dcfh-da活性氧检测原理
dcfhda荧光探针原理
dcfhda荧光探针原理DCFH-DA荧光探针原理一、DCFH-DA荧光探针简介DCFH-DA是一种常用的细胞活性氧（ROS）指示剂，是一种无色、无味、无毒的化学物质，可以在细胞内通过酯酶水解成为荧光染料DCFH。
DCFH能够被ROS氧化成为强荧光产物DCF，因此可以用来检测ROS的产生情况。
二、DCFH-DA荧光探针原理1. DCFH-DA的特点DCFH-DA具有以下特点：（1）易于渗透细胞膜：由于其结构中含有酯基，可以很容易地穿过细胞膜进入到细胞内部。
（2）不具有荧光：DCFH-DA在细胞内并不会自发发出荧光信号，而需要被ROS氧化后才会发出强烈的荧光信号。
（3）对活性氧敏感：DCFH-DA只有在存在ROS时才能够被氧化，因此可以作为活性氧指示剂来使用。
2. ROS的产生与检测ROS包括超氧阴离子（O2•−）、过氧化氢（H2O2）、羟基自由基（•OH）等。
这些ROS可以通过多种途径产生，如细胞呼吸、光合作用、化学反应等。
在细胞内，ROS的过量产生会导致氧化应激反应，从而引起多种疾病的发生。
DCFH-DA可以检测ROS的产生情况。
当DCFH-DA进入到细胞内后，通过酯酶水解成为DCFH。
在存在ROS时，DCFH会被氧化成为强荧光产物DCF，从而发出荧光信号。
因此，DCFH-DA可以用来检测ROS的产生情况。
3. DCFH-DA的应用DCFH-DA可以广泛应用于多个领域中：（1）医学领域：DCFH-DA可以用来检测细胞内ROS的水平变化，从而判断氧化应激反应是否发生，并且可以用来研究ROS与多种疾病之间的关系。
（2）环境科学领域：DCFH-DA可以用来检测环境中污染物对细胞内ROS水平的影响。
（3）食品科学领域：DCFH-DA可以用来检测食品中抗氧化剂的含量，从而评估食品的质量。
三、DCFH-DA荧光探针的优缺点1. 优点（1）DCFH-DA无毒、无味、无色，不会对细胞产生影响。
（2）DCFH-DA可以很容易地穿过细胞膜进入到细胞内部。
组织ros含量检测方法
ROS 含量检测方法1. 荧光染料法•DCFH-DA:一种非荧光的醋酸酯，进入细胞后被酯酶水解为 DCFH，而后被活性氧氧化为高度荧光的 DCF。
•H2DCFDA:类似于 DCFH-DA，但具有更高的水溶性和更快的氧化速度。
•DHE:一种非荧光染料，与细胞内的超氧化物反应形成荧光产物 ethidium。
2. 化学发光法•Lucigenin:一种非荧光化合物，在与超氧化物反应后发出化学发光。
•L-012:一种化学发光探针，与活性氧反应发出荧光。
3. 电化学法•ROS 电极:一种选择性电极，可检测特定类型的活性氧，如超氧化物或过氧化氢。
4. 蛋白质氧化法•羰基化:检测蛋白质羰基含量，它是脂质过氧化和蛋白质氧化的标志。
•硝基化:检测蛋白质硝基含量，它是自由基攻击的标志。
5. 脂质氧化法•丙二醛 (MDA) 测定:检测 MDA 含量，它是脂质过氧化产物。
•脂质过氧化物检测:测量双键脂质产物，如 F2-异前列腺素。
6. DNA 氧化法•8-羟基脱氧鸟嘌呤 (8-OHdG) 测定:检测 DNA 氧化产物 8-OHdG 含量。
•单链 DNA 断裂测定:测量单链 DNA 断裂的频率。
7. 抗氧化剂水平测量•谷胱甘肽测定:检测谷胱甘肽含量，它是主要的抗氧化剂。
•维生素 E 测定:检测维生素 E 含量，它是脂溶性抗氧化剂。
选择方法时的考虑因素•ROS 类型:不同的方法对不同类型的 ROS 有选择性。
•样本类型:一些方法需要特定的样本类型，如细胞悬液或组织匀浆。
•检测灵敏度:一些方法比其他方法更灵敏。
•成本和复杂性:不同的方法具有不同的成本和复杂性。
活性氧检测试验方案
活性氧检测试验方案活性氧检测试验方案一：实验原理活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。
而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。
细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。
检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。
Rosup是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml。
二：实验步骤⑴取20 ul DCFH-DA（试剂盒有100ul)按照1:1000用无血清培养液即20ml稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/ 升。
⑵吸取12ml细胞培养液（细胞浓度为一百万至二千万/毫升）加入24孔板中（设3个阳性对照，3个浓度梯度分别做3个重复，每孔加入1ml细胞培养液），放入细胞培养箱中培养。
⑶培养24小时后去除细胞培养液，每孔加入稀释好的DCFH-DA 1ml （加入的体积以能充分盖住细胞为宜）。
⑷ 37℃细胞培养箱内孵育20分钟。
