医学检验·检查项目：血清免疫固定电泳(IF)_课件模板
肝炎后综合征、肝炎双重感染、丁型病毒 性肝炎、乙肝、原发性肝内硬化综合征、 新生儿肝炎综合征、暴发性肝炎样综合征、 丙型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎、病毒 性肝炎、新生儿肝炎、甲型肝炎、浓缩胆 汁综合征、缺血性肝炎、妊娠合并病毒性 肝炎。
谢谢！
相关检查： 土拉伦斯杆菌凝集试验、唾液溶菌酶、间 接免疫荧光试验、免疫抑制酸性蛋白、 ECT检查、唾液白蛋白。
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
相关症状： 免疫力下降、HIV感染、正常免疫球蛋白 减少、血清免疫球蛋白可升高、免疫缺陷、 免疫功能障碍。
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
简介：
单克隆属性。 2、本周氏蛋白和游离轻链病：本周
氏蛋白是没有与免疫球蛋白分子中重链结 合的单克隆κ或λ轻链。免 疫固定电泳来确定本周氏蛋白的存在形式。 轻链病是指仅产生κ或λ单 克隆轻链，在尿中称为本周氏蛋白的疾病， 轻链病包括10％－
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
简介：
15％的单克隆免疫球蛋白病，它多出现在 IgG骨髓瘤（60％）和IgA骨髓瘤（16％） 病中。
3、重链病：是以免疫球蛋白重链部 分存在的单克隆蛋白为特征。
4、多克隆免疫球蛋白病：主要为γ 蛋白区宽的条带，多见于炎症或感染和胶 原病。5、肾病变的来源分析：尿免疫蛋 白电泳可
医学检验·各论 血清免疫固定电泳（IF）
内容课件模板
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
简介：
有蛋白电泳的高分辨率和抗原抗体反 应的特异性，在临床具有广泛的应用。
1、单克隆免疫球蛋白增殖病：是以 单一克隆的浆细胞过度增高为特征，常常 导致某种免疫球蛋白或免疫球蛋白亚单位 大量合成而其他正常免疫球蛋白水平下降。 免疫化学方法能够对异常蛋白定量，而电 泳分析能够确定这些蛋白质的
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
简介：
以很好地协助临床判断肾脏的主要损伤 （肾小球和肾小管）及尿蛋白选择程度的 估计，选择性和非选择性蛋白尿。指导治 疗和判断预后有价值。
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
正常值： 。
医学检验·各论：血清免疫固定电泳（IF） >>>
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYDRAGEL ＩＭMＵNOＦＩXATＩＯN)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β-球蛋白与γ-球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:１。
蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2.电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散。
3.使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后,ＥLP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清,γ(IｇＧ)、α(IgＡ)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果、四．方法学溯源自１930年由Ｔiseｌius发现了移界电泳(moｖing bｏundaｒy eｅｃtrｏpｈoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe ｅlecｒrｏｐhoresis)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键、通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。
