专家讲座核酸检测实验室建立与应用
核酸检测实验室建设方案书
核酸检测实验室建设方案书一、平面布局（一）实验室功能分区普通核酸检测PCR实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、核酸扩增、产物分析等四个区域。
全自动定量PCR实验室通常设置三个工作区，即试剂准备区、标本制备区、核酸扩增和产物分析区，普通PCR 实验室后两个区合并。
一体化自动化分析PCR 实验室原则上设置两个工作区，即试剂准备区、自动检测区，普通PCR实验室后三个区合并。
各个区可组合布置，也可分散布置。
（二）实验室平面布局实验室应在建筑物中自成隔离区，应有出入控制。
试剂准备区、标本制备区和核酸扩增及产物分析区等四个区域在物理空间上必须是完全相互独立的。
可以分散布置。
为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
不能将工作服带出。
每个工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内设备、物品混用。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
整体划分为∶PCR区域、独立缓冲间，及辅助房间区域，缓冲间可兼做防护服更换间。
当缓冲间的门设置互锁时，应在互锁门的附近设置紧急手动解除互锁开关。
保持合理梯度，保证气流从辅助房间流向核心区。
可降低扩增区内的气压以避免气溶胶从本区漏出。
（三）人流、物流流向人流∶工作人员→一更→二更→缓冲间→洁净走廊→缓冲→核心试验区域洁物∶原料→入口→样品接收→传递窗→洁净走廊→缓冲→核心试验区域污物∶污物→洁净走廊→传递窗→高压灭菌→传递窗→外部进入各个区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开时，不得将工作服带出。
这种人员的单向流动可以降低因人员的流动带来的交叉污染风险。
所有的物品进入实验区必须经过双扉互锁传递窗，利用传递窗消毒后才可进入，实验室内所有物品也必须经过传递窗才可以传递到实验室以外的清洁公共区。
这种物品有组织的单向流动可以降低物品的差错和混淆的风险。
儿童呼吸道感染病原体核酸检测专家共识解读PPT课件
一名3岁女孩，出现高热、咳嗽、呼吸急促等症状。核酸检测结果显示为呼吸道合胞病毒感染。经过对症治疗和 氧疗，患者病情逐渐稳定，并在两周内康复。
常见问题解答
问题一
核酸检测在儿童呼吸道感染中的意义是什么？
答
核酸检测能够快速、准确地确定病原体类型，为临床诊 断和治疗提供重要依据。
问题二
核酸检测的敏感性和特异性如何？
03
核酸检测在儿童呼吸道感染的诊断和治疗中具有重 要作用。
经验总结与展望
• 临床医生应熟悉和掌握各种病原体的核酸 检测方法和技术。
经验总结与展望
01 02 03 04
展望
未来可进一步完善儿童呼吸道感染病原体核酸检测的技术和方法。
加强临床医生对核酸检测技术的培训和教育，提高检测准确性和效率 。
探索将核酸检测与其他检测技术相结合，提高儿童呼吸道感染的诊断 和治疗水平。
03
儿童呼吸道感染可导致发热、咳嗽、喘息、呼吸困难等症状 ，严重者可出现并发症，如肺炎、中耳炎、心肌炎等，甚至 危及生命。
03
核酸检测技术原理与方法
核酸检测技术原理
核酸提取
01
从临床样本中提取核酸，通常采用化学或物理方法破坏病原体
细胞壁，释放核酸。
核酸扩增
02
利用PCR技术，在特定条件下将目标核酸片段进行指数级扩增
质量控制体系建立及持续改进
室内质控
实验室应建立室内质控体系，包括阴性对照、阳性对照、内标等，以确保实验结果的准确性和可靠性。同时，应定期 对室内质控数据进行统计分析，及时发现并解决问题。
室间质评
实验室应积极参加国家或省级临床检验中心组织的室间质评活动，以评估实验室的检测能力和水平。对于室间质评不 合格的项目，应进行整改并重新参加质评。
新冠病毒检测的生物安全管理与防护(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
• （四）管控原则：生物安全实验室建设之初应做好对拟从事的病 原微生物进行危险度评估，一定要有科学、合理的总体构思和概 念设计，在此基础上应根据操作过程的梗概进行平面布局工艺设 计，然后再进行空调通风和电控等的具体设计。国内的生物安全 实验室一定要按照国务院发布的《病原微生物实验室生物安全管 理条例》进行管理。该条例对病原微生物的管理原则是：病原微 生物是分类管理，实验室是分级管理。
表1 生物安全柜技术参数及应用对象的异同
生物安全柜类型 I级
正面气流速度 （m/s）
0.36
II级 A1型
0.38-0.51
A2型
0.51
B1型
0.51
气流方式
前面进，后面出， 顶部通过HEPA过滤 器 70%通过HEPA在工 作区内循环，30% 通过HEPA排出到实 验室内 同II级A1，但箱内 排气管道呈负压 30%通过HEPA在工 作区内循环，70% 通过HEPA和气密管 道排出
• ⑴ 院内运输：运送人员进行二级防护并随身携带75%酒精，以便 发生意外时能及时处理。条件允许时，应配备标本转运监控装置。
• ⑵ 长距离运输：
• ①应当按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样 本运输管理规定》办理《准运证书》。
• ② 2019-nCOV标 本 运 输 包 装 属 于 A类，对应的联合国编号为 UN2814。
• 2、风险（risk）：危险发生的概率及其后果严重性的综合； • 3、风险评估（risk assessment）：评估风险大小以及确定是否可
容许的整个过程；
• 4、风险控制（risk control）：减低风险而采取的综合措施；
