自动生化分析仪的分析参数设置

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生化分析仪参数设置

生化分析仪参数设置

(八)底物耗尽限额设置。

有些仪器有自动选择线性功能,能自动 选择反应曲线上连续监测期内仍呈线性 的吸光度数据计算结果,使酶活性测定 的线性范围得以扩大,可以减少稀释及 重测次数。
(九)试剂吸光度上限、下限 和试剂空白速率设置。


每种试剂都有一定的空白吸光度范围, 试剂空白吸光度的改变往往提示着试剂 的变质,此时应更换合格试剂。 试剂吸光度上限为正向反应用,试剂吸 光度下限为负向反应用。
(三):样品量与试剂量设置

3.1稀释水量。 添加样品稀释水是为了洗出粘附在采样 针内壁上的微量血清,减少加样误差, 添加试剂稀释水是为了避免试剂间的交 叉污染。所以两种稀释水应尽量减少, 以免被过量稀释。
(三):样品量与试剂量设置

3.2最小样品量。 即分析仪进样针能在规定的误差范围内 吸取的最小样品量,随着技术的不断改 进,仪器的最小样品量逐渐减小,在样 品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的 情况下往往需采用分析仪的最小样品量 作为减量参数,从而使仪器的检测范围 上限得以扩大。
(一):检测方法。

1.3比浊法。 自动生化分析仪一般只能做透射免疫比 浊分析,当光线通过一定体积的含免疫 复合物的溶液时,由于溶液中存在的抗 原-抗体复合物粒子对光线的反射和吸收, 引起透射光的减少,测定的光通量和抗 原抗体复合物的量成反比。
(一):检测方法。

比浊法常用于终点法测定,目前主要用于 血清特种蛋白的检测,如载脂蛋白、免 疫球蛋白等。
(一):检测方法。

1.1终点法 1.1终点法又称为平衡法,是根据反应达 到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其 对光吸收强度的大小对物质进行定量分 析的一类方法,有一点终点法和两点终 点法两类。

全自动生化分析仪的使用流程及操作步骤

全自动生化分析仪的使用流程及操作步骤

全自动生化分析仪的使用流程及操作步骤下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。

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自动生化分析仪试验参数设置

自动生化分析仪试验参数设置
自动生化分析仪 分析参数设置
张孝永
您遇到过这样的医疗纠纷吗? 您遇到过这样的医疗纠纷吗?
A医院的生化室使用全自动生化仪器,每天早上做两 医院的生化室使用全自动生化仪器, 医院的生化室使用全自动生化仪器 个水平的质控合格后才开始测试标本。某天, 个水平的质控合格后才开始测试标本。某天,检测了一例 病人标本ALT(丙氨酸氨基转移酶)结果为 病人标本 (丙氨酸氨基转移酶)结果为20U/L。生化 。 室的检验人员没有仔细检查其它项目就匆匆发了报告。 室的检验人员没有仔细检查其它项目就匆匆发了报告。 此人是一个严重的肝炎患者, 此人是一个严重的肝炎患者,当他拿到一个正常的 ALT结果的报告单,大为疑惑,于是第二天到另一家权威 结果的报告单, 结果的报告单 大为疑惑, 医院抽血化验,得到2500U/L的ALT报告,一场医疗纠纷 报告, 医院抽血化验,得到 的 报告 产生了!结果 结果……. 产生了 结果 检测人员很不理解,两个水平的质控都在靶值上, 检测人员很不理解,两个水平的质控都在靶值上,说 明试剂和仪器状态均正常, 明试剂和仪器状态均正常,为什么病人结果却相差如此悬 而且仪器也没有报警。 殊,而且仪器也没有报警。
延迟时间(Delay Time)
• 概念:指试剂与样本混合后到监测开始之间的时 间 • 应用:连续监测法或两点速率法法用 • 原因:酶与底物混匀后需要一定的时间才被激活, 直到线性期的零级反应后才能开始监测;有的项 目需要用工具酶将内源性代谢产物耗尽后才能监 测 • 方式: 以S“秒”或P(Point)测定点设置 • 项目和方法学不同时差别很大:CHE/CREA/ALT/ALP/CK/TBA
HITACHI P800 C501 OLYMPUS ABBOTT
• 样本与试剂的比例 样本与试剂的比例(SV:RV)即样本体积分数: 定义:样本体积与反应液总体积的比值(SV/TV) • 比例选择原则

