细胞培养技术和培养箱习题
第十章细胞培养技术和培养箱首页习题习题参考答案习题名词解释选择题简答题一、名词解释1. 细胞培养2. 细胞培养传代3. 原代细胞培养4. 无限细胞系5. 细胞融合6. 细胞治疗7. 培养箱8. 缓冲室9．手套操作箱二、选择题【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。
1.体外培养细胞的分类（贴附型或悬浮型）是根据（）A．细胞为上皮样或成纤维细胞样B．能否贴附在支持物上生长C．呈密度抑止特性D．肿瘤细胞E．细胞可多次传代2. 下述细胞传代的概念中，正确的是（）A．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器的过程B．从体内取出细胞接种到培养容器，细胞继续增殖的过程C．培养细胞期间更新培养液的过程D．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器并及时更新培养液使细胞增殖继续的过程E．细胞倍增的过程3. 细胞生长维持液，需添加的血清量的百分比为（）A．1％～2％B．2％～5％C．5％～10％D．10％～20％E．20％～25％4．培养细胞传代时，通常是（）A．根据不同细胞采取不同的方法B．常用二乙烯四乙酸二钠（EDTA）C．EDTA与胰蛋白酶按不同比例混合使用D．悬浮生长的细胞直接添加胰蛋白酶”E．贴壁生长的细胞添加新鲜培养液5. 二氧化碳培养箱结构的核心部分，主要是A．湿度调节装置B．湿润的含水托盘C．温度调节器D．CO2调节器、温度调节器和湿度调节装置E．气体保护器装置6. 二氧化碳培养箱调节CO2浓度范围为（）A．0％～20％B．20％～40％C．10％～20％D．20％～30％E．30％～40％7. 厌氧培养箱通过自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态，其换气过程是（）A．①气体排空→②净化→③气体排空→④N2净化→⑤气压平衡B．①气体排空→②N2净化→③气压平衡C．①N2净化→②气体排空→③N2净化→④气压平衡D．①N2净化→②气体排空→③N2净化→④气体排空→⑤气压平衡E．①气体排空→②N2净化→③气体排空→④N2净化→⑤气体排空→⑥气压平衡8. 厌氧培养箱内厌氧菌最佳的气体生长条件是（）A．80% N2、5% CO2和15%H2B．80% N2、15% CO2和5% H2C．80% N2、10% CO2和10% H2D．85% N2、5% CO2和10% H2E．85% N2、10% CO2和5% H29. 厌氧培养箱催化除氧系统箱内采用钯催化剂，其作用是（）A．催化箱内氧气与氢气反应生成水后再由干燥剂所吸收B．催化无氧混合气体内的微量氧气与氢气反应，生成水后再由干燥剂所吸收C．除去箱内CO2D．除去箱内充满的氧E．除去箱内H2S10. 维持细胞较快的生长增殖速度，需添加的血清量为（）A．1％～2％B．2％～5％C．5％～10％D．10％～20％E．20％～25％【X型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。
1. 培养细胞的生存条件（）A．培养液B．合适的温度C．一定的湿度D．恰当的气体成分E．一定量的抗生素2. 确定有无支原体污染可做的检测有（）A．相差显微镜检测B．荧光染料染色检测C．用电镜检测D．DNA分子杂交检测或支原体培养E．用FITC荧光染料染色，置荧光显微镜下观察亮绿色小点3. 细胞培养可应用于（）A．细胞融合B．核移植C．组织工程D．图像处理技术E．激光技术4. 电热恒温培养箱适用于（）A．普通的细菌培养和封闭式细胞培养B．厌氧细菌培养C．病毒培养D．衣原体培养E．开放式细胞培养5. 二氧化碳培养箱已广泛应用于（）A．各种组织和细胞的培养、病毒增殖B．细菌培养、遗传工程，C．试管工程和克隆技术D．控制温度的精度E．门加热三、简答题1．细胞培养的生存条件有哪些2．常见细胞培养箱有哪些类型3．各种细胞培养箱可应用于哪些方面4.如何检测培养细胞霉菌和细菌的污染5. 如何检测培养细胞的支原体污染6. 简述气套式CO2培养箱的结构特点。
7．简述厌氧培养系统的保持箱内的厌氧状态工作原理。
8．简述厌氧培养系统的基本构成。
9．如何使用厌氧培养系统习题参考答案一、名词解释1. 细胞培养：从生物体内取出组织或细胞，在容器内模拟体内生理环境，于无菌、适当温度和一定营养条件下进行孵育培养，使之保持一定的结构和功能，以便于我们观察研究。
2. 细胞培养传代: 当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器，并及时更新培养液，使细胞增殖继续，这一过程叫传代。
