流式常用荧光染料

流式荧光染色法实验原理及步骤

流式荧光染色法实验原理及步骤原理：荧光染料CFSE，即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。

当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。

这种现象可以在488nm的激发光下，采用流式细胞仪检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细胞分裂增殖的情况。

实验步骤，以小鼠脾细胞为例：1.取一只6-8周小鼠颈椎脱臼处死后，将其全部浸泡于75%酒精中；2.在超净工作台上无菌取出小鼠脾脏；3.用无菌注射器内芯研磨脾脏，尽量不残留较大组织块；再用3mlPBS冲洗后，将脾脏研磨液经200目尼龙网过滤至15mL离心管中，离心350g，5min；4.弃上清后，加入2mL红细胞裂解液，轻微吹打，裂解2min后加入等体积PBS终止裂解反应，混匀后离心350g，5min；5.弃上清，用RPMI1640完全培养基重悬沉淀，并取10μL细胞液计数，将细胞浓度调至2.0×106/ml；6.提前将CFSE按照说明书用DMSO配成5mM母液，并分装储存于-80冰箱，其工作浓度为0.5-25μM；7、取部分细胞作为不染色组阴性对照，其他细胞加入CFSE溶液，使得终浓度为5μM，37°C避光孵育15min；8、加入1ml冰冷的RPMI1640完全培养液，4℃，5min以中止染色；9、弃上清，加入冰冷的含10%FBS的完全1640培养液洗2次，最后用1640完全培养基重悬细胞沉淀，充分吹打成单细胞悬液，将上述细胞悬液加入96孔培养板,每孔105个细胞（阳性对照用PHA刺激）；10、37℃，5%CO2培养3天后用流式细胞仪分析细胞488nm激光器检查细胞增殖情况。

流式细胞术中应用的荧光染料介绍

流式细胞术中应用的荧光染料介绍流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数细胞的技术。

在流式细胞术中，荧光染料起着至关重要的作用，可以标记细胞的不同成分，使其能够通过流式细胞仪进行检测和分析。

荧光染料通过特定的荧光光谱来发出荧光信号，这些信号被流式细胞仪采集和分析，从而提供有关细胞类型、数量和功能的信息。

以下是几种常见的流式细胞术中应用的荧光染料的介绍。

1. FITC（Fluorescein Isothiocyanate）：FITC是最常用的荧光染料之一，通过与免疫球蛋白G（IgG）结合，可用于免疫细胞表面分子的检测。

FITC在波长为488 nm的激光下激发，发射的荧光信号在525 nm 左右。

它可以与其他荧光染料（如PE或APC）结合使用，以实现多参数流式细胞分析。

2. PE（Phycoerythrin）：PE是一种从红藻中提取的荧光染料，其发射的荧光信号在575 nm左右。

PE通常用于检测细胞表面的抗原或细胞内的蛋白质，如细胞因子。

PE也可以与其他染料结合使用，以实现多参数分析。

3. APC（Allophycocyanin）：APC是一种类似于PE的荧光染料，通过独特的发射波长（约于660 nm附近）和长的荧光寿命来区分。

APC适用于检测多种细胞表面分子和蛋白质，在深色的区域提供了可靠的信号。

5. PE-Cy7：PE-Cy7是PE染料与Cyanine 7（Cy7）结合形成的荧光染料。

它适用于多参数流式细胞术，利用其较长的荧光寿命和波长（激发于488 nm，发射于780 nm左右），可以与其他染料一起使用，以实现更多的细胞表面和内部分子的检测。

