小鼠输精管结扎和简单精子操作
试验六1、小鼠采精方法的研究
实验六、小鼠采精方法中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVEMEDICINE2005年4月第15卷第2期April, 2005 Vol.15 No.2郑新民,李聚学,魏雁,乔宪凤,周荆荣(湖北省农科院生物技术研究所,武汉430072小鼠是世界上研究最为详尽的哺乳类动物[1]。
但是目前人们仍然是通过手术法从小鼠附睾中获取精子,国内外尚无小鼠非手术法采精的报道。
手术法采精为众多的科学研究带来了不便:(1)手术法采精必须将雄鼠处死,分离其附睾和输精管来获取精子,过程繁琐,费时费工,且造成不必要的经济浪费[2]。
另外,从附睾中获取的精子由于缺少副性腺中的诸多有益成分,精子品质难以保证[3];(2)不利于小鼠生殖生理的研究,在医学上,人们都是通过“杀鸡取卵”式地宰杀大量的雄鼠来获取精子进行科研分析[4-6],不但造成了很大的经济浪费,而且增加了实验的误差和难度;(3)不利于某些动物模型的建立,例如,由于小鼠精子获取繁琐,人工授精技术不易建立,精子载体转基因技术尚无理想的动物模型,这极不利于该项研究的开展[7]。
由此可见,建立一种方便快速的小鼠非手术法采精技术对解决小鼠手术法采精中存在的问题、小鼠生殖生理的研究和建立某些小鼠动物模型都是很有意义的。
1 材料和方法1.1 实验动物SPF级昆明小白鼠雄鼠,购自湖北省预防医学科学院。
合格证号为:SYXK(鄂)20035853。
1.2 小鼠假阴道抽吸器的制备小鼠假阴道的制作:取一段长约2 cm,内径8 mm的软质透明塑料管,在其内侧套上一层厚度约0.1 mm的胶膜,胶膜要求透明且有良好的弹性。
在塑料管中部钻一直径为2 mm的小孔,将一外径与小孔相当的硬质插管插入小孔中,深度与塑料管管壁厚度相当,小孔周围用强力胶水密封,向小管中轻轻吹入空气即可将塑料管内侧胶膜充起。
将制好的小鼠假阴道与胶头吸管相连,小鼠假阴道抽吸器即制作完毕。
1.3 电刺激采精仪的制备电刺激采精仪由电刺激发生器和直肠探子两部分组成。
实验一小鼠睾丸附睾及输精管精子采集运动能力检测与结构观察
实验用品
3. 实验动物： 选择60日龄以上，体重达到32-35g的昆明种 公鼠。
实验方法
1. 精子采集：
左手捏小鼠尾部，右手持镊子，或以图3-1所 示方法，以颈部脱臼法处死小鼠。使处死的小鼠 仰卧，用75%的酒精棉球消毒腹部开口部位被毛 及皮肤。剪开腹壁，暴露生殖系统。无菌分离睾 丸、附睾及输精管。在含培养液的表面皿中，用 眼科剪除去睾丸、附睾及输精管周围的系膜及脂 肪，并冲洗干净，以免血液或脂肪球混入液体妨 碍精子观察。
实验方法
采集附睾尾精子时，将其剪成几段。采集输精管 精子时，由于小鼠输精管非常细，不能直接冲洗 管腔，将输精管放入含有1ml培养液的表面皿内， 在实体显微镜下，用一只眼科异物针固定输精管， 用另一支异物针向相反方向纵向撕开输精管，精 子会浮游到培养液中。将大块输精管组织拨开， 用吸管连同精子吸出液体部分，装于乳动物的精子在睾丸内形成，并必须经过 在附睾内发生一系列形态、生理和生化方面的 变化而最终达到成熟，才能获得向前运动的能 力，这种向前运动能力的获得是精子受精能力 的重要指标。哺乳动物精子包括头部和尾部两 个主要部分，颈部介于头部和尾部之间，形成 头部和尾部的连接。精子头部主要由核组成，