3. 原代细胞培养：从体内取出细胞接种培养到第一次传代叫原代细胞培养，原代细胞一经传代后便称为细胞系。
4.无限细胞系：细胞系进入传代期，细胞增殖旺盛，传代后细胞获得永生性即永久增殖的能力，称为无限细胞系（或连续细胞系）。
5. 细胞融合：将来源于不同细胞核的染色体结合到同一个核内，形成一个合核体的杂种细胞称为细胞融合。
6. 细胞治疗：用体外培养的正常细胞，或者是导入外源基因的细胞，也可利用由干细胞诱导分化而来的特定细胞，植入患者病变部位以代偿病变细胞丧失的功能。
7. 培养箱：是细胞培养必需设备，可提供不同细胞与细菌生长所需适宜温度和气体成份的装置。
有普通的电热恒温培养箱、CO2培养箱和厌氧培养箱等类型。
8. 缓冲室：是一个传递舱，具有内外两个门，其后部与一个间歇真空泵相连，缓冲室随时可自动抽气换气造成无氧环境。
9．手套操作箱：厌氧培养箱前面安装的操作者塑料手套，使操作箱与外界隔绝。
操作箱内侧门与缓冲室相通，由操作者用塑料手套控制开启。
当标本、培养基等在缓冲室内变为厌氧状态时，便可打开内门将它们移入工作室。
二、选择题【A型题】1．B 2．D 3．B 4．A 5．D6．A 7．E 8．D 9．B 10．D【X型题】1．ABCD 2．ABCD 3．ABC 4．ABCD 5．ABC三、简答题1．细胞培养的生存条件有哪些答：培养细胞需要特定的培养基和培养设备，需要特有的环境，包括恒定的温度（37?C）、湿度（95％）和气体（通常为5% CO2成分）。
培养细胞所需营养物质包括糖、氨基酸、维生素、无机离子、微量元素等，尚需加一定量的动物血清（胎牛或小牛血清）。
为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。
2．常见细胞培养箱有哪些类型答：常用培养箱有电热恒温培养箱、二氧化碳培养箱和厌氧培养箱等。
电热恒温培养箱有隔水式电热恒温培养箱和气套式电热恒温培养箱两种；二氧化碳培养箱种类繁多，根据其工作原理，可以分为气套式CO2培养箱、水套式CO2培养箱、红外CO2培养箱、高温灭菌培养箱、光照低温培养箱、恒温恒湿培养箱等。
3. 各种细胞培养箱可应用于哪些方面答：电热恒温培养箱适合于普通的细菌培养和封闭式细胞培养，并常用于有关细胞培养的器材和试剂的预温及恒定。
CO2培养箱已广泛应用于各种组织和细胞的培养、病毒增殖、细菌培养、遗传工程，试管工程和克隆技术等，用于研究各种因素对细胞的结构、功能和各种生命活动规律的影响等临床医学和检验医学的工作。
4.如何检测培养细胞霉菌和细菌的污染答：一般肉眼可见在培养液中形成白色或浅黄色飘浮物；倒置显微镜下可见于细胞之间悬浮飘荡在培养液中的纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝或卵圆形单细胞真菌，为霉菌污染。
培养液短期内颜色变黄并出现明显混浊现象；倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量细小的圆球状颗粒飘浮，有时在细胞表面和周围有大量细菌存在，为细菌污染。
5. 如何检测培养细胞的支原体污染答：①相差显微镜检测，将细胞接种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间；②荧光染色法，用荧光染料使支原体DNA着色，置荧光显微镜下观察，可见散在于细胞周围或附于细胞膜表面的亮绿色小点为支原体污染；③电镜检测，用扫描电镜或透射电镜观察支原体；④DNA分子杂交检测或支原体培养等方法。
6. 简述气套式CO2培养箱的结构特点。
答：①直接加热，加热组件环绕所有外夹套，能均匀加热并用玻璃纤维绝缘包绕；②箱体不需注水、排水，无溢出或缺水警报；③CO2取样口处于箱体的前部；④与水套式相比重量较轻；⑤采用过温保护系统，当温度过高可自动切断电源；⑥可选配HEPA过滤系统，箱体内气体每分钟被过滤一次，快速达到100级气体质量，能为细胞提供理想环境。
7.简述厌氧培养系统保持箱内的厌氧状态的工作原理。
答：通过催化除氧系统和自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态。
（1）通过自动化装置自动抽气、换气的自动连续循环换气系统，使箱内最大程度地减少O2含量，产生厌氧状态。
自动换气功能可由按钮控制，培养箱与真空泵相连，当所有要转移的物品被放入缓冲室后，关闭外门，进行自动去除缓冲室中的氧气。
循环换气预设三个气体排空阶段、两个氮气净化阶段和一个缓冲室平衡气压阶段。
其换气过程是：①气体排空；②N2净化；③气体排空；④N2净化；⑤气体排空；⑥气压平衡：平衡缓冲室内的气压与气体成分（作用时间1分31秒，延迟时间4分32秒）。
此时，厌氧状态灯显示为ON，此时即可将内门打开，钯催化剂将除去余下的少量O2。