除了上述染料外，还有很多其他的荧光染料可以用于流式细胞术。

例如，Alexa Fluor系列、eFluor系列、Brilliant Violet系列等。

这些染料具有不同的光谱特性和荧光强度，可以根据实验需要选择合适的染料。

需要注意的是，在选择荧光染料时，需考虑染料的互相干扰问题和流式仪的激发和检测系统。

常见细胞核荧光染料

细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。

透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。

EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。

DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。

DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。

Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。

这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。

与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。

RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。

RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。

RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。

不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。

EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。

流式常用荧光染料概要

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。

发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。

激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。

hochest 染色及流式

hochest 染色及流式Hochest染色及流式染色技术在生物学和医学领域中起着重要作用，其中Hochest染色是一种常用的荧光染色方法。

Hochest染料是一类荧光染料，常用于细胞和组织的核酸染色。

本文将介绍Hochest染色的原理和应用，并结合流式细胞术探讨其在生物研究中的意义。

让我们了解一下Hochest染色的原理。

Hochest染料是一类DNA特异性染料，可以通过与DNA双链结合来发射荧光。

Hochest染料有多种不同的类型，如Hochest 33342和Hochest 33258等。

这些染料都具有很高的DNA亲和力，能够与DNA的碱基序列发生相互作用，从而实现染色的效果。

Hochest染色在细胞和组织学研究中具有广泛的应用。

首先，Hochest染色可以用于检测细胞核的形态和数量。

通过将Hochest 染料与细胞一起处理，可以使细胞核发出荧光信号，从而观察和分析细胞核的形态和数量变化。

这对于细胞周期研究、细胞增殖和凋亡等过程的研究非常重要。

Hochest染色还可以用于染色体分析。

在细胞分裂过程中，可以使用Hochest染色来观察和分析染色体的形态和数量变化。

这对于研究染色体异常、染色体结构和功能等方面具有重要意义。

此外，Hochest染色还可以用于研究DNA损伤和修复、DNA合成和复制等过程。

除了Hochest染色技术本身，流式细胞术也是一种常用的生物研究技术。

流式细胞术利用荧光染料标记的细胞或细胞器，通过流式细胞仪进行检测和分析。

结合Hochest染色和流式细胞术，可以更精确地分析细胞核的形态和数量，进一步研究细胞的生物学特性。

流式细胞术在生物研究中有着广泛的应用。

首先，流式细胞术可以用于细胞表型分析。

通过荧光染料标记的抗体，可以对细胞表面标记物进行定量分析，如细胞膜蛋白、细胞间连接蛋白等。

这对于研究细胞分化、细胞功能和细胞亚群的分离非常重要。

流式细胞术还可以用于细胞周期分析。

通过Hochest染色和荧光染料标记的抗体，可以对细胞周期不同阶段的细胞进行定量分析。

pi染色原理

pi染色原理
PI染色原理。

PI染色是一种常用的核酸染色方法，它可以将DNA和RNA染色成红色，用于细胞核酸的定量和定位分析。

PI染色原理主要基于PI（Propidium Iodide）分子的特性，下面将详细介绍PI染色的原理和应用。

PI染色原理的核心是PI分子的荧光特性。

PI是一种具有DNA亲和力的荧光染料，它可以通过插入DNA的双螺旋结构中而发出红色荧光。

PI在水溶液中呈现橙红色，而当与DNA结合后则呈现红色荧光。

