"的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基；（2)可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质,经培养后，其他微生物生长受抑制,而分离对象却可乘机大大繁殖，在数量上占优势.2．选择培养基(1)概念：选择培养基指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
（2）选择培养基的制备原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某一化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。
(3)选择培养基的制备方法：在培养基中加入某种允许特定种类微生物生长，抑制或阻止其他种类微生物生长的化学成分。
（4)选择培养基的用途：使混合菌株中的目的菌变成优势菌，提高该菌的筛选率。
（5)实例:在培养基中以尿素为唯一的氮源可得到能利用尿素的微生物；在培养基中加入青霉素可分离得到酵母菌和霉菌。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基配方培养基组成提供的营养或作用KH2PO4 1.4 g、Na2HPO4 2。
1无机盐g、MgSO4·7H2O 0。
2 g葡萄糖10.0 g碳源尿素1.0 g氮源、碳源琼脂15.0 g凝固剂用蒸馏水定容至1 000 mL氢元素、氧元素尿素，以尿素为氮源,缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，会因缺乏氮源而不能生长繁殖，所以，用该培养基能够筛选出可分解尿素的微生物。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
耐高温的酶
寻找
寻找 耐高温生物体 耐高温环境（热泉等）
小结：从自然界筛选目的菌株的原则：
根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
耐盐微生物
盐碱地等高盐的环境
冰川
耐寒微生物
分解石油的细菌
油田
2、 实验室中微生物的筛选 筛选原则：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
（二）制备培养基
制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基 思考：为什么要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ （对照作用）
相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应 明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基 可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
（三）稀释涂布平板
（1）测土壤中细菌数： 一般用104、105、106稀释液
（2）测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 （3）测真菌数： 一般用102、103、104稀释液 以保证获得菌落数在30-300之间。
思考：（P24页左侧）
原因：不同微生物在土壤中含量不同
（三）稀释涂布平板
每个稀释度均用3个选择培养基和1个牛肉膏蛋白胨培养基 为保证计算结果准确 ①选择菌落数在30～300的平板上计数。 ②每个稀释度取3个或以上平板做重复组，其平均值。
三、设置对照 （三）设置对照：
（1）设置对照的目的： 是排除实验组中非测试因素对实 验结果的影响，提高实验结果的可信度。 （2）对照实验： 指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
请你通过设置对照实验，（P23页），帮助A同学排除上述两个可 能影响实验结果的因素。 可能原因 设置对照 实验结论 其他同学用与A同学 如结果与A同学一致，则证明 土样不同 相同土样进行实验 A无误；反之，则证明A同学 失误 若有菌落出现，则培养基被污染 培 养 基 污 染 或 将A同学的培养基不接种， 培 养 中 混 入 了 进行培养，作为空白对 若无菌落出现，则没污染 照 若菌落数和A同学一致，说明培养基 其他的含氮物 中混入了其他含氮物质，若菌落数 其他同学用A同学的培养 质) 与其他同学一致说明培养基中没有
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
基础知பைடு நூலகம்：
（一）筛选菌株
KH2PO4
1.4g
NaH2PO4
2.1g
MgSO4`7H2O 葡萄糖
0.2g 10.0g
尿素 琼脂
选择培养基
1.0g 15.0g
培养基配方
思 考：该培养基对微生物具有选择作用吗？如果 具有，是如何进行选择的？
只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长
选择培养基：在微生物学中，将允许特定种
• 2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生 物，其中也包括分解尿素的微生物。由于 瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后 会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生 物除了需要准备选择培养基外，还应参照 厌氧菌的培养方法进行实验设计。
分析P22实例:
你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认 为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如 何改进？
第一位同学没有重复实验(至少涂布3个平板)，结 果不具有说服力。
第二位同学有重复实验，但结果不一致（误差较 大），说明在操作过程中可能出现错误，需要重 新实验。
【例1】为了计数微生物的数量，一位同学在4
1、酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增
强，PH升高→酚红指示剂，变红 2、伊红—美蓝培养基： 鉴定大肠杆菌。 原理：代谢产物与伊红-美蓝结合→菌落呈黑
色。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结:
课后练习
