氨基酸态氮的测定
氨基酸态氮的测定
FSPTWPJY003 酱油 氨基酸态氮的测定 中和滴定法F_SP _TWP_JY _003酱油—氨基酸态氮的测定—中和滴定法1 范围本方法采用滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。
本方法适用于各种类型酱油中氨基酸态氮含量的测定。
以g/100mL 报告其结果，测定值保留两位小数。
2 原理利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以酸度计测定终点。
3 试剂3.1 甲醛溶液，体积百分数为37~40。
3.2 氢氧化钠标准溶液，c (NaOH)＝0.1mol/L3.2.1 配制将氢氧化钠配成饱和溶液，注入塑料瓶（或桶）中，封闭放置至溶液清亮，使用前虹吸上层清液。
量取5mL 氢氧化钠饱和溶液，注入1000mL 不含二氧化碳的水中，混匀。
3.2.2 标定称取0.6g 于105～110℃烘至恒量的基准邻苯二甲酸氢钾，精确至0.0001g 。
溶于50mL 不含二氧化碳的水中，加入2滴酚酞指示剂溶液，以新制备的氢氧化钠标准溶液滴定至溶液呈微红色为其终点。
同时做空白试验。
3.2.3 计算按下式计算氢氧化钠标准溶液的浓度：C ＝2042.0)(1×−V V m 式中：C —氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L ；m —基准邻苯二甲酸氢钾的质量，g ；V —滴定时所消耗氢氧化钠溶液的体积，mL ；V 1 —空白试验消耗氢氧化钠溶液的体积，mL ；0.2042—与1.00mL 氢氧化钠标准溶液[c (NaOH)=1.000mol/L]相当的，以克表示的邻苯二甲酸氢钾的质量。
3.3 氢氧化钠标准滴定溶液，c (NaOH)＝0.05mol/L将配制的0.1mol/L 氢氧化钠标准溶液准确稀释一倍。
4 仪器4.1 分析天平，感量0.1mg 。
4.2 酸度计，附磁力搅拌器；4.3 碱式滴定管，25mL 。
5 操作步骤5.1 仪器校准按仪器使用说明书校正pH 计，并注意校正温度使其与测定时保持一致。
酱油中氨基酸态氮含量的测定
NaOH/mL 醛后消耗 NaOH/mL 醛后消耗 度/（mol/L)
NaOH/mL
NaOH/mL
3.31
7.82
0.21
1.38
0.05
2.结果计算 (V1 V2) c 0.014 100 V4 (V3 /V )
式中：ρ--样品中氨基酸态氮的含量，g／100mL； V1—测定用的样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL； V2—试剂空白试验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL； V3—样品稀释液取用量，mL； V4—样品的体积，mL； V—样品稀释液的总体积，mL； c—NaOH标准溶液的浓度，mol／L； 0.014—1mL 1.000mol／L氢氧化钠标准溶液相当氮的克数。
(V1 V2 ) c 0.014 100
V4 (V3 /V )
(7.82 3.31) 0.05 0.014 100 5 (20 /100 )
=0.003157 x100 =0.3157 g/100ml
六、实验小结
• 本实验主要是要我们掌握电位滴定法的基本原理和操作要 点及进一步巩固电位滴定法的基本操作技能。在测定之前， 酸度计一定要进行校正，校正溶液的配制要准确。
测定步骤：样品采集与处理→样液制备→测定→ 数据处理。
三、仪Байду номын сангаас与试剂
仪器：酸度计、磁力搅拌器、100mL容量瓶、50mL碱 式滴定管、200mL的烧杯
试剂：36％甲醛溶液、0.050mol/L氢氧化钠标准溶 液、酱油、蒸馏水
四、测定步骤
1. 0.050 mol/L氢氧化钠标准溶液配制 准称2.00gNaoH 溶解 定容 1000mL容量瓶
一、目的与要求
1.了解食品中氨基酸态氮的来源、作用及测定方法 2. 领会和掌握双指示剂甲醛滴定法及电位滴定法 基本原理、操作要点。 3. 进一步巩固滴定分析和电位滴定法的基本操作 技能。
实验三酱油中氨基酸态氮含量的测定
实验三酱油中氨基酸态氮含量的测定一、实验原理氨基酸态氮是指氨基酸结构中所含的那些氮元素。
氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，其中氮元素主要以氨基酸态形式存在，通常被认为可以反映食品中蛋白质含量及质量。