全自动生化分析仪操作规程

全自动生化分析仪操作规程

全⾃动⽣化分析仪操作规程全⾃动⽣化分析仪操作规程BS-400全⾃动⽣化分析仪标准操作规程⼀、BS-400全⾃动⽣化分析仪标准操作规程(开/关机程序)1开机1.1依次打开分析部主电源、分析部电源、操作部显⽰器电源、操作部主机电源、打印机电源;1.2开启操作部主机后会⾃动启动操作软件,在对话框中输⼊⽤户名与密码;1.2.1若只关闭分析部电源保持试剂盘制冷,则要依次打开分析部电源、操作部显⽰器电源、操作部主机电源、打印机电源;1.2.2若使⽤仪器睡眠功能,则只需在对话框中输⼊⽤户名与密码,重新登陆;2分析前准备2.1观察各压⼒表是否在绿⾊标线之内;2.2检查蒸馏⽔、去离⼦⽔是否⾜够、废液管道有否堵塞,废液桶是否清空;2.3检查⾼浓度清洗罐是否有⾜够⾼浓度清洗液;2.4确认试剂盘的D1号位置已放置碱清洗液,D2号位置已放置酸清洗液,W号位置已放置蒸馏⽔、去离⼦⽔。

2.5确认样本盘的U号位置已放置尿液稀释液(ISE专⽤稀释液),D1位置已放置ISE清洗液(如选配有ISE模块),D2位置已放置酸清洗液,D3位置已放置碱清洗液,W位置已放置⾜够的蒸馏⽔、去离⼦⽔。

2.6对于选配ISE模块的仪器,确认ISE试剂包已安装且试剂存量充分。

2.7检查样本注射器和试剂注射器是否漏液以及是否有⽓泡。

2.8检查样本针,确认⽆污物,⽆弯折。

如有污物,清洗样本针。

如有弯折,更换样本针。

2.9检查试剂针,确认⽆污物,⽆弯折。

如有污物,清洗样本针。

如有弯折,更换样本针。

2.10检查样本搅拌杆与试剂搅拌杆,确认搅拌杆表⾯⽆污物,杆⽆弯折。

如有污物,清洗搅拌杆。

3关机3.1出”或“紧急退出”进⾏关机操作。

依次关闭打印机电源,操作部主机电源,操作部显⽰器电源,分析部电源,分析部主电源。

此时需要取⾛试剂仓内试剂冰箱保存。

3.2如保留试剂制冷功能,则不需要关闭分析部主电源。

3.3如需切换不同操作者,仪器处于“空闲”状态时,可点击3.43.5清理取⾛样本盘所有标本。

全自动生化分析仪技术参数

全自动生化分析仪技术参数

全自动生化分析仪技术参数1.技术规格:1.1 仪器类型:全自动分立式,急诊优先检测;分析参数和试剂全开放★1.2 分析速度:比色恒速≥400T/H1.3 同时分析项目:78个比色项目1.4样本位:≥90个样本位1.5样本管规格:标准杯、微量杯、原始采血管,规格(Φ12-13)mm×(25~100)mm1.6加样技术:液面探测、随量跟踪、立体防撞、堵针检测、空吸检测1.7 分析方法:终点法、两点法、速率法1.8试剂位:≥80个1.9 试剂针:液面探测、随量跟踪、立体防撞、气泡检测1.10试剂针携带率:自动清洗,携带率小于或等于0.1%1.11 反应杯:≥90个1.12反应杯清洗:自动8阶清洗,清洗水预加温2.校准与质控:校准方法包括1点线性法、2点线性法、多点线性法。

可自动描绘校准K值趋势图进行校准追踪。

可进行失控样本测试结果报警并记录失控原因3.软件主要功能:自动校准、自动条码扫描、项目组合测试、试剂信息管理、血清指数、反映全过程监测、脏杯记忆回避、防交叉污染程序、病人信息记忆及联想输入、自动报告审核、数据多参数查询、报表统计与打印、参考范围分级、报警信息分级、用户操作权限分级管理、自动休眠与唤醒、实时在线帮助4.报告打印:中文报告,8种格式可选。

