C18色谱柱维护 常识
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗

液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意:每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督。
总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料;另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好。
对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考。
对于未启用的新的色谱柱,先用甲醇或乙腈以小流速(0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min )不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为1.0 ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相的比例(如80%、50%、 10%甲醇或乙腈)各冲洗至少 30分钟。
若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中(如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中);色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂(将缓冲盐溶液换成水)冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析。
样品分析完后,色谱柱维护与保养方法:流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,1.0ml/min 的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80% 甲醇或乙腈里(具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相)。
如柱子长时间未用,则柱子保存在 100%的甲醇或乙腈里。
对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统(水:90-10;乙腈:10-90)冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈。
需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间(1小时以上)冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱。
【色谱柱】色谱柱使用维护 色谱柱维护和修理保养

【色谱柱】色谱柱使用维护色谱柱维护和修理保养1、色谱柱的使用说明:(1)色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特别说明,均为评价报告所示的流动相。
在使用前,确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出,堵塞色谱柱。
(2)流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水可以是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。
另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0,BDSC18适合于碱性化合物,PH值适用范围为 2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。
(3)样品:样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时,全部的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存:(1)反相色谱柱每天试验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。
注意:不能用纯水冲洗柱子,应当在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
3、色谱柱的再生:由于色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的加添,会显现色谱峰高降低,峰宽加大或显现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。
c18色谱柱保养方法

C18色谱柱的保养方法C18色谱柱的保养方法主要包括以下几个方面:1.保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
2.每次新买的色谱柱虽然是经厂家测试过并密封好的,可是有的色谱柱到达手中时已经过很长的时间了,因此,每次拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。
首先,配制好65%的乙腈/水,再把色谱柱正确的连接在色谱仪上,出口放空(注意:出口端切不可连上检测器,以免污染了检测器),以低流速0.1ml/min~0.5ml/min(如果是LC/MC柱子,则应以0.3ml/min进行),不可以高流速进行,等看见柱子出口有液体流出后,过20分钟后再接上检测器,以循序渐进的方法将流速调至 1.0ml/min (如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行),继续冲洗2~8小时。
3.色谱柱的存储:在不使用色谱柱时,应将其存储在恒温箱或冰箱中,避免暴露在阳光下或高温环境中。
同时,要注意避免色谱柱的震动和振荡,以防止填料团聚或变形。
4.色谱柱的洗脱条件:为了避免填料的污染和附着物的积累,使用完毕后应进行适当的洗脱。
常用的洗脱方法包括使用pH2-3的酸性溶液,有机溶剂和水的混合溶液,或者乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗,阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗,除去交换性能强的盐,然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有机物)、甲醇、水依次冲洗。
5.定期进行清洗:使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能。
同时要定期用甲醇或丙酮冲洗色谱柱,保持色谱柱的清洁。
以上就是C18色谱柱保养的主要步骤和注意事项,遵循这些步骤可以有效延长色谱柱的使用寿命并保证实验结果的准确性。
色谱柱的维护与保养

色谱柱的维护与保养一、C8及C18反相色谱柱(新的色谱柱)应该在自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
使用前应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
具体步骤如下:(1)准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇,冲洗色谱仪器系统,保证仪器系统管路干净。
(新柱老化前,此步决不可忽略)(2)将色谱柱反向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(3)再将色谱柱正向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(4)连接检测器,开启柱温达30℃~40℃,用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗4h以上。
(目的是充饱和色谱柱,去除柱内空气)(5)用水-有机相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相(95:5→0:100)梯度变化,以0.3~0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂,以0.3~0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗1h以上。
(目的是老化色谱柱)(6)在平衡前根据水相-有机相的比例,首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例,以1ml/min流速冲洗30左右(目的是相平衡过渡)。
如果流动相中含有缓冲盐,决不可在柱老化后立即用流动相平衡,必需先用90%以上水进行预平衡30min以上,否则,会导致缓冲盐在柱内析出结晶,严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
(7)然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤,超声脱气后的流动相,按检测方法平衡至少1h,待基线稳定后,开始进样检测。
色谱柱使用维护及解决方案

色谱柱使用维护及解决方案色谱柱使用维护1、色谱柱的使用说明:(1)色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特别说明,均为评价报告所示的流动相。
在使用前,确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出,堵塞色谱柱。
(2)流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水可以是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。
另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0,BDSC18适合于碱性化合物,PH值适用范围为 2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。
(3)样品:样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时,全部的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存:(1)反相色谱柱每天试验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。
注意:不能用纯水冲洗柱子,应当在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
3、色谱柱的再生:由于色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的加添,会显现色谱峰高降低,峰宽加大或显现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。
C18液相色谱柱基础维护常识

