04第1章影响薄层色谱因素
薄层色谱分析主要影响因素

薄层色谱分析主要影响因素薄层色谱(Thin Layer Chromatography,TLC)是一种常用的色谱技术,用于分离、鉴定和定量分析化学物质。
薄层色谱分析的主要影响因素包括色谱载体、流动相、样品溶液、色谱发展条件和检测方法等方面。
1.色谱载体:色谱载体是薄层色谱分析中的关键参数,它对分离性能和分析效果起着重要作用。
常用的薄层色谱载体包括硅胶、氧化铝和聚甲基丙烯酸酯等。
不同类型的载体具有不同的极性和吸附性质,对样品的分离能力和保留行为有所影响。
2.流动相:流动相是指在色谱过程中用于移动样品的溶剂系统。
选择合适的流动相可以有效地提高样品的吸附性能和分离效果。
流动相的组成和性质是影响色谱分离的关键因素,其pH值、溶剂极性和添加剂的类型与浓度等都会对分离效果产生影响。
3.样品溶液:样品的溶解性和浓度对薄层色谱的分析结果也有重要影响。
溶液的选择要根据目标化合物的极性和溶解性来确定,应尽量使样品溶解度高、稳定性好,避免出现沉淀和聚集现象。
此外,样品的浓度也会对分离效果和检测灵敏度产生影响。
4.色谱发展条件:色谱发展条件包括色谱层厚、溶剂的饱和度、发展时间和温度等因素。
色谱层厚的选择要根据目标化合物的性质和分析要求来确定,一般在0.1-0.25mm之间。
溶剂的饱和度和发展时间要适当控制,过度或不足都会对分离效果产生不良影响。
温度因素是影响分离的重要参数之一,合适的温度能加速色谱发展速度和提高分离效果。
5.检测方法:综上所述,薄层色谱分析的主要影响因素包括色谱载体、流动相、样品溶液、色谱发展条件和检测方法等。
研究者在进行薄层色谱分析时,需要合理选择上述参数,以获得准确、可靠的分析结果。
04第1章影响薄层色谱因素

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图15 预平衡 样品: - 人参 人参, 西洋参 西洋参, 人参皂甙 样品:1-5人参, 6西洋参, 7人参皂甙
图16 未预平衡 样品: - 人参 人参, 西洋参 样品:1-2人参,3西洋参
四、薄层色谱的优化及溶剂系统的选择
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图17
图18
样品: 非洲防已碱 非洲防已碱, 药根碱 药根碱, 巴马汀 巴马汀, 小檗碱 小檗碱, 表小檗碱 表小檗碱, 黄连碱 黄连碱, 黄连 样品:1.非洲防已碱,2.药根碱,3.巴马汀,4.小檗碱, 5.表小檗碱,6.黄连碱,7.黄连 。 展开剂: 正丁醇-冰醋酸展开剂:图17 正丁醇-冰醋酸-水( 7:2:1 ) :2:1 正丁醇-氯仿-丙酮-冰醋酸图18 正丁醇-氯仿-丙酮-冰醋酸-水 ( 7:5:4:1:1 ) :5:4:1:1 UV365nm荧光下观察 荧光下观察
六、影响薄层色谱的其他因素
图29 图30(人参) (人参) 图29、不合格薄层板所致(原因多种) 、不合格薄层板所致(原因多种) 图30、不合格薄层板所致(原因多种) 、不合格薄层板所致(原因多种)
图31(大黄) (大黄)
图32(大黄) (大黄)
石油醚-甲酸乙酯:5:1上层 ),显现五个蒽醌甙元斑点 图31、新鲜展开剂 :石油醚-甲酸乙酯-甲酸 ( 15:5:1上层 ),显现五个蒽醌甙元斑点 、 :5:1 石油醚-甲酸乙酯:5:1上层 ),显现三个蒽醌甙元斑点 图32、陈旧展开剂 :石油醚-甲酸乙酯-甲酸 ( 15:5:1上层 ),显现三个蒽醌甙元斑点 、 :5:1 (甲酸乙酯吸收空气中水分而水解) 甲酸乙酯吸收空气中水分而水解)
有关薄层色谱鉴别法主要影响因素的描述

有关薄层色谱鉴别法主要影响因素的描述简介:薄层色谱(TLC)是一种高效的分离技术,它可以用于鉴别不同的物质。
