三种中国南海红树林内生真菌 次级代谢产物的研究课件
南海红树林内生真菌GX—3代谢产物研究
南海红树林内生真菌GX—3代谢产物研究摘要：采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶色谱法等分离纯化南海红树林内生真菌GX-3的代谢产物，并通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。
结果表明，从南海红树林内生真菌GX-3的菌体中分离得到6个代谢产物。
经波谱解析，分别为：环（苯丙-甘）二肽（1）、环（丙-亮）二肽（2）、Fusaric acid （3）、3，6-di-sec-butyl-1，4-dihydroxypiperazine-2，5-dione（4）、环（脯-亮）二肽（5）、环（甘-亮）二肽（6）。
初步药理活性显示化合物1对口腔癌细胞KB、KBv200的抗肿瘤活性的LD50值分别为6.5和11.2 μmol/L。
通过鉴定，所有化合物均系首次从南海红树林内生真菌GX-3中分离得到。
关键词：红树林；内生真菌；代谢产物海洋微生物资源由于具有可持续开发性，其活性物质生产不受天然资源难再生的限制，能通过发酵进行胞外生产，与现代微生物技术相结合，较容易实现工业化生产，特别是其生产不对环境造成危害，符合当今绿色化学发展的方向。
而多数报道均显示海洋真菌都与红树林有着紧密的联系[1，2]，对红树林真菌生物活性物质的研究已成为海洋微生物资源开发利用，寻找天然药物先导化合物的重要途径。
近十几年来，已有学者对中国南海红树林内生真菌进行了系统的研究，并从中分离获得了一系列结构新颖、药理活性良好的海洋天然化合物[3-9]。
1 材料与方法1.1 仪器和试剂美国Varian公司的INOV A-500NB超导核磁共振谱仪、INOV A-300NB核磁共振仪、VG ZAB-HS双聚焦质谱仪、Thermo DSQ电子轰击电离质谱仪和Thermo MAT95XP高分辨质谱仪；北京泰克仪器有限公司的X-4数字显示显微熔点测定仪。
所用试剂均为广州化学试剂厂生产，化学纯，溶剂经重蒸后使用；柱层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的200～300目硅胶，硅胶H，薄层硅胶GF254。
《三株植物内生真菌次级代谢产物及其生物活性研究》
《三株植物内生真菌次级代谢产物及其生物活性研究》一、引言植物内生真菌是生态系统中不可或缺的组成部分，它们与宿主植物之间形成了复杂的共生关系。
近年来，随着对植物内生真菌的深入研究，越来越多的次级代谢产物被发现并展现出独特的生物活性。
本文将针对三株植物内生真菌的次级代谢产物及其生物活性进行详细研究，旨在为相关领域的研究提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料本研究选取了三株具有代表性的植物内生真菌，分别来自不同地区和不同种类的植物。
这些真菌经过分离、纯化后，用于后续的实验研究。
2. 方法（1）次级代谢产物的提取与分离：采用适当的溶剂对内生真菌进行提取，通过柱层析、薄层扫描等技术分离出次级代谢产物。
（2）生物活性检测：通过体外实验和体内实验，检测次级代谢产物的生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗氧化等。
（3）结构鉴定：利用现代分析技术，如核磁共振、质谱等，对次级代谢产物的结构进行鉴定。
三、实验结果1. 次级代谢产物的提取与分离结果通过适当的溶剂提取和柱层析、薄层扫描等技术，成功分离出三株内生真菌的次级代谢产物。
这些产物在紫外灯下呈现不同的荧光特性，表明其化学结构具有多样性。
2. 生物活性检测结果（1）抗菌活性：三株内生真菌的次级代谢产物均表现出不同程度的抗菌活性，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用。
其中，某株真菌的代谢产物对某种病原菌的抑制效果尤为显著。
（2）抗肿瘤活性：通过体外实验，发现某株内生真菌的次级代谢产物具有显著的抗肿瘤活性，能够抑制肿瘤细胞的生长。
这一结果为抗肿瘤药物的研究提供了新的思路。
（3）抗氧化活性：三株内生真菌的次级代谢产物均具有一定的抗氧化活性，能够清除自由基，减轻氧化应激对机体的损伤。