报告单支持用户自定义模式,质控与状态信息等5. 基本配置要求5.1 主机1台5.2 操作电脑1台,19寸以上液晶显示屏,5.3打印机1台5.4 样本、试剂条码扫描仪选配5.5纯水系统一套5.6UPS电源一块5.7外置打印机一台B超技术参数1.设备用途说明腹部、妇科、产科、浅表组织与小器官、颅脑、术中、介入性超声2.主要规格及系统概述:2.1 高档黑白便携式超声波诊断仪包括:2.1.1 高分辨率LCD显示器2.1.2 全数字化二维灰阶成像单元2.1.3 全数字化波束形成器*2.1.4组织二次谐波成像(应用于凸阵、高频线阵探头)2.1.5 二维图像优化技术* 2.1.6 可配置可变角度解剖M型(超声仪器主机内置)*2.1.7多角度扩展探头技术2.2 测量和分析:(B 型、M 型)2.2.1 一般测量(包括腹部、泌尿和小器官等软件包)2.2.2 妇科、产科测量(包括胎儿生长曲线和多胎计算等软件包)2.2.3 血管测量与分析2.3 图像存储与(电影)回放重现单元2.4 输出信号:复合视频2.5 图像管理与记录装置:2.5.1 超声图像存档与病案管理系统,一体化病案管理单元包括病人资料、报告、图像等的存储、检索和修改等2.5.2静态图像以PC 通用格式直接存储,无需特殊软件即能在普通PC 机上直接观看图像2.5.3 USB 接口3. 系统概述3.1 系统通用功能:3.1.1 监视器:>10″LCD显示器3.1.2 全激活电子探头接口:2 个3.2 探头规格*3.2.1 频率:超宽频变频探头,工作频率明确显示,二维显示频率可选择≥4 种*3.2.2 腹部用凸阵探头,最高频率≥6MHZ,最低频率≤2.5MHZ(请附图)*3.2.3 可配置高频线阵探头中心频率≥13MHz3.2.4 探头配置:电子凸阵(腹部)探头1 个3.2.5 穿刺导向:探头可配穿刺导向装置,具有穿刺测量功能3.3 二维灰阶显像主要参数:3.3.1变频探头工作频率范围:电子凸阵:超声频率2.5 — 6.0MHz电子线阵:超声频率5.0 — 13MHz电子微凸(含腔内):超声频率3.0 — 9MHz3.3.2 灰阶≥2563.3.3 扫描速率:电子凸阵探头,全视野,18 cm 深,帧频≥15帧/秒,可显示帧频3.3.4 发射声束聚焦:发射≥4 段3.3.5 体位标记≥50个*3.6.6 数字声束形成器:数字式全程动态聚焦,数字式可变孔径及动态变迹,A/D≥12 bit(需提供原厂date sheet 证明)*3.3.7 回放重现:灰阶图像电影回放≥1000 帧,回放时间≥30秒3.3.8 增益调节:B/M 可独立调节,TGC 分段≥6*3.4 超声功率输出调节:B/M 输出功率可调,可调级数≥50级自动分析心电图机技术参数输入电路心电输入:12导联同步采集,10电极导联选择:自动或手动输入方式:浮地输入输入保护:标配导联线内附除颤保护电路采样率:8000 Hz/8Ch模数转换精度≤2.5 μV输入阻抗:≥50MΩ耐极化电压:≥±500mV共模抑制比:≥110dB频率响应:0.05Hz-150Hz(+0.4/-3 dB)标准灵敏度:10mm/mV, 误差≤±2%时间常数:≥3.2秒滤波器:低通滤波、肌电滤波、交流滤波、基线抑制滤波低通滤波75Hz, 100Hz, 150Hz 三档肌电滤波25Hz/35Hz 二档交流滤波50Hz或60Hz基线抑制强/弱二档增益/灵敏度选择:5,10,20mm/mV,手动或自动不正常状态检测:电极脱落报警,高频噪声过高报警电极脱落:液晶显示器显示脱落部位显示和记录显示方式:≥4.8"液晶显示显示分辨率:320x240显示导联数:同屏12导联,≥2.8s显示内容:程序型号、版本、日期和时间、走纸速度、灵敏度、导联名称、滤波器、患者信息(ID号码、年龄、性别)、计时标记、电极松脱、噪音等。