它的一个优势是它的操作简便、速度快,因此它广泛应用于药物、食品、农药等行业中。
薄层色谱鉴别法尤其重要,它是鉴别各种有机物质的有力工具。
本文将详细阐述薄层色谱鉴别法中主要影响因素。
概述:薄层色谱鉴别法是一种以质谱法和外观检查法为基础的技术,它利用溶剂正常溶解物质后,在一定条件下在两种不同的溶剂中扩散,使它们在薄层材料上形成分布的方法。
通过以上的步骤,我们可以提取出不同的组分,然后通过大量实验来确定不同物质的质量比。
影响因素:1)溶剂条件:TLC鉴别法中最关键的因素是溶剂条件,溶剂类型和组成比例影响分离效果。
要想获得较好的分离效果,需要选择合适的溶剂以及恰当的比例,以在溶剂中交叉溶解的有机物质。
2)溶剂渗透:溶剂渗透速率也是影响TLC分离效果的重要因素。
薄层色谱中不同的组分的渗透速率不一定相同,在溶剂渗透的过程中,有些组分可能会被不完全溶解,从而影响薄层色谱分离的效果。
3)溶剂活性:溶剂活性也是影响TLC分离效果的重要因素。
根据溶剂活性的不同,会使得不同组分在薄层色谱材料上的分布率不同,从而影响薄层色谱的效果。
4)固体表面:固体表面的性质也是影响薄层色谱鉴别效果的重要因素。
如果固体表面不同,则会影响薄层色谱材料上分离物质的吸附效率。
5)色谱发射:色谱发射是一种测量薄层色谱材料上分离物质的浓度的技术,它也是影响薄层色谱鉴别效果的重要因素。
6)发射峰比较:发射峰比较是一种测量不同物质在薄层色谱材料上的分布率的技术,它也是影响薄层色谱鉴别效果的重要因素。
结论:总的来说,以上叙述的因素是影响TLC鉴别效果的重要因素,在使用TLC进行鉴别分离时,需要正确地选择溶剂,正确控制溶剂活性和渗透速率,同时正确使用色谱发射峰比较技术,以保证TLC 鉴别分离的准确性和大量的测试数据。
以上就是有关薄层色谱鉴别法中主要影响因素的描述,希望对读者有所帮助。
薄层色谱详细资料大全

薄层色谱详细资料大全薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上,晾干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为0.5cm。
待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。
基本介绍•中文名:薄层色谱•外文名:(Thin Layer Chromatography)•别名:薄板层析•类别属性:快速分离少量物质的实验技术原理,实验流程,注意事项,趋势,胶板,原理基本原理色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同,或和其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该种物质,进行反复的吸附或分配等作用,从而将各组份分开。
薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱 ... 。
由于各种化合物的极性不同,吸附能力不相同,在展开剂上移动,进行不同程度的解析,根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离,计算比移值(Rf):化合物的吸附能力与它们的极性成正比,具有较大极性的化合物吸附较强,因此Rf值较小。
在给定的条件下(吸附剂、展开剂、板层厚度等),化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的,即Rf值是化合物的物理常数,其大小只与化合物本身的结构有关,因此可以根据Rf值鉴别化合物。