3. 结构鉴定结果通过现代分析技术，成功鉴定了三株内生真菌次级代谢产物的化学结构。
这些产物包括多种酮类、酚类、萜类等化合物，具有不同的生物活性。
四、讨论本研究发现的三株植物内生真菌的次级代谢产物具有丰富的生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗氧化等。
固体发酵培养南海红树林内生真菌1403次级代谢产物研究
固体发酵培养南海红树林内生真菌1403#次级代谢产物研究蔡奕彪蔡小玲（中山大学化学与化学工程学院海洋天然产物有机研究所；广东省生物功能分子重点实验室，广东广州510275）摘要：海洋红树林内生真菌次级代谢产物化学结构新颖、种类繁多，是天然药物先导化合物的重要来源。
本文对南海红树林内生真菌1403#进行了固体发酵培养，得到醌类等类型的化合物。
关键词：红树林内生真菌；次级代谢产物；固体培养海洋多变复杂的环境导致了海洋微生物的多样性。
海洋微生物因其特殊的生存环境而具有产生新型生物活性物质的巨大潜力。
近年来，从海洋真菌中分离鉴定了许多结构新颖的次级代谢产物，这些化合物显示了良好的抗肿瘤、抗细菌或抗真菌等生物活性，为新药的开发和各种疑难疾病的治愈提供了新的希望[1]。
红树林是一种热带盐滩上特有的植物群落，因此组成这个群落的几种主要种类在形态、生理、生态的各个方面都有它的特殊性：主要表现在胎萌现象以及根系的多样性中，以及红树林区经常受到海水的浸淹，土壤中的含盐量很高（一般在4.6~27.8‰之间），因而红树植物绝大部分属于盐生植物，具有排除或分泌盐分的结构，能将吸入体内的盐分分别经过茎、叶表面分布的盐腺排出，排在茎、叶表面的盐分晶体被雨水等淋洗掉。
如桐花树、海榄雌等植物，就有泌盐的机能，能排除过量的盐分，以适应高盐度的基质[2-3]。
在固体发酵中，菌体可以更高效地利用培养基中的营养物质，促进次级代谢产物的产生，同时，可能是因为固体发酵更好的模拟了其生活环境，且当菌株附着与固体基质上生长时，供氧丰富，生长密度大，生存竞争更为激烈，因此产生的次级代谢产物的量也会提高。
固体发酵还有含水量少，废水、废渣少，环境污染少等优点[4]。
醌类化合物(quinonoids) 指分子中具有不饱和环二酮结构（醌式结构）或容易转变为这种醌式结构的天然有机化合物。
主要包括:苯醌、萘醌、菲醌、蒽醌四类。
它是一种色素，在植物中主要存在于蓼科大黄、何首乌、虎杖；茜草科茜草、豆科决明子、番泻叶、百合科芦荟、唇形科丹参、紫草科的紫草等。
红树植物角果木内生真菌Cladosporium sp.JS1-2的次级代谢产物研究
文章编号：1001-8689(2020)07-0655-05红树植物角果木内生真菌Cladosporium sp. JS1-2的次级代谢产物研究白猛1, 2 王海洋1 练余兴 1 刘亚1 刘婷1 郑彩娟1,2,* 陈光英1, 2,*(1 热带药用资源化学教育部重点实验室，海南师范大学化学与化工学院，海口 571127；2 海南省热带药用植物化学重点实验室，海南师范大学，海口 571127)摘要：从红树植物角果木内生真菌枝孢霉属Cladosporium sp. JS1-2的发酵产物中共分离得到5个异香豆素类化合物(1~5)，1个苯并呋喃衍生物(6)，1个异色满衍生物(7)，以及5个其他类化合物(8~12)，通过理化性质和波谱数据对化合物的结构进行了鉴定。
通过微量稀释法测定所有化合物的抗菌活性，其中化合物6~8和11对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )的MIC 值均为12.5μg/mL ，阳性对照环丙沙星(ciprofloxacin)的MIC 值为3.12μg/mL 。
同时对所有化合物进行棉铃虫幼虫生长抑制活性测试，结果表明化合物4、5、8、9和11对棉铃虫幼虫的IC 50值均为100μg/mL ，阳性对照印楝素(azadirachtin)的IC 50值为50μg/mL 。