——利用血球计数板在显微镜下直接计数。
（2）活菌计数法——统计菌落数目
方法： 稀释涂布平板法。 原理：
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长 的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
高中土壤中分解尿素的细菌的分离与计数及答案教案
高中土壤中分解尿素的细菌的分离与计数及答案教案YUKI was compiled on the morning of December 16, 2020课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数要点展示1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。
2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。
要点突破一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。
3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。
2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3．微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。
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2.实验结果分析:
内 容
有无杂 菌污染 的判断 选择培养 基的筛选 作用
现 象
对照的培养皿中无菌落 生长 培养基中菌落数偏高 菌落形态多样,菌落数偏 高 牛肉膏蛋白胨培养基上 的菌落数目大于选择培 养基上的数目
结 论
未被杂菌污染 被杂菌污染 培养基中混入其 他杂菌 选择培养基具有 筛选作用
内
容
现
尿素 _______(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作为氮源，
不选择其他两组的原因是______
其他两组都含有 __________。 NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细
菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用
(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作
筛选微生物种类
稀释倍数
4、105、106 10 _____________ 3、104、105 10 _____________
细菌
放线菌 真菌
102、103、104 _____________
(3)微生物的培养与观察。 ①连线：
形状 、大小、隆起程度和 ②观察指标：观察菌落的_____ 颜色 等方面。 _____ (4)菌种鉴定。 脲酶 能够将尿素分解成氨，使 ①原理：细菌合成的_____ 升高 。 培养基中的pH_____
以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数 为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？
提示：不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设
置重复实验，在同一稀释度下涂布3个平板，统计结果
后计算平均值。
(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数 分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均 值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？ 提示：不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复
用有_________________(答出两点即可)。 为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细菌生长过程 中pH稳定
菌落 。 _____
2.对照实验设计的分析： 分析“设置对照”中的实例，探讨下列问题： (1)在A同学确定自己操作无误的情况下，A同学得出的 菌落数多于其他同学的原因可能有哪些？
提示：可能是他选择的土壤样品不同于其他同学；可
能是培养基受到了污染。
(2)如何设计对照实验帮助A同学排除上述两个可能影 响实验结果的因素： 提示：①其他同学取与A同学一样的土壤进行实验，如 果统计结果与A同学一致，则可以确定是土壤样品不同
黑色，可以此来鉴定大肠杆菌。
主题1 【互动探究】
研究培养基对微生物的选择作用
1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基：
教材P22左上方侧栏是本课题使用的培养基配方，请分
析：
(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮
源的分别是什么物质？
提示：碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择 的？ 提示：该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯 一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生 长。
酚红指示剂 ，如果指示剂变红，则可 ②方法：加入___________ 以初步鉴定该细菌为尿素分解菌。
பைடு நூலகம்
【判断正误】 1.只要培养基中有尿素即可筛选出分解尿素的细菌。 (×) 【分析】只有以尿素为唯一氮源的培养基，才能筛
选出分解尿素的细菌。
2.选择培养基筛选出的微生物只有一种。
(×)
【分析】只要能利用选择培养基中特定营养物质的微 生物都可在培养基上生长，从而被一同选出。 3.对照实验可以提高实验结果的可信度。 (√)
④样品中活菌数的计算公式： (C÷V)×M 每克样品中的菌株数=__________ 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀 释倍数。
2.增加实验说服力的措施： 措施 设置重复 设置对照
培养过程中设置重 复组，同一稀释度 3 个平 方法 下应涂布__ 板，才能增加实验 的说服力与准确性 排除偶然性因素对 意义 实验结果的影响
