样品制备

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样品的采集和制备

样品的采集和制备

测敏捷度和精确性
§1 无机成份分析旳样品前处理
❖ 分析样品中无机成份旳目旳一般有两个:一是 营养评价,二是卫生检验。
❖ 在样品前处理时,一般需要作两方面旳工作: ❖ 一方面是除去大量有机物,可用灰化、消化旳
措施, ❖ 另一方面是除去对分析有干扰旳其他无机元素。
可用螯合萃取、分离等措施。
❖对无机成份分析旳样品前处理及分析一般接下列 环节进行:
(7)湿润或溶解残渣时,需待坩埚冷却至室温 方可进行,不能将溶剂直接滴加在残渣上。
(8)从高温炉中取出坩埚时,防止高温灼伤。 (9)坩埚从炉内取出前,先放置于炉口冷却,并
在耐火板上冷却至室温。 切忌直接置于木制台面、有机合成台面上以免
烫坏台面,也不宜直接置于导热系数较高旳台面 上,以免陡然遇冷引起坩埚破裂。
❖ 微波消解也称为“微波辅助化学消解” 使用程序化旳微波湿法消化器,系统能够程序升温, 先脱水,然后湿法灰化,同步可控制真空度和温度, 与马福炉相比缩短了灰化时间,如面粉旳微波湿法 灰化只需10~20min。对于植物样品(除铜旳测定 外),用微波系统灰化20min就足够了,而要得到 类似旳成果,用马福炉则需要40min~4h。
存在旳形式、含量以及选用合适旳分析措施,有 时可采用较简朴旳前处理方式。对挥发性旳物质 如磷化氢,采用顶空气相色谱法,并选用合适旳 检测器进行测定,使样品前处理大为简化。
§2 有机成份分析旳样品前处理
有机成份分析旳样品前处理措施诸多,它一 般涉及提取、浓缩(或稀释)、净化(排除干扰)、 转态等多种环节。
第四节 样品旳保存
❖ 样品采样后,应用合适旳容器储存。 ❖ 在样品运送及保存中,要预防挥发性成份损失
及霉变、变质、成份分解。 ❖ 一般样品检验结束后应保存样品一种月,以备

样品制备

样品制备

第三章样品制备样品制备(sample preparation)是农药残留分析方法的重要部分,它一般包括从样品中提取残留农药、浓缩提取液和去除提取液中干扰性杂质的分离净化等步骤,是将检测样品处理成适合测定的检测溶液的过程。

其目的是使样品经处理后更适合农药残留分析仪器测定的要求,以提高分析的速度、效率、准确度、灵敏度和精密度。

农药残留分析的样品种类多,其化学组成复杂,要使分析仪器能检测到痕量的残留农药,必须对样品进行细致的提取、浓缩和净化处理。

样品制备在农药残留分析中不仅最费时、费力、经济花费大,其效果好坏直接影响到方法的检测限和分析结果的准确性,而且还影响分析仪器的工作寿命。

在提取过程中要求尽量完全地将痕量的残留农药从样品中提取出来,同时又尽量少地提取出干扰性杂质;净化则要求在充分降低干扰分析的杂质的同时,最大限度地减少农药的损失。

很多情况下,当检测样品中农药残留量很低难以检出时,常常通过增大样品量和浓缩检测溶液体积来满足仪器最低检测限的要求。

3.1 样品制备的原理样品制备的原理主要是利用残留农药与样品基质的物理化学特性差异,使其从对检测系统有干扰作用的样品基质中提取分离出来。

化合物的极性和挥发性是指导样品制备最有用的理化特性。

极性主要与化合物的溶解性及两相分配有关,如在进行液液提取(liquid-liquid extraction)、固液提取(solid-liquid extraction)、液固提取(liquid-solid extraction)等操作时就是利用农药的极性这一理化特性。

而挥发性则主要与化合物的气相分布有关,如在进行吹扫捕集提取(purge-and-trap extraction)、顶空提取(headspace extraction)等操作时就是利用农药的挥发特性。

3.1.1 分子的极性和水溶性农药的极性和水溶性(polarity and water solubility)是选择提取和净化条件的重要参考依据,在残留农药的溶剂提取中常采用“相似相溶”原理,就是使用与农药极性相近的溶剂为提取剂,使残留农药在溶剂中达到最大溶解度。