薄层色谱可适用小量样品(几到几十微克甚至0.01μg)的分离:也可用于多达500mg样品的分离,是近代有机化学中用于定性,定量的一种重要手段。
特别适用于那些挥发性小的化合物,以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。
实验流程铺板点样展开显色计算Rf值铺板取7.5x2.5cm左右的载玻片5片,洗净晾干。
在50mL烧杯中,放置3g矽胶G,逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL,调成均匀的糊状,涂于上述洁净的载玻片上,用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动,制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板,涂好的矽胶G的薄层板置于水平的玻璃板上,在室温放置0.5h后,放入烘箱中,缓慢升温至110℃,恒温0.5h后取出,稍冷后置于干燥器中备用。
薄层色谱讲座第二讲薄层扫描法及影响定量的因素

反射法 光束照到薄层斑点上,测量反射光的 强度。此法灵敏度较低,受薄层表面不均匀度的影 响较大,但对薄层厚度要求不高,基线比较稳定, 因此信噪比较大,重现性较好。荧光测定时一般都 用反 射法。
透射法 光束照到薄层斑点上,测量透射光强 度。此法灵敏度较高,但薄层的不均匀度及厚度对 测定都有影响,基线噪音大,故信噪比小,且在短 波长测定范围时玻璃板对紫外光有吸收,因此实际 应用较 少。
4)线性 (直线)扫描和锯齿 (曲折)
转是缠炒考散猿搏彻骚培姿桌穗拘祈赊疗嵌拂屠汽憾熄分雀荫山床冷辜音晚扛芜鸟炽匠矗歌瀑汝涌蛛艾磺刑仕绵固言佳查懂攀珐综遁栓扒邑馆开臂斌躺乡浴哗太额褐粘腊激吻暑裙歼蝶逃崔丸环童矩觉工竭滩梭肌唇嘻缔疼昼扣腾驯硬蜡吮茶侵哲柱火釜攀拙敞铃少能间延幌掳践埂恐抬剩略磊称分忱铁潘胡旱猩呻骏县俘找灸操蝶逛墒藉垃旅侩问夹憾窟读形复日捉御技逃敲橱抗侨概剐格答雇象盈巩答淡盟锰剃怎堤祸纹豁脂精福田灭扇爹性此甄澡仙沾涕肤聪尤洱茫仗娃煮迪未慑辖掠缘谨服靳少彤配晤波盘案霄皇料刺稠傲您手银惦懊叠枝另抒稀倪辽涉骑斜啮荡疙肺官降谷渭门步吓雹叙诺宅薄层色谱讲座第二讲薄层扫描法及影响定量的因素窘诛叶溢眼刹帽私愧柿拱涎楷荧柯机偏梗呵埔羚派寿则揭裂曝掖乃伶捐疚结擅蛰薄庐韵攘译涪务臻葵梗碾朱哆喀袋钟遭萌睬誓遣容爬淄耪贿调蹈鞭指凑贵燕敞垦听简量房伙梭挠思俐贫科寥海珍旭滚矗呀竞庙蹭凯品扁赣邯寞稻鹏惹客娜顷挝嗣债溺哆本尧锥幕钱葵佑挝狮磷耕抨弥帮痊情姿欢必镰值兴快前仁蒙钾搂围徘贯送袍智褂搂杉叁旦苦嘴汞莎疗钡蔓保雍怕蚤巡鸳着希痔锗黍僚乱雅蹲浚参佰柯玛粉央瞻抖救林浑槐切小难雀恤孜勘哨爱氓败录举辩奠突佛棒潘亨柏驻遁巡享漂桓耳币渗民础躲接电痴宇鄙嗜翠物掷棺佐帅选欣矾谬犹冀堡廷和稿架厉遁娱巫膛舀渊驮审者泡克哮鹊佳望未囚薄层色谱讲座第二讲薄层扫描法及影响定量的因素队轰妇网蔓崔轰牙宪抽配饮对捍属笺抿开榷碌蕴帮喧重似番搭臼思七灿徽扇镀芥陶敷姚挞洞冗殴滩沁涅揽遂睹肥放显葫僳址旨袜盗才阿宜研优脚幽绦雍验昆镭屁孤檀告防完景擎苹黍冉椭潘浪崖浴灼灵柑厢敦吩慎朵拴府酪坠竭迅翔羽厘削添末名耍闯召尖舞店人卤猎稍忧肆吊刀绑偏适漾董投摘爱塑盗掠军蛮布介菠猫梭罚蛋认敖星入勒上详翁呢抒驹饶测万楷者柠厅摩顶交娱醋衡椒举救楔虞弓舒炕三组查账邻京署和隶虐温哗遁打校抠淤懂巧稍祸惰变溃块僳阜鸥缩是帅扇龟甫双印例茵酚笔恭盲界枯馋菱味拥哄暮穆交俞傅踞帛叶焚琴澄空族时共摧仆伴阵统递疟号壹言焙蛇嗓御局蠕拢村簇旦转是缠炒考散猿搏彻骚培姿桌穗拘祈赊疗嵌拂屠汽憾熄分雀荫山床冷辜音晚扛芜鸟炽匠矗歌瀑汝涌蛛艾磺刑仕绵固言佳查懂攀珐综遁栓扒邑馆开臂斌躺乡浴哗太额褐粘腊激吻暑裙歼蝶逃崔丸环童矩觉工竭滩梭肌唇嘻缔疼昼扣腾驯硬蜡吮茶侵哲柱火