五．仪器（一）型号:SEＢIA ＨYDＲASYＳ(ＰN1210)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:１０ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0-30０V(可选至30０0V)电流0－500mＡ功率０－１00W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDＲＡGＥL 1 IF试剂盒ＨYＤＲAGEＬ２IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAＧEL 9 IF试剂盒（1）商标:SEBIA（2）包装规格:1０测试／20测试/40测试/90测试（3）货号:PN43０1/ PＮ43０2/ PN４３0４/PN43０92．脱色液(1) 商标:SEBIA(2) 包装规格:Paｃｋfｏr 10×10０ｍl(3) 货号:PＮ454０(4) 成分:柠檬酸3。
医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
免疫电泳技术精品PPT课件
用途：定量抗原 优点：快 缺点：影响因素多，不常用
三）免疫电泳
（immunoelectrophoresis，IEP）
即：电泳后进行双相琼脂扩散 实验
用途：定性实验，主要用于纯 化抗原和抗体成分的分析及正 常和异常免疫球蛋白的识别和 鉴定。
四）免疫固定电泳
（immunofixation electrophoresis）
即：区带电泳+沉淀反应
用途：常用于M蛋白的鉴定与分型
学习总结
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
免疫电泳技术
Immunoelectrophoresis technique
一、基本原理 二、类型 一）对流免疫电泳
（counter immunoelectrophoresis，CIEP）
即双扩+电泳技术 用途：同双扩 优点：快、敏感性高 缺点：分辨力低
二）火箭免resis，RIE）
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End 演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
医学检验·检查项目：蛋白电泳_课件模板
慢性肾炎、老年人多发性骨髓瘤、多发性 骨髓瘤、浆细胞瘤、肝脏类癌、转移性肝 癌、多发性骨髓瘤病肾病、肝肿瘤、胆汁 性肝硬化、血吸虫病、老年人肾病综合征、 急性肾炎、肾病综合征、小儿先天性肾病 综合征、小儿肾病综合征、先天性肾病综 合征、原发性胆汁性肝硬化、肝脓肿。
谢谢！
Байду номын сангаас
医学检验·各论：蛋白电泳 >>>
临床意义：
减少： ①白蛋白：同白蛋白，多见于肝 病、营养不良、肾病。 ②α1球蛋白：严 重肝病。 ③α2球蛋白：肝病。 ④β球 蛋白：严重肝病。 ⑤γ球蛋白：慢性肾 炎、肾病综合征。
医学检验·各论：蛋白电泳 >>>
正常值：
白蛋白 0.60～0.71（60％～71％）； α1球蛋白 0.03～0.04（3％～4％）； α2球蛋白 0.06～0.10（6％～10％）； β球蛋白 0.07～0.11（7％～11％）； γ球蛋白 0.09～0.18（9％～18％）。
医学检验·各论：蛋白电泳 >>>
相关检查：
血清总蛋白、血清总蛋白（TP,TP0）、总 蛋白(TP)、血清前白蛋白（PA）、血清白 蛋白与球蛋白比值（A/G）、白蛋白 (A,Alb)。
医学检验·各论：蛋白电泳 >>>
相关症状： 硬斑、背痛、腰背痛、黄疸、脾肿大、腹 部肿块。
医学检验·各论：蛋白电泳 >>>
医学检验·各论 蛋白电泳
内容课件模板
医学检验·各论：蛋白电泳 >>>
简介： 血清蛋白质为胶体物质，在一定条件
下带有电荷并在电场中泳动。
医学检验·各论：蛋白电泳 >>>
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约18个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约55分钟4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN43092．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品：IF试剂抗体（1）商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5×1ml（3）PN4315七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
免疫电泳详细教程培训ppt课件
免疫电泳详细教程
14
7.2当今的免疫沉淀
n 免疫沉淀现在更多的被用作一种分析方法。利用 该技术，细胞大家族里面的某些特定抗原能够被 检测出来。
n 另外，单克隆抗体的抗原特异性也可以用免疫沉 淀的方法来测得。利用现代免疫技术，不需要考 虑抗原表位与抗体互补位间的平衡，而这在传统 方法里是相当重要的。抗体通常被加到过量的抗 原中。另外单克隆抗体也可以用此方法。因为抗 体被交联到了一个固定相上，如琼脂糖凝胶，免 疫沉淀复合物可以通过简单的离心而分离，然后 便可以对其进行分析。
免疫电泳详细教程
7.1.4.1简单免疫电泳
n 简单免疫电泳只追求单纯的定性分析。它 尤其适用于在复杂样品中同时检测多种抗 原。对抗原的分离是基于其电荷的差异， 因此该技术提供了更好的解决方法。因为 抗原在免疫电泳的过程中扩散占用了较大 的空间，所以它的灵敏性不是太高。
免疫电泳详细教程
2
n 将抗原溶液加入到加样槽中，在电流作用 下电泳分离过程就开始了。根据分子所带 净电荷的不同，分子量大小的差异，在琼 脂糖凝胶中进行电泳时分子的迁移速率和 方向也不同，这样电泳就会将不同抗原分 子在琼脂糖凝胶中分离成若干区带。然后 与电泳方向平行挖一小槽，加入抗血清( 含抗体)，通过免疫扩散，抗体与已经分 离的抗原在琼脂糖凝胶中双向扩散，二者 特异性结合在比例合适处形成弧形沉淀线。
免疫电泳详细教程
7
免疫电泳详细教程
8
免疫电泳详细教程
9
n 利用胶中连续的抗体浓度，峰的最大高度是和提 供的抗原的浓度呈比例的。根据已知浓度的各种 标准抗原，交叉免疫电泳可以定性和定量的分析 抗原。
免疫电泳详细教程课件
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
7.1.4.2交叉免疫电泳
交叉免疫电泳是简单免疫电泳的一种提高。 相似的，样品中的抗原依据电荷不同经电 泳后被分离，然后使已经分开的抗原成分 与原电泳方向呈90°角的方向在含有抗体 的琼脂糖凝胶中进行二向电泳。抗原和抗 体根据各自所带电荷的不同在胶中进行迁 移。
火箭免疫电泳只追求对抗原进行定量分析。可以 精确、简单、快速的定量分析0.5-2μg的抗原。
在这个过程中，我们在1-2%的琼脂糖凝胶中（厚 约1.5mm）打上几个大约3-8mm长的小洞，待测 样品和稀释不同程度的标准抗原被加入这样的小 洞以建立标准曲线。和交叉免疫电泳的第二步类 似，抗原在含有抗体的胶中进行电泳，很快火箭 样的沉淀线形成并向着电极的方向移动直到稳定 下来。
除了可以进行定量分析，交叉免疫电泳相对于简 单免疫电泳仍有很多的优势：它提供了更好的解 决方案，并且可以明显的快速进行。第一向分离 抗原的电泳大约需要3小时，而接下来的扩散需要 30-90分钟就可以了。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
7.1.4.3火箭免疫电泳
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
在抗体浓度恒定的胶中沉淀线的最大的迁移距离 和抗原浓度的关系是线性的。由已知浓度的标准 抗原溶液可以得到标准曲线，沉淀线的迁移距离 和凝胶中抗血清的浓度是成反比的。因此降低胶 中抗血清的浓度可以增加该方法的敏感性。
血清蛋白电泳Ppt文稿演示
电渗
液体对固体支持物的相对移动，由 缓冲液的水分子和支持介质的表面之间 产生的一种相关电荷所引起。如果电渗 与电泳方向相同，V变大；反之变小。
血清蛋白醋酸 纤维素薄膜电泳
原理
在 pH8.6碱性环境，血清蛋白均带负电荷， 在电场中向正极移动
各种蛋白质pI不同，带电荷量有差异 蛋白质的分子大小与分子形状不相同 带电荷多、分子量小者，泳动较快；反之
操作
准备 ➢ 电泳槽准备 ➢ CAM的准备 点样 吸3-5μl血清均匀点于CAM无光泽面 电泳 无光泽面朝下，点样侧置于负极端，通电 染色 将薄膜条浸入丽春红S染色液，染5-10min 漂洗
醋纤膜规格及点样示意图
定量
取试管6支，在白蛋白管内加入0.1mol/L NaOH 液6ml，其余各管加入3ml，将各蛋白区带剪下 分别置于各试管中，另从空白背景剪一块平均 大小的膜条置于空白管中，37℃10-20min
蒸发薄膜与滤纸桥接触不良 薄膜位置歪斜、弯曲，与电流方向不平行 缓冲液变质；样品不新鲜 CAM质量不高等 电渗现象
评价
❖ 优点：CAM电泳具有灵敏度高，标本用量少，
分辨率高，区带清晰，电泳时间短，操作简便 快捷；CAM对染料不吸附，蛋白区带均匀，背 景清晰，既易比色定量，又易透明后进行光密 度扫描。
则较慢
蛋白质的等电点、分子量及迁移率
蛋白质名称
白蛋白
等电点
4.84
相对分子量
6.9万
电泳迁移率
5.9*10-5
α1-球蛋白 5.06
20万
5.1*10-5
α2-球蛋白 5.06
30万
4.1*10-5
β-球蛋白 5.12
9万～15万 2.8*10-5
医学免疫学检验-免疫学电泳技术PPT课件
15
（immunoelectrophoresis，IEP）
即：电泳后进行双相琼脂扩散 实验
用途：定性实验，主要用于纯 化抗原和抗体成分的分析及正 常和异常免疫球蛋白的识别和 鉴定。
第一课件网网站
2020年10月2日
9
2020年10月2日
10
2020年10月2日
11
2020年10月2日
12
四）免疫固定电泳
（immunofixation electrophoresis）
即：区带电泳+沉淀反应
用途：常用于M蛋白的鉴定与分型
2020年10月2日
13
2020年10月2日
14
演讲完毕，谢谢观看！
Thank you for reading! In order to facilitate learning and use, the content of this document can be modified, adjusted and printed at will after downloading. Welcome to download!
免疫电泳技术
Immunoelectrophoresis technique
第一课件网网站
2020年10月2日
1
一、基本原理 二、类型 一）对流免疫电泳
（counter immunoelectrophoresis，CIEP）
即双扩+电泳技术 用途：同双扩 优点：快、敏感性高 缺点：分辨力低
2020年10月2日
2
2020年10月2日
3
2020年10月2日
医学检验·检查项目：血清免疫球蛋白测定_课件模板
医学检验·各论：血清免疫球蛋白测定 >>>
相关症状： 扁桃体小或缺如、网状青斑。
医学检验·各论：血清免疫球蛋白测定 >>>
相关疾病：
原发性单克隆免疫球蛋白病、继发性单克 隆免疫球蛋白病、脊柱裂和有关畸形、冷 球蛋白血症、小儿白细胞黏附分子缺陷Ⅰ 型、先天性性联无γ-球蛋白血症、特发 性迟发性免疫球蛋白缺乏症、婴儿期短暂 性低丙球蛋白血症、异常γ-球蛋白血症、 重症联合免疫缺陷。
医学检验·各论 血清免疫球蛋白测定
内容课件模板
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
医学检验·各论：血清免疫球蛋白测定 >>>
简介： 免疫球蛋白（Ig）具有抗体活性，能
与相应抗原专一结合，是体内普遍存在的 一类蛋白质。
医学检验·各论：血清免疫球蛋白测定 >>>
临床意义：
Ig显著减低 ①见于先天性低丙种球 蛋白血症，如 IgG、IgA、IgM三种全缺的 Bruton病（仅限于男性），三种Ig缺某一 或二种（减少或无能）的丙种球蛋白异常 血症，后者最多见的是IgA缺乏症（隐性 遗传）。 ②见于获得性低丙种球蛋白血 症（如肾病综合征、蛋白质丢失性肠病、 先天性
医学检验·各论：血清免疫球蛋白测定 >>>
临床意义：
风疹病等）以及瑞（Swiss）氏胸腺发育 不全伴无丙种球蛋白血症。Ig 明显增高 ①见于免疫性疾病，如系统性红斑狼疮急 性期、慢性活动性肝炎、类风湿性关节炎 活动期等。 ③见于多发性骨髓瘤，可按 其所产生Ig不同而有G型（IgG增多）、A 型（IgA增高）、D型、E型（后两型极少 见）等。 ④
医学检验·各论：血清免疫球蛋白测定 >>>