实验目的
1. 认识雄性小鼠睾丸、附睾、输精管等 生殖器官结构及位置特点；
2.掌握小鼠睾丸、附睾及输精管精子采 集方法；
3.掌握血细胞计数板法精子计数和运动 能力检查的方法；
4.通过睾丸、附睾及输精管精子运动能 力检测，认识精子在睾丸产生后，在 附睾内成熟的过程；
实验目的
5. 掌握精子抹片方法； 6. 掌握染色法进行精子结构观察和顶体 结构观察的方法，认识精子的正常结构； 7. 使学生得到小鼠精子操作的基础训练。
实验方法
小鼠的基本实验操作
小鼠皮肤移植试验、卵巢摘除术
近交系小鼠皮肤移植试验
• 一、动物
• KM小鼠2只（1雌1雄）
• 二、方法： • 尾-背植皮法
• 尾-尾植皮法
近交系小鼠皮肤移植试验
• 三、步骤
• 1、异体尾-背植皮法
• （1）麻醉 固定 • （2）受体小鼠，背部剪毛（1.5cm×1.5cm），酒精消毒， 去皮（0.3cm×0.3cm） • （3）供体小鼠，酒精消毒尾部，尾背部剪皮 （0.5cm×0.5cm） • （4）供体皮片覆盖受体背部方洞 • （5）1～3周后观察结果
• 5、解剖
腹腔：肝脏、胃、肠道、胰腺、脾脏、肾脏、肾上腺、 输尿管、膀胱；卵巢、输卵管、子宫；睾丸、附睾、输精 管。 胸腔：肺、心脏。 颈部：甲状腺。 头部：开颅取脑。
兔的一般实验操作
• 1、抓取和固定
• 2、性别鉴定
兔的一般实验操作
• 3、给药
• （1）灌胃 • （2）耳缘静脉注射•Biblioteka 4、采血• （3）尾静脉注射
小鼠的基本实验操作
• 6、采血
• （1）眼眶后静脉丛采血 （2）眼球摘除采血
• 7、麻醉
• 2%水合氯醛，20ml/kgBW，腹腔注射
8、处死
• • 颈椎脱臼 过量麻醉
小鼠的基本实验操作
• 9、解剖
腹腔：肝脏、胃、肠道、胰腺、脾脏、肾脏、肾上腺、 输尿管、膀胱；卵巢、输卵管、子宫；睾丸、附睾、输精 管。 胸腔：肺、心脏。 颈部：甲状腺。 头部：开颅取脑。 • 要求：辨识各个器官，观察正常大小、形状、色泽、 表面形态。
近交系小鼠皮肤移植试验
• 2、自体尾-尾植皮法
• （1）麻醉 固定 • （2）上一供体小鼠尾背部创面的下方取皮片 （0.5cm×0.5cm） • （3）旋转180〫覆盖在创面上 ， • （4）1～3周后观察
家畜繁殖学实验指导(2014.3.20)
实验一、人工授精器械的认识与假阴道的安装一、目的和要求1．熟悉人工授精所用的采精和输精器械，了解其用途及使用方法。
2．练习安装假阴道。
二、材料和仪器设备〔一〕采精器材牛羊猪马的采精用假阴道，牛羊电刺激采精棒，猪手握法采精用的橡胶手套〔二〕输精器材牛羊猪马输精器，阴道开张器，额灯和手电筒〔三〕辅助器材高压灭菌器，酒精灯，长柄钳，镊子，玻璃棒，棒状温度计〔四〕药品灭菌凡士林，75％和95％酒精棉球，滑石粉，来苏儿，洗衣粉三、方法和步骤先由老师讲解人工授精器材的构造、各部分名称和用途，并作假阴道安装的示范。
然后学生分组观察并作假阴道的安装练习。
〔一〕人工授精器材的认识1．假阴道为长筒状，由外壳、内胎和集精杯〔管〕三个主要部分组成。
其粗细和长短因畜种而异，不同国家不同时期的设计形式也不尽相同。
〔1〕外壳牛、羊和猪的假阴道外壳一般为硬橡胶或塑料制成的圆筒，中部装有可吹气、注水和排水的开关。
猪用假阴道则在此处连接一个可向假阴道内打气的双链球，以调节压力。
马的假阴道的外壳由镀锌铁皮或金属制成，分头、颈和体三部分。