生化分析仪的参数设置

生化分析仪的参数设置

其它参数
样本类型
单位
参考值
线性检查
仪器常数 (a、b)
前带现象 检查
底物不足 检查参数
系统参数
复查的 设定
计算项 目的设

打印顺 序设定
通讯参 数设定
组合设 定
报警参 数设定
条形码 设定
质控参 数设定
特殊清 洗的设

项目方法的选择
二点法
速率法
项目方法 的选择
终点法
校准
选择校准 方法的类 型
线性
14、校准液个数及浓度
15.校准K值或理论K值
16.线性范围
17.小数点位数
必选分析参数
试验名称
试验名称(test code)是指测定项目的标示符,常以项目的 英文缩写来表示。
方法类型(也称反应模式)
方法类型(assay)有终点法、两点法、连续监测法等,根 据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
K因数 法
Log itlog(4P)
Logitlog(5P)
样条函 数
折线法
校准
二.选择标准个数 三.设置允许离散吸光度(SD Limit) 四.设置偏差允许吸光度(Dupicate Limit) 五.标准1的吸光度范围(S1 Abs Range) 六灵敏度允许范围(Sensitivity Limit) 七.选择标准液的浓度及放置的位置 八.如用浓标准液稀释,设置标准液取样量、稀释液取样量、稀释后取样量
生化分析仪的参数设置
目录
必需的分析参数 备选分析参数 某些参数的特殊意义 其它参数 系统参数
分析参数介绍——必选分析参数
1、试验名称 4、主波长
2、方法类型 5、次波长

自动生物化学分析仪实验参数设置

自动生物化学分析仪实验参数设置

自动生物化学分析仪实验参数设置全自动生化分析仪的参数就是仪器工作的指令,操作者通过设置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而且有序的操作程序。

指挥仪器工作的参数很多,有些参数是在生产过程中设置好的,如机械操作、加试样时间、反应时间安排等,只需选择就可进行工作,我们简称为仪器指令。

操作者需进行的参数设置是指进行某个具体检测项目时的具体操作指令,我们简称为客户指令,主要包括样品量、试剂量、测定方法、校正方法、反应时间、测定波长、延迟时间、测定时间、控制因素等。

客户指令和仪器指令结合起来,共同完成整个测试。

各种品牌的仪器由各自的厂商设置了不同的仪器指令,我们在设置客户指令之前必须了解厂商设置的仪器指令,才能根据不同的试剂要求设置客户指令。

一、日立7170、7180、7600 P仪器指令0 5 10 15 0 1 2 3 4 5 6 7 9 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50S T1 T2 T3 T4二、日立7060、7080仪器指令0 5 10 150 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45S T1 T2 T3 T4三、日立7150、7600 D仪器指令0 5 10 0 1 2 3 4 5 6 7 9 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50S T1 T2四、奥林帕斯AU600 、AU400、AU640、AU2700、AU5400 仪器指令0 3 100 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27S T1 T2五、奥林帕斯AU800 、AU10000 3 100 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16S R1 R2六、东芝40 FR0 5 100 1 2 3 4 5 6 7 9 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62S T1 T2七、东芝120 FR仪器指令0 5 100 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33S T1 T2八、贝克曼CX4\5\7\90 320 620 920primary inject rnt SAMPLEsecondary inject rgtreagent blankreaction八、贝克曼LX20-180 0 300 600primary inject rnt SAMPLEsecondary inject rg t Third Inject rgtreagent blankreaction九、客户指令1.样品和试剂量样品和试剂量的确定一般按照实际说明书上的要求比例,并结合仪器特征进行设置。