关键词：内生真菌；枝孢霉属；次级代谢产物；生物活性 中图分类号：R978.1 文献标志码：AStudies on secondary metabolites from the endophytic fungus Cladosporium sp.JS1-2 from mangrove plant Ceriops tagalBai Meng 1, 2, Wang Hai-yang 1, Lian Yu-xing 1, Liu Ya 1, Liu Ting 1, Zheng Cai-juan 1, 2 and Chen Guang-ying 1, 2(1 Key Laboratory of Tropical Medicinal Resource Chemistry of Ministry of Education, School of Chemistry and Chemical Engineering, Hainan Normal University, Haikou 571127; 2 Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Hainan Province, Hainan NormalUniversity, Haikou 571127)Abstract Five isocoumarins (1~5), one benzofuran derivative (6), one isochroman derivative (7), and five other compounds (8~12), were isolated from the culture extract of Cladosporium sp. JS1-2, an endophytic fungus obtained from the mangrove plant Ceriops tagal . The structures were identified on the basis of physiochemical properties and spectroscopic data analyses. All compounds were tested their antibacterial activities by microdilution method. Compounds 6~8 and 11 displayed antibacterial activities against Staphylococcus aureus with the same MIC values of 12.5μg/mL, the positive control was ciprofloxacin, with the MIC value of 3.12μg/mL. All compounds were also evaluated for their growth inhibition activities against newly hatched larvae of Helicoverpa armigera Hubner, compounds 4, 5, 8, 9 and 11 displays their growth inhibition activities with the same IC 50 values of 100μg/mL, the positive control was azadirachtin, with the IC 50 value of 50μg/mL.Key words Endophytic fungus; Cladosporium sp.; Secondary metabolites; Biological activity 收稿日期：2019-07-01基金项目：国家自然科学基金(No. 21662012)；研究生创新项目(No. Hyb2018-26)；大学生创新项目(No. cxcyxj2018009)作者简介：白猛，男，生于1990年，在读博士研究生，专业方向为天然有机化学，E-mail:******************通讯作者，郑彩娟，E-mail:******************,陈光英，E-mail:*******************红树林生态系统分布在热带、亚热带陆海交替和过渡地域的海岸带，红树植物长期生长于高盐、受周期性潮水浸淹、强风、高温、强紫外辐射和缺氧的特殊环境。
南海红树林内生真菌No.ZZF71代谢产物研究