【分析】土壤是微生物的天然培养基，在富含有机 质的土壤表层，有更多的微生物生长。
7.土壤样品稀释时不同的微生物应该选择不同的稀释 度。 (√)
【分析】土壤中不同微生物的数量不同，应该选择不 同的、合适的稀释度，以得到菌落数在30～300的平板。
8.伊红美蓝培养基可用来鉴定大肠杆菌。
(√)
【分析】大肠杆菌在伊红美蓝培养基上的菌落呈现
2.选择培养基： 特定 种类的微生物生长，同时_____ 抑制 (1)概念：允许_____ 或阻止 其他种类微生物生长的培养基。 _______ (2)举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基 尿素 为唯一氮源，按物理性质归类为固体 特点是以_____ 培养基。
二、进行微生物数量的测定 1.统计菌落数目： 活菌计数 法和_______________ 显微镜直接计数 法。 (1)方法：_________
360 234 23
平板3
356 287 18
提示：105的稀释度下取0.1 mL涂布的三个平板上的菌 落数在30～300，计算其平均值为(212+234+287)/3 ≈244。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为 (244÷0.1)×105=2.44×108。
当两 (4)统计的菌落数比活菌的实际数目低，原因是_____ 个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个 _____________________________________________
提示：每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳
定时的记录作为结果。
【探究总结】 稀释涂布平板法的三个易错提醒 (1)稀释涂布平板法所选择倒平板的稀释度很重要，一 般以3个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现的平均
菌落数在50个左右的最好。
(2)在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复
组。
(3)在分析结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果 是否一致，如果差别过大，则意味着操作有误，需要 重新实验。
【分析】设置对照能排除实验组中非测试因素对实验
结果的影响，使实验结果更加可信。
4.统计样品中的活菌数目一般使用平板划线法。( × )
【分析】使用平板划线法能分离微生物，但不能对 微生物进行计数。 5.显微镜直接计数法统计的都是活菌。 (×)
【分析】显微镜直接计数法统计的是活菌和死菌。
6.土壤中的微生物大多生活在富含有机质的土壤表 层。 (√)
于其他同学；
②将A同学配制的培养基在不加土样的情况下培养作为
空白对照，以判断培养基是否受到污染。
3.微生物数量测定的实验设计： (1)分离不同的微生物要采用不同的稀释度，原因是： 土壤中各种微生物的数量是不同的，为获得不同类型 _______________________________________________
二者比较如下: 内 容 主要用具 计数依据 优点 直接计数法 显微镜、细菌计数板 菌株本身 计数方便、操作简单 间接计数法 培养基 培养基上菌落 数 计数的是活菌
内
容
直接计数法
间接计数法
缺点
死菌、活菌都计算 在内
操作较复杂,且有 一定误差
每毫升原液含菌株 每毫升原液含菌株 数=400×1 000×每 平均菌落数 计算公式 数= 所用涂布液的体积（mL） 小格平均菌株数× 稀释倍数① ×稀释倍数
(3)若菌落形态多样，菌落数偏高，说明培养基中混入
其他杂菌。
2.选择培养基的筛选作用：若牛肉膏蛋白胨培养基上
的菌落数目大于选择培养基上的数目，说明选择培养
基具有筛选作用。
主题2 【互动探究】 1.统计菌落数目：
进行微生物数量的测定
甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品
中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到
课题2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
【自主预习】 一、研究培养基对微生物的选择作用
1.筛选菌株：
(1)自然界中目的菌株的筛选。 生存环境 的要求，到相应的 ①原理：根据目的菌对_________ 环境中去寻找。
Taq细菌 就 ②实例：能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的________ 是从热泉中筛选出来的。 (2)实验室中目的菌株的筛选。 目的菌株 生长的条件(包括营 ①原理：人为提供有利于_________ 抑制或阻止 其他微生物生长。 养、温度、pH等)，同时___________ ②实例：从土壤中筛选能分解尿素的细菌。 选择 培养基进行微生物的筛选。 ③方法：利用_____
(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上
生长？
提示：分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿
素分解成氨，从而为微生物提供氮源。
2.设计对照实验： (1)如何验证该选择培养基的确筛选到了能分解尿素的 细菌？ 提示：增设牛肉膏蛋白胨基础培养基并进行涂布平板
操作，如果牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显多于
(2)活菌计数法。 稀释涂布平板 法。 ①方法：_____________ ②原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长 样品稀释液中的一个活菌 。通 的一个菌落，来源于_______________________ 菌落数 ，就能推测出样品中大约含有 过统计平板上的_______ 多少活菌。
③活菌计数原则：在同一稀释度下涂布3个平板，并 30～300 的平板进行计数。 选择菌落数在________
选择培养基上的菌落数，则说明选择培养基的确起到
了筛选能分解尿素的细菌的作用。
(2)如何验证所用的选择培养基没有受到污染？
提示：设置一个未涂布平板的能筛选分解尿素的细菌
的选择培养基。
【探究总结】 1.培养基中有无杂菌污染的判断方法： (1)若对照的培养皿中无菌落生长，说明未被杂菌污染。 (2)若培养基中菌落数偏高，说明被杂菌污染。