C18液相色谱柱基础维护常识液相色谱柱中使用较多的就是C18色谱柱了,下面整理的有关C18液相色谱柱的基本维护,希望能给大家一些帮助。
1、色谱柱的流向不能改变在我们常规思维中,色谱柱上标示的流向是不可改变的,每次使用都要遵循。
可是,大家有没有想过这个方向的作用是什么呢?为什么要标示一个使用方向呢?其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的,标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱,那么这个流入段就是最先污染端。
这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备,而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。
我曾将已经污染过的色谱柱反方向来使用,如果保留时间不是很长,而色谱柱足够长,还是能使用一段时间的。
2、看清色谱柱说明书后再上机使用色谱柱内部保存着什么溶剂一定要看清楚,因此色谱柱的说明书一定要看清楚,当然也包括说明书上建议的维护保养规定,对我们都非常的有用。
对于反相柱来说,溶剂基本就是乙腈或甲醇。
但正相柱就不同了,因为正相柱除了可以适用正相系统,也可以适用反相系统,因此一定要看清楚,对于你的方法来说是否需要置换色谱柱内部保存溶剂。
3、用纯水冲洗色谱柱才能把缓冲液冲洗干净使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是最大的,尤其是纯水,除非你的色谱柱是耐水的。
冲洗色谱柱可以的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。
如果你认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大,你可以使用内含10%左右的纯水来冲洗。
4、保存在乙腈或甲醇中的新色谱柱可以直接使用理论上液相色谱柱不同于气相色谱柱需要活化,但是由于液相色谱柱内部保存的有机系具有挥发性,因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
可以是0.5ml/min,120min,但可以咨询厂家,根据色谱柱参数设定。
5、色谱柱应该保存在纯乙腈或甲醇中根据第4条,色谱柱内部保存液具有挥发性,因此为了减少其挥发速度,可以添加5%-10%的水,这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。
c18色谱柱的使用及维护

c18色谱柱的使用及维护
C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱,广泛应用于药物分析、
环境监测等领域。
下面是关于C18色谱柱的使用和维护的一
些建议:
1. 使用前注意:
- 检查色谱柱是否有损坏或污染,如果有,应更换色谱柱。
- 预处理色谱柱:通过一定条件下的溶剂流动,去除色谱柱
中的杂质和气泡,一般使用一种使色谱柱略干的有机溶剂,如甲醇或乙醇。
- 将色谱柱连接到色谱仪装置上,根据操作手册设置适当的
条件。
2. 使用过程中的注意事项:
- 避免使用过高或过低的流速,以免损坏色谱柱。
- 避免溶剂温度过高,应控制在色谱柱规定的温度范围内。
- 避免使用有机溶剂或样品溶液中有大量盐类。
- 避免样品浓度过高,以免柱子内超出静电容量发生电吸附。
3. 维护:
- 使用后,应用适当的溶剂清洗色谱柱,去除残留的样品和
溶剂,一般使用纯水或略带酸性的溶液。
- 在使用中,避免发生气泡堵塞现象,如有气泡,可进行紧
急处理。
- 定期检查色谱柱的性能和状态,如柱效、重复性和分离度等,根据需要更换或维修色谱柱。
- 注意避免色谱柱与空气长时间接触。
总的来说,使用C18色谱柱时要注意合理设置条件,避免过高的流速和温度,以及样品浓度过高。
使用后要及时清洗,并定期检查和维护色谱柱的性能,以确保分析结果的准确性和稳定性。
c18柱色谱填料使用