（2）催化除氧系统箱内采用钯催化剂将除去余下的少量O2，可催化无氧混合气体内的微量氧气与氢气反应，生成水后再由干燥剂所吸收。
催化剂片和干燥剂片分别密封于筛网中组成三层催化剂片。
三层催化剂薄片插入气流系统，有风扇使箱内气体得到连续循环。
8．简述厌氧培养系统的基本结构。
答：为密闭的大型金属箱，由手套操作箱和缓冲室（传递箱）两个部分组成，操作箱内还附有小型恒温培养箱。
缓冲室是一个传递舱，具有内外两个门，在其后部与一个间歇真空泵相连，缓冲室随时可自动抽气换气造成无氧环境，在缓冲室的后部，连接有厌氧气体管。
手套操作箱的前面装有塑料手套，操作者双手经手套伸入箱内操作，使操作箱与外界隔绝。
操作箱内侧门与缓冲室相通，由操作者用塑料手套控制开启。
小型恒温培养箱中细胞培养室的操作温度通常是固定35℃，变化范围是“（室温+4）℃70℃”，控制精度为±0.3℃。
当温度超高温时，会发出报警。
9．如何使用厌氧培养系统答：所有要转移的物品被放入缓冲室后，关闭外门；按下“Cycle Start”钮即可进行自动去除缓冲室中的氧气。
经循环换气的三个气体排空阶段和两个氮气净化阶段，使缓冲室气体达98％的无氧状态，再经缓冲室气压平衡，操作箱与缓冲室平衡，厌氧状态灯显示为ON，此时即可将内门打开，钯催化剂将除去余下的少量O2。
操作者经手套伸入箱内进行标本接种、培养和鉴定等全部工作。
细胞培养期末考试试题
细胞培养期末考试试题一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞培养中常用的培养基是：A. 蒸馏水B. 营养琼脂C. RPMI 1640D. 细菌培养基2. 细胞培养中，以下哪项不是细胞生长必需的：A. 温度B. 氧气C. 二氧化碳D. 紫外线3. 以下哪种细胞培养技术不涉及细胞的遗传改造：A. 转染B. 转导C. 克隆D. 原代培养4. 细胞培养中，pH值的维持主要依赖于：A. 细胞自身的代谢B. 培养基中的缓冲系统C. 培养箱的温湿度控制D. 定期更换培养基5. 细胞培养中，细胞传代的频率通常取决于：A. 细胞的密度B. 细胞的类型C. 培养基的成分D. 培养箱的CO2浓度二、填空题（每空2分，共20分）6. 细胞培养中，细胞的贴壁依赖于细胞表面的_________与培养基表面的_________。
7. 细胞培养过程中，细胞的增殖速率通常用_________来表示。
8. 细胞培养中，常用的细胞计数方法包括_________和_________。
9. 细胞培养时，细胞的形态变化可能预示着_________。
10. 细胞培养中，细胞的冻存通常使用含有_________的冷冻保护剂。
三、简答题（每题10分，共30分）11. 简述细胞培养中常用的传代方法及其优缺点。
12. 描述细胞培养过程中可能出现的污染类型及其预防措施。
13. 解释细胞培养中为什么要维持适宜的pH值，并说明如何调节。
四、论述题（每题15分，共30分）14. 论述原代细胞培养与次代细胞培养的区别及其在生物医学研究中的应用。
15. 讨论细胞培养技术在药物筛选和毒性测试中的应用及其重要性。
五、实验设计题（共30分）16. 设计一个实验方案，以评估不同培养条件对特定细胞株生长的影响。
请包括实验目的、原理、材料与方法、预期结果和可能的实验变量。
培养箱练习题
第二十二章培养箱练习题一、名词解释1. 细胞培养2. 细胞培养传代3. 原代细胞培养4. 无限细胞系5. 细胞融合6. 细胞治疗7. 培养箱8. 缓冲室9 ．手套操作箱二、选择题【A 型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。
1. 体外培养细胞的分类（贴附型或悬浮型）是根据（）A ．细胞为上皮样或成纤维细胞样B ．能否贴附在支持物上生长C ．呈密度抑止特性D ．肿瘤细胞E ．细胞可多次传代2. 下述细胞传代的概念中，正确的是（）A ．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器的过程B ．从体内取出细胞接种到培养容器，细胞继续增殖的过程C ．培养细胞期间更新培养液的过程D ．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器并及时更新培养液使细胞增殖继续的过程E ．细胞倍增的过程3. 细胞生长维持液，需添加的血清量的百分比为（）A ．1 ％～2 ％B ．2 ％～5 ％C ．5 ％～10 ％D ．10 ％～20 ％E ．20 ％～25 ％4 ．培养细胞传代时，通常是（）A ．根据不同细胞采取不同的方法B ．常用二乙烯四乙酸二钠（EDTA ）C ．EDTA 与胰蛋白酶按不同比例混合使用D ．悬浮生长的细胞直接添加胰蛋白酶”E ．贴壁生长的细胞添加新鲜培养液5. 二氧化碳培养箱结构的核心部分，主要是A ．