⑸去除孵育后的DCFH-DA稀释液，每孔加入1ml无血清细胞培养液洗涤细胞（重复洗涤三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA）。
洗涤完后每孔加入1ml 细胞培养液。
⑹在酶标仪下使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前荧光的强弱即OD值。
⑺实验组中每孔加入已配制好的松茸多糖20ul(浓度分别为5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml),对照组中加入阳性对照物Rosup 20ul，放入细胞培养箱内继续培养。
⑻4小时后，在酶标仪下使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激后荧光的强弱即OD值。
三：数据处理实验组：癌细胞活性氧降低率=（刺激前OD值－刺激后OD值)/刺激前OD值×100%阳性对照组：癌细胞活性氧升高率=（刺激后OD值－刺激前OD 值)/刺激前OD值×100%四：注意事项⑴探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
活性氧（ROS）测定试剂盒说明书
②、波长设置：最佳激发波长 500(50015nm)，最佳发射波长 525 (53020 nm)。也可按照 FITC 荧光检
测条件检测。 ③、结果以荧光度值表示。
四、细胞样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
二、试剂组成及保存： 1、0.1ml 10mM DCFH-DA in DMSO，20℃保存。 2、1ml 活性氧供氢体，4-8℃保存。
三、组织样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
1、单细胞悬液制备： 方法 1、采用单细胞悬液制备仪制备单细胞悬液。 方法 2、酶消化法： 方法 3、机械法（网搓法）：
本试剂盒仅用于科研实验
1、直接将探针加入培养液中： ①、直接将 DCFH-DA 探针加入无血清培养基中：一般按照 1 ：1000 用无血清培养液稀释 CFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜， 通常对于 6 孔板的一个孔加入稀释好的 DCFH-DA 不少于 1ml。 ②、取一份不加探针，只加入培养基的细胞设为阴性对照管。阳性对照管：取一份已加入探针的细胞，同 时加入活性氧供氢体诱导细胞，推荐该试剂的工作浓度为 20～100µM。 ③、37℃孵育细胞 30min～几小时，通常为 30～60min 即可，孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA 浓度有关。一般阳性对照在刺激细胞 30 分钟左右，即可观察到明显的绿色荧光。 ④、吸去培养液，利用无血清培养液或者 0.01MPBS 反复吹打，肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成 片)转为透明，细胞层几乎全部吹打到 PBS 中。 ⑤、将细胞悬液全部收集到 1.5ml 离心管中。用无血清培养液或者 PBS 洗涤 2 次，以充分去除未进入细 胞内的 DCFH-DA。1000rpm/min，5min，吸净上清后加入 PBS 重新悬浮细胞进行测定。
DCFHDA活性氧的检测
产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
产品简介： 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧
化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 贝博活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针 DCFH-DA 进行活性氧检测的试剂盒。
DCFH-DA 本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解 生成 DCFH。而 DCFH 不能通透细胞膜，从而使探针很容易被标记到细胞内。在活性氧存 在的条件下，DCFH 被氧化生成荧光物质 DCF，绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比， 检测 DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
-2-
咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