样品制备的考核标准

样品制备的考核标准

样品制备的考核标准样品制备是科学研究中至关重要的一环,其质量直接关系到后续的实验结果和研究结论的准确性。

为了确保样品制备的质量,需要制定一系列的考核标准来评估样品制备的过程和结果。

以下是一个样品制备考核标准的例子:1. 样品准备流程:对于每个样品制备过程,都应有一个明确的流程和步骤。

考核标准要求样品制备者按照流程进行操作,确保每一步都得到正确执行。

2. 样品纯度:样品的纯度对研究结果有着关键的影响。

考核标准要求样品制备者使用高纯度的试剂和材料,确保样品的纯度达到一定的要求。

3. 样品标准曲线:对于某些分析实验,需要建立样品的标准曲线来定量分析样品中目标成分的含量。

考核标准要求样品制备者按照标准曲线的要求进行制备,确保样品的浓度落在标准曲线的线性范围内。

4. 样品稳定性:在某些实验中,样品的稳定性对结果的准确性至关重要。

考核标准要求样品制备者在制备过程中注意样品的保存和处理方式,确保样品的稳定性。

5. 样品处理注意事项:在样品制备过程中,可能需要进行一些特殊的处理步骤,如样品溶解、过滤、稀释等。

考核标准要求样品制备者按照相关的操作规范进行处理,确保样品在处理过程中不受污染或损失。

6. 实验记录:样品制备过程的记录是对样品制备质量的评估依据之一。

考核标准要求样品制备者详细记录每个步骤的操作和结果,以便后续进行验证和审查。

7. 质量控制:样品制备过程中的质量控制是确保制备结果可重复性和准确性的关键。

考核标准要求样品制备者按照规定的质量控制要求进行操作,并记录相应的控制结果。

8. 风险评估:样品制备过程中可能存在一些潜在的风险和危险。

考核标准要求样品制备者在进行操作前进行风险评估,并采取相应的安全措施来降低风险。

9. 运行效率:样品制备过程的效率直接影响到研究工作的进展。

考核标准要求样品制备者在合理的时间内完成制备任务,并且尽量节约试剂和材料的使用。

通过以上的考核标准,可以对样品制备的质量进行评估和监控,确保样品制备的准确性、可重复性和高效性。

名词解释样品的制备

名词解释样品的制备

名词解释样品的制备一、引言在科学研究和实验中,为了更好地了解、分析和解释各种现象和理论,我们常常需要制备样品。

样品的制备是科学研究中至关重要的一步,它涉及到选取合适的材料、采取适当的方法和手段,以获得符合研究需要的样品。

本文将探讨名词解释样品的制备的相关知识和技巧。

二、样品的选取样品的选取是样品制备的首要环节。

在进行科学研究时,我们需要根据研究目的和问题的需求,选择合适的样品。

样品的选取应考虑以下几个方面:1.与研究目的相关性:样品应与研究目的相关,能够代表研究对象的特征。

例如,研究金属材料的耐蚀性,我们应选择与金属材料相似的样品。

2.代表性:样品应具有代表性,能够良好地反映整体的性质。

为了确保选取的样品具有代表性,我们可以通过随机抽样或者系统抽样的方式进行。

3.适量:样品的选取量应当适中,既能够满足研究需求,又能够减少资源消耗。

这需要根据具体实验需求和资源条件进行合理评估。

三、样品制备方法样品的制备方法根据研究对象和研究目的的不同而有所差异。

下面将介绍几种常用的样品制备方法:1.分离提取法:对于复杂的样品,我们可以通过分离提取来获得目标物质。

例如,提取土壤中的有机物,可以通过使用合适的溶剂和提取剂进行分离提取。

这种方法需要根据目标物质的特性和样品的复杂程度进行合理选择。

2.切割/加工法:对于固体样品,我们通常采用切割或加工的方法来制备适合实验要求的样品。

例如,研究金属材料的力学性能时,我们可以使用切割机或加工设备将金属样品制备成所需的形状和尺寸。