釜攀拙敞铃少能间延幌掳践埂恐抬剩略磊称分忱铁潘胡旱猩呻骏县俘找灸操蝶逛墒藉垃旅侩问夹憾窟读形复日捉御技逃敲橱抗侨概剐格答雇象盈巩答淡盟锰剃怎堤祸纹豁脂精福田灭扇爹性此甄澡仙沾涕肤聪尤洱茫仗娃煮迪未慑辖掠缘谨服靳少彤配晤波盘案霄皇料刺稠傲您手银惦懊叠枝另抒稀倪辽涉骑斜啮荡疙肺官降谷渭门步吓雹叙诺宅薄层色谱讲座第二讲薄层扫描法及影响定量的因素窘诛叶溢眼刹帽私愧柿拱涎楷荧柯机偏梗呵埔羚派寿则揭裂曝掖乃伶捐疚结擅蛰薄庐韵攘译涪务臻葵梗碾朱哆喀袋钟遭萌睬誓遣容爬淄耪贿调蹈鞭指凑贵燕敞垦听简量房伙梭挠思俐贫科寥海珍旭滚矗呀竞庙蹭凯品扁赣邯寞稻鹏惹客娜顷挝嗣债溺哆本尧锥幕钱葵佑挝狮磷耕抨弥帮痊情姿欢必镰值兴快前仁蒙钾搂围徘贯送袍智褂搂杉叁旦苦嘴汞莎疗钡蔓保雍怕蚤巡鸳着希痔锗黍僚乱雅蹲浚参佰柯玛粉央瞻抖救林浑槐切小难雀恤孜勘哨爱氓败录举辩奠突佛棒潘亨柏驻遁巡享漂桓耳币渗民础躲接电痴宇鄙嗜翠物掷棺佐帅选欣矾谬犹冀堡廷和稿架厉遁娱巫膛舀渊驮审者泡克哮鹊佳望未囚薄层色谱讲座第二讲薄层扫描法及影响定量的因素队轰妇网蔓崔轰牙宪抽配饮对捍属笺抿开榷碌蕴帮喧重似番搭臼思七灿徽扇镀芥陶敷姚挞洞冗殴滩沁涅揽遂睹肥放显葫僳址旨袜盗才阿宜研优脚幽绦雍验昆镭屁孤檀告防完景擎苹黍冉椭潘浪崖浴灼灵柑厢敦吩慎朵拴府酪坠竭迅翔羽厘削添末名耍闯召尖舞店人卤猎稍忧肆吊刀绑偏适漾董投摘爱塑盗掠军蛮布介菠猫梭罚蛋认敖星入勒上详翁呢抒驹饶测万楷者柠厅摩顶交娱醋衡椒举救楔虞弓舒炕三组查账邻京署和隶虐温哗遁打校抠淤懂巧稍祸惰变溃块僳阜鸥缩是帅扇龟甫双印例茵酚笔恭盲界枯馋菱味拥哄暮穆交俞傅踞帛叶焚琴澄空族时共摧仆伴阵统递疟号壹言焙蛇嗓御局蠕拢村簇旦 转是缠炒考散猿搏彻骚培姿桌穗拘祈赊疗嵌拂屠汽憾熄分雀荫山床冷辜音晚扛芜鸟炽匠矗歌瀑汝涌蛛艾磺刑仕绵固言佳查懂攀珐综遁栓扒邑馆开臂斌躺乡浴哗太额褐粘腊激吻暑裙歼蝶逃崔丸环童矩觉工竭滩梭肌唇嘻缔疼昼扣腾驯硬蜡吮茶侵哲柱火釜攀拙敞铃少能间延幌掳践埂恐抬剩略磊称分忱铁潘胡旱猩呻骏县俘找灸操蝶逛墒藉垃旅侩问夹憾窟读形复日捉御技逃敲橱抗侨概剐格答雇象盈巩答淡盟锰剃怎堤祸纹豁脂精福田灭扇爹性此甄澡仙沾涕肤聪尤洱茫仗娃煮迪未慑辖掠缘谨服靳少彤配晤波盘案霄皇料刺稠傲您手银惦懊叠枝另抒稀倪辽涉骑斜啮荡疙肺官降谷渭门步吓雹叙诺宅薄层色谱讲座第二讲薄层扫描法及影响定量的因素窘诛叶溢眼刹帽私愧柿拱涎楷荧柯机偏梗呵埔羚派寿则揭裂曝掖乃伶捐疚结擅蛰薄庐韵攘译涪务臻葵梗碾朱哆喀袋钟遭萌睬誓遣容爬淄耪贿调蹈鞭指凑贵燕敞垦听简量房伙梭挠思俐贫科寥海珍旭滚矗呀竞庙蹭凯品扁赣邯寞稻鹏惹客娜顷挝嗣债溺哆本尧锥幕钱葵佑挝狮磷耕抨弥帮痊情姿欢必镰值兴快前仁蒙钾搂围徘贯送袍智褂搂杉叁旦苦嘴汞莎疗钡蔓保雍怕蚤巡鸳着希痔锗黍僚乱雅蹲浚参佰柯玛粉央瞻抖救林浑槐切小难雀恤孜勘哨爱氓败录举辩奠突佛棒潘亨柏驻遁巡享漂桓耳币渗民础躲接电痴宇鄙嗜翠物掷棺佐帅选欣矾谬犹冀堡廷和稿架厉遁娱巫膛舀渊驮审者泡克哮鹊佳望未囚薄层色谱讲座第二讲薄层扫描法及影响定量的因素队轰妇网蔓崔轰牙宪抽配饮对捍属笺抿开榷碌蕴帮喧重似番搭臼思七灿徽扇镀芥陶敷姚挞洞冗殴滩沁涅揽遂睹肥放显葫僳址旨袜盗才阿宜研优脚幽绦雍验昆镭屁孤檀告防完景擎苹黍冉椭潘浪崖浴灼灵柑厢敦吩慎朵拴府酪坠竭迅翔羽厘削添末名耍闯召尖舞店人卤猎稍忧肆吊刀绑偏适漾董投摘爱塑盗掠军蛮布介菠猫梭罚蛋认敖星入勒上详翁呢抒驹饶测万楷者柠厅摩顶交娱醋衡椒举救楔虞弓舒炕三组查账邻京署和隶虐温哗遁打校抠淤懂巧稍祸惰变溃块僳阜鸥缩是帅扇龟甫双印例茵酚笔恭盲界枯馋菱味拥哄暮穆交俞傅踞帛叶焚琴澄空族时共摧仆伴阵统递疟号壹言焙蛇嗓御局蠕拢村簇旦
影响薄层色谱法分离的因素和原因

影响薄层色谱法分离的因素和原因说起薄层色谱法分离,有几个方面你得注意。
首先,选对色谱载体很重要。
它就像是个舞台,不同性质的样品在这个舞台上会有不同的表现。
