新技术分离纯化六大类天然有效成分的研究进展_雷建飞

saponin, polycose, aetherolea, alkaloid and organic acid. The author pointed to the isolated and purified technology of natural active component, especially the equal height purity p reparation and isolated technology need to be imp roved.
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良贵等 [14 ]在 pH 7. 00,进料浓度 2. 43 ×102 μg/m l,三七皂苷 的表而张力为 5. 93 ×102 N /m ,氮气流速 15 m l/m in,及进料 体积 8. 0 m l时 ,对三七粗提液进行泡沫分离 ,泡沫相三七皂 苷收率为 73. 6% ,液相三七多糖收率为 87. 5%。 2. 4 分离挥发油 超临界 CO2萃取具有低温 、高效 、无污染 等优点 ,应用于挥发油分离纯化已有了一定进展 。如李斌 等 [15 ]基于超临界流体萃取原理 ,通过单因素和正交实验研 究了超临界 CO2萃取玫瑰精油的最佳工艺条件 :原料粒度 60 目 ,流量 18 L / h,萃取时间 1. 5 h,温度 40 ℃,压力 16 Mpa 时 ,玫瑰精油的萃取率较高 ,其多数组分都有较好的萃取效 果 。用超临界 CO2萃取满山红挥发油的最佳实验条件 :萃取 压力 25 M Pa,萃取温度 45 ℃,萃取时间 2. 5 h, 萃取率 3. 82% ,水蒸汽蒸馏提取率 0. 24% ,超临界 CO2萃取法优于传 统的水蒸气蒸馏法 [16 ] 。另外 ,白术和连翘挥发油的超临界 CO2萃取 ,用全二维气相色谱法分离莪术挥发油 [17 ]和微柱高 效液相色谱分离八角茴香挥发油 [18 ]也有报道 。 2. 5 分离生物碱 传统溶剂萃取生物碱的纯化方法分离效 率和纯度低 ,溶剂污染环境 ,操作安全性差 。采用大孔吸附 树脂 、膜分离和高速逆流色谱等新技术可以优化工艺 。秦学 功等 [19 ]选用非极性大孔树脂 DF01在实验条件下 ,苦豆子总 生物碱的吸附率和解吸率可依次达到 17 mg/m l和 96%。马 朝阳等 [20 ]将切割相对分子量为 6000 的聚砜膜用于苦豆子 酸提取物中生物碱的分离 ,总生物碱的回收率达 93. 5% ,同 时可以除去 87. 3%的蛋白质和 64. 7%的固形物 ,总生物碱 的纯度为 52. 3%。陆向红等 [21 ]人选择氯仿 - 水 ( 1 ζ 1 ) ,流 量 10 m l/m in,转速 339 r/m in作为分离咖啡因 、茶碱的色谱 条件 ,在此色谱条件下 ,高速逆流色谱仪对咖啡因和茶碱有 很强的分离能力 ,这是其他色谱所不能及的 。 2. 6 分离有机酸 有机酸广泛存在于水果 、蔬菜中 ,其种类 和含量是决定果蔬风味的重要指标 ,也是果蔬成熟度 、耐储 藏性 、加工性的重要依据 ,因此分离和测定果蔬中有机酸的 种类及含量具有重要的意义 。用含有 15 mmol/L的 β - 环糊 精的硼砂缓冲液 (50 mmol/L , pH = 10. 5) - 甲醇 20 ζ 5作为 电泳缓冲液 ,以肉桂酸为内标 , 202 nm 为测定波长 ,运行电压 20 kV ,柱温 25 ℃,邻氨基苯甲酸 、苯甲酸 、水杨酸与丁香酸 在 10 m in内完全分离且呈良好的线性关系 ,其平均回收率分 别为 100. 1% , 97. 9% , 99. 8% , 99. 1% ( n = 6 ) ,该方法快速 、 高效 、简便 、结果准确可靠 [22 ] 。杨若明 [23 ]研究了毛细管电泳 法分离测定草酸 、乌头酸 、苹果酸 、柠檬酸等有机酸的条件 , 在 pH值 7. 8的磷酸钠缓冲溶液中加入表面活性剂溴化十六 烷基三甲铵作为电泳溶液体系 ,紫外检测波长 214 nm ,可以 有效地分离检测以阴离子形式存在的上述有机酸 ,将该法应 用于铝胁迫下培育的小麦根样品中有机酸的分析 ,结果表 明 :随着培养基中铝浓度的增加 ,苹果酸被诱导增加 ,与报道
中药生产的发展方向 :国家提出中药现代化战略 ,同时 大力开发植物新药 ,不仅供国内需求 ,还可走向世界 。中国 成功加入 W TO ,是中药和植物药走向世界的良好机遇 ,现代 中药应具有“三效 ”(高效 、速效 、长效 ) 、“三小 ”(剂量小 、毒 性小 、副作用小 )和“三便 ”(便于储存 、便于携带 、便于服用 ) 等特点 [1 ] 。因此 ,采用新的中药提取及制药新工艺新技术是 大势所趋 。 2 新技术分离天然有效成分的研究进展 2. 1 分离黄酮 目前分离黄酮类天然活性成分常采用大孔 吸附树脂 、高效液相色谱 、高速逆流色谱 、超滤膜分离和高效 毛细管电泳等主要新型分离技术 。如杨星昊等 [2 ]研究不同 大孔树脂对小蓟总黄酮的吸附及解吸性能 ,通过吸附容量和 洗脱效果的比较 , AB - 8和 HP - 20对小蓟总黄酮吸附容量 大 ,易洗脱 。