3.合成法:有时,我们需要制备一些特殊的样品,无法从自然界中直接获取。

这时候,我们可以采用合成法来制备样品。

例如,研究新型材料的特性时,我们可以使用化学合成的方法来制备所需的样品。

四、样品制备的注意事项样品的制备虽然看似简单,但在实际操作中却存在着一些需要注意的事项。

1.实验条件控制:样品的制备需要保持一系列严格的实验条件,如温度、湿度、压力等。

这些条件的控制将直接影响样品的质量和性能,因此在制备过程中要严格按照实验要求进行。

样品制备的要求

样品制备的要求

样品制备的要求
以下是 8 条关于样品制备的要求:
1. 一定要精确呀!就像厨师做菜要精确称量调料一样,样品制备的量也要分毫不差,不然结果能准确吗?比如在做化学实验时,那一点点药品的量都不能马虎!
2. 清洁可太重要啦!你想想,要是准备样品的地方脏兮兮的,那不是污染了样品吗?就如同给宝贝穿衣服,衣服得干干净净的呀!像在生物实验里,必须保证环境一尘不染。

3. 操作得细心呀,这可不是能随便应付的!好比搭积木,每一块都要认真放好,不然就塌了。

制备样品时稍有疏忽可能就前功尽弃啦,可不能大意。

4. 时间要把握好呀!难道不是吗?这就好像跑步比赛,在规定时间内要到达终点。

样品制备过程中的时间节点都要严格遵守,不然效果会大打折扣。

5. 工具要用对呀!你总不能用切肉的刀切水果吧?对于样品制备,合适的工具能让事情事半功倍呢。

就跟画画选对画笔一样关键。

6. 顺序不能乱哦!这不就跟排队一样,乱来可不行呀。

样品制备按照正确的顺序来,才能顺利进行下去,不然肯定会出乱子。

7. 过程中要多观察呢!就像侦探查找线索一样仔细,随时注意样品的变化。

在制备过程中,一个小细节都可能影响到最终结果。

8. 保持专注呀,千万不能分心!这就如同开车,分心容易出事故。

制备样品时全身心投入,才能做出高质量的样品。

我觉得样品制备真的需要严格按照这些要求来做,这样才能保证结果的可靠性和准确性!。

样品的制备

样品的制备
手工研磨 机械研磨
研磨
助磨剂的作用
提高研磨效率。如生泥生料可用硬脂酸或三乙醇胺混 合研磨,在2.5min内振动研磨即可达到要求 料钵便于清洗 增加粘性
粘结剂
—选择原则
• 良好的自成形特性 • 不含污染元素和干扰元素
• 质量吸收系数必须低(除非需要人为增加基体的 质量吸收系数)。
注意事项
4. 样品和熔剂的称量精度要求:0.1mg
5. 试样与标样最好采用相同的稀释比 6. 样品+熔剂~5 g。用量太少时,不易制出圆 形片,短波长元素的分析可能受厚度影响。 7. 须控制熔融温度和熔融时间,使所有试样和标 样均保持一致。
玻璃熔片法 注意事项
8. 不适用于易挥发元素的分析 9. 金属、有机碳、硫化物对Pt-Au坩锅有损伤。金 属含量<0.1%、S含量<0.5%、C含量<0.1%时,可 直接熔融。含量比较低时,可使用氧化剂。 10.由于熔剂的稀释作用,使微量元素的灵敏度下降。 必要时,可考虑使用低稀释率(1:2)
玻璃熔融法
• 特点
• 熔融条件 • 熔剂及添加剂
• 坩埚与浇铸
• 熔样机 • 注意事项
熔融特点
优点 可用纯氧化物或用标样加添加法制得标样, 元素的含量范围可以很大,用理论α 系数校正元素间吸收增强 效应也很方便 标样还可长期保存 缺点 消耗试剂 因稀释降低了强度,背景强度增加,对测痕量元素是不利的。 Sb,As等元素易挥发,影响测定准确度
熔融
• 熔剂的类型
– Na 和 Li的硼酸盐 (Na 熔剂有吸湿性) • Li/B ratio
Si, Al, - LiBO2 Ca, Mg - Li2B4O7/LiBO2 Fe, Cr, Mn Li2B4O7