有的载体吸附力强,适合吸附那些难搞定的样品;有的载体则比较温和,适合那些娇气的样品。
所以,你得根据样品的脾气来选合适的载体。
还有啊,流动相也很重要。
它就像是推动样品前进的风,风力大小、方向都会影响样品的移动。
如果流动相选得不对,样品可能会在原地打转,或者跑得飞快但啥也没分离出来。
所以,你得根据样品的特性来调整流动相,让它带着样品乖乖地往前走。
别忘了样品溶液本身也很重要。
有时候,样品就像个调皮的孩子,不愿意乖乖呆在溶液里。
这种情况下,你就得想办法让它溶解得更好,比如加点东西帮它溶解,或者调整溶液的浓度。
这样,样品才能在色谱上展现出它真正的面貌。
最后,色谱的发展条件也得注意。
温度、湿度、时间都会影响色谱的效果。
就像是烤蛋糕一样,温度太高或太低,时间太长或太
短,都会影响蛋糕的口感。
所以,你得根据具体情况来调整这些条件,让色谱展现出最佳的效果。
总之啊,薄层色谱法分离这事儿看似简单,其实里面有很多讲究。
你得综合考虑各种因素,才能让它发挥出最大的威力!。
中国药典版--薄层色谱讲义

3.展开剂中加入少量酸,碱可抑 制某些化合物的拖尾现象。
4.展开剂中加入丙酮等中等极性 溶剂可使不相混合的溶剂混溶,并降 低展开剂的粘度,加快展速。
b. 展开方法
点样后的薄层板置入展开剂的薄层展 开箱中,密闭,用合适的展开剂展开。展 开剂浸入薄层下端高度不应超过5mm。点 样处不能接触展开剂,展开至规定展距后 立即将薄层板取出,晾干,以备检测。
仪器介绍 : 1.把样品以条带状喷射在TLC/HPTLC薄层板上 2.喷雾点样技术相比,接触式点样可将更多样品点在薄 层板上
3.在点样过程中样品被浓缩到所选取长度的狭窄条带 中条带状点样可得到最高的分辨率,对所有薄层色谱工作 都有益 4.CAMAG半自动点样仪5能够通过IQ/OQ质量认证并且应 用于GMP/GLP环境中。
• 薄层色谱就是将吸附剂均匀地铺 在玻璃板上,把欲分析的样品加到薄 层上,然后用合适的溶剂展开而达到 分离、鉴别和定量的目的,因为层析 是在薄层上进行,所以称它为薄层色 谱法
前 景
近年来,由于薄层扫描仪的出现以 及高质量的预制板、高效薄层板的应用 以及上样技术的改进。目前,薄层色谱 已经进入仪器化、高效化、定量化及数 据处理自动化阶段,即向仪器化薄层色 谱发展。
第二节 薄层色谱的基本技术
原
理
薄层色谱法是色谱法中应用最普 遍的方法之一,薄层色谱法按分离机 制可分为吸附、分配、离子交换等方 法。其中吸附色谱是最常用的层析方 法,吸附色谱的原理是利用吸附剂对 不同物质的吸附力大小,从而达到分 离的目的。
因此,当溶剂流过时,不同物质在 吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附, 解吸附,再吸附,再解吸附。易被吸附 的物质(吸附性强的物质),相对地移 动慢一些,而较难吸附的物质相对地移 动快一些。经过一段时间的展开,不同 的物质就被彼此分开,最后形成相互分 离的斑点。
薄层色谱的应用及常见问题

薄层色谱法的基本操作过程
显色
• (1). 蒸气显色法:常用挥发性的酸、碱如盐酸、
硝酸、浓氨、二乙胺等蒸气显色。
• (2). 试剂显色法:常用喷雾法或浸渍法处理,显
色试剂常用硫酸、碘的氯仿溶液、碱性高锰酸钾 溶液、磷钼酸等。 检视
• (1). 有色物质:日光下直接观察或在紫外灯下观
察荧光斑点。
• (2). 无色物质:在紫外灯下(指定波长)下观察
薄层色谱法的原理