浅谈自动生化分析仪的参数设置

浅谈自动生化分析仪的参数设置
也 不同 。
5 试 剂 的选 择
软件 的设 定等。
1 波 长 的 选 择
1 . 1 单 波长
单波长 是用一个 波长检 测物质 的光 吸收强度 的
方法 。 当测定 体系 中只有一 种组分或混合溶液 中待测组分 的吸
收峰与其他共存 物质的吸收峰无重 叠时 ,可用单波 长检测 。
综 合 医 学
健 康 大 视 野 2 0 1 4 年 9 月 第 2 2 卷 第 9 期 H e a l t h H o r i z o n , S e p t e m b e r 2 0 1 4 , V o 1 . 2 2 N o . 9
浅谈 自动 生化分析仪的参数设置
张汉乐 曹学英 宁夏第五人 民医院石炭井医院 ( 宁夏 石嘴 山7 5 3 0 0 0 )
电化学疗法 、微波热凝 疗法 、红外线凝 固治疗 ,较少用 。
痔 的初 期。 注意饮食 , 忌酒 和辛辣 刺激食物 , 增加纤维性食 物 , 多摄人 果蔬 、多饮水 ,改变不 良的排便 习惯 ,保持大便 通畅 , 必要 时服用缓泻 剂 ,便后清洗 肛门。对于脱垂 型痔 ,注意用手 轻 轻托 回痔块 ,阻止再脱 出。避免久 坐久立 ,进行适 当运动 , 睡前温热水 ( 可 含高锰酸钾 ) 坐浴 等” 。 1 . 2 局部用药 治疗 已被 广泛采用 ,药物 包括栓剂 、膏剂 和
1 . 2 双 波 长 或 多 波 长 就 是 用 两 个 或 多 个 波 长 检 测 ,根 据 光
5 . 1 单试 剂法
指在反 应过程 中只加一次试 剂的方法 。
5 . 2 双试 剂法 在反 应 过程 中试 剂 分开 配 制和 加 入反 应 系 统 ,可 消除干扰和非特异性 的反应 ,稳定试 剂 ,使检测结 果更 准确 。 6 分 析时间的选择 分 析时间的选择依据所 用分析方法 的不 同而异 , 一点终点 法 的分 析时间应设在待测 物质反应即将完成 时 , 过早会 由于反 应未达 到终点而影 响结果 的准确性 , 过迟易受其他 反应物质 的
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自动生化分析仪的分析参数设置核心提示:自动生化分析仪是一种把生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、恒温反应、自动监测、数据处理以及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器,它完全模仿并代替了手工操作,目前已经成为医疗机构进行临床诊断所必可不少的仪器之一。

它的应用大大提高了生化自动生化分析仪是一种把生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、恒温反应、自动监测、数据处理以及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器,它完全模仿并代替了手工操作,目前已经成为医疗机构进行临床诊断所必可不少的仪器之一。

它的应用大大提高了生化检验的准确性、精密度和工作效率,适应了临床医学发展对检验医学的要求,然而这一切不仅需要生化分析仪的技术基础,也需要仪器内每个项目都有一组最优化的分析参数。

并且目前大多数生化分析仪为开放式,封闭式的仪器一般也会另外留一些检测项目的空白通道由用户自己设定分析参数,因此我们有必要了解生化分析仪各个分析参数的基本含义以及设置方法。

1.试验名称常以项目的英文缩写来设置,如总蛋白设置为TP,白蛋白设置为ALB 等。

2.方法类型生化分析仪常用的方法有终点法、连续监测法、比浊法等,根据被检物质的检测原理等选择其中一种分析方法。

2.1终点法又称为平衡法,是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小对物质进行定量分析的一类方法,有一点终点法和两点终点法两类。

一点终点法的特点是使用一种或两种试剂,当待测物与试剂反应达到终点时,测定混合溶液的吸光度来计算待测物的浓度,该法常用的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法等,手工操作的大多数方法都是一点终点法。

两点终点法也称固定时间法,如果是单试剂分析,当测定波长同干扰物质的吸收光谱有重叠时,通过选用两点终点法可消除样品空白引起的干扰,其分析过程是在样品与试剂混合后经过一段延滞期读取一个点A1,一定时间后再读取A2,然后比较标准和测定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待测物的浓度。

肌酐苦味酸法就是一个典型的单试剂两点法的例子。

如果是双试剂分析,选用二点终点分析法除了可消除样品空白引起的干扰外,还可消除内源性干扰物质的干扰,其分析过程是加入试剂1后读取A1,加入试剂2后读取A2,A1相当于读出样品空白值,A2才是实际呈色反应,然后比较标准和测定的ΔA(ΔA=A2-A1)值,求得待测物的浓度。

为了提高终点法检测的准确性,选择该法时应设置终点法零点读数、样品空白等两个分析参数,前者是在反应前即开始读数,可以扣除反应前试剂和样品混合液的空白读数;后者是样品加空白试剂所得到的吸光度,反应需要占用一个比色杯。

2.2连续监测法又称动态分析法、速率法等,基本原理是在酶促反应的最适条件下,用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反应速度恒定期(零级反应期)内连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化,以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。