化学分析样品制备

化学分析样品制备化学分析是一种常见的实验方法,用于确定物质的成分和性质。

在进行化学分析前,我们需要制备合适的样品,以确保分析结果准确可靠。

本文将介绍化学分析样品制备的一些常用方法。

一、固体样品制备1. 研磨法:将固体样品研磨成细粉末,以增加样品与试剂的接触面积,加快反应速率。

可使用研钵、研钉等工具进行研磨,注意避免样品受潮。

2. 熔融法:对于难熔的固体样品,可采用熔融法。

将样品加热至熔点,使其变为液体状态,然后冷却后得到固体样品。

这种方法适用于高熔点的样品。

3. 气相法:某些固体样品在常温下难以分析,可通过气相法将其转化为气体样品。

如将固体样品加热至升华点,将其直接转化为气体状态。

二、液体样品制备1. 溶液制备:将固体样品加入溶剂中,搅拌或加热溶解,得到溶液样品。

溶解时应控制溶剂的用量和浓度,避免过浓或过稀的溶液对分析结果产生影响。

2. 蒸发法:对于含溶质浓度较低的液体样品,可采用蒸发法进行浓缩。

将样品加热,使溶剂蒸发,留下溶质浓缩的样品。

注意控制温度,避免样品的损失或分解。

三、气体样品制备1. 气体采样:直接收集空气中的气体样品。

可使用玻璃净化棉、活性炭等材料吸附空气中的气体,然后进行分析。

2. 气相法:将液体或固体样品加热至升华点,使其直接转化为气体状态。

或将溶液样品加入适当的容器中,通过加热或通入惰性气体使其挥发,得到气体样品。

四、有机样品制备1. 溶剂提取法:将固体样品与适当的溶剂混合,振荡或加热搅拌,使样品中的有机成分溶解于溶剂中,然后通过滤液或离心分离。

2. 蒸馏法:对于液体样品中含有不同挥发性的有机化合物,可采用蒸馏法进行分离。

通过加热使样品挥发,并在不同温度下收集不同组分。

综上所述,化学分析样品制备是确保分析结果准确可靠的关键步骤之一。

根据不同的样品性质和分析要求,选择合适的制备方法非常重要。

在制备过程中,需要注意操作规范,控制温度、溶剂用量等因素,以保证样品的质量和分析结果的可靠性。

样品制备实验报告

一、实验目的1. 掌握样品制备的基本原理和方法。

2. 学习使用实验仪器,提高实验技能。

3. 了解样品制备在实验研究中的重要性。

二、实验原理样品制备是将自然界或人工合成的物质,通过物理、化学或生物方法,使其达到实验要求的过程。

样品制备的质量直接影响实验结果的准确性。

本实验以某固体样品为研究对象,通过研磨、过筛、洗涤等步骤,制备出符合实验要求的样品。

三、实验仪器与试剂1. 仪器:研钵、研杵、筛子、烧杯、漏斗、滤纸、电子天平、磁力搅拌器等。

2. 试剂:去离子水、无水乙醇、浓盐酸、氢氧化钠等。

四、实验步骤1. 样品研磨:将固体样品放入研钵中,用研杵进行研磨,直至样品颗粒达到实验要求的大小。

2. 样品过筛:将研磨后的样品通过筛子,去除过大或过小的颗粒,得到符合实验要求的样品。

3. 样品洗涤:将过筛后的样品放入烧杯中,加入适量的去离子水,用磁力搅拌器搅拌,使样品充分溶解。

待样品溶解后,将溶液过滤,去除杂质。

4. 样品干燥:将过滤后的溶液放入烧杯中,用磁力搅拌器搅拌,使溶液蒸发至干燥。

干燥后的样品即为制备好的样品。

五、实验结果与分析1. 样品研磨:研磨后的样品颗粒大小符合实验要求,无明显杂质。

2. 样品过筛:过筛后的样品颗粒大小均匀,无明显杂质。

3. 样品洗涤:洗涤后的样品溶液清澈,无明显杂质。

4. 样品干燥:干燥后的样品为白色粉末,无明显杂质。

实验结果表明,样品制备过程顺利进行,制备出的样品符合实验要求。

六、实验讨论1. 样品研磨过程中,研磨力度不宜过大,以免造成样品污染或损失。

2. 样品过筛过程中,筛网孔径应适中,以避免样品损失。

3. 样品洗涤过程中,去离子水应充分搅拌,确保样品充分溶解。

4. 样品干燥过程中,应控制好干燥温度,避免样品变质。

七、实验总结本实验通过研磨、过筛、洗涤等步骤,成功制备出符合实验要求的样品。