检测： 对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光 光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光 度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。 使用 488nm 激发波长，525nm 发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF 的荧光光谱和 FITC 非常相似，可以用 FITC 的参数设置检测 DCF。
PH0630 活性氧检测试剂盒实验操作手册 Phygene
PH0630|活性氧检测试剂盒Reactive Oxygen Species Assay KitCatalog No：PH0603Size：☐100~500Tests Store at-20℃活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）是一种基于荧光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate）的荧光强度变化，定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。
进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。
而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞内。
细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。
绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。
在最大激发波长480nm，最大发射波长525nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。
Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。
根据检测体系和检测方法的不同，本试剂盒可测定100~500次。
试剂存储冰袋运输。
-20℃干燥避光保存，有效期一年。
试剂组分编号组分规格保存方法PH0630-A DCFH-DA（10mM）0.1mL-20℃，避光保存PH0630-B活性氧阳性对照（Rosup,100mM） 1.0mL-20℃，避光保存使用说明检测步骤1.装载探针1.1原位装载探针（仅适用于贴壁细胞）①细胞准备：检测前一天进行细胞铺板，确保检测时细胞汇合度达到50~70%。
【注】：必须保证细胞状态健康，且检测时不会过度生长。
②药物诱导：去除细胞培养液，加入适量经合适的缓冲液或无血清培养基稀释到工作浓度的药物，于37℃细胞培养箱内避光孵育，具体诱导时间根据药物本身特性，以及细胞类型来决定。
（可选）阳性对照：先用无血清培养基等稀释阳性对照（Rosup,100mM）到常用工作浓度100μM，加入细胞，一般37℃避光孵育30min-4h 可显著看到活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异。
dcfda法 -回复
dcfda法-回复dcfda的含义与应用。
DCFDA是一种广泛应用于细胞生物学和药物筛选领域的荧光探针，它可以用于评估细胞活力、检测细胞应激和测定细胞中的氧化还原状态。
在本文中，我们将逐步介绍DCFDA的使用方式和优势，并探讨其在细胞研究中的作用。
首先，DCFDA是一种草酰荧光氯化酯（dichlorofluorescein diacetate）探针，通过测量其转化为草酰荧光素（dichlorofluorescein）的草酰酶（esterase）活性，来评估细胞中的活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平。
活性氧在正常代谢过程中产生，但在细胞应激、疾病进展和氧化损伤等情况下，可能会过度积累，导致细胞损伤甚至死亡。
因此，对于研究活性氧的产生和剧烈变化具有重要意义。
其次，DCFDA的使用方法相对简单。
首先，将DCFDA溶解在适当的溶剂中，制备一定浓度的工作溶液。
然后，将待测细胞分配到96孔板中，对照组和实验组各设置3个孔。
接下来，向每个孔中添加适量的DCFDA 工作溶液，使其最终浓度在细胞耐受范围内。
最后，孔板放置在培养箱中，恢复适宜的培养条件。
一定时间后，可以使用荧光显微镜或流式细胞术测量细胞中草酰荧光素的荧光强度。
草酰荧光素的荧光强度与细胞内活性氧水平成正比。
DCFDA在细胞研究中具有多种优势。
首先，它是一种非侵入性的探针，不会对细胞造成实质性的损伤，可以长期监测细胞的活性氧水平。
其次，DCFDA具有较高的灵敏度和选择性，可检测低浓度的活性氧水平，并与其他产生荧光的物质区分开来。
此外，DCFDA的使用方法简单直观，易于操作。
最重要的是，DCFDA可以应用于不同类型的细胞和组织，包括培养的细胞、原代细胞和体内细胞，为不同研究领域提供了广泛的适用性。
通过DCFDA的应用，我们可以得到许多有用的信息。
首先，我们可以评估细胞内活性氧水平的变化情况，了解细胞对环境应激的响应和适应能力。
dcfh-da荧光探针分子式