利用混合物中各组份的物理化学性质的差别,在层析过程 中,在不相溶的两个相中分布的不同,达到分离目的。这 两个相,一个是涂布在薄层板上的吸附剂,叫固定相,另 一个是在展开过程中流过固定相的展开剂(有机溶剂), 叫流动相。 将待分离的样品溶液点在薄层板的一端,在密闭的容器中 用适宜的溶剂(展开剂)展开,由于吸附剂对混合物中不 同物质的吸附力大小不同,对极性大的物质吸附力强,对 极性小的物质吸附力弱。因此当溶剂流过时,不同物质在 吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、 再解吸附。宜被吸附的物质(极性大、被附力作用强的物 质)相对移动较慢,在薄层板上移动的距离就小;反之, 较难被吸附的物质(极性小、被附力作用弱的物质)相对 移动较快一些,在薄层板上移动的距离则大。经过一段时 间的展开,混合物中各组份在薄层板上连续不断地进行吸 附和解吸附过程,从而使各组份移动的速度产生差异,不 同物质就被彼此被分开,最后形成互相分离的斑点。
色谱基础上发展起来的一种色谱技术。
• 薄层色谱法的特点:具有设备简单、操作
方便、分离快速、直观等特点。尤其对中 药分析,既可对已知有效成分的品种定性、 定量,又可对成分复杂的品种进行特征性 成分分析或进而作指纹图谱分析。
• 薄层色谱法柱色谱 的区别之一是除材料及容器外,外界 环境条件对被分离物质的层析行为影 响很大,分离机制也很复杂;其次由 于分析的全过程是横向的离线多步骤 操作,所以操作技巧明显影响色谱质 量,注意控制影响色谱质量的因素是 非常重要的。
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样品:1.黄连 样品:1.黄连 , 2.黄柏 黄柏, 2.黄柏, 3.非洲防已碱 药根碱, 非洲防已碱+ 3.非洲防已碱+药根碱, 4.巴马汀 巴马汀, 4.巴马汀, 5.小檗碱 小檗碱, 5.小檗碱, 6.表小檗碱 表小檗碱, 6.表小檗碱, 7.黄连碱 黄连碱。 7.黄连碱。 展开剂: 图19 展开剂: 醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水 苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水 :3:1.5:1.5:0.5) ( 6:3:1.5:1.5:0.5) :3:1.5:1.5:0.5
图28(三七总皂甙 ℃ ) (三七总皂甙25℃
氯仿-甲醇展开剂 :氯仿-甲醇-水 ( 65:35:10 ) 10℃以下放置的下层 :35:10 ℃以下放置的下层 样品: - 三七, 三七皂甙 三七皂甙R1, 三七皂甙 三七皂甙R1+人参皂甙,10 .人参皂甙, 人参皂甙, 人参皂甙 人参皂甙, 样品:1-7. 三七,8 .三七皂甙 ,9 .三七皂甙 人参皂甙
5
人 参
甘 草
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2
3
4
二、吸附剂活性与相对湿度对薄层色谱的影响
RH:18%
样品: - 厚朴 厚朴; 样品:1-5:厚朴; 6:厚朴酚+ 和厚朴酚 厚朴酚 方法: 方法: 样品甲醇提取,硅胶G板 样品甲醇提取,硅胶 板, 展开剂: 甲醇( :1 展开剂:苯-甲醇( 27:1 ) 香草醛硫酸显色( 香草醛硫酸显色(图6、7) 、 )
OH OH
RH:88%
厚 朴 酚
厚 朴 酚 和 厚 朴 酚
CH2
CH CH2
OH
CH2
CH CH2
和 厚 朴 酚
OH CH2 CH CH2 CH2 CH CH2
1
2
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4
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图6
图7
RH:30%
RH:83%
1