湿度调节装置B ．湿润的含水托盘C ．温度调节器D ．CO 2 调节器、温度调节器和湿度调节装置E ．气体保护器装置6. 二氧化碳培养箱调节CO 2 浓度范围为（）A ．0 ％～20 ％B ．20 ％～40 ％C ．10 ％～20 ％D ．20 ％～30 ％E ．30 ％～40 ％7. 厌氧培养箱通过自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态，其换气过程是（）A ．①气体排空→②净化→③气体排空→④N 2 净化→⑤气压平衡B ．①气体排空→②N 2 净化→③气压平衡C ．①N 2 净化→②气体排空→③N 2 净化→④气压平衡D ．①N 2 净化→②气体排空→③N 2 净化→④气体排空→⑤气压平衡E ．①气体排空→②N 2 净化→③气体排空→④N 2 净化→⑤气体排空→⑥气压平衡8. 厌氧培养箱内厌氧菌最佳的气体生长条件是（）A ．80 ％N 2 、5 ％CO 2 和15 ％H 2B ．80 ％N 2 、15 ％CO 2 和5 ％H 2C ．80 ％N 2 、10 ％CO 2 和10 ％H 2D ．85 ％N 2 、5 ％CO 2 和10 ％H 2E ．85 ％N 2 、10 ％CO 2 和5 ％H 29. 厌氧培养箱催化除氧系统箱内采用钯催化剂，其作用是（）A ．催化箱内氧气与氢气反应生成水后再由干燥剂所吸收B ．催化无氧混合气体内的微量氧气与氢气反应，生成水后再由干燥剂所吸收C ．除去箱内CO 2D ．除去箱内充满的氧E ．除去箱内H 2 S10. 维持细胞较快的生长增殖速度，需添加的血清量为（）A ．1 ％～2 ％B ．2 ％～5 ％C ．5 ％～10 ％D ．10 ％～20 ％E ．20 ％～25 ％【X 型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。
细胞培养技术中的常见问题解答
细胞培养技术中的常见问题解答细胞培养技术是生物科学领域中重要的研究方法之一，广泛应用于细胞生物学、生物医学研究、药物开发等领域。
然而，细胞培养过程中常会遇到各种问题，这些问题的解答对于保证实验结果的可靠性和研究顺利进行至关重要。
本文将就细胞培养技术中的常见问题进行解答，希望对于读者在实验过程中的疑问起到一定的帮助。
Q1：为什么我的细胞无法附着在培养皿上？A：细胞无法附着的原因可能有多种。
首先，确保培养皿表面已经充分涂上了适当的基质，如凝胶体或胶原蛋白等。
其次，检查培养基的配方是否正确，是否缺乏必需的生长因子或氨基酸等。
同时，培养环境的温度、湿度和培养皿表面的处理都会影响细胞附着。
最后，细胞密度和接种时间也会影响细胞的附着能力。
如果问题仍然存在，可以尝试不同的培养条件以找到合适的附着条件。
Q2：为什么我的细胞生长缓慢？A：细胞生长缓慢可能源于多种因素。
一方面，细胞培养基的配方可能导致细胞生长受到限制。
检查培养基中是否缺乏必需的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等，并根据需要进行调整。
另一方面，细胞密度过高或过低也会影响细胞生长速度。
合理调整细胞密度以促进正常的生长。
此外，温度、CO2浓度、培养皿和培养箱的湿度等因素也会对细胞生长产生影响。
对这些条件进行优化，在适当的环境中培养细胞可以加快其生长速度。
Q3：我应该什么时候更换培养基？A：细胞生长到饱和状态之前应避免更换培养基。
通常，在细胞取代率达到80-90%时，即到达细胞生长的最佳时机进行培养基的更换。
更换培养基的目的是为了提供充足的营养物质和清除废弃物，以促进细胞的生长和健康。
然而，过于频繁的培养基更换也会带来损害细胞的风险，因此要根据实验的需要和细胞的生长状态来进行判断。
Q4：细胞是否可以冻存？A：冻存细胞是细胞培养技术中常见的方法之一。
冻存细胞可以长期保存，以备将来的培养和实验使用。
冻存细胞需要使用特定的冻存液来保护细胞，并通过特定的冷冻和解冻过程来确保细胞的完整性和生存率。
细胞实验试题及答案
细胞实验试题及答案1. 细胞培养中常用的培养基有哪些？- 答案：常用的细胞培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM、F12等。
2. 细胞传代时应注意哪些事项？- 答案：细胞传代时应注意以下事项：1. 使用无菌操作技术。
2. 确保培养基新鲜且无污染。
3. 传代时细胞应处于健康生长状态。
4. 传代比例要适当，避免细胞过于拥挤或过于稀疏。
3. 细胞冻存液的主要成分是什么？- 答案：细胞冻存液的主要成分包括：1. 基础培养基。
2. 冷冻保护剂（如DMSO）。
3. 血清。
4. 细胞凋亡的形态学特征有哪些？- 答案：细胞凋亡的形态学特征主要包括：1. 细胞体积缩小。
2. 细胞核浓缩。