dcfh-da荧光探针分子式全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：DCFH-DA荧光探针是一种常用于细胞活性氧（ROS）检测的荧光探针。
ROS是细胞内的一类活性氧化物质，在细胞内参与了氧化还原反应，同时也是一种细胞内信号分子，与细胞的生理功能和疾病发生密切相关。
DCFH-DA（2',7'-二氯二羟荧光素acethoxymethyl 酯）是一种无色、无味的脂溶性荧光探针，在细胞内可以被酯酶水解释放出荧光素荧光团。
DCFH-DA与ROS的检测原理基于氧自由基可在酶的催化下将非荧光物质氧化为荧光物质，因此该荧光探针能够在细胞内检测活性氧的水平。
DCFH-DA荧光探针的合成方法比较简单，通常是通过将2',7'-二氯荧光素（DCFH）与乙酰氧甲基化试剂（acethoxymethyl）在碳酸氢钠缓冲溶液中反应合成，再通过减压蒸馏或硅胶柱层析纯化得到目标产物。
DCFH-DA的荧光特性主要是在考察细胞内氧气活性时的上，其最大吸收波长在485 nm，最大发射波长为529 nm，发射光比较稳定，可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
DCFH-DA荧光探针已经广泛应用于心血管疾病、神经退行性疾病等病理生理过程的研究中。
在心血管疾病中，ROS的水平与动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病的发生发展相关。
研究人员通过DCFH-DA 荧光探针检测活性氧的水平，探索ROS与心血管疾病的关联，并希望通过抑制ROS的积累来减缓或治疗心血管疾病。
在神经退行性疾病中，如帕金森病和阿尔茨海默病，也发现ROS的水平升高。
科学家通过DCFH-DA荧光探针的应用，研究神经细胞中ROS的释放和清除机制，探索神经退行性疾病的发病机制。
第二篇示例：DCFH-DA是一种常用的荧光探针分子，通常应用于生物学研究领域。
它是一种非极性脂溶性分子，由于其能够在活细胞内被内切酯酶水解成为高度荧光的荧光染料，因此DCFH-DA广泛用于检测活细胞中的ROS（活性氧种）水平。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
dcfh-da活性氧检测原理
活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）是指一类具有高度活跃的氧原子或氧化剂，主要包括超氧阴离子（O2•-）、氢过氧化物（HO2•）、过氧化氢（H2O2）、单线态氧（1O2）、羟基自由基（•OH）等物质。
在正常生理状态下，适量的活性氧能够参与细胞信号传导、炎症应答、免疫调节等重要生物学过程。
然而，当活性氧的生成和清除失衡时，会导致细胞内的氧化应激，引发细胞内氧化性损伤，从而诱发多种疾病，如心血管疾病、神经系统疾病和肿瘤等。
活性氧的检测技术主要分为直接检测法和间接检测法。
直接检测法主要通过对活性氧的特定物理或化学性质进行测定，如电子顺磁共振（EPR）、荧光探针和化学发光等。
间接检测法则是通过测定活性氧对其他物质的氧化反应来间接评价活性氧的水平，如酶活性测定法和抗氧化剂测定法等。
本文将主要介绍直接检测法中常用的电子顺磁共振法（EPR）和荧光探针法。
一、电子顺磁共振法（EPR）：
电子顺磁共振法利用电子磁共振技术来直接检测自由基和活性氧。
其原理是利用带有未成对电子的物质（即自由基）对外加磁场的电子自旋产生磁共振现象。
在EPR仪器中，样品通过微波辐射，引发由磁共振演变而形成的微弱信号。
通过测量这些信号的幅度、形状和宽度等参数，可以判断活性氧的种类和数量。
EPR法的优点在于其高灵敏度和高特异性，可以实现对各种活性氧物质的定量分析。
然而，EPR仪器操作相对复杂，且仪器成本较高，因此在实际应用中受到一定的限制。
二、荧光探针法：
荧光探针法是一种通过测定荧光探针与活性氧的反应生成的荧光信号来间接检测活性氧水平的方法。
荧光探针是一类能够与活性氧发生反应的化合物，一般可分为特异性探针和非特异性探针。
特异性探针是指能够选择性地与活性氧发生化学反应，生成具有荧光特性的产物。
例如，二氟苯基三氟甲烷（DCFH-DA）作为一种常用的特异性探针，它通过氧自由基致氧化反应生成2',7'-二羟基荧光素（DCF），DCF会发出绿色荧光，并与活性氧的浓度呈正相关。
非特异性探针则是指在活性氧和其他生物分子之间发生反应生成荧光产物，不能直接与活性氧产物形成特异性产物。
例如，羟苯基二(2-羟苯酚曙红，H2DCFDA)是一种常用的非特异性探针，它能够与活性氧和氧自由基产生反应，生成荧光产物。
通过测定探针的荧光强度，可以间接反映活性氧的水平。
荧光探针法的优点在于其操作简单、成本低廉，对样品的破坏小，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
总之，活性氧的检测是研究氧化应激和相关疾病的重要手段。
电子顺磁共振法和荧光探针法是常用的活性氧检测方法，它们各自具有独特的优点和适用范围。
在实际应用中，可以根据需要选择合适的方法进行活性氧检测，以达到准确和可靠的检测结果。