实验过程中,应注意操作规范,确保样品制备质量。

样品制备在实验研究中具有重要意义,掌握样品制备的基本原理和方法,对提高实验结果准确性具有重要意义。

样品制备方案

样品制备方案
标题:样品制备方案
一、引言
样品制备是科学研究和实验分析中的重要步骤,其质量直接影响到实验结果的准确性。

因此,制定一个合理的样品制备方案至关重要。

本方案将详细介绍样品制备的全过程,包括样品的选择、采集、预处理、储存以及使用等环节。

二、样品选择与采集
1. 样品选择:根据研究目标和实验设计,选择具有代表性的样品。

例如,在环境科学中,可能需要在不同的地点和时间点收集样品,以反映环境的变化。

2. 样品采集:采用适当的方法采集样品,确保样品的完整性。

同时,记录样品的相关信息,如采集时间、地点、条件等。

三、样品预处理
1. 清洗:对采集的样品进行清洗,去除表面的杂质和污染物。

2. 研磨:对于固体样品,可能需要通过研磨将其破碎成小颗粒,以便后续的分析。

3. 提取:使用适当的溶剂或方法提取样品中的待测物质。

四、样品储存
1. 标记:对每个样品进行清晰的标记,包括样品编号、采集时间、地点等信息。

2. 储存条件:根据样品的性质,选择合适的储存条件,如温度、湿度等。

3. 储存期限:设定样品的储存期限,并定期检查样品的状态。

五、样品使用
在实验过程中,按照预先设定的程序使用样品。

注意保持实验条件的一致性,避免引入额外的误差。

六、总结
样品制备是一个系统的过程,需要严格的操作规程和细致的工作态度。

只有这样,才能保证样品的质量,从而得到准确的实验结果。

以上就是本次样品制备方案的全部内容,希望对大家有所帮助。

样品制备流程

样品制备流程1. 简介样品制备是科学研究中非常重要的一步,正确的样品制备流程能够保证实验的可靠性和结果的准确性。

本文档将详细介绍样品制备的流程和步骤。

2. 材料准备在开始样品制备流程之前,需要准备好以下材料:- 样品所需的原材料- 试剂和溶剂- 实验装置和设备- 安全防护装备,如手套、护目镜等3. 样品制备流程步骤1:准备工作- 清洗实验装置和设备,并确保它们的干净和无污染。

- 确认实验室环境符合实验要求,如温度、湿度等。

- 检查样品原材料的质量和纯度,必要时进行前处理。

步骤2:样品的配制1. 根据实验需求,准确称取所需的原材料,并将其放置在干燥的中。

2. 按照一定比例加入试剂和溶剂,搅拌均匀直到溶解或混合。

3. 如有需要,调整pH值、温度或其他参数,确保样品的适用性。

步骤3:反应过程1. 根据实验方案,在适当的实验条件下进行反应。

2. 按照实验方案的要求,控制反应时间、温度和搅拌速度等参数。

3. 在反应过程中必要时进行取样,以监测反应进程和调整实验条件。

步骤4:样品处理1. 根据实验目的,采用适当的方法对样品进行处理,如析出、洗涤、干燥等。

2. 确保样品处理的过程准确、高效,并且不引入污染或其他干扰因素。

步骤5:样品评估和记录1. 对制备好的样品进行评估,包括外观、颜色、纯度等指标。

2. 将样品的相关信息、制备过程和评估结果记录下来,建立详细的样品制备记录。

4. 实验安全措施在样品制备过程中,务必遵守实验室的安全规定,并采取必要的安全措施,如佩戴手套、护目镜,避免接触有毒、易燃或腐蚀性物质等。

5. 结束语样品制备是实验研究中至关重要的一环,正确的样品制备流程对于实验结果的准确性和可靠性起着关键性的作用。

通过严格遵循本文档中所述的样品制备流程和注意事项,可以提高实验的成功率和可重复性,并为后续实验或研究奠定良好的基础。

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扫描电镜样品制备技术一.样品的初步处理(一) 取材取材的基本要求和透射电镜样品制备相同,可参考第十四章超薄切片技术中所提的要求。

但是,对扫描电镜来说,样品可以稍大些,面积可达8mm×8mm,厚度可达5mm。

对于易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,以充分暴露待观察的组织表面。

(二) 样品的清洗用扫描电镜观察的部位常常是样品的表面,即组织的游离面。

由于样品取自活体组织,其表面常有血液、组织液或粘液附着,这会遮盖样品的表面结构,影响观察。

因此,在样品固定之前,要将这些附着物清洗干净。

清洗的方法有以下几种:1.用等渗的生理盐水或缓冲液清洗;2.用5%的苏打水清洗;3.用超声震荡或酶消化的方法进行处理。

例如清洗肠粘膜表面的粘液,可用下面的方法:清洗液配方:透明质酸酶300 µg α-糜蛋白酶,10 ml生理盐水,100 ml清洗液的pH为5.5~6。

清洗的方法是将样品浸泡在配好的清洗液中,边浸泡边震荡30分钟,最后用双蒸水洗3次。

无论用哪种清洗方法,注意在清洗时不要损伤样品。

(三) 固定固定所用的试剂和透射电镜样品制备相同,常用戊二醛及锇酸双固定。

由于样品体积较大,固定时间应适当延长。

也可用快速冷冻固定。

(四) 脱水样品经漂洗后用逐级增高浓度的酒精或丙酮脱水,然后进入中间液,一般用醋酸异戊酯作中间液。

二.样品的干燥扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。

无论是水或脱水溶液,在高真空中都会产生剧烈地汽化,不仅影响真空度、污染样品,还会破坏样品的微细结构。

因此,样品在用电镜观察之前必须进行干燥。

干燥的方法有以下几种:(一) 空气干燥法空气干燥法又称自然干燥法,就是将经过脱水的样品,让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。

这种方法的最大优点是简便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中,组织会由于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。

因此,该方法一般只适用于表面较为坚硬的样品。

(二) 临界点干燥法临界点干燥法是利用物质在临界状态时,其表面张力等于零的特性,使样品的液体完全汽化,并以气体方式排掉,来达到完全干燥的目的。

这样就可以避免表面张力的影响,较好地保存样品的微细结构。

此法操作较为方便,所用的时间也不算长,一般约2~3小时即可完成,所以是最为常用的干燥方法。

但用此法,需要特殊仪器设备。

临界点干燥是在临界点干燥仪中进行的,操作步骤如下:1.固定、脱水:按常规方法进行。

如样品是用乙醇脱水的,在脱水至100%后,要用纯丙酮置换15~20分钟。

2.转入中间液:由纯丙酮转入中间液醋酸异戊酯中,时间约15~30分钟。

3.移至样品室:将样品从醋酸异戊酯中取出,放入样品盒,然后移至临界点干燥仪的样品室内,盖上盖并拧紧以防漏气。

4.用液体二氧化碳置换醋酸异戊酯:在达到临界状态(31℃ , 72.8大气压)后,将温度再升高10℃,使液体二氧化碳气化,然后打开放气阀门,逐渐排出气体,样品即完全干燥。

(三) 冷冻干燥法冷冻干燥法是将经过冷冻的样品置于高真空中,通过升华除去样品中的水分或脱水剂的过程。

冷冻干燥的基础是冰从样品中升华,即水分从固态直接转化为气态,不经过中间的液态,不存在气相和液相之间的表面张力对样品的作用,从而减轻在干燥过程中对样品的损伤。

冷冻干燥法有两种,即含水样品直接冷冻干燥和样品脱水后冷冻干燥。

1.含水样品直接冷冻干燥法1.1 取材固定:按常规方法进行。

1.2 置于冷冻保护剂中:将样品置于冷冻保护剂中浸泡数小时。

常用的冷冻保护剂为10%~20%二甲基亚砜水溶液,或15%~40%甘油水溶液。

1.3 骤冷:将经过保护剂处理的样品迅速投入用液氮预冷至(150(C的氟利昂冷冻剂中,使样品中的水分很快冻结。

1.4 干燥:将已冻结的样品移到冷冻干燥器内已预冷的样品台上,抽真空,经几小时或数天后,样品即达到干燥。

本方法不需要脱水,避免了有机溶剂对样品成分的抽提作用,不会使样品收缩,也是较早使用的方法。

但是,由于花费时间长,消耗液氮多,容易产生冰晶损伤,因此未被广泛应用。

2.样品脱水后冷冻干燥样品用乙醇或丙酮脱水后过渡到某些易挥发的有机溶剂中,然后连同这些溶剂一起冷冻并在真空中升华而达到干燥。

和前一种方法比较,本方法的优点是不会产生冰晶损伤,且干燥时间短。

不足之处是有机溶剂对样品成分有抽提作用,造成部分内含物丢失。

乙腈(acetonitrile)真空干燥法:这是一种利用乙腈在急速蒸发时会冷却固化的性质将样品干燥的方法。

其操作步骤如下:(1). 固定、水洗:按常规方法进行。

(2). 乙腈置换:使用50%、70%、80%、90%的乙腈水溶液置换,最后用100%乙腈代替,每步骤15~20分钟。

(3). 干燥:至纯乙腈时,放入真空镀膜台抽真空,乙腈和样品在真空中很快致冷而被冻结(冻结的温度为-45℃),变成冰状固体。

然后继续抽真空,使冻结的乙腈升华,约需30分钟,样品即达干燥。

样品干燥后要粘在样品台上。

对于不镀膜而直接观察的样品,必须用导电胶来粘固;对于要镀膜的样品,则可以用胶水或万能胶来代替,微细的样品如粉末、纤维等也可用双面胶纸来粘贴。

三.样品的导电处理生物样品经过脱水、干燥处理后,其表面不带电,导电性能也差。

用扫描电镜观察时,当入射电子束打到样品上,会在样品表面产生电荷的积累,形成充电和放电效应,影响对图象的观察和拍照记录。

因此在观察之前要进行导电处理,使样品表面导电。

常用的导电方法有以下几种:(一) 金属镀膜法金属镀膜法是采用特殊装置将电阻率小的金属,如金、铂、钯等蒸发后覆盖在样品表面的方法。

样品镀以金属膜后,不仅可以防止充电、放电效应,还可以减少电子束对样品的损伤作用,增加二次电子的产生率,获得良好的图象。

1.真空镀膜法真空镀膜法是利用真空膜仪进行的。

其原理是在高真空状态下把所要喷镀的金属加热,当加热到熔点以上时,会蒸发成极细小的颗粒喷射到样品上,在样品表面形成一层金属膜,使样品导电。

喷镀用的金属材料应选择熔点低、化学性能稳定、在高温下和钨不起作用以及有高的二次电子产生率、膜本身没有结构。

现在一般选用金或金和碳。

为了获得细的颗粒,有用铂或用金—钯、铂—钯合金的。

金属膜的厚度一般为10nm~20nm。

真空镀膜法所形成的膜,金属颗粒较粗,膜不够均匀,操作较复杂并且费时,目前已经较少使用。

2.离子溅射镀膜法在低真空(0.1~0.01乇)状态下,在阳极与阴极两个电极之间加上几百至上千伏的直流电压时,电极之间会产生辉光放电。

在放电的过程中,气体分子被电离成带正电的阳离子和带负电的电子,并在电场的作用下,阳离子被加速跑向阴极,而电子被加速跑向阳极。

如果阴极用金属作为电极(常称靶极),那么在阳离子冲击其表面时,就会将其表面的金属粒子打出,这种现象称为溅射。

此时被溅射的金属粒子是中性,即不受电场的作用,而靠重力作用下落。

如果将样品置于下面,被溅射的金属粒子就会落到样品表面,形成一层金属膜,用这种方法给样品表面镀膜,称为离子溅射镀膜法。

和真空镀膜法比较,离子溅射镀膜法具有以下优点:(1)由于从阴极上飞溅出来的金属粒子的方向是不一致的,因而金属粒子能够进入到样品表面的缝隙和凹陷处,使样品表面均匀地镀上一层金属膜,对于表面凹凸不平的样品,也能形成很好的金属膜,且颗粒较细。