c18柱色谱填料使用
C18色谱柱是一种常用的色谱柱,其填料具有亲脂性,常用于反相色谱中。
以下是使用C18色谱柱的注意事项:
1. 流动相的选择:C18色谱柱通常使用正己烷和甲醇作为流动相。
正己烷可以增加分离物与固定相的相互作用力,甲醇则有助于溶解非极性溶剂。
根据分析需要,可以调整正己烷和甲醇的比例。
2. 预处理:在使用C18色谱柱之前,需要进行预处理以去除可能存在的杂质和保证柱子的稳定性。
常见的预处理方法包括使用高压液相系统进行洗脱、使用有机溶剂或酸碱溶液进行洗脱等。
应避免用过酸性或过碱性的洗脱剂,以免对C18柱填料造成损害。
3. 样品准备:样品的溶解度和纯度对分离效果有很大影响,因此在分析前需要充分溶解样品,并通过滤器除去杂质。
4. 色谱柱平衡:在使用C18色谱柱之前,需要将其平衡至最佳状态。
可以通过逐步增加流动相的流速并监测基线来找到最佳流速。
在达到最佳流速之前,应缓慢增加流速以避免对色谱柱造成过度压力。
5. 柱效测定:在使用C18色谱柱之前,需要测定其柱效。
可以通过使用标准品进行测定,并比较标准品和样品的保留时间和峰形来进行评估。
6. 清洗和维护:在使用C18色谱柱过程中,需要定期清洗和维护以保持其性能和寿命。
需要定期更换流动相、清洗柱子并检查其性能。
总之,使用C18色谱柱需要了解其特点和注意事项,并进行充分的预处理、样品准备、色谱柱平衡、柱效测定以及清洗和维护。
这些步骤对于获得准确、可靠的色谱结果非常重要。
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【讨论】高效液相色谱柱的保护各位同仁,为保证我们的分析效果,延长色谱柱的使用寿命,大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。
我先来聊聊,算是抛砖引玉了1、最好用预柱。
(但要注意,若有时出峰异常,要先看看是不是它有问题了)2、每次做完分析,都要进行冲洗,分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质,建议用90%甲醇冲洗30~60min;若分析用流动相中含以上物质,要先用10%甲醇(或用与分析用流动相同比例,把含酸、碱、盐溶液换成水)冲洗1小时左右,再梯度走到90%甲醇冲洗30~60min(若用多元泵)。
有必要时再循环几次,可以适当缩短时间。
若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲醇或乙腈封存。
3、若流动相中用到离子对试剂,更应该好好冲洗,且该色谱柱最好作为专用,不能再做其它物质分析用。
因色谱柱填料性质已与原来所不同,在该柱上所摸索的色谱条件,可能在其它同类柱子上得不到重现。
4、尽量避免反冲,除非该色谱柱厂家明确说明允许。
5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。
6、定期测柱效,有下降,可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。
若柱效还没有改善,可以再生,甲醇-二氯甲烷-甲醇。
呵呵,还有的一时想不起来了,各位有经验的战友请发表高见!1.样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤,流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。
2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围3.避免流动相组成及极性的剧烈变化。
4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。
5.每次测试完毕,要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱(分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml)。
如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净,并保存于乙腈中。
6.压力升高是需要更换预柱的信号。
1:溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂,膜过滤(孔径不超过0.45μm)2:样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤(孔径不超过0.45μm)3:泵,进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器,在进样器和柱之间安装预过滤器4:柱内不溶物的形成:由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱;在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶;由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧,并保持室温恒定!还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生:1 平衡色谱柱:反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。
由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"。
硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。
如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱?平衡过程中,将流速缓慢地提高;用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间来平衡)2 色谱柱的再生:进行色谱柱再生时,应使用一个谦价的泵,最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱!偶也来参与一下,谈一点拙见1.对于一些特殊型号的柱子,例如不同型号的手性柱应严格按照柱子的相应说明书所要求的进行维护,并按照其规定的范围选择试剂的种类,比例,PH ,等等;2.尽量避免柱子进气泡的现象出现,如在实验过程中留心流动相的体积,同时对所需体积进行大概的估计,以免吸空,气泡进柱,尽管有多种排气泡的方法,但毕竟影响柱子的性能,尤其是比较“娇贵”的柱子;每天用足够的时间来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做!新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
并且,在以后的使用中,应时常对色谱柱进行测试。