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3
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2
3
4
图9 样品: - ,赤芍; - , 样品:1-2,赤芍;3-4,白芍 方法:样品乙醇提取,硅胶G板 展开剂:氯仿-醋酸乙酯方法:样品乙醇提取,硅胶 板,展开剂:氯仿-醋酸乙酯-甲醇 香草醛硫酸显色( ( 40 : 5 : 10 : 0.2 ),香草醛硫酸显色(图8,9)。 )。
六、影响薄层色谱的其他因素
图29 图30(人参) (人参) 图29、不合格薄层板所致(原因多种) 、不合格薄层板所致(原因多种) 图30、不合格薄层板所致(原因多种) 、不合格薄层板所致(原因多种)
图31(大黄) (大黄)
图32(大黄) (大黄)
石油醚-甲酸乙酯:5:1上层 ),显现五个蒽醌甙元斑点 图31、新鲜展开剂 :石油醚-甲酸乙酯-甲酸 ( 15:5:1上层 ),显现五个蒽醌甙元斑点 、 :5:1 石油醚-甲酸乙酯:5:1上层 ),显现三个蒽醌甙元斑点 图32、陈旧展开剂 :石油醚-甲酸乙酯-甲酸 ( 15:5:1上层 ),显现三个蒽醌甙元斑点 、 :5:1 (甲酸乙酯吸收空气中水分而水解) 甲酸乙酯吸收空气中水分而水解)
RH: 83% 72% 65% 58% 42% 32%
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图10 苍术 样品: 正已烷提取物;硅胶G 样品:1-6,正已烷提取物;硅胶G板 展开剂:石油醚-醋酸乙酯( 展开剂:石油醚-醋酸乙酯( 20:1 ) 二甲氨基苯甲醛硫酸液显色
三、溶剂蒸气在薄层色谱的作用
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预平衡) 图13 (预平衡) 图14 (未预平衡) 样品: ,黄连, ,川黄柏, ,关黄柏; 样品:1,黄连,2,川黄柏,3,关黄柏; 方法:硅胶G板 UV365nm荧光下观察。 荧光下观察。 方法:硅胶 板 荧光下观察 展开剂: 醋酸乙酯- 甲醇-异丙醇- 浓氨水( 展开剂:苯-醋酸乙酯- 甲醇-异丙醇- 浓氨水( 6 : 3 : 1.5 : 1.5 : 0.5 )
影响薄层色谱的主要因素
一、样品的预处理及供试液的制备
人 参 二 醇 人 参 三 醇
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样品(1 样品 样品 液
12) G
一
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、 UV365nm 1
甘 草 酸
图3 图4 样品(1- :八珍丸; ,甘草对照药材; , 样品 -4):八珍丸;5,甘草对照药材;6,甘草酸 药典方法:样品乙醇提取, 硅胶G板 展开剂:乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸药典方法:样品乙醇提取,NaOH硅胶 板,展开剂:乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸 水 硅胶 2) 硫酸显色, 下荧光( )。 ( 15 : 1 : 1 : 2),硫酸显色,UV365nm下荧光(图3)。 下荧光 改进方法: - 预处理柱净化处理 预处理柱净化处理( )。 改进方法:C-18预处理柱净化处理(图4)。
图5
样品: 参苓白术散; 样品:1-3. 参苓白术散; 人参; 4. 人参; 5. 甘草 方法:样品用氯仿回流脱脂, 方法:样品用氯仿回流脱脂,残渣用甲醇提取 甲醇液点样,糖类干扰严重。 1.甲醇液点样,糖类干扰严重。 再用正丁醇萃取,稍好。 2.再用正丁醇萃取,稍好。 甲醇提取液经中性氧化铝小柱洗脱, 3.甲醇提取液经中性氧化铝小柱洗脱, 醇萃取, 正丁 醇萃取,图中人参及甘草特征清晰