因此，测定食品中氨基酸态氮含量，可以间接反映该食品的蛋白质含量及质量。
本实验利用梅氏试剂（含有0.1%甲醛和2%亚硫酸钠水溶液）将氨基酸转化为氨后，利用巴林指示剂定量测定氨的含量，从而测定酱油中氨基酸态氮含量。
二、实验操作1、仪器与试剂氨基酸态氮测定仪、巴林指示剂（0.5%硫酸水溶液）、氯仿、醋酸、乙醇、氢氧化钠、梅氏试剂。
2、样品制备取醇提酱油10mL，加氢氧化钠1.0 g溶解，并加入2 mL的氯仿，瓶口用聚四氟乙烯膜封口，用搅拌混合器低速搅拌30min，离心（4000 rpm, 10min），取沉淀，再加2 ml的氯仿，瓶口用聚四氟乙烯膜封口，再次搅拌30 min，离心，取沉淀。
沉淀用甲醇洗涤后挥除甲醇，取干的氨基酸，称重记录净重。
3、氨基酸态氮测定称取试样0.5 g，加入150 mL三角瓶中，加10 mL梅氏试剂和5 mL乙醇。
瓶口用聚四氟乙烯膜封口，用搅拌混合器低速搅拌30min，倒入250 mL锥形瓶中，加入100 mL蒸馏水并立即气密封口，用水浴恒温30 min，使氨完全释放，冷却至室温。
然后取10 mL溶液，用标准盐酸溶液进行巴林指示剂定量，得到氨的含量。
4、结果计算样品中氨基酸态氮含量 = （巴林指示剂滴定时标准盐酸产生的酸量 - 空白的酸量）×10×10/mg样品，单位为mg/100g。
四、注意事项1、梅氏试剂中含有甲醛，有毒，禁止直接接触，尽量避免吸入散发的气味；2、从样品制备开始到测定完成期间尽可能防止样品污染，避免摄入外源氨基酸；3、使用实验仪器时，应严格按照操作规程操作，保证实验安全；4、实验过程中如有任何异常情况或问题，应及时向实验室管理人员和指导老师报告。
氨态氮测定
食品安全检验技术（理化部分） 食品安全检验技术（理化部分） 食品中氨基酸态氮的测定
2、电位滴定法 、
(1) 原理 根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性， 根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使 羧基显示出酸性， 羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入 被测液中构成电池，用氢氧化钠标准溶液滴定，依据酸度计 被测液中构成电池，用氢氧化钠标准溶液滴定， 指示的pH值判断和控制滴定终点 值判断和控制滴定终点。 指示的 值判断和控制滴定终点。 (2) 试剂 酚酞乙醇指示液： ①酚酞乙醇指示液：1% 硼砂（标准物质）缓冲液： 称取3.8克 ②硼砂（标准物质）缓冲液：pH9.22 称取 克Na2B4O7 溶 解后，定容至1000mL 解后，定容至 中性甲醛溶液：２０% ③中性甲醛溶液：２０ 氢氧化钠标准溶液： ④氢氧化钠标准溶液：0.0500mol/Ｌ Ｌ
食品安全检验技术（理化部分） 食品安全检验技术（理化部分） 食品中氨基酸态氮的测定
加甲醛前耗 NaOH量/mL 量 1 样 品 滴 定 2 3 平均 1 空 白 滴 定 2 3 平均 加甲醛后耗 NaOH量/mL 量 NaOH标准液 标准液 浓度/mol.L-1 浓度
食品安全检验技术（理化部分） 食品安全检验技术（理化部分） 食品中氨基酸态氮的测定 ② 计算
X=
(V1 V2 ) × c × 0.014 ×100 20 m× 100
式中 X----氨基酸态氮的含量，g/100g; X----氨基酸态氮的含量 氨基酸态氮的含量，
V1----加入甲醛后滴定至终点耗 NaOH的体积，mL； 的体积， ； 加入甲醛后滴定至终点耗 的体积 V2----空白试验加甲醛后滴定至终点所耗 NaOH的体积，mL； 的体积， ； 空白试验加甲醛后滴定至终点所耗 的体积 c----氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L； 氢氧化钠标准溶液的浓度， 氢氧化钠标准溶液的浓度 ； m----测定用样品溶液相当于样品的质量，g ； 测定用样品溶液相当于样品的质量， 测定用样品溶液相当于样品的质量 0.014----氮的摩尔质量，g/mmol； 氮的摩尔质量， 氮的摩尔质量 ；
氨基酸态氮的检验方法
氨基酸态氮的检验方法一﹑原理：根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用用氢氧化钠标准溶液滴定后依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
