JSR 胶乳微球
聚乳酸微球制备方法
聚乳酸微球制备方法我折腾了好久聚乳酸微球制备方法，总算找到点门道。
说实话，聚乳酸微球制备一开始我真是瞎摸索，走了不少弯路。
我最早尝试的一种方法，就是那种最基本常见的乳化- 溶剂挥发法。
我当时就想啊，把聚乳酸溶解在有机溶剂里，这就像是把糖溶解在水里一样，只不过这溶剂比水可难伺候多了。
然后我把这个溶液加到乳化剂溶液里，想让它形成小液滴。
可是呢，我失败了好多次，后来发现是搅拌速度的问题。
搅拌太快，液滴就大小不均匀，太难看了，跟一群高矮胖瘦特别失调的人站在一起似的；搅拌太慢呢，又不能很好地分散开。
这个搅拌速度我是调了又调，感觉就像在走钢丝，好不容易才找到个合适的。
还有一次，我没太注意有机溶剂的选择。
有的有机溶剂挥发性太强了，我刚把聚乳酸溶液加进去准备乳化呢，溶剂就没了一大半，结果制备出来的根本就不是微球，就是一团不知道啥玩意儿的东西。
从那以后，我就知道有机溶剂的选择可太重要了，必须要找那种挥发性比较合适的。
我也试过那种相分离的方法来制备聚乳酸微球。
我得先把聚乳酸放在一种溶剂里，然后再往里面加另外一种沉淀剂。
这个就像是在一杯牛奶里倒醋，想让蛋白质沉淀出来一样。
但是这里的比例也很不好把握，沉淀剂加多了吧，聚乳酸就一下子全沉淀成一大坨，根本没有微球的样子；加少了呢，那就沉淀不出来，全是悬浊液。
前几天试了个新方法，这次总算成功了。
这个方法呢，步骤比较复杂。
在整个制备过程中，温度的控制也很关键。
我就像照顾一个生病的小宝宝一样，一刻都不敢放松。
温度高一点，聚乳酸可能就会有一些变形，温度低一点呢，整个反应就慢得要死。
还有啊，在过滤清洗聚乳酸微球的时候也要很小心，不然微球很容易就被破坏掉。
就好像你捧着一把沙子，稍微一动就散掉了那种感觉。
不过这里我不是特别确定，我还得再试几次不同的过滤清洗方式来确定一个最好的。
我觉得大家要是尝试制备聚乳酸微球的话，一定要把每个环节都好好记录下来，包括你用的试剂的量、搅拌的速度、反应的时间和温度这些，方便进行调整，要不然失败了都不知道啥原因。
胶乳微球吸附原理
胶乳微球物理吸附反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。
磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。
醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。
羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5.0以上时保持稳定。
带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。
这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。
疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。
醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。
虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。
一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。
反应步骤：1. 用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml；2. 用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；3. 将蛋白溶液加入到胶乳微球溶液中，10ml胶乳中加入1ml蛋白溶液。
室温搅拌孵育2hr；4. 离心或超滤，除去未结合蛋白；5. 将微球蛋白复合物用储存缓冲液溶解。
注意事项：1. 最优蛋白标记量影响因素1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值得增加；2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用；3）免疫反应：最近标记量由免疫反应需要决定。
2. 胶乳微球中加入蛋白后，快速搅拌混合，利于反应均衡。
反应体积是1ml时，可用移液器吸取蛋白加入微球中，并吹打数次。
如果反应体积较大时，用烧杯，边搅拌边加入蛋白，3. 储存缓冲液和反应缓冲液不同时，抗体有脱落的可能；4. 表面活性剂能使得抗体从胶乳中脱落，所以应避免加入。
微球共价结合抗体方法一、一步法1. 准备50mM pH 6.0的reaction buffer，醋酸或MES buffer更合适2. 用reaction buffer溶解抗体，使其浓度为1mg/mL。
聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法
聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法聚苯乙烯（PS）是一种热塑性树脂，具有较高的硬度、透明度和抗冲击性能。
然而，由于其具有较高的比重和生产成本，使其应用受到一定的限制。
近年来，聚苯乙烯胶乳微球（PSL）因其具有较低的比重、优异的加工性能和低成本等优点而备受关注。
本文将会介绍聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法。
一、聚苯乙烯胶乳微球聚苯乙烯胶乳微球是聚苯乙烯水乳液通过聚合和微球化产生的胶乳乳液，其粒径通常为几十纳米到数百纳米。
它将聚合物的优异性能和乳胶的良好加工性能结合在了一起，成为了一种理想的材料选择。
在工业上，聚苯乙烯胶乳微球广泛应用于轻质填充材料、油墨沉淀剂、聚合物乳液增稠剂、表面涂装剂等领域。
其中，作为轻质填充材料，PSL在汽车、航空、建筑等行业应用广泛，能够有效降低材料重量，减少燃料消耗。
二、制备方法1. 乳液聚合法乳液聚合法是制备聚合物微球最为常用的方法之一。
通常，首先通过有机溶剂或水相制备聚合物乳液，再通过乳液聚合来制得具有所需性质的聚合物微球。
该方法具有操作简单、制备量大、适用性广等优点。
2. 溶剂挥发法溶剂挥发法是通过添加低挥发性溶剂将聚合物溶解成溶液，然后将溶液加入高挥发性溶剂中，利用溶剂与大气之间的压力差使得小液滴形成，并通过溶剂挥发的过程形成微球。
该方法制备的微球形态规则、分散性好，但成本较高。
3. 原位乳化法原位乳化法是在单体溶液中通过引入促进乳化的表面活性剂，形成微小乳珠，随后开始聚合并逐渐增大，最终形成微球。
该方法具有操作简单、反应体系稳定等优点，但微球的粒径还存在着一定的不均匀性。
本文介绍了聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法。
聚苯乙烯胶乳微球因其具有较低的比重、优异的加工性能和低成本等优点，目前在轻质填充、油墨、增稠剂等领域得到了广泛的应用。
制备方法有乳液聚合法、溶剂挥发法、原位乳化法等。
胶乳微球 物理吸附
胶乳微球物理吸附
胶乳微球是一种由胶乳制备而成的微小球体，具有很强的吸附性能。
物理吸附是一种吸附过程，通过分子之间的非化学键相互吸附，无需化学反应就能实现分离和吸附物的固定。
胶乳微球的物理吸附特性使其在各个领域具有广泛的应用。
胶乳微球的物理吸附性能使其在环境领域具有重要作用。
例如，在水处理中，胶乳微球可以吸附和去除水中的悬浮物、重金属离子和有机污染物。
胶乳微球的大表面积和多孔结构使其能够有效地吸附水中的污染物，从而提高水的质量。
此外，胶乳微球还可以用于油水分离中，通过物理吸附油脂颗粒，实现油水的分离和回收。
胶乳微球的物理吸附性能还使其在医药领域有广泛的应用。
例如，在药物缓释系统中，胶乳微球可以作为药物的载体，通过物理吸附将药物固定在微球表面，实现药物的缓慢释放，提高药物的疗效和持续时间。
此外，胶乳微球还可以用于肿瘤治疗中，通过物理吸附药物靶向输送至肿瘤部位，提高药物的治疗效果。
胶乳微球的物理吸附性能还使其在化工领域有重要应用。
例如，在催化剂载体中，胶乳微球可以吸附催化剂颗粒，提高催化剂的活性和稳定性。
此外，胶乳微球还可以用于染料吸附和分离过程中，通过物理吸附将染料分子吸附在微球表面，实现染料的分离和回收。
胶乳微球的物理吸附性能使其具有广泛的应用前景。
在环境、医药
和化工等领域，胶乳微球通过物理吸附实现各种分离、吸附和固定的功能，为解决实际问题提供了一种有效的方法。
随着科技的不断发展，相信胶乳微球在各个领域的应用会更加广泛，并为人们的生活带来更多的便利和效益。
JSR厦门展会 胶乳微球
COOα
β
OSO3-
COO -
Density：1.05
Refractive Index :1.59
Pure water＋0.09%NaN3
3
TEM Photograph
Methods of Antibody conjugation
IMMUTEXTM is PSL designed as “ready to use” and have most suitable surface to immobilize antibodies
Zeta potential is an important factor to understand stability of particle.
The absolute value of zeta potential is higher, the particle is more stable.
30-60min Supernatant
Stirring（RT～37℃）
Antibody sol （1Vol） （Quantity;10～200μg/mg-LTX,１hr） EDC sol COOHx1～50 equivalent quantity
Centrifugation
-CONH-
-COOH
Blocking(pH7.2-8.5,1-2hr、BSA:1-2%,Blockmaster CE210, CE510) Redisperse by Vortex etc.