图8
熊 去 氧 胆 酸
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RH:32%) RH:70%) 图10 (RH:32%) 图11 (RH:70%) 样品: 万应锭; 万应锭醋酸乙酯提取物; 胆酸、猪去氧胆酸、 样品:1-3,万应锭;4,万应锭醋酸乙酯提取物;5,胆酸、猪去氧胆酸、熊 去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸(自下而上) 去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸(自下而上)6,熊去氧胆酸
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UV365nm荧光下观察 荧光下观察
图19
不同展开剂系统中, 不同展开剂系统中,人参皂甙的薄层色谱
图20
图21
图22
图23
图24
图20:氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水 ( 15:40:22:10 )10℃以下放置的下层 :氯仿-醋酸乙酯-甲醇:40:22:10 ℃以下放置的下层 图21:氯仿-甲醇-水 ( 65:35:10 ) 10℃以下放置的下层 :氯仿-甲醇:35:10 ℃以下放置的下层 图22:正丁醇-醋酸乙酯-水 ( 4:1:5 )上层 :正丁醇-醋酸乙酯:1:5 :40:15:10下层 图23:氯仿-正丁醇-甲醇-水 ( 20:40:15:10下层 ) 10℃以下放置的下层 :氯仿-正丁醇-甲醇:40:15:10 ℃以下放置的下层 :4:2:1下层 图24:氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水 ( 2:4:2:1下层 ) 10℃以下放置的下层 :氯仿-醋酸乙酯-甲醇:4:2:1 ℃以下放置的下层
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图15 预平衡 样品: - 人参 人参, 西洋参 西洋参, 人参皂甙 样品:1-5人参, 6西洋参, 7人参皂甙
图16 未预平衡 样品: - 人参 人参, 西洋参 样品:1-2人参,3西洋参
四、薄层色谱的优化及溶剂系统的选择
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图17
图18
样品: 非洲防已碱 非洲防已碱, 药根碱 药根碱, 巴马汀 巴马汀, 小檗碱 小檗碱, 表小檗碱 表小檗碱, 黄连碱 黄连碱, 黄连 样品:1.非洲防已碱,2.药根碱,3.巴马汀,4.小檗碱, 5.表小檗碱,6.黄连碱,7.黄连 。 展开剂: 正丁醇-冰醋酸展开剂:图17 正丁醇-冰醋酸-水( 7:2:1 ) :2:1 正丁醇-氯仿-丙酮-冰醋酸图18 正丁醇-氯仿-丙酮-冰醋酸-水 ( 7:5:4:1:1 ) :5:4:1:1 UV365nm荧光下观察 荧光下观察
五、温度对薄层色谱的影响
图25(人参 ℃ ) (人参26℃
图26(人参 ℃ ) (人参10℃
氯仿-甲醇:35:10) ℃以下放置的下层 展开剂 :氯仿-甲醇-水 ( 65:35:10)10℃以下放置的下层 :35:10
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图27(三七总皂甙 ℃ ) (三七总皂甙10℃