二﹑试剂：甲醛（36%）、氢氧化钠标准滴定溶液C=L仪器：酸度计﹑磁力搅拌器﹑10ml碱式滴定管三﹑分析步骤：1.准确称取5g（液体吸取5ml）样品，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取，置于200ml烧杯中，加60ml水（酵母类吸取5ml,加55ml水），开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液C（NaOH）=L滴定至PH=[注：滴定时应先快后慢,如果不小心滴过量可用玻璃棒蘸取少量L盐酸沿烧杯壁流入溶液；开磁力搅拌器时,转速要由慢变快,不要让转子碰到电极]2.加入10ml甲醛溶液,混匀。
再用氢氧化钠标准溶液（L）继续滴定至PH=,记下样品PH从到消耗氢氧化钠标准溶液L)的毫升数。
3.空白试验：将80ml蒸馏水（酵母类为60ml）置于200ml烧杯中滴定，记录加入甲醛后消耗标液毫升数。
四﹑计算：()1230.014100%100V V CXVm-⨯⨯=⨯⨯式中：X——样品中氨基酸态氮的含量，g/100ml1V——样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 2V——试剂空白加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 3V——样品稀释液取用量，mlM——样品质量，gC——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、备注滴定空白时，由于PH=时的显示值极不稳定，可加一滴氢氧化钠标准液后直接加甲醛，不必待其稳定，然后先预滴，再逐滴滴定至PH=。
参照：GB/谷氨酸钠测定以上操作步骤不变，操作步骤2滴定终点改为滴定至PH=，计算公式系数改为进行计算参照SB/T 10371-2003 鸡精调味料。
氨基酸态氮的测定
氨基酸态氮的测定测定氨基酸态氮（Total Amino Nitrogen，TAN）是用来衡量溶液中氨基酸的氮量的常用指标，它主要用来检测和控制工业水体的性质以及底物、中和剂的浓度。
一、氨基酸态氮的作用1、评价溶液的性质氨基酸态氮（TAN）能够反映溶液中氨基酸的总氮量，从而能够用来判定溶液的性质。
TAN测试值能反映氨基酸在溶液中的浓度，从而可以更准确地了解氨基酸在溶液中的结构和性质，为进一步优化溶液的性质提供参考。
2、控制底物、中和剂的浓度氨基酸态氮的测定还可以用来控制底物和中和剂的浓度，这有助于工业水体的净化和修复。
TAN的测定结果能够提供有关底物和中和剂的信息，这些信息可以指导技术人员如何调节和控制底物和中和剂的浓度，从而达到良好的清洁度水平。
二、氨基酸态氮的测定1、样品准备要测定氨基酸态氮，首先要使用精确滴定量筒准备样品。
样品中氨基酸的浓度应大于1mg/50ml，并需要经过自由基四分法得到准确的样品浓度。
2、试剂配制对要进行TAN测定的溶液，可以使用0.02mol/L硫酸铵配制试剂，当然，这里也可以采用其他试剂，比如氢氟酸或者硝酸。
3、测试方法一般来说，TAN的测试可以采用两种方法，即固体高效液相色谱法（HPLC/GC）和氰化-分光光度法（CN-spectrophotometry）。
除此之外，还可以采用其他的测试方法，比如汞分析、离子色谱法等，并根据实际情况进行选择。
4、结果分析测定完氨基酸态氮后，根据测试结果来分析该溶液的性质，从而确定是否需要调整或者控制底物和中和剂的浓度。
处理过程中要确保参数保持稳定，以达到良好的结果。
三、总结氨基酸态氮（TAN）是用来衡量溶液中氨基酸的氮量的一个重要指标，它主要用来检测和控制工业水体的性质以及底物、中和剂的浓度。
在测定TAN时，需要正确地准备样品，及时准确地分析数据，以期达到良好的结果。
氨基酸态氮的检验方法
氨基酸态氮的检验方法一﹑原理：根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用用氢氧化钠标准溶液滴定后依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
二﹑试剂：甲醛（36%）、氢氧化钠标准滴定溶液 C=0.050mol/L仪器：酸度计﹑磁力搅拌器﹑10ml碱式滴定管三﹑分析步骤：1.准确称取5g（液体吸取5ml）样品，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0ml，置于200ml烧杯中，加60ml水（酵母类吸取5ml,加55ml水），开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液C（NaOH）=0.050mol/L滴定至PH=8.2[注：滴定时应先快后慢,如果不小心滴过量可用玻璃棒蘸取少量0.1mol/L盐酸沿烧杯壁流入溶液；开磁力搅拌器时,转速要由慢变快,不要让转子碰到电极]2.加入10ml甲醛溶液,混匀。