筒体的中部装有把柄，其侧面有吹气和注水、排水孔，并有封闭塞或橡胶带。
〔2〕内胎由优质橡胶制成的胶筒，目前有些国家将其内胎面制成粗糙面，以增强采精时对阴茎的刺激，利于采精。
〔3〕集精杯〔管〕牛、羊用双层的棕色集精杯〔苏式〕或有刻度的离心管〔美式〕。
马用黑色橡皮杯〔苏式〕。
猪用棕色有刻度的广口瓶。
当用手握法对公猪进行采精时，只需备一只乳胶手套和收集精液的容器即可。
集精杯〔管〕可借橡皮圈直接固定于假阴道的一端或借橡胶漏斗与假阴道连接。
2．输精器苏式牛、羊输精器为一长颈玻璃注射器。
目前常用的为金属或塑料制成的输精管，其后连接一个橡皮球。
冷冻细管精液输精则使用金属制成的输精枪。
对牛羊等家畜的输精需借助阴道开张器和额灯或手电筒照明进行。
开张器的种类和大小因畜种而异。
〔二〕假阴道的准备1．假阴道外壳及内胎的检查〔1〕检查假阴道外壳两端是否光滑，外壳有否裂隙或开焊之处〔特别是马用外壳〕。
试验六1、小鼠采精方法的研究
实验六、小鼠采精方法中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVEMEDICINE2005年4月第15卷第2期April, 2005 Vol.15 No。
2郑新民,李聚学，魏雁，乔宪凤,周荆荣（湖北省农科院生物技术研究所，武汉430072小鼠是世界上研究最为详尽的哺乳类动物［1］.但是目前人们仍然是通过手术法从小鼠附睾中获取精子，国内外尚无小鼠非手术法采精的报道.手术法采精为众多的科学研究带来了不便：（1)手术法采精必须将雄鼠处死，分离其附睾和输精管来获取精子,过程繁琐，费时费工,且造成不必要的经济浪费［2]。
另外，从附睾中获取的精子由于缺少副性腺中的诸多有益成分，精子品质难以保证[3];（2）不利于小鼠生殖生理的研究,在医学上,人们都是通过“杀鸡取卵”式地宰杀大量的雄鼠来获取精子进行科研分析[4-6],不但造成了很大的经济浪费，而且增加了实验的误差和难度;(3)不利于某些动物模型的建立,例如，由于小鼠精子获取繁琐，人工授精技术不易建立，精子载体转基因技术尚无理想的动物模型,这极不利于该项研究的开展［7］。
由此可见,建立一种方便快速的小鼠非手术法采精技术对解决小鼠手术法采精中存在的问题、小鼠生殖生理的研究和建立某些小鼠动物模型都是很有意义的。
1 材料和方法1。
1 实验动物SPF级昆明小白鼠雄鼠,购自湖北省预防医学科学院。
合格证号为：SYXK(鄂）20035853。
1.2 小鼠假阴道抽吸器的制备小鼠假阴道的制作：取一段长约2 cm,内径8 mm的软质透明塑料管,在其内侧套上一层厚度约0.1 mm的胶膜,胶膜要求透明且有良好的弹性。
在塑料管中部钻一直径为2 mm的小孔,将一外径与小孔相当的硬质插管插入小孔中，深度与塑料管管壁厚度相当,小孔周围用强力胶水密封,向小管中轻轻吹入空气即可将塑料管内侧胶膜充起。
将制好的小鼠假阴道与胶头吸管相连,小鼠假阴道抽吸器即制作完毕。
1.3 电刺激采精仪的制备电刺激采精仪由电刺激发生器和直肠探子两部分组成。
121140066 许克波 小鼠输精管结扎
小鼠输精管结扎及小鼠各时期精子形态观察
121140066 许克波 253
一、实验目的
1、学习小鼠结扎方法；
2、学习雄性小鼠生殖系统特点；
3、观察小鼠生殖系统各部位的精子形态特点；
二、实验原理
断颈法处死小鼠：
小鼠不能用毁髓法处死，最简单的方法便是断颈法对小鼠进行处死。