肖建波等 [3 ]采用反相高效液相色谱 ,在 RP C18柱上以乙醛 - 甲醛 - 乙腈 - 磷酸 - 水为多元流动相等度 洗脱 ,在 30 m in内对地钱黄酮提取物进行分离与测定 ,检测 波长 350 nm ,流速 0. 60 m l/m in,采用标准曲线法对实际样品 中的芹菜素 、檞皮素和木犀草素进行定量分析 ,结果表明 :平 均加标 回 收 率 为 96. 79% ～ 101. 13% , RSD 为 0. 66% ～ 1. 52%。王巧娥等 [4 ]采用高速逆流色谱法 ,从胀果甘草的乙 醇粗提物 中 分 离 纯 化 甘 草 查 尔 酮 甲 和 胀 果 香 豆 素 甲 , 经 H PLC方法测得甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲的纯度分别为 95. 0%和 98. 8%。在应用膜分离技术和高效毛细管电泳法
第 12卷第 11期 中 医 药 导 报 2006年 11月 Vol. 12 No. 11 Guiding Journal of TCM November. 2006
新技术分离纯化六大类天然有效成分的研究进展
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第 12卷第 11期 中 医 药 导 报 2006年 11月 Vol. 12 No. 11 Guiding Journal of TCM November. 2006
方面 ,于涛等 [5 ]研究了银杏叶中黄酮类化合物的提取过程及 工艺 ,对影响超滤的工艺条件如压力 、温度 、时间进行考察 , 确定了最佳的提取条件 : 50%乙醇 、提取温度 80℃、料液质量 体积比 1 g /10 m l、提取时间 2 h,提取物中黄酮质量分数达到 5. 96% , 超 滤 后 的 产 品 中 黄 酮 质 量 分 数 达 到 33. 99%。 M cGhile等用高效毛细管电泳法 (HPCE)对 30多种结构相似 的黄酮甙类化合物中的 20种成分实现了一次性分离 。 2. 2 分离皂苷 文献大量报道分离皂苷的新技术有高速逆 流色谱 、超滤膜分离 、泡沫分离技术 、大孔树脂和高效液相色 谱等 。如窦德强等 [6 ]运用高速逆流色谱法从 120 mg上样量 一次分离得到人参皂苷 Re和 Rg1各 25 mg和 18 mg,本方法 的重现性好 ,简单易行 。肖文军 [7 ]采用 0. 2 μm 微滤膜在 40 ℃条件下微滤经粗滤后的七叶参浸提液 ,且在微滤滤液达到 浸提液重的 80%时加入与原料等重的透析水透析残渣 ,可作 为微滤澄清的技术参数 : 选用截留分子量为 10000 Da的超 滤膜能有效去除色素等大分子物质 ,利用截留分子量为 2500 Da或 3500 Da纳滤膜分离七叶参皂苷 ,可制得纯度为 42% 以上的七叶参皂苷产品 ,且 3500 Da纳滤膜比 2500 Da纳滤 膜的得率要高 ,但干粉中皂苷纯度略低 。韩丽等 [8 ]对泡沫分 离技术在皂苷分离中应用进行了探讨 ,并得出泡沫分离技术 用于人参皂苷及三七皂苷的分离工艺稳定 、可行 、分离效果 好 ,且运行成本低的结论 。大孔吸附树脂的应用方面 ,徐先 祥等 [9 ]采用 D101大孔吸附树脂分离纯化威灵仙总皂苷 ,用 70%乙醇回流提取后 ,上 D101 型大孔树脂 ,水洗后分别用 30% , 50% , 70%乙醇洗脱 ,威灵仙总皂苷主要富集于 50%乙 醇洗脱液部分 ,大孔吸附树脂的吸附容量为 53. 36 mg/ g,洗 脱率达 71. 26%。郭伟芳等 [10 ]建立 20 ( S)和 20 ( R ) - 人参 皂苷 Rg2构型异构体的 HPLC法分离 ,用 YW G - C18分析柱 , 以甲醇一水 (67ζ 33)为流动相 ,在 203 nm 波长处检测 ,人参 皂苷 Rg2两种构型异构体完全分离 ,纯度达 98%以上 。 2. 3 分离多糖 多糖的分离纯化目前大多采用树脂 、凝胶 、 超滤膜分离和泡沫分离等新技术 。如王元凤等 [11 ]对 D315 树脂分离 纯 化 茶 多 糖 的 工 艺 进 行 了 研 究 , 试 验 结 果 表 明 D315树脂适合用于茶多糖的初步分离和纯化 。刘海青等 [12 ] 通过采用热水提取和乙醇沉淀获得沙棘叶水溶性粗多糖 ,再 经酸性乙醇分级 ,将沙棘叶水溶性粗多糖分为 SJ1、SJ2和 SJ3 3 个级 ,将 SJ2脱蛋白后经 DEAE - Sephadex A - 25进行分离纯 化得 SJ21和 SJ22 ,经纸层析 、醋酸纤维薄膜电泳和 Sepharose CL - 4B 柱层析纯度鉴定表明 : SJ21和 SJ22的相对分子量均约 为 7 ×104 ,为首次从沙棘叶中分离得到的纯多糖 。范云鹏 等 [13 ]应用超 滤 - 渗 滤 纯 化 香 菇 多 糖 , 工 作 条 件 为 : 温 度 30℃,压力差 0. 3 Mpa,所得产品相对纯度为 80. 4% ,收率为 1. 59% ,接近 Lentinan的理论收率值 (约 1. 2% ) 。与单纯的 超滤工艺过程相比 ,本实验所得产品纯度提高了 8. 1%。王
[摘要 ] 文章分析了中草药传统提取方式的弊端和中药生产的发展方向 ,综述了应用新技术分离纯化黄酮 、皂苷 、多糖 、 挥发油 、生物碱和有机酸的研究进展 。指出中国天然有效成分的分离和纯化技术 ,尤其是等高纯度制备与分离技术需进一步 提高 。