本 文 首 次 报 道 对 南 海 红 树 林 内 源 真 菌 Ｎ ． Ｚ ７ 代谢产 物 的研 究工作 。通过静 置发 酵培 ｏＺ Ｆ １ 养， 从真菌 Ｎ 。Ｚ ７ ｏＺ Ｆ １的菌 体 和发 酵培 养液 中提 取 分离得到 ６个代谢 产物（ １ ， 图 ） 分别鉴定其 结构为 ： 环 （ 异亮 ） 肽 （ ） ８羟基．一 甲基．． 亮． 二 １ 、一 １羟 ３甲基一一 ２ （一 ３ 甲基一一 ２烯氧 ）９ 一 杂蒽 ．一 （ ） 三 油 酸甘 油 一Ｈ 氧 ９酮 ２ 、 酯 （ ）麦角 甾醇（ ） 甘露醇 （ ）苯 乙酸（ ） ３、 ４、 ５、 ６。
文章 编号 ：０ ４１ ５ （ ０ ８ ０ －８ ３０ １０ — ６ ２０ ） ７０ ９ －３ ６
南 海 红 树 林 内生 真 菌 Ｎ ． Ｚ ７ 代 谢 产 物 研 究 ｏＺ Ｆ １
杨 瑞云 ， 忠 京 邵 长伦 ， 永 成 ， 世 宁 黄 一， 林 周
（ ．广西 师范 大学化 学化 工学院 ， １ 广西 ２ ．中山大学化 学与化 学工程 学 院 ， 广东 ３ ．广西 民族 大学化 学与 生态工 程学 院 ， 广西 ４ ．中国海洋 大学 医药学 院 ， 山东 桂林 广州 ５ １０ ； ４ ０ ４ ５０ ７ ； １２ ５
收 稿 日期 ：０７】 ・２ 修 回 日期 ：０ ８０ －０ ２０ －１２ ； ２ ０ －２２
基金项目： 国家 ８３科技攻关计划资助项 目（ ０ ３ Ａ ２０ ０ ； ６ ２０ Ａ ６４ １ ） 广东省 自然科学重点基金资助项 目（ ２７ ２ ０１３）
联系人简介 ： 林永成（９ ５ ）男 ， １４ － ， 教授 ， 主要从事天然产物化学 的研究。Ｅ ａ ： ｓ ｃ ａ ． ｓ．ｄ ．ｎ ｍ ｉ ｃ ｌ ＠ｍ ｉ ｓ ｕ ｅｕ ｃ ｌｅｙ ｌｙ
南海红树林内生真菌Cephalosporium sp.(2090#)次级代谢产物研究
角瓶 ， 内装培养液 ３０ Ｌ 经 １１ ０ １ Ｐ 高温 ０ ｍ ， ２ ℃（ ．Ｍ ａ） 灭菌 ２ ｒｎ ５ ｉ 后在超净工作台上接种。共接种 ７ Ｌ ａ ０， ２ ℃静置培养四周后 ， ５ 分别收集发酵液和菌体。
１ ４ 提 取分 离 ．
７ Ｌ发酵 物过 滤得 菌体 和发酵 液 ， ０ 发酵 液浓 缩
（． １ 广东医学院药学院 ， 广东 东莞 ５ ３０ ；．胶南市第一中学 ， ２８８ ２ 山东 ３ ．中国海洋 大学 医药 学院 ， 山东 青 岛 ２ ６０ ； ６０ ３
４ ．中山大学化 学 与化学 工程 学 院 ， 广东
关键词 ： 红树林 内生真菌 ； 次级代谢 产物 ； 环二肽 ； 甾醇
青岛 ２６０ ； ６４０
发酵 培 养 基 为 葡 萄 糖 １ ０ ， 白 胨 ０ ２ ， ．％ 蛋 ．％
授采 自南 海 红 树 的 内 生 真 菌 ， 菌 的 种 属 尚 未 鉴 该
酵母 膏 ０ １ ， 海 盐 ０２ ％ ，Ｈ ． 。５０ Ｌ三 ．％ 粗 ．５ ｐ ７０ ０ ｍ
定， 本文首次研究了该菌的次级代谢产物。从该菌 的菌体浸提液中分离得到七个已知化合物， 通过波 谱解析 以及文献 对 照 ， 分别 鉴定 为 ： （ 一 ） 肽 环 亮 亮 二 （ ）环 （ 亮 ） １ ， 丙一 二肽 （ ）环 （ 一 亮 ） 肽 （ ）环 ２， 亮 异 二 ３， （ 一 ） 肽（ ） 脯 异亮 二 ４ 和环 （ 苯丙一 ） 肽 （ ）麦 角 甾 甘 二 ５， 醇（） ６ 和过氧化麦角 甾醇 （ ） ７。
１ 实 验 部分
１ １ 仪器 与试 剂 ．
仪器 ： 国 Ｂｕｅ 公 司 Ｖ Ｃ Ｏ ２型 富 立叶 德 ｒｋｒ Ｅ Ｔ Ｒ２
变换红外光谱仪 （ Ｔ Ｒ ｓ ｃ ｏ ｅ ｒ ； 国 Ｖ ｒ ｎ Ｆ — ｅｔｍ ｔ ）美 Ｉ ｐ ｒ ｅ ａ ａ ｉ 公 司 ＩＯ Ａ ５０ Ｂ超 导 核 磁 共 振 谱仪 ； 国 Ｖ Ｎ Ｖ ０ Ｎ 英 Ｇ 公 司 Ｚ ＢＨ Ａ —Ｓ双聚 焦 磁 质 谱 仪 ； 国 Ｅｅ ｅｔ 公 德 ｌｍ ｎａ ｒ 司 Ｖｒ ＬＣ ＳＯ元素 分 析仪 。 ａｉ Ｅ ＨＮ — ｏ 试 剂 ： 萄 糖 Ｃ 蛋 白胨 Ｂ 酵 母 膏 Ｂ 粗 葡 Ｒ， Ｒ， Ｒ，
三株海洋真菌活性次生代谢产物及其碱调节研究
三株海洋真菌活性次生代谢产物及其碱调节研究海洋真菌是活性海洋天然产物的重要来源。
由于海洋真菌生活在寡营养，弱碱的海水环境中，可能形成独特代谢机制，产生有别于陆生真菌的次生代谢产物，近年来逐渐成为研究的热点之一。