• 5、气溶胶（aerosol）： 是固态或液态微粒悬浮在气体介质中的分散 体系。其中的气体介质称为连续相，一般为空气；微粒称为分散相， 大小不一，一般粒经为0.001-100微米，属于气溶胶研究的对象。
核酸检测实验室(PCR),你了解吗
核酸检测实验室（PCR），你了解吗发表时间：2020-12-23T14:40:05.267Z 来源：《中国医学人文》2020年9月9期作者：曾庆凌[导读] 核酸检测实验室（PCR），你了解吗曾庆凌（眉山市人民医院；四川眉山620000）【中图分类号】R2 【文献标号】A 【文章编号】2095-9753（2020）09-0003-01 核酸检测实验室的建成是为疫情提供科学、有效、有力的数据支撑，对打响抗疫，赢得抗疫具有重大的意义。
核酸检测实验室又叫做基因扩增实验室，PCR 的中文翻译为橘核链式反应。
事先准备好设计的引物、耐热的 DNA 聚合酶以及反应原料，即可在体外进行 DNA 的复制过程。
首先将需要扩增的 DNA 模版进行加热使其变性解链。
之后待温度达到能使引物与待扩增的模版序列发生结合时可完成退火结合；核酸检测实验室一般需要包含以下四个独立区域即：核酸扩增区以试剂配置区、产物分析区、样品处理区。
核酸检测实验室可以有分散形式的也可以有组合形式的。
试剂选择、样品处理、核酸扩增以及产物分析四个步骤通常是一组完整实验需要经历的必要过程。
分散形式的核酸检测实验室。
分散形式的实验室就是指各个实验过程的独立单位没有紧密相邻，成分布状态。
对着这种分散形式的实验室由于相互之间几乎不产生相互干扰，因此没有特殊条件的需要。
组合形式的核酸检测实验室。
是指完成一组实验过程中每个实验用房彼此相邻，形成一个实验区域。
由于组合形式的核酸检测实验室各用房之间相邻因此会造成彼此之间的干扰，对此对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
每个实验入口需要外设缓冲间，以减少室内空气之间的交换。
核酸检测是什么？核酸检测是临床用于艾滋病的一种检测方式。
如果在感染艾滋病毒以后进行核酸检测可以了解身体内含有的艾滋病毒素，对此可以在医生的指导下进行抗病毒药物的治疗。
如果在治疗后的 11 周经过核酸检测结果为阴性，则可以排除没有出现艾滋病毒感染的结果，但是需要定期复查。
【专家讲座】核酸检测实验室建立与应用PPT课件
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应用SAS9.0软件PARnaOlyBsiIsTo分f Pa析ram结eter果Estimates
ChiParameter
ChiSq
DF Estimate
Standard 95% Confidence
Error
Limits
Square Pr >
Intercept 0.0028 log10(Dose) 1 0.0011
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标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
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核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
PROBIT Pi=A+BXi
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用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
新冠核酸检测实验室质量控制和生物安全培训课件ppt
（一）实验室要求——检测要求
实验室应当将重点人员样本和一般健康筛查人群样本分区存 放、分批检测
在检测过程中，由于样品盖的打开、核酸提取的振动和离心 作用，可能产生气溶胶，存在感染和污染的风险。所有的实 验操作要轻柔，避免气溶胶的产生。
生物安全柜每次使用后应该用消毒剂消毒后紫外线照射至少 30min；核酸提取仪、荧光PCR等，离心机等设备每天用酒 精擦拭消毒；必要时用去核酸污染试剂擦拭上述设备，擦拭 完毕后必须用清水彻底清洁，以免出现假阴性。
加样枪切勿 插 进管内
加阴性对照和 室 内弱阳性质 控品 • 先加样本核酸
和 试剂阴性对 照 • 封膜或盖管 • 最后加阳性对照
4、核酸扩增间
个人防护：本区域专用实验服
主要功能： 核酸扩增
核对扩增程序 确保反应板或管密封
离心、上机
结果判定严格按照试剂盒说明书进行
扩增结束后，严禁开盖，及时清理反应板，按一般医疗废弃物处理
核酸提取间
产物分析间 核酸扩增间
试剂准备间
缓冲间
缓冲间
缓冲间
缓冲间
人员流动严格按照单一方向，试剂准备区→核酸提取间→扩增区→ 扩增产物分析区 不同工作区域内的设备、物品不得混用 不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）
1、采样——收样
标本接收人员的个人防护：按采样人员防护装备执行 样本双签收：标本运送人员+接收人员
）
4
二、实验室质量控制
实验室要求
质量控制
（一）实验室要求
1、实验室基本要求：
➢符合《病原微生物实验室生物安全管理条例 ➢具备经过卫生健康行政部门审核备案的ห้องสมุดไป่ตู้物安全二级及 以上实验室条件 ➢ 具备基因扩增检验实验室条件。
核酸检测建设工程施工方案
核酸检测建设工程施工方案一、工程概况随着新冠病毒疫情的发展，核酸检测成为了疫情防控的重要手段。
为确保疫情防控工作的顺利进行，提高核酸检测效率，我们计划在原有实验室基础上，新建一座核酸检测实验室。
本项目位于某地进行建设，主要包括实验室土建工程、设备采购及安装、系统调试等。
二、施工目标1. 确保工程质量：严格按照国家相关规范和标准进行施工，确保实验室质量达到设计要求。
2. 保证工程进度：合理安排施工计划，确保工程按时完成。
3. 确保施工安全：加强施工现场安全管理，确保施工人员生命安全和工程安全。
4. 保证环境保护：施工过程中，做好环境保护工作，减少对周边环境的影响。
三、施工内容1. 土建工程：包括实验室主体结构、内部装修、通风空调、给排水、电气等施工。
2. 设备采购及安装：采购核酸检测设备、实验室仪器、通风设备等，并负责安装调试。
3. 系统调试：包括实验室设备、通风系统、监控系统等调试，确保各项设备正常运行。
四、施工组织与管理1. 施工组织：项目成立专门施工组织机构，负责施工过程中的协调、管理和监督。
2. 人员配置：根据施工内容，合理配置施工人员，确保施工顺利进行。
3. 质量管理：实施严格的质量管理制度，对施工过程进行全程监控，确保工程质量。
4. 进度管理：制定详细的施工计划，明确各阶段施工任务，确保工程按时完成。
5. 安全管理：加强施工现场安全管理，定期进行安全教育培训，提高施工人员安全意识。
6. 环境保护：制定施工现场环境保护措施，严格执行环保法规，确保施工过程中对周边环境的影响降到最低。
五、施工技术措施1. 土建工程：根据设计图纸，按照相关规范进行施工，确保实验室主体结构安全可靠。
2. 设备安装：遵循设备安装规范，确保设备安装牢固、运行稳定。
3. 系统调试：在设备安装完成后，进行系统调试，确保各项设备正常运行。
六、施工质量保证1. 材料验收：对进场的材料进行严格验收，确保材料质量符合国家标准。
核酸检测室-实验室初步规划与布局
核酸检测室-实验室初步规划与布局XXX布局规划建设依据：XXX生物安全通用要求»、«生物安全实验室建筑技术规范»、«临床扩增实验室管理暂行办法»、«检测和校准实验室能力认可准则在基因扩增检测领域的应用说明»。
实验室分为洗消区、样品受理区、换衣区、试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区，并设有专用走廊，其中试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。
不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密连接，需安装物品传递窗，不得逆向流动。
实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。
各工作区顶部应该安装紫外灯，紫外灯波长为254mm,每20㎡一支40W的紫外灯。
一、各区的功能洗消区：放置清洁用具,清洗实验用具等。
样品受理区：样品的接收与受理。
换衣区：换工作服。
试剂准备区：试剂的配制、分装和保存。
样品处理区：样品登记、分装;核酸提取、保存。
扩增区：扩增反应混合物的配制、加样。
扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
扩增前区与扩增后区应严厉分隔，须使用不同的房间，两区之间有一定的间隔。
二、PCR实验室主要设备洗消区：烘箱样品受理区：电脑、打印机。
试剂筹办区：仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。
试剂分装应在超净台中进行，扩增反应混合液应使用分子生物学级的。
标本制备区：仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、干浴器、混匀器、水浴锅、冰箱等。
扩增区：扩增区的主要仪器是PCR扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、冰箱等。
PCR扩增仪需进行校准。
并配备UPS电源，以防止由于电压的波动，停电对扩增效果的影响。
扩增产物分析区：本区所使用的仪器设备有测序仪、实时荧光定量PCR仪、加样器等。
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2020/1/23
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核酸实验室污染后措施
实验室污染后，如何处理？
通风 次氯酸钠溶液（扩增区不宜使用） HCL溶液（吸头） 紫外线（固定、移动） 酒精喷洒（空气）
应设计有备用实验室 : 如开设独立的报 告发放区作为备用
2020/1/23
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血筛核酸检测的内标的作用
中心理念：监测全程的实验过程包含病毒核 酸提取、反转录及扩增过程的效率。
合格标本发布结果
单项目反应性 无反应性
阳性或可疑 结果淘汰
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标准操作规程(SOP)的编写
核酸实验室设置与管理规范 核酸实验室标本检测流程 核酸实验室岗位职责 核酸实验室关键试剂管理规范 核酸实验室仪器设备管理规范 核酸实验室检测标本管理规范 核酸实验室室间质量评价规范 核酸实验室记录管理制度 核酸实验室生物防护规范 核酸反应性献血者追踪规程 核酸实验室检测应急措施
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应用SAS9.0软件PROBIT分析结果
Analysis of Parameter Estimates Standard 95% Confidence Chi-
Parameter DF Estimate Error Limits Square Pr > ChiSq Intercept 1 -4.6852 1.5659 -7.7542 -1.6161 8.95 0.0028 log10(Dose) 1 4.8000 1.4699 1.9190 7.6810 10.66 0.0011
每个循环可以生成100-1000个复制物， 在15-30分钟内可增加10亿倍复制物
以2n扩增，2～3 h就能将待 扩目的基因扩增放大10亿倍
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TMA的优点
自动化程度高 灵敏度高
扩增效率高：10n
缺点
不能绝对定量
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PCR的优点
缺点
易于自动化 灵敏度高 扩增效率高
合格标本发布结果
2020/1/23
待查标本复检
合格标本
不合格标本
单人份拆分 反应性标本
淘汰 不合格标本
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检测流程(2):常规筛查合格单人份标本检测流程
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检测流程(3):平行检测流程
常
规
检
样测
本
清
点 交
核 酸 单
接份
检
测
不合格标本 合格标本
阴性标本
反应性标本
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阳性或可疑 结果淘汰
汇集拆分过程繁琐
拆分可减低非反应性比率
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核酸试剂质控
试剂的确认 试剂运输过程的控制(温度\条件\时限) 灵敏度的要求 内标的要求
试剂涵盖的基因型
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检测流程(1):常规筛查合格汇集标本检测流程
标本清点、离心 常规检测
合格标本 标本交接、电脑锁定
8 人份汇集 核酸提取 扩增检测 阴性标本
核酸检测实验室建立与应用
核酸扩增检测实验室的建立
人员 场地 检测方法选择 实施方案
依据：卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》
（卫医发[2002]10号）
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核酸实验室人员要求
资质:经过临检中心PCR培训班培训并取 得上岗证；通过血站核酸实验室岗前培 训考试合格。
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
2020/1/23
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核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
PROBIT Pi=A+BXi
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用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
1
5003/3100源自21006/6
100
3
50
8/8
100
4
30
7/8
87.5
5
10
4/8
50
培训:①无”核酸”的概念形成, ②防污 染的概念③良好工作习惯的培养. ④报告 的正确发放.
后备人员的培养.
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样本离心交接区
试剂准备区
核
酸
实
标本制备区
验
场
地 扩增区及扩增产物分析区
报告发放区
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方法选择: TMA与PCR
TMA
扩增原理 模拟自然 DNA 转录成 mRNA 的过程
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标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
靶目标 酶
RNA MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶
PCR 模拟自然 DNA复制的过程
DNA DNA聚合酶
反应体系
两种酶，两条引物，dNTP, NTP
一种酶，一对引物，dNTP
温度条件
扩增仪器 扩增产物
恒温（41.5℃ ） 水浴箱或者加热块
RNA
循环导热 （变性，退火，延伸）
热循环仪
DNA
扩增速度
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核酸实验室防污染措施
主要的污染源
扩增产物 标本之间产生的气溶胶 操作人员
手 衣服
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核酸实验室防污染措施
要有独立的空气处理系统. 各区始终处于完全分隔的状态，不能有空气的
直接相通 实验室保持合理的通风 对各区内的设备、物料进行标示，专区专用；
其他物品不得混用（例如：笔、纸张） 空气：试剂准备区→标本制备区→扩增区→产
物分析区 试剂阳性对照储存在标本制备区 使用带滤芯的吸头
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核酸实验室防污染措施
使用外排式的生物安全柜 自配试剂应分装成小规格，未用完的试剂应废
弃 使用次氯酸钠溶液消毒（台面、地面） 使用1mol/L的HCL溶液（吸头） 使用紫外线照射（空气和台面） 使用无水乙醇溶液（空气喷雾）