先给小鼠一个抓着物，然后左手捏住小鼠颈部毛皮并轻摁在桌面上，右手拉住小鼠尾巴后三分之一处向上30度左右使劲一拉，将小鼠颈椎拉断就可以了。
这样处死小鼠可以让小鼠在痛苦最小的情况下死去，是符合动物福利学的一种实验方法。
三、实验动物及器材
雄性小鼠；
基本解剖器械、注射器、显微镜、生理盐水等；
四、实验操作
1、处死小鼠；（我做的）
2、解剖小鼠并找到小鼠生殖系统；
3、输精管结扎；（每人做一边）
4、取精观察；（合作）
五、实验结果
实验中观察到的生殖系统结构：
睾丸内精子图片：
输精管内精子图片：
六、分析及讨论
我们只在睾丸和输精管内取出了精子，但是由于附睾的头、体、尾、三部分过小，而且不能切开取精，注射器也没能吸出来，所以没能观察到附睾内的精子形态。
输精管结扎的方法
输精管结扎的方法输精管结扎是一种常见的绝育手术，用于男性不再生育的目的。
下面我将详细介绍输精管结扎的方法。
输精管结扎是通过手术将男性的输精管结扎起来，以阻止精子的通路，从而达到不再生育的效果。
传统的输精管结扎手术是通过一种所谓的“直视手术”来进行的。
即医生使用显微镜帮助定位和结扎输精管。
手术通常在局部麻醉下进行，并且需要进行小切口。
然后，医生将输精管暴露出来，并进行结扎。
剪切输精管并结扎管腔的两端，通常使用可降解的线来结扎，以防止再通。
手术进行得当的话，男性液中的精子将无法从输精管里通过。
传统的输精管结扎手术虽然是一种安全有效的方法，但存在一些风险和不便之处。
手术需要一定的恢复期，通常需要几天到一周的时间。
术后可能会出现一些轻度的不适感，如疼痛、肿胀和淤血等。
此外，手术后可能还需要避免过量活动，以免影响愈合和恢复。
然而，在近年来，还出现了一些更为现代化的输精管结扎方法，如微创输精管结扎术和阻塞法。
微创输精管结扎术是利用微创手术技术进行的，采用针刺方式将输精管结扎起来，无需进行割裂和结扎。
这种方法更为简便，术后恢复期短，风险也较传统方法小。
阻塞法是通过入选可降解的植入物到输精管内，使输精管被封闭。
这种方法既方便又安全，不需要进行手术，也无需进行切口和结扎。
无论使用哪种方法，输精管结扎都是一种永久性的绝育手术，因为输精管的结扎通常是不可逆转的。
因此，在决定进行输精管结扎手术之前，男性应该充分考虑自己是否确实不再生育，并在医生的指导下做出决定。
此外，还应该了解手术的风险、恢复时间等因素。
如果男性有意后悔，想要恢复生育能力，那么输精管结扎的逆转手术是存在的，但效果和成功率并不高。
综上所述，输精管结扎是一种常见的绝育手术，用于男性不再生育的目的。
传统的输精管结扎手术是通过直视手术进行的，而现代化的方法如微创输精管结扎术和阻塞法则更为方便和安全。
无论使用哪种方法，男性在做决定之前都应该充分了解手术的细节和风险，并在医生的指导下进行决策。
小鼠胆总管结扎实验报告
小鼠胆总管结扎实验报告一、引言胆总管是将胆汁从肝脏运输到小肠的管道，它在胆汁的合成和排泄中起着重要的作用。
为了研究胆总管的功能以及其在胆汁形成和排泄中的作用，科学家们开展了胆总管结扎实验。
本实验旨在通过结扎小鼠的胆总管，观察胆汁的合成和排泄是否受到影响，进而探究胆总管在胆汁循环中的作用。
二、实验方法1. 实验动物：选取健康的小鼠作为实验对象，确保它们的年龄和体重相似。
2. 麻醉：使用适量的麻醉剂将小鼠麻醉，确保其不会感到疼痛。
3. 手术操作：在麻醉状态下，将小鼠固定在手术台上。