再用氢氧化钠标准溶液（0.05ml/L）继续滴定至PH=9.2,记下样品PH从8.2到9.2消耗氢氧化钠标准溶液(0.05mol/L)的毫升数。
3.空白试验：将80ml蒸馏水（酵母类为60ml）置于200ml烧杯中滴定，记录加入甲醛后消耗标液毫升数。
四﹑计算：()1230.014100%100V V CXVm-⨯⨯=⨯⨯式中：X——样品中氨基酸态氮的含量，g/100ml1V——样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 2V——试剂空白加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 3V——样品稀释液取用量，mlM——样品质量，gC——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、备注滴定空白时，由于PH=8.2时的显示值极不稳定，可加一滴氢氧化钠标准液后直接加甲醛，不必待其稳定，然后先预滴1.2ml，再逐滴滴定至PH=9.2。
参照：GB/T5009.39谷氨酸钠测定以上操作步骤不变，操作步骤2滴定终点改为滴定至PH=9.6，计算公式系数0.014改为0.187进行计算参照SB/T 10371-2003 鸡精调味料。
总酸和氨基酸态氮的测定
总酸和氨基酸态氮的测定称取5.000克样品，准确加入50mL 纯净水捣研，50℃水浴浸提30分钟，脱脂棉过滤，取滤液10.0mL ，置于烧杯中，加水70mL 混匀。
开动磁力搅拌器，用0.1mol/L NaOH 标准溶液(标定)滴定至酸度计指示为pH8.2（记下消耗氢氧化钠的体积V 1，用于计算总酸含量）。
快速加入10.0mL 甲醛溶液(38%)混匀，立即用氢氧化钠标准溶液继续滴定至pH9.2，记录用量V 2。
同时用80mL 水作空白对照，氢氧化钠消耗量记为V 01（pH8.2）和加入甲醛后消耗量V 02（pH9.2）。
在乳酸菌发酵料中总酸以主要成分乳酸表示，其公式为 10010550090.0)(0111⨯⨯⨯⨯⨯-=c V V X （1） 式（1）中 X 1 ——样品中总酸的含量（以乳酸计），%V 1 ——测定用试液滴定至pH8.2时氢氧化钠消耗量，mLV 01——空白滴定至pH8.2时氢氧化钠消耗量，mLc ——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L0.090 ——与1.00mL 氢氧化钠标准滴定溶液（c=1.000mol/L ）相当的乳酸的质量，g氨基酸态氮公式 10010550014.0)(0222⨯⨯⨯⨯⨯-=c V V X （2） 式（2）中：X 2 ——样品中氨基酸态蛋白的质量分数，%V 2 ——测定用试液加入甲醛后滴定至pH9.2时氢氧化钠消耗量，mLV 02——空白加入甲醛后滴定至pH9.2时氢氧化钠消耗量，mLc——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L0.014——与1.00mL氢氧化钠标准滴定溶液（c=1.000mol/L）相当的氮的质量，g文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。
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文案它不同于设计师用画面或其他手段的表现手法，它是一个与广告创意先后相继的表现的过程、发展的过程、深化的过程，多存在于广告公司，企业宣传，新闻策划等。
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氨基酸态氮的测定
1概述
2氨基酸态氮的测定
一、概述
蛋白质可以被酶、酸或碱水解，其水解的最终产物为氨基酸。
氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，虽然从各种天然源中分离得到的氨基酸已达175种以上，但是构成蛋白质的氨基酸主要是其中的20种，而在构成的氨基酸中，亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨算、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，必须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病或通过补充而增强了新陈代谢作用。