为了寻找海洋来源真菌中的“Talented strains”和结构新颖的活性代谢产物，本论文对分离自南海直针小尖柳珊瑚Muricellaabnormalis、海南文昌头苑红树植物海漆Excoecaria agallocha根部样品和东营黄河入海口滩涂植物蒙古鸦葱Scorzonera mongalica三种不同海洋来源样品中分得的真菌，通过化学和生物学相结合的筛选模式，从中获得3株海洋来源“Talentedstrains”；对这3株“Talented strains”进行系统的次生代谢产物研究，并选择其中的一株“Talented strains”进行了碱胁迫发酵培养的初步研究。
取得的主要研究成果有：1.海洋天才真菌的筛选。
从实验室菌株库提供的10株海洋来源真菌为筛选对象。
以MCF-7肿瘤细胞增殖抑制、抑菌和抗炎试验作为生物活性筛选模型，TLC薄层色谱和HPLC指纹图谱作为化学筛选模型，采用生物活性和化学评价相结合的集成筛选模式，最终获得3株海洋“Talented strains”，并对3株“Talentedstrains”碱胁迫发酵培养条件进行探索研究。
2.对3株海洋“Talented strains”次生代谢产物进行系统研究。
包括对“Talented strains”进行发酵条件摸索，如培养基、发酵天数、碱源及盐度等，选择最佳培养条件进行大发酵，获得发酵浸膏。
通过薄层色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、反相高效液相色谱等分离方法，从3株海洋天才真菌次生代谢产物中，应用现代波谱技术(UV，IR，NMR，MS，X-Ray等)和化学方法分离鉴定了76个单体化合物的化学结构。
其中新化合物23个：从团青霉Penicillium commune518#的代谢产物中获得了12个新的芳香聚酮类化合物（1–12）；从扩张青霉Penicillium expansum091006的代谢产物中得到1个新的没药烷型倍半萜衍生物（25）和1个新的二聚苯酚类衍生物（29）；从互隔交链孢菌Alternaria alternata007#的代谢产物中得到4个新的混源萜类化合物（40–43）。
南海红树林内生真菌Sk-2代谢产物研究
南海红树林 内生真菌 Ｓ ｋ 一 ２ 代谢产物研究
杨 建香
ｆ 桂林 师范高等专科学校 学报编辑部 ， 广西 桂林 ５ ４ １ ０ ０ １ ）
［ 摘 要】 目的：研究南海红树林 内生真菌 ｓ ｋ 一 ２的代谢产物。方法 ：采用反复硅胶柱色谱法、 Ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｄ ｅ ｘ
Ｌ Ｈ 一 ２ Ｏ凝 胶色 谱法 等进行 分 离纯化 ， 并通过 理化 常数 测定和 核磁 数据分 析鉴 定其 化学结 构。结 果 ： 从南海 红树 林 内 生 真菌 Ｓ ｋ － ２的培 养 液 中分 离得 到 ４个 代 谢 产 物 。经 波 谱 解 析 ，分 别 为 ：大 黄 素 甲醚 （ １ ） ， ３ ， ６ 一 ｄ ｉ ｓ ｅ ｃ ｂ ｕ ｔ ｙ ｌ 一 １ ， ４ 一 ｄ １ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙ ｐ １ Ｄ ｅ ｒ ａ ｚ ｛ ｎ ｅ 一 ２ ， ５ 一 ｄ ｉ ｏ ｎ ｅ （ ２ ） ． ７ ， ８ 一 二 甲基 苯 并 ［ ｇ ］ 蝶啶 一 ２ ， ４（ １ Ｈ ， ３ Ｈ ） 一二酮（ ３ ） 过氧 化麦角 甾醇（ ４ ） 。结论 ： 四个化 合物 均首次 从南 海红树 林 内生真菌 Ｓ ｋ 一 ２中分 离得到 。
研究表明， 海 洋 微 生物 将 成 为 下 个 世 纪 开 发 新 型 药 物 的重 要 资 源［ ３ １， 海 洋 微 生 物 是 产 生新 的 生 物 活 性 物 质 的极 好 来 源之 一 ， ｌ ４ １ 而 海 洋 微 生 物 中 的红 树 林 内生 真菌 ， 已成 为海 洋微 生 物 资 源开 发 利用 ， 寻 找 天然 药物 先导 化合 物 的重要 途径 。 本 文对 南 海 红 树 林 内生 真 菌 Ｓ Ｋ一 ２的次 级 代 谢 产 物 进 行 系 统研 究 ， 从 培 养 液 中分 离 得 到 ４个 化 合 物： （ １ ）大 黄 素 甲醚 ； （ ２ ） ３ ， ６ 一 ｄ ｉ ｓ ｅ ｃ ｂ ｕ ｔ ｙ ｌ 一 １ ， ４ 一 ｄ ｉ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ —