细胞介导细胞毒作用检测法：LDH释放法
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ADCC，全称为抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用，是一种生物学反应，涉及抗体与靶细胞表面的抗原特异性结合，然后通过NK细胞等具有杀伤细胞功能的细胞杀死靶细胞。
至于LDH（乳酸脱氢酶）释放法，它是高通量检测的一种方法。
当NK细胞杀死靶细胞后，靶细胞中的LDH会释放到培养基中，通过电子载体的作用，WST会发生颜色反应，WST甲臜产物的吸光度与LDH量呈正比，可以反映死亡和受损伤靶细胞的数量。
请注意，由于医学专业领域的复杂性，如需获取更多准确信息，建议咨询相关医学专家或查阅相关医学文献资料。
细胞生物学中的药物筛选与评价方法研究
细胞生物学中的药物筛选与评价方法研究细胞生物学是研究细胞结构、功能和生物过程的学科，而药物筛选与评价方法是指在细胞水平上对药物进行筛选和评价的方法。
这些方法在药物研发和临床应用中起着至关重要的作用。
本文将介绍几种常用的细胞生物学中的药物筛选与评价方法。
1. 细胞存活率测定法细胞存活率测定法是一种常用的药物筛选与评价方法。
该方法通过评估细胞在药物处理后的存活率来判断药物对细胞的毒性和抗细胞增殖活性。
常见的细胞存活率测定方法包括MTT、CCK-8、LDH释放等。
MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）法是通过测定细胞内活性代谢产物的形成来评估细胞存活率的。
MTT是一种黄色草酮类化合物，可以被活细胞内的NAD(P)H依赖的还原酶酶活（如线粒体呼吸链复合物）还原为紫色的结晶物。
通过把MTT溶液添加到细胞培养板中，待细胞生长一段时间后，通过加入一定的溶解剂来溶解结晶物，最后用分光光度计测定溶液的吸光度来评估细胞存活率。
CCK-8（cell counting kit-8）法是一种类似于MTT法的细胞存活率测定方法。
CCK-8是MTT法的改进版，它具有更高的灵敏度和更好的线性关系。
该方法也是通过测定细胞内的活性代谢产物（如细胞色素c）来评估细胞存活率的。
LDH（lactate dehydrogenase）释放法是一种衡量细胞毒性的常用方法。
LDH是存在于细胞质中的酶，只有在细胞膜破裂释放到培养液中时才会被检测到。
通过测量培养液中的LDH含量，可以评估细胞膜完整性的损害程度和细胞的存活率。
2. 细胞凋亡检测法细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，与多种疾病的发生和药物治疗效果密切相关。
因此，在药物筛选与评价中，细胞凋亡的检测方法也是不可或缺的。
常见的细胞凋亡检测方法包括TUNEL、Annexin V-FITC/PI、DNA Ladder等。
细胞毒性检测方法总结!
细胞毒性检测方法总结！细胞毒性(cytotoxic)是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。
有时需要进行特定物质细胞毒性的检测，比如药物筛选。
细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测一.LDH的方法：通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性其它酶方法：如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等细胞增殖能力分析试剂原理：正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质（如MTT、XTT、WST-1等）还原为紫色的结晶状的物质，沉积在细胞周围，然后通过酶标仪读取OD值，从而检测到细胞增值状态优点：1）快速：96孔培养板形式，可进行高通量检测。
2）灵活：可直接通过显微镜观察，也可通过酶标仪进行定量检测。
二.荧光素发光法细胞生存能力检测原理：腺苷酸激酶（AK）存在于所有真核和原核细胞的胞浆中，AK具有激活ADP 生成ATP。
当细胞受损后，细胞膜发生破损，AK会释放到培养上清中。
该试剂盒利用荧光素酶和荧光素在ATP作用下可以发光，通过化学发光仪可以定量进行检测。
特点： 1）简单、快速。
2）板式检测，可进行高通量。
三.LDH法细胞毒性检测原理：LDH（乳酸脱氢酶）是一种稳定的蛋白质，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH即被释放到细胞外； LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应形成紫色的结晶物质，可通过500nm酶标仪进行检测。
通过检测细胞培养上清中LDH的活性，可判断细胞受损的程度特点：1）方法简单，安全，不使用放射性物质2）可进行高通量检测。
ldh释放量计算公式__概述说明以及解释
ldh释放量计算公式概述说明以及解释1. 引言1.1 概述引言部分是对全文进行概述和介绍的重要部分。
本文将讨论LDH释放量计算公式的定义、意义以及其在医学领域中的应用与解释。
LDH（乳酸脱氢酶）释放量计算公式是一种常用于评估细胞损伤程度的方法，通过测定LDH活性来推导细胞受损程度。
本文将深入探讨LDH释放量计算公式的原理、推导过程以及其在医学领域中的具体应用及局限性。
1.2 文章结构本文共包含五个部分：引言、LDH释放量计算公式、应用与解释、结论和参考文献。
接下来的内容将按照这个顺序进行阐述。
1.3 目的本文旨在详细介绍LDH释放量计算公式，包括其定义、意义、测定方法以及相关应用和解释。
通过阐述其原理和推导过程，读者可以更好地理解LDH 释放量计算公式在评估细胞损伤方面的作用，并了解该方法在医学领域中的应用前景，以促进未来的研究和发展。
2. LDH释放量计算公式2.1 LDH释放量的定义与意义LDH（乳酸脱氢酶）是一种存在于细胞质和线粒体内的酶，它在细胞能量代谢中起着重要的作用。
LDH释放量是衡量细胞损伤程度和组织疾病状态的指标之一。
当细胞受到损伤或发生疾病时，LDH会从细胞内释放到外部环境中，因此测定和计算LDH释放量对于评估疾病的严重性以及治疗效果具有重要意义。
2.2 LDH测定方法简介目前常用的LDH测定方法主要包括光度法、电化学法和免疫学法等。
其中，光度法是一种经典的测定方法，通过测定产生的NADH（还原型辅酶Ⅰ）数量来间接反映LDH活性水平。
而电化学法则利用电极检测样品中由LDH产生的还原电流强度来确定其活性。
免疫学法则使用特异性抗体与LDH结合并形成可检测信号进行定量分析。
2.3 LDH释放量计算公式的推导LDH释放量的计算公式可以根据上述测定方法获得的实验数据得出。
一般来说，LDH释放量的计算公式如下：LDH释放量（U/L）=（样品测定值-背景测定值）/体积×稀释倍数其中，样品测定值是指待测样品中LDH含量所对应的实验结果；背景测定值是无待测物的标准控制样品或空白试剂在相同条件下进行测定后所得到的实验结果；体积是指用于测定的样品体积；稀释倍数则表示了对待测样品进行稀释处理时所需的倍数。
NK细胞毒活性-LDH释放法
1只/组
2. YAC-1 1*105 * 2ml 3. 培养液（1640) 无FCS
5ml/ 组
3. 培养液(1640) 3%FCS
10ml/组
3. LDH底物
3ml/组
4. 柠檬酸（终止液）1ml/组
·3·
原理
免疫学实验
➢ NK（natural killer ）细胞属非特异性免疫细胞， 为机体的天然免疫系统中主要的效应细胞，是与T、B细 胞并列的第三类群淋巴细胞。 ➢ NK细胞可非特异直接杀伤靶细胞，这种天然杀伤活性 既不需要预先由抗原致敏，也不需要抗体参与，且无 MHC限制。 ➢YAC-1细胞为Moloney鼠科白血病毒(Mo-MuLV) 感染的鼠T淋巴瘤细胞，对NK细胞敏感，可用于检测 NK细胞的杀伤活性。
·8·
乳酸脱氢酶释放法-原理
免疫学实验
乳酸脱氢酶(LDH)存在于细胞内，正常情况下，
不能透过细胞膜。当细胞受到损伤时，LDH可从细胞内 释放至培养液中。释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮 酸的过程中，使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶 (NADH)，后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还 原碘硝基氯化氮唑蓝(INT)或硝基氯化四氮唑蓝(NBT)形 成有色的甲基化合物，在570nm波长处有一吸收峰，利 用读取的Ａ值，可测得杀伤细胞毒活性。
Na251CrO4、 3H-TdR、125I-UdR
Or Protein
cpm
SI
试验孔cpm均值－自然释放孔 cpm均值 最大释放孔 cpm均值－自然释放孔 cpm均值
·7·
同位素释放法
免疫学实验
❖应用放射性同位素（ 如51Cr）标记靶细胞，当靶 细胞受到NK细胞攻击，靶细胞被破坏，释放出 51Cr。51Cr辐射γ射线，通过测定受损伤或死亡 靶细胞释放到上清中51Cr的放射脉冲数 （cpm)， 即可计算出NK细胞活性。
LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性
LDH释放法检测肿瘤患者PBM C和CIK细胞的细胞毒活性X张 蕾a,李芳秋a,张士新a,黄海嵘b,李德闵b(南京军区南京总医院a.解放军临床检验医学研究所;b.心胸外科,南京 210002)摘 要:目的 建立检测细胞毒活性的乳酸脱氢酶(L DH)测定法,了解肿瘤患者外周血单个核细胞(PBM C)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的抗肿瘤活性,为肿瘤的免疫细胞治疗提供参考。
方法 采集肿瘤患者和健康成人外周血,常规分离PBM C,体外进行CIK的培养,用L DH释放法分别检测PBM C和CIK对肿瘤细胞K562的细胞毒活性。
结果 肿瘤患者PBM C对K562的杀伤活力比正常人显著降低(P<0.05)。
经多种细胞因子诱导培养7～10d后,健康人和肿瘤患者的CIK 对K562的杀伤活力都有显著提高(P<0.01),肿瘤患者CIK杀伤活力接近于健康人。
结论 肿瘤患者P BM C细胞毒活性显著降低,但经诱导培养成CIK后则显著提高。
用L DH释放法检测肿瘤病人CIK细胞毒活力,有助于CI K疗法适应病人的选择及个体疗效观察。
关键词:乳酸脱氢酶释放法;细胞因子诱导的杀伤细胞;细胞毒活性;肿瘤治疗中图分类号:R730.43 文献标志码:A 文章编号:1671-7414(2008)06-027-03Measurement of Cytotoxic Activity of PBMC andCIK from Cancer-bearing Patients Using LDH Release AssayZHANG Lei a,LI Fang-qiu a,ZHANG Shi-xin a,HU ANG Hai-rong b,LI De-min b(a.Institute of Clinical L aboratory M edicine,PL A;b.Dep ar tment ofCardiothor acic Surgery,N anj ing General H osp ital Command,N anj ing210002,China)Abstract:Objective T o investigate the anti-t umor activit y of peripher al blood monouclear cells(P BM C)and CIK cells from cancer-bearing patients.Methods PBM C fr om healthy donor s and patients w ere iso lated and w ere incubated w ith var ious types of cy tokines to generate CIK.Cyto tox ic activit y of PBM C and CIK fr om cancer-bear ing patients at diagnosis w as evaluated using an L DH release assay.Results T he anti-tum or activity of P BM C fro m patients w as much lower t han that of healthy donor s.A fter stimulation,the cyto tox ic activity of CIK w as sig nificant incr eased,and the cytoto xic activity in CIK w as increased to the prox imat e level of these tw o g ro ups,r espectiv ely.C oncl usion Result s show the enhancement of cy totox ic activity o f CIK cells fr om bot h healthy donors and cancer patients.L DH release assay is useful for choosing candidated patients and for estimating the indiv idual t her apeut ic efficiency of CIK.Keywords:L DH release assay;cyto kine-induced killer cell;cyto tox ic activity;tumor ther apy 细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案,已经作为一种肿瘤的辅助疗法应用于临床。
ldh法和mtt法
ldh法和mtt法一、介绍在细胞实验研究中，细胞增殖和生长的检测是必不可少的。
而常用的细胞增殖和生长检测方法有许多种，其中较为常见的是LDH法和MTT法。
这两种方法都是通过细胞的代谢和细胞的状态来反映细胞的增殖和生长情况的。
二、LDH法LDH法全称为乳酸脱氢酶检测法，是利用乳酸脱氢酶的氧化还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法基于细胞膜通透性的变化，当细胞膜发生损伤或破裂时，细胞内的乳酸脱氢酶会释放到培养基中。
而乳酸脱氢酶检测法就是通过检测培养基中乳酸脱氢酶含量的变化来判断细胞是否发生了损伤或破裂，以此来推测细胞的增殖和生长情况。
三、MTT法MTT法全称为四氮唑盐（3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基-二氮杂烷）法，是利用MTT盐的还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法的原理是将MTT盐加入细胞培养液中，MTT盐通过细胞中的酶反应还原成具有紫色的甲醛样代谢产物。
而这个代谢产物则会在细胞中不断积累，从而使细胞颜色越来越深。
最后，通过检测细胞的颜色深浅来推测细胞的增殖和生长情况。
四、LDH法和MTT法的比较1.优点与缺点LDH法的优点是可以反映细胞的状态和增殖情况，适用于不同种类的细胞；缺点是需要时间较长，对细胞损伤有一定影响。
而MTT法的优点是简单易行，可作为高通量筛选的快速方法；缺点则是对细胞形态和生长状态的要求较高，对于一些较小或幼稚的细胞不适用。
2.应用范围LDH法和MTT法都常用于评估各种细胞因素（如生长因子、激素、细胞毒性物质等）对细胞生长的影响；同时也受到在细胞增殖实验和细胞毒性实验中的广泛应用。
此外，LDH法和MTT法也可应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
3.实验难度和操作技巧LDH法和MTT法均需要一定的实验基础和耐心，但LDH法一般操作难度稍高些。
五、总结细胞增殖和生长检测方法是细胞实验研究中非常重要的组成部分。
LDH法和MTT法是两种常用的检测方法，不仅能反映细胞的增殖和生长情况，也广泛应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法
细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：王政, 田菲菲, 刘丁, 吕凤林【关键词】 T淋巴细胞生物杀伤细胞毒性细胞介导的免疫效应在机体抗感染免疫、抗肿瘤免疫、移植排斥效应和自身免疫性疾病发生机制中发挥重要作用, 主要效应细胞之一为细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphoclyte, CTL)。
近年来, 基于CTL特异性表位的多肽疫苗已经成为研究热点之一, CTL的活化及对靶细胞的杀伤效应成为衡量疫苗质量的重要因素之一。
目前已经报道许多新的评价CTL活性及其杀伤效应的方法, 现就此做一综述。
1 单个细胞水平测定CTL活性目前一般常用的有产生细胞因子的细胞记数法和有限稀释分析法(LDA)。
活化的T淋巴细胞可分泌一些功能性的细胞因子, 如IL2、IFNγ、TNFα等, 由于分泌不同种类细胞因子可以区分不同免疫功能的记忆细胞或效应细胞, 这样可以在体外评价外周血单个核细胞（PBMC）中抗原特异性T细胞的数量和功能状态。
目前常用的检测细胞因子的方法如ELISA、ELISPOT、PCR/RT PCR及细胞内因子检测等。
1.1 有限稀释分析法(Limiting dilution analysis, LDA) 该方法是迄今应用较广泛的定量分析系统［1］。
LDA 法使我们能够详细了解免疫反应动力学和记忆CTL(Memory CTL, mCTL) 细胞亚群的细胞周期［2］, 也是对pCTL和mCTL亚群细胞表面的激活标志物进行研究的良好方法。
但此方法也存在缺点, 主要是: (1)在LDA条件下, 深入刺激会使效应CTL(eCTL)细胞加快凋亡［3］, 使CTL活性测定值变动较大, 对eCTL细胞数量不能测定或测定值偏低。
(2)实验较繁琐, 因为在实验之前, 首先需要将淋巴细胞表面表达的CD分子, 如CD44或CD62L进行染色, 再用FACS法分类筛选, 然后在LDA条件下培养6 d; 这样就会造成T细胞数量损失, 特别是在活化状态进行筛选和分离时。
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细胞介导细胞毒作用检测法：LDH释放法
佚名
LDH释放法
1）测定方法
1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。
2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。
3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。
3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例根据要求而定，通常为5：1～20：1。
自然释放孔不加效应细胞只加100μl培养液，最大释放孔中加100μl 1％ NP40。
每个实验置三个复孔。
4．置37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养4～6小时。
5．离心培养板200×g 10分钟。
每孔吸出150μl上清液，对应加入另一块96孔酶联检测板中。
向第二块板每孔依次加20μl 0.4mol/L乳酸溶液、20μl 4mmol/L 2-p-碘苯酯-3-p-氯化硝基苯四唑，20μl反应液（含0.03％ BSA，2.7U/ml硫辛酰胺脱氢酶，
4.5mmol/L氢化型辅酶I（NAD＋），1.2％蔗糖的PBS），室温中放置20分钟。
在酶联检测仪上测定各孔的光密度（OD值），检测波长492nm，参考波长650nm。
2）特异性杀伤活性的计算
杀伤活性（％）＝[（OD实验组－OD总自然释放）/（OD最大释放组－OD总自然释放）]×100％。