卡套柱的安装(不加预柱)1.将卡套架套入柱芯2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使柱芯高于夹套(见左图)3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片4.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手注意:使用卡套柱时,两端的卡套应时刻连接在柱芯上。
不管您是平衡色谱柱或是清洗,任何时候都不能将卡套取下来,否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装(加预柱)1.将卡套架套入柱芯2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使夹套高于柱芯(见左图)3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片4.将"子弹头"预柱放入卡套片内5.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端7.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片(同时可以修补色谱柱)注意:在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前,应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗,而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
1.将修补工具中的2套入柱芯的顶端2.将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中,并顺时针方向旋转到旋紧3.一手握柱芯,另一只手轻轻地向外拉3,取出柱芯顶端的滤网4.用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5.将新的填料用甲醇润湿,然后填入挖去的部位,压平6.照(左图)装上新的玻璃棉滤网,并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端7.柱芯顶端套上2,然后参照(左图)将滤网放入8.压紧,然后取下2,再用4将滤网的边缘压平平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。
由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"。
硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。
如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱?平衡过程中,将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低,则需要较长的时间来平衡)色谱柱的再生进行色谱柱再生时,应使用一个谦价的泵,我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
表1建议用来冲洗的溶剂体积色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-4 1.6ml 30ml250-4 3.2ml 60ml250-10 -20ml 400ml请根据下表选择您的再生方法:极性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色谱填料)的再生:正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱注意:在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护1.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围3.避免流动相组成及极性的剧烈变化4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存大乙腈中6.压力升高是需要更换预柱的信号对于高效液相色谱柱的保护我也来谈谈吧。
1.首先,溶剂、样品要前处理,溶剂要用色谱级别的并用0.45um的滤膜过滤并脱气,样品要用0.22um的滤膜过滤。
2.做样前,柱子要平衡一段时间,先用甲醇平衡30-60分钟,再用纯化水平衡30-60分钟,然后用流动相平衡,直到基线走平时,再进样。
3.做样结束后,柱子要用甲醇和水冲洗,冲洗顺序与2步相反,最后柱子用甲醇(95%)保存。
4.如果柱子里东西太多,可以用甲醇,乙腈,水反复冲洗。
谈谈关于启用新柱子(C18)的注意事项:1、首先应检查一下,看是否为原装产品和外观完好情况。
2、保存好供应商随柱提供的“关于柱性能测试报告”,其中包含了新柱子的最佳性能指标,如在某预定色谱条件下的柱压、柱效等。
3、重现流动相条件,主要观察柱压的变化(100%甲醇、100%乙腈、50%甲醇-50%水等),并将数据记录在“性能报告上”,以便今后对照。
4、启用新柱子时的流动相流速应慢一点,如0.3-0.5ml/min,经过10-15min后可以加快。
5、对于25cm柱子,流速一般不超过1.0ml/min,能用慢速流量时尽量使用慢一点,当然要考虑分离效果和分析时间。
加预柱喽!以上大家都说了很多柱子保护方面的内容,已经很全了,但我想补充一个方面:用离子对色谱法时柱子使用的一个问题.我们知道,一般我们分析样品时,常采用有机相(甲醇,乙腈)-水体系作为流动相,对于大部分的分析工作,这个体系就能胜任了,但是,当我们遇到弱酸碱时,比如生物碱,容易拖尾,这时候我们可以采用离子对色谱法进行分离,常用的离子对试剂有庚烷磺酸肭和十二烷基磺酸钠,这时候,我们常采用pH3-5的缓冲盐体系,我们在采用离子对色谱进行分离时,该怎么保护色谱柱呢?一个很重要的问题是,当我们冲柱子的时候,应该先采用有机相-水体系冲,再用水冲,然后用有机相冲,比如我们的流动想是甲醇-0.5%的庚烷磺酸钠(pH3.3)(50:50),我们在冲柱子的时候,应该先用50%的甲醇水冲柱子,然后用水冲,然后用甲醇冲,这是为什么呢?我们知道,通常的洗衣粉的主要有效成分是十二烷基硫酸钠(表面活性剂),它可以把一些脂肪油洗下来(烷烃及其衍生物),庚烷磺酸纳也是表面活性剂,如果先用水冲洗,会产生用洗衣粉洗衣服时的效果(ODS的固定相是长链烷烃),会造成固定相的损失,如果我们采用有机相-水体系先冲柱子,由于表面活性剂在有机相中有一定的溶解度,并且流动相的量比较大(相对于固定相,因为流动相是在不停的流动嘛)会使表面活性剂逐渐溶解在流动相中而被冲出,当表面活性剂被冲干净之侯,我们就可以采用水冲,然后采用有机相保存柱子了.我也说说色谱柱的保护首先要看清楚说明书,是属于何种色谱柱,楼上各位所说都是集中在反相柱上,而正相色谱柱的保护和处理则有很大不同其次,色谱柱优良好坏的指标有柱效、柱压等如果在实验的某一天突然发现柱压升高,或者峰形脱尾等现象,则有必要对色谱柱进行处理。