随着食品科学的发展和营养知识的普及，食物蛋白质中必需氨基酸含量的高低及氨基酸的构成，愈来愈得到人们的重视。
为提高蛋白质的生理效价而进行食品氨基酸互补和强化的理论，对食品加工工艺的改革，对保健食品的开发及合理配膳等工作都具有积极的指导作用。
因此，食品及其原料中氨基酸的分离、鉴定和定量也就具有极其重要的意义。
二、氨基酸态氮的测定
（1）双指示剂甲醛滴定法：原理、试剂、测定方法、结果计算
（2）电位滴定法：原理、试剂、仪器、测定方法、结果计算
1、双指示甲醛滴定法
（1）原理
氨基酸具有酸性的-COOH基和碱性的-NH2基。
它们相互租用而使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2基与甲醛结合，从而使其碱性消失。
这样就可以用强碱标准溶液来滴定-COOH基，并用间接的方法测定氨基酸的总量。
（2）方法特点及应用
此法简单易行、快速方便，与亚硝酸氮气容量法分析结果相近。
在发酵工业中常用此法测定发酵液中氨基酸含量的变化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情况，并以此作为控制发酵生产的指标之一。
普氨酸与甲醛作用时产生不稳定的化合物，使结果偏高;溶液中若有存在也可与甲醛反应，往往使结果高。
（3）试剂
①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，
用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。
②0.1%百里酚酞乙醇溶液
③0.1%中性红50%乙醇溶液
④0.1%mol/L氢氧化钠标准溶液
（4）操作步骤
1）含氨基酸溶液20-30mg→250ml锥形瓶中→中性红指示剂2-3滴，滴0.01mol/lNAOH 滴定终点（红→琥珀色）
2）含氨基酸溶液20-30mg→250ml锥形瓶中→百里红酚酞3滴/中性甲醛20ml→摇匀，滴0.01mol/lNAOH滴定终点（淡蓝色）
3）分别记录两次消耗碱液的用量
（5）结果计算
氨基酸态氮% ＝
式中:
c----氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L
V1----中性红指示剂滴定时消耗NaOH 标准溶液体积，mL
V2----百里酚酞知己滴定是消耗NaOH 标准溶液体积，mL
m-----测定用试样溶液相当于试样的质量，g
0.014----氮的毫摩尔质量，g/mmol
2、电位滴定法
（1）原理
根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用氢氧化钠标准溶液滴定，依据酸度计指示的pH 值判断和控制滴定终点。
（2）仪器
酸度计（附磁力搅拦器）；
酸式滴定管：25 ml
胖肚吸量管：10 ml
（3）试剂
酚酞乙醇指示液：1%
缓冲液：PH=6.18
中性甲醛：20%
氢氧化钠标准溶液：0.0500mol/l
（4）操作步骤
1）吸取氨基酸20 ml —— 100ml ，加水至刻度线，得到A
2）吸取A 20 ml ——100 ml 烧杯中，加水60ml ，开动磁力搅拌器，加(0.05mmol/L)NaOH 滴定至PH=8.2 ，得到B 并记录NaOH 的消耗量
3）↓10.0 ml 甲醛溶液→B 混匀，↓(0.05mmol/L)NaOH ，滴定至PH=9.2并记录NaOH 的消耗量
4）取80 ml H2O → 200ml 烧杯中，↓(0.05mmol/L)NaOH 滴定至PH=8.2，↓10.0 ml 甲醛溶液，↓(0.05mmol/L)NaOH ，滴定至PH=9.2，做空白试验
（5）结果计算
氨基酸态氮% =
式中：
V1----试样稀释液加入甲醛后滴定至终点（PH9.2）消耗NaOH 标准溶液的体积， ml V2----空白试验加入甲醛后滴定至终点（PH9.2）消耗NaOH 标准溶液的体积，ml = 100*014
.0**)(12m c V V 100*100/20*014.0**)(12m c V V
c----氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L
m-----测定吸取的试样溶液相当于试样的质量0.014----氮的毫摩尔质量，g/mmol。