具体方法有两点速率法和多点速率法:两点速率法是通过观察在零级反应期内两个时间点的吸光度,用两个点的吸光度的差值(ΔA)除以时间(分),计算出每分钟的吸光度变化值;多点速率法是在零级反应期内每隔一定时间(2-30s)进行一次监测,连续监测多次,求出单位时间内的反应速度,这种方法又可分为最小二乘法、多点δ法、回归法、带速率时间法等。

该法具有明显的优点就是大大提高了分析速度和准确性,主要适用于酶活性及其代谢产物的测定。

在连续监测法过程中,即使不加样品,试剂中的底物也会自动降解得到一个结果,因此应设置试剂空白速率,不同批号试剂的试剂空白速率不一样,其值为以水代样品测得的项目结果,样品测定结果应扣除试剂空白速率的数值。

2.3比浊法自动生化分析仪一般只能做透射免疫比浊分析,当光线通过一定体积的含免疫复合物的溶液时,由于溶液中存在的抗原-抗体复合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射光的减少,测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比。

它常用于终点法测定,目前主要用于血清特种蛋白的检测,如载脂蛋白、微量蛋白、急性时相反应蛋白、免疫球蛋白以及某些药物监测等。

但是如果样品中待测抗原浓度过高,抗原与抗体形成的免疫复合物分子将会变小,而且易发生解离,使浊度反而下降,因此免疫比浊分析过程中必须设置前区检查,比较分析过程中后两个读数点的差别,如果后一点比前一点的吸光度低,则表示抗原已过剩,应将样品稀释后重测。

3.反应温度自动生化分析仪通过温度控制系统保持温度恒定,以保证反应的正常进行,其保持恒温的方式有三种:干式恒温器加热、水浴式循环加热、恒温器循环间接加热。

恒温控制器可以对25℃、30℃、37℃三种温度进行恒温,根据需要可以任意选择,半自动生化分析仪恒温器属于这种。

全自动生化分析仪的温度控制器一般只能控制37℃一种温度,少数也可以控制30℃和37℃两种温度。

4.反应波长当测定体系中只有一种组分或混合溶液中待测组分的吸收峰与其他共存物质的吸收波长无重叠时,可选用单波长,如果待测物质有几个吸收峰,可选用吸光度最大的一个波长,或者选择在吸收峰处吸光度随波长变化较小的某个波长。

当被检溶液混浊或存在较多的干扰物质时,测定过程中会出现光散射和非特异性光吸收,从而影响测定结果的准确性,此时可用双波长甚至多波长测定,以提高测定结果的准确性,而在实际应用中选择辅助波长主要用于消除脂血、溶血、黄疸的干扰。

由于脂质、血红蛋白、胆红素在较宽的波长范围内有较强的光吸收,常常同测定波长有重叠,此时测得的吸光度包含待测物质的吸光度和干扰物质的吸光度,因此必须选用合适的辅助波长来消除干扰物质的吸光度。

辅助波长的设置原则是根据测定波长选择辅助波长,要求干扰物质在测定波长同辅助波长有相同的吸光度。

5.反应方向有正向反应和负向反应两种,反应过程中吸光度增加为正向反应,吸光度下降为负向反应。

6.样品量与试剂量样品与试剂量的确定一般按照试剂说明书上的比例,并结合仪器的特性进行设置,亦可根据手工法按比例缩减或重新设计,但要考虑到检测灵敏度、线性范围,尽可能将样品稀释倍数大些,以降低样品中其他成分的影响。

在样品与试剂量的设置过程中主要应注意以下几个方面:①稀释水量,添加样品稀释水的是为了洗出粘附在采样针内壁上的微量血清,减少加样误差,添加试剂稀释水是为了避免试剂间的交叉污染,两种稀释水的量应在复溶试剂时按比例扣除。

如果采用液体试剂盒时因不再用水,无法扣除稀释水量,所以两种稀释水应尽量减少,以免试剂被过量稀释。

②最小样品量,即分析仪进样针能在规定的误差范围内吸取的最小样品量,随着技术的不断改进,仪器的最小样品量逐渐减小,目前有少至1.6μl的。

在样品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的情况下往往需采用分析仪的最小样品量作为减量参数,从而使仪器的检测范围上限得以扩大。

③总反应容量,在不同的分析仪有一个不同的规定范围,在设置的时候样品量和试剂量之和不能超过这一范围。

该值受仪器的光路系统所影响,直射式光路由于光束较宽,难于减少所测试反应液体积,集束式光路则是通过一个透镜使光束变窄,可检测低至180μl的反应液混合体,近年来又出现了点光源技术,它的光束更小,照射到样品杯时仅为一个点,可使反应液的量降至120μl。

④试剂量/样品量比值,不要为节省试剂而过分地减少试剂用量,因为在终点比色法中,缩小试剂量/样品量比值会降低线性范围,遇高浓度样本会因试剂量不足而使结果偏低。

7.分析时间分析时间包括孵育时间、延迟时间、监测时间等,选择不同的分析方法应选择相应的分析时间。

7.1孵育时间选择终点法时设置,在一点终点法是样品与试剂混匀开始至反应终点为止的时间,在两点终点法是第一个吸光度选择点开始至第二个吸光度选择点为止的时间。

在设置孵育时间时,有些分析方法要特别注意,如选择溴甲酚绿法测定血清白蛋白时,由于血清中α1-球蛋白、转铁蛋白等也可与溴甲酚绿呈色,尽管其反应速率较白蛋白为慢,但是实际上当血清与白蛋白混合时,“慢反应”已经发生,因此为减少非特异性结合反应,应在溴甲酚绿与血清混合后30s读取吸光度。

当选择酶法的Trinder反应测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯时,由于37℃酶反应较慢,因此必须测定这些酶试剂反应达到终点的时间,自动分析仪用试剂盒一般可以在全部加样后5分钟内反应完全,所以应选择分析仪的最大反应时间。

7.2延迟时间选择连续监测法或两点终点法时设置,即在样品与反应试剂(第二试剂)混匀开始至第一个吸光度选择点之间的时间。

在连续监测法过程中,当酶与底物混合后需要一定的时间让酶激活,直至线性反应期才能开始监测,有的项目需要用工具酶将内源性代谢产物耗尽,消除干扰。

一般单试剂法只需要30s,常用项目中谷氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶需要特别注意,但是对于双底物反应或需要辅酶参与者,通常为1-3min。

7.3监测时间酶促反应延滞期后,在过量底物的存在下,反应速率加快并达到稳定的阶段,即酶促反应以恒定的速率进行,不受底物浓度的影响,这段时间称为线性反应期或零级反应期,自动生化分析仪的监测时间即为此期。

连续监测法在零级反应期至少应监测90-120s或至少4点(3个ΔA),少于3个ΔA不能称为连续监测法,因为不能计算线性度;监测时间过长则容易发生底物耗尽,可测范围变窄。

8.计算因子(F值)和实测F值用连续监测法进行酶活性测定时,不需作标准管或标准曲线,根据摩尔吸光系数很容易进行酶活性浓度的计算。

先测定在线性范围内每分钟吸光度的变化(ΔA/min),以U/L代表酶活性浓度时,则可按下式进行计算:U/L,t℃=△A/min×F==△A/min×V×106/(ε×V×L)式中V:反应体系总体积(ml);106:将mol换算成μmol;ε:摩尔吸光系数(cm2/mol);v:样品体积(ml);L:比色杯光径(cm)。

当条件固定时,从理论上讲V、v和L 均为固定值,ε值为常数,所以F值是恒定的。

F值对酶的测定十分重要,过高虽然测定的线性较宽,但重复性差,反之精密度虽好,但检测线性窄,因此应根据实际情况进行合理的设置和应用。

但是在临床实际工作中,仪器诸多因素如波长的准确性、半波宽的大小、比色杯光径及磨损与清洁度、温控的准确性、加样系统状况等若不符合要求或发生变化都会影响指示物的ε值或上述公式中的相关项,因此应在具体仪器条件下,定期检查和实际测定指示物的实测ε值和F值。

因为纯NAD(P)H溶液不稳定,所以NAD(P)H的ε值需用葡萄糖己糖激酶法实测,实际操作为将某一浓度的葡萄糖溶液重复5-10次测定,得到相应的一组吸光度A值,求出A¯±s,注意s必须低于规定的批内允许值,再根据下面两个公式分别计算出NAD(P)H的实测ε值和F值:式中C为标准液浓度(mol/L)。

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