3. 细胞膜泡化。
4. DNA片段化。
5. 细胞周期各阶段的特点是什么？- 答案：细胞周期各阶段的特点如下：1. G1期：细胞生长，进行RNA和蛋白质的合成。
2. S期：DNA复制。
3. G2期：细胞继续生长，准备进行分裂。
4. M期：细胞分裂。
6. 细胞转染常用的方法有哪些？- 答案：细胞转染常用的方法包括：1. 脂质体介导的转染。
2. 电穿孔。
3. 病毒载体转染。
7. 细胞克隆形成实验的步骤是什么？- 答案：细胞克隆形成实验的步骤包括：1. 细胞消化。
2. 细胞计数。
3. 细胞稀释。
4. 细胞培养。
5. 克隆选择。
6. 克隆扩增。
8. 细胞培养中常见的污染类型有哪些？- 答案：细胞培养中常见的污染类型包括：1. 细菌污染。
2. 真菌污染。
3. 支原体污染。
4. 病毒污染。
9. 细胞培养箱的基本条件是什么？- 答案：细胞培养箱的基本条件包括：1. 恒温。
2. 恒湿。
3. 5% CO2环境。
4. 无菌。
10. 细胞毒性实验中常用的检测方法有哪些？- 答案：细胞毒性实验中常用的检测方法包括：1. MTT法。
2. LDH释放法。
3. 细胞克隆形成实验。
4. 细胞存活率检测。
以上是细胞实验试题及答案的排版和格式示例。
生物(课后习题)动物细胞工程第课时
2。
2动物细胞工程2。
2.1动物细胞培养和核移植技术基础巩固1下列不属于动物细胞培养必需条件的是（)A。
无菌、无毒的环境B.适宜的温度和pHC.O2等气体环境D。
适宜的光照条件答案D2下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是( )A。
动物细胞培养技术的原理是细胞的全能性B。
传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞C.癌细胞在培养瓶中不会出现接触抑制现象D。
动物细胞培养一般需要使用CO2培养箱解析动物细胞培养的原理是细胞增殖。
答案A3在动物细胞培养过程中,使用胰蛋白酶的目的是（)A。
使动物组织分散为单个细胞B.去掉细胞壁，使其成为原生质体C.去掉细胞膜，暴露出原生质体便于细胞融合D.促进蛋白质水解为多肽解析在进行动物细胞培养前,先用胰蛋白酶使组织块中的细胞相互分散开,以增加细胞与培养液的接触面积，便于培养。
答案A4下列有关核移植的说法，错误的是（）A。
用核移植得到的动物称为克隆动物B.核移植的受体细胞最好是受精卵C.核移植可以充分发挥优良种畜的繁殖潜力D。
核移植得到的克隆动物属于无性生殖解析核移植的受体细胞应该是MⅡ中期的卵母细胞，相对受精卵来说,MⅡ中期的卵母细胞细胞质所含的物质更有利于细胞核全能性的表达.答案B5用于动物体细胞核移植的供体细胞一般选用（)A.受精卵B。
传代10代以内的细胞C.传代10～50代以内的细胞D.处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞解析培养的动物细胞一般当传代至10~50代时，部分细胞核型可能会发生变化,而传代10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。
因此,在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞作为供体细胞。
答案B6在进行核移植时，通常将整个体细胞而不是细胞核注入去核卵母细胞中，下列有关叙述错误的是( ）A.体细胞太小因而去除细胞核较困难B。
细胞质中遗传物质少因而对遗传的影响很小C。
直接将体细胞注入卵母细胞中简化了操作程序D.体细胞的核离开了原来的细胞质将不能存活解析体细胞太小因而去除细胞核较困难，因此可将整个体细胞注入去核卵母细胞中，A项正确；DNA主要位于细胞核中,细胞质中遗传物质少，因而对遗传的影响很小,B项正确；将整个体细胞注入去核卵母细胞中，简化了操作程序，C项正确；体细胞的核离开了原来的细胞质，注入去核的卵母细胞依然能存活,D项错误。
293细胞培养
293细胞培养1.培养基DMEM ++丙酮酸钠++10%血清++青链霉素2.复苏：（1）37度融化后，擦干冻存管酒精擦，细胞加入15ml离心管，加5ml培养基，500g离心5min，弃上清，加1ml培养基重悬后加入到培养瓶中，5~6ml左右，记得晃匀。
3. 传代吸出旧培基，加5mlPBS洗1-2遍，用移液管加1ml胰酶，滚2遍吸出，37度放1min左右计时，看到变圆即加入新培基吹打，几下就好了，分到新瓶里。
我个人认为：293细胞贴壁后形成圆形，可能是细胞本身状态不是很好，细胞不够饱满，细胞的贴壁后的棱角不易显露出来，所以看上去类似圆形，而且细胞较小。
293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。
它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与ey 于1976年用DNA转染技术构建而成。
293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。
293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。
单层培养细胞在5-10％FBS-DMEM中能生长很好。
一般来讲，1:10传代后，一周可以长满。
严禁过度生长，这点很重要。
因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染，传代时也不易打散。
悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。
293细胞在传代120次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。
293细胞培养特性：1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。
一般用高糖的DMEM培养基。
2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
细胞培养技术题库
细胞培养技术题库细胞培养技术准备⼯作常⽤设备准备室的设备：单蒸馏⽔蒸馏器、双蒸馏⽔蒸馏器、酸缸、烤箱、⾼压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭⼒天平和电⼦天平（称量药品）、PH计（测量培养⽤液PH值）、磁⼒搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、⽇光灯和紫外灯、空⽓净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、⼆氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在⽆菌间的设备：离⼼机（收集细胞）、超净⼯作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、⽔浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养⽤液）。
⽆菌操作⽆菌室的灭菌：1.定期打扫⽆菌室：每周打扫⼀次，先⽤⾃来⽔拖地、擦桌⼦、超净⼯作台等，然后⽤3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧⼄酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先⽤3‰新洁尔灭擦拭，然后⽤75％酒精擦拭或者0.5％过氧⼄酸，再⽤紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空⽓净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：⽤75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验⼈员的⽆菌准备：1.肥皂洗⼿。
2.穿好隔离⾐、带好隔离帽、⼝罩、放好拖鞋3.⽤75％酒精棉球擦净双⼿。
⽆菌操作的演⽰：1.凡是带⼊超净⼯作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋⽩酶的瓶⼦均要⽤75％酒精擦拭瓶⼦的外表⾯2.靠近酒精灯⽕焰操作。
3.器⽫使⽤前必须过⽕灭菌4.继续使⽤的器⽫（如瓶盖、滴管）要放在⾼处，使⽤时仍要过⽕。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使⽤液时要注意更换吸管，防⽌交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：⼀、新的玻璃器⽫的洗消：1.⾃来⽔刷洗，除去灰尘。
2.烘⼲、泡盐酸：烤箱中烘⼲，然后再浸⼊5％稀盐酸中12⼩时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘⼲：12⼩时后⽴即⽤⾃来⽔冲洗，再⽤洗涤剂刷洗，⾃来⽔冲⼲净后⽤烤箱烘⼲。
细胞培养复习题(含答案)
1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。
（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。
）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。
此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。
处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。
细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。
②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。
一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。
③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。
以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。
⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。
此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。
时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。
底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6～24小时。
④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。
分析仪器在细胞培养与细胞工程的应用考核试卷
17. D
18. A
19. A
20. B
二、多选题
1. ABCD
2. ABCD
3. ABC
4. ABCD
5. ABC
6. AB
7. ABC
8. ABC
9. ABC
10. AB
11. ABC
12. AB
13. AC
14. AD
15. ABC
16. AC
17. ABC
18. ABC
19. AB
D.流式细胞术
4.细胞培养中，用于监测细胞代谢状态的仪器是？（）
A. CO2培养箱
B.荧光显微镜
C.氧气传感器
D.磁力搅拌器
5.下列哪种分析仪器可以用于细胞工程中的基因转移效率检测？（）
A.荧光显微镜
B.流式细胞仪
C.电泳仪
D.显微注射器
6.在细胞培养过程中，用于检测细胞增殖的仪器是？（）
A.分光光度计
A.流式细胞术
B.免疫组化
C.电子显微镜
D.显微注射
20.以下哪些分析仪器可以用于细胞工程中的细胞外泌体分离与分析？（）
A.超速离心机
B.流式细胞仪
C.电子显微镜
D.磁力分离器
三、填空题（本题共10小题，每小题2分，共20分，请将正确答案填到题目空白处）
1.在细胞培养中，用于监测细胞生长环境的仪器是______。
分析仪器在细胞培养与细胞工程的应用考核试卷
考生姓名：________________答题日期：________________得分：_________________判卷人：_________________
一、单项选择题（本题共20小题，每小题1分，共20分，在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）
动物细胞培养技术与应用考核试卷
C. LB
D. EMEM
5.下列关于动物细胞培养中的CO2的作用，错误的是？（）
A.维持pH
B.促进细胞代谢
C.抑制细胞分化
D.提供细胞生长所需的气体
6.下列哪个条件不是动物细胞培养的基本条件？（）
A.营养物质
B.气体环境
C.温度
D.重力
7.下列哪种细胞器在动物细胞培养过程中起到重要作用？（）
D.细胞突然死亡
13.动物细胞培养中，下列哪种方法可用于检测细胞的活力？（）
A.细胞计数
B.MTT法
C.流式细胞术
D.电子显微镜
14.下列哪种应用不属于动物细胞培养技术的范畴？（)
A.生物制品生产
B.细胞疗法
C.药物筛选
D.基因编辑
15.下列哪个过程不属于动物细胞培养的基本流程？（）
A.细胞原代培养
8.在动物细胞培养中，__________是细胞贴壁生长的关键因素。
9.下列哪种方法可以用来分离单核细胞？__________。
10.动物细胞培养中，__________是细胞分化的重要标志。
四、判断题（本题共10小题，每题1分，共10分，正确的请在答题括号中画√，错误的画×）
1.动物细胞培养中，细胞的密度越高，生长速度越快。（）
A.物理因素
B.化学因素
C.生物因素
D.遗传因素
12.以下哪些是动物细胞培养中常用的细胞冻存方法？（）
A.液氮冻存
B.冷冻箱冻存
C.真空冻干
D.冷藏冻存
13.以下哪些是动物细胞培养中使用的培养基类型？（）
A.合成培养基
B.天然培养基
C.半合成培养基
D.完全培养基