这种荧光的发射波长在600-700nm之间，可以被常见的激光激发，因此非常适合在流式细胞仪等设备中使用。

在实际应用中，PI染色主要用于细胞核酸的检测和分析。

细胞在进行PI染色前通常需要经过固定和透化处理，以保证PI能够穿透细胞膜并与细胞内的核酸结合。

在染色完成后，可以利用荧光显微镜或流式细胞仪等设备观察并记录细胞的荧光信号，从而进行核酸含量的定量分析和细胞周期的研究。

除了用于细胞核酸的定量分析外，PI染色还可以用于细胞死亡的检测。

在细胞凋亡或坏死的过程中，细胞膜通透性会增加，PI可以进入细胞内并与裸露的DNA 结合，从而发出红色荧光。

因此，通过PI染色可以快速、直观地检测细胞的存活状态和死亡比例。

总之，PI染色原理是基于PI分子的DNA亲和性和荧光特性，通过将DNA和RNA染色成红色荧光来进行核酸的定量和定位分析。

它在细胞生物学和分子生物学研究中具有广泛的应用，为科研工作者提供了重要的实验手段和数据支持。

希望本文的介绍能够帮助读者更好地理解PI染色的原理和应用，为相关研究工作提供参考和指导。

bv510激发和发射波长

BV510激发和发射波长一、什么是BV510BV510是一种荧光染料，常用于流式细胞术中的细胞标记。

它是一种有机化合物，属于靛绿染料家族。

BV510在流式细胞仪中作为荧光探针，用于检测细胞表面或细胞内特定分子的表达情况。

二、BV510的激发和发射波长BV510的激发波长为405纳米，发射波长为510纳米。

这意味着在流式细胞仪中，我们可以使用405纳米的激光来激发BV510染料，然后检测510纳米的荧光信号。

三、BV510的应用BV510具有广泛的应用领域，特别是在免疫学和细胞生物学研究中。

以下是一些常见的应用：1. 免疫细胞表型分析在流式细胞仪中，BV510可以与其他荧光染料一起使用，用于分析细胞表面的特定蛋白或分子的表达情况。

通过检测细胞表面标记物的荧光信号，我们可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和定量分析。

2. 细胞增殖和凋亡研究BV510也可用于评估细胞增殖和凋亡的情况。

通过标记细胞增殖指标或凋亡标记物，我们可以利用BV510的荧光信号来定量分析细胞的增殖或凋亡水平。

3. 细胞内信号转导研究BV510还可用于研究细胞内信号转导通路。

通过将BV510标记于信号转导通路中的关键蛋白或分子，我们可以观察到这些信号转导分子的定位、表达和活性状态。

四、BV510的优点和注意事项1. 优点•BV510的发射波长在510纳米，不会与其他常用荧光染料的发射波长重叠，避免了光谱交叉干扰。

•BV510的荧光强度较高，可以增加检测的灵敏度。

•BV510的化学性质稳定，不易褪色，可以长时间保存。

2. 注意事项•BV510对光敏感，应避免暴露在强光下，以免荧光信号被破坏。

•在使用BV510时，应根据实验需求选择适当的激发波长和检测通道，以确保荧光信号的最大化。

•BV510染料使用后应妥善处理，避免对环境造成污染。

五、总结BV510是一种常用于流式细胞术中的荧光染料，具有激发波长405纳米和发射波长510纳米。

它在免疫学和细胞生物学研究中有广泛的应用，可以用于细胞表型分析、细胞增殖和凋亡研究以及细胞内信号转导研究。

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。

发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；PE（藻红蛋白）PI（碘化丙啶）CY5（化青素）preCP(叶绿素蛋白)ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。

激发光和发射光波长，如下：流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml荧光染料谱第十三章：干燥通过本章的学习，应熟练掌握表示湿空气性质的参数，正确应用空气的H–I 图确定空气的状态点及其性质参数；熟练应用物料衡算及热量衡算解决干燥过程中的计算问题；了解干燥过程的平衡关系和速率特征及干燥时间的计算；了解干燥器的类型及强化干燥操作的基本方法。

二、本章思考题1、工业上常用的去湿方法有哪几种？态参数？11、当湿空气的总压变化时，湿空气H–I图上的各线将如何变化? 在t、H 相同的条件下，提高压力对干燥操作是否有利? 为什么?12、作为干燥介质的湿空气为什么要先经预热后再送入干燥器？13、采用一定湿度的热空气干燥湿物料，被除去的水分是结合水还是非结合水？为什么？14、干燥过程分哪几种阶段？它们有什么特征？15、什么叫临界含水量和平衡含水量？16、干燥时间包括几个部分？怎样计算？17、干燥哪一类物料用部分废气循环？废气的作用是什么？18、影响干燥操作的主要因素是什么？调节、控制时应注意哪些问题？三、例题例题13-1：已知湿空气的总压为101.3kN/m2 ,相对湿度为50%，干球温度为20o C。

试用I-H图求解：(a)水蒸汽分压p；(b)湿度Ｈ；(c)热焓Ｉ；(d)露点t d；(e)湿球温度tw ；(f)如将含500kg/h干空气的湿空气预热至117o C，求所需热量Ｑ。