通过腹部切口找到胆总管，使用微创技术将其结扎。
4. 术后护理：术后将小鼠放置在温暖、干燥的环境中，观察其恢复情况，并提供适量的食物和水。
三、实验结果通过实验观察发现，结扎小鼠的胆总管后，其胆汁的排泄量明显减少。
此外，胆汁中的胆固醇和胆盐的含量也出现了明显的下降。
这表明胆总管在胆汁的合成和排泄中起着重要的作用。
四、实验讨论1. 胆总管结扎后胆汁排泄减少的原因：胆总管结扎后，胆汁无法正常流入小肠，导致胆汁排泄量减少。
此外，结扎后可能会影响胆固醇和胆盐的合成和排泄，进一步降低胆汁的排泄量。
2. 胆总管结扎对小鼠的影响：胆总管结扎可能会导致小鼠的食欲下降，消化不良等问题。
此外，胆总管结扎还可能影响小鼠体内营养物质的吸收和代谢。
3. 胆总管在胆汁循环中的作用：胆总管在胆汁循环中起着重要的作用。
它将肝脏合成的胆汁运输到小肠，帮助消化和吸收脂肪。
同时，胆总管还起到排泄废物和代谢产物的作用，维持体内的代谢平衡。
五、实验结论通过胆总管结扎实验，我们观察到胆汁的合成和排泄受到了明显的影响。
胆总管在胆汁循环中起着重要的作用，对于胆汁的合成、排泄以及脂肪消化和吸收具有重要的调节作用。
该实验结果对于深入理解胆总管的功能和胆汁循环的机制具有重要的意义。
六、实验的局限性本实验使用小鼠作为实验对象，其生理特征与人类并不完全相同，因此实验结果可能存在一定的局限性。
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小鼠输精管结扎和简单精子操作
121140052 王哲迪 174
一、实验目的
1、掌握小鼠手术的基本技巧
2、学习雄性小鼠生殖系统特点
3、练习显微操作技术
二、实验结果及分析
1、以腹部横切法剪开小鼠腹壁后，用镊子夹住脂肪垫将睾丸、附
睾和输精管拉出切口。
实验时我们将下面图片中镊子夹着的地方剪掉了1cm。
但是
在仔细观察过右边这个图后发现，我们错把附睾体当做了输精管。
我们剪掉的是附睾体，而不是输精管。
2、下面这张图片是小鼠腹壁缝合后的照片。
我们采取了方洁的打结方式。
在将睾丸放回腹腔的过程中，发现不管怎么推，都不能把睾丸推回阴囊，这给缝合带来了一定的难度。
缝合腹壁时一定要小心，因为缝合针很容易扎到皮肤和腹腔内的脏器。
3、下图为皮肤缝合后的照片，同样采用的是方结的打结方式。
皮肤相对于腹壁而言较容易缝合。
4、下图为在解剖镜下观察得到的照片。
可能由于角度问题，这张图片上只能分辨出脂肪体和睾丸，并不能看到附睾体和输精管。
取出睾丸时的操作也存在问题，并没有注意到输精管在哪里。
上面剪切输精管时也没有找对输精管，所以实验失败在没有观察到输精管。
脂肪体
睾丸
4、下图为在显微镜下观察精子得到的照片。
正如细线所指的，图中有着尖尖的头部和一条细长的尾巴的就是精子。
由于载玻片上有一些脂肪体残留的脂肪，所以在显微镜下会看到很多油花，影响精子的观察。
但是仔细看还是可以看到许多在快速无规则运动的精子。
精子
三、备注
1、本人在实验中操作的部分：
对小鼠进行断颈处理
切开腹壁
夹出睾丸、附睾和脂肪体
剪掉1cm输精管（其实剪掉的是附睾）
部分缝合操作
2、实验要求用乙醚麻醉小鼠，但是实验过程中发现用乙醚麻醉的方法并不好，小鼠经常会醒过来，而且用乙醚操作时间长了，实验人员出现头疼恶心等不适症状。
由于并不需要对小鼠进行回收，所以为了方便操作我们直接采取了断颈处理的方法。