(2)受辐射热影响较小,对样品的损伤小。

(3)消耗金属少。

(4)所需真空度低,节省时间。

(二) 组织导电法用金属镀膜法使样品表面导电,需要特殊的设备,操作比较复杂,同时对样品有一定程度的损伤。

为了克服这些不足,有人采用组织导电法(又称导电染色法),即利用某些金属溶液对生物样品中的蛋白质?脂类和醣类等成分的结合作用,使样品表面离子化或产生导电性能好的金属盐类化合物,从而提高样品耐受电子束轰击的能力和导电率。

此法的基本处理过程是将经过固定、清洗的样品,用特殊的试剂处理后即可观察。

由于不经过金属镀膜,所以不仅能节省时间,而且可以提高分辨率,还具有坚韧组织,加强固定效果的作用。

组织导电法主要有碘化钾导电染色法、碘化钾--醋酸铅导电法、丹宁酸—锇酸导电法等。

比较常用的是丹宁酸—锇酸导电法,其具体操作方法如下:(1).样品处理:按常规方法取材、清洗及用戊二醛固定。

(2).导电染色:将样品放入2%~4%丹宁酸溶液中浸泡。

如果观察表面结构,浸泡时间为30分钟;如果观察内部结构,浸泡时间为8小时,即可过夜。

在浸泡过程中,可更换一次溶液。

(3).清洗及再固定:用磷酸缓冲液充分清洗,然后放入1%锇酸中固定2~4小时,再用磷酸缓冲液清洗。

(4).脱水和干燥:按常规方法。

(5).扫描电镜观察。

四.几种特殊的样品制备技术(一) 细胞内部结构冷冻割断法1972年,日本学者田中敬一采用冷冻树脂割断法将细胞打开,用扫描电镜观察细胞的内部结构。

后来他又以二甲基亚砜代替树脂进行冷冻割断取得成功,该方法简便,结构清晰,已得到广泛应用。

其操作方法如下:1.取材和固定:为了使细胞结构清晰,不被过多的血细胞污染,可在取材前用灌注法冲洗。

即先将动物麻醉,经腹主动脉注入生理盐水或低分子量的右,切开下腔静脉放血,至无血色为止。

然后迅速取材,将样品修成1mm×1mm×5mm大小,投入1%锇酸溶液中固定1小时,用1/15M磷酸缓冲液 (pH7.4)清洗两次,每次10分钟。

2.二甲基亚砜浸泡:将样品依次放入25%、50%二甲基亚砜溶液中,各浸泡30分钟。

3.割断:用TF—1型冷冻割断装置进行割断。

然后将割断后的样品放到50%二甲基亚砜中,等融化后再用1/15M磷酸缓冲液浸洗,每次10分钟,换液5次。

4.软化及后固定:将样品放入0.1%锇酸中软化,温度20℃,时间48~72小时。

然后用1%锇酸后固定1小时,双蒸水浸洗1小时,换液几次,需彻底清洗干净。

5.导电染色:将样品放入2%丹宁酸中2小时(或过夜),以双蒸水清洗1小时,换液几次。

再以1%1%锇酸后固定30~60分钟,双蒸水清洗1小时。

6.脱水、干燥及镀膜:按常规方法进行。

(二) 铸型技术为了研究空腔脏器特别是血管系统复杂的立体分布,先向腔内注射某种成形物质,待该物硬化后再把组织腐蚀去掉,剩下的成形物即能显示血管系统的立体分布,这种技术称铸型技术。

如果是研究血管系统,称为血管铸型。

用铸型技术制作的标本,经过镀膜后,就可进行扫描电镜观察。

常用的铸型剂有甲基丙烯酸酯、聚苯乙烯及其共聚物以及ABS等。

ABS是一种树脂,为丙烯晴、丁二烯和苯乙烯的三元共聚物,被认为是比较理想的铸型剂。

下面简单介绍用ABS制作血管铸型标本的方法:1.灌流和注入铸型剂首先将准备灌注的器官取下或保持自然位置,找到动脉,插入玻璃管或静脉穿刺针,并以粗丝线结扎之,用普通流水或温盐水将血管中的血液冲洗干净。

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