Scale up
14
△
○
Purification process and calibration curve
JSR胶乳微球
分散机理不同 通常使用超声波 温度控制对抗体的 避免变性很重要
均值器Байду номын сангаас管
抗体和EDC引起软粒子的聚合。因为zate颗粒改变了他们的潜力 声波降解法能驱散聚集的粒子。饱和的吸光度是声波降解法的时间完成 分散的声波降解法是非常重要的。如果不使用声波降解法,空白校准曲线变得很高 制作胶乳试剂过程中，PH、温度、EDC用量和超声是非常重要的
最初残留物 水溶性低聚物 表面活性剂
没有净化 净化后
表面活性剂等阻碍抗体的标记 抗体和微粒很容易结合
胶乳微球偶联蛋白的使用中常见问题及解答
胶乳微球偶联蛋白的使用中常见问题及解答以下问题是我们用户在使用过程中遇到的问题，我们咨询了国外的技术人员，这是他们的答复）问：产品说明书中给出的胶乳粒径是平均粒径吗？答：产品说明书中给出的胶乳粒径（Diameter）是平均粒径。
问：如何选择胶乳微球的粒径？答：一般选择粒径小的胶乳微球，则需要的抗体量就多，精密度和线性相对较好，而选择粒径大的胶乳微球性，则所需抗体少，精密度和线性相对较差，相对于小球，大球的灵敏度较好。
问：一般情况下我们所使用的微球的浓度大概是多少？答：整个测定体系中，微球的浓度大约在0.01%左右，当然这与试剂本身规定的线性有关系。
问：在使用离心方法偶联乳胶微球，一般需要多大的（相对）离心力？答：需要多大的离心力和所使用的乳胶微球有关，一般70nm左右的微球大概13000g/min30min以上，粒径越小所需时间越长，离心力越大。
问：蛋白（抗体）与微球偶联前，是不是微球的活化时间越长，效率越好？答：羧基微球的活化所需时间很短，一般以10-20分钟为宜，长时间的活化反而会降低偶联效率。
问：由于抗体不只是FC的氨基酸上有NH2，是不是表示它可以在任何方向与EDCA活化微球偶联呢？如果是这样，是不是会影响抗体与抗原的特异性反应？答：事实的确如此，当然由于抗体的空间折叠方式和FC端疏水性强，因此偶联反应的绝大多数发生在Fc端，对抗体与抗原的结合的影响不大。
问：胶乳微球与抗体偶联后，当时没发现有凝集，但隔夜后发现有凝集，这是什么原因？如何控制和避免？答：这种情况一般是偶联效率低的原因。
当体系中蛋白不足或是其它原因，使微球表面在交联后还空出许多反应基团时，这些基团又可以与相连微球上的蛋白反应，结果是把球又拉在一起了，所以有聚集。
可以加一些阻断剂解决,常见的是BSA，另外，也可提高微球的交联率。
但为什么是过一段时间后才出现凝集呢，这是因为微球偶联上蛋白后，相互之间由于携带同种电荷的关系，比较稳定（所以能以胶体样存在），只有当偶尔相互碰撞，遇上彼此的反应基团时才能结合。
jsr 微球直径 表面电荷密度与羧基含量的计算
jsr 微球直径表面电荷密度与羧基含量的计算一、引言近年来，JSR微球作为一种重要的无机材料，在多个领域得到了广泛应用。
由于其具有粒径小、比表面积大、分散性好等优点，JSR微球在催化剂载体、药物传递、吸附剂、电容器等领域展现出了良好的应用前景。
在JSR微球的应用过程中，其直径、表面电荷密度和羧基含量等性质参数对其性能具有重要影响。
因此，对JSR微球直径、表面电荷密度和羧基含量的准确测量和计算是十分必要的。
二、JSR微球的基本特性JSR微球是指由日本石油公司（JSR株式会社）开发的一种无机材料，其具有高比表面积、高孔隙率和高机械强度的特点。
JSR微球的制备方法主要包括溶胶-凝胶法、沉淀法、微乳液法等。
在制备过程中，可以通过控制原料的种类、浓度、反应温度和时间等参数来调节JSR微球的粒径、形貌和化学组成。
三、JSR微球的直径计算JSR微球的直径可以通过显微观察法和光子相关光谱法进行测量。
显微观察法是通过显微镜观察微球的粒径大小，并采用图像分析软件进行粒径测量。
光子相关光谱法是通过测量微球颗粒的散射光子相关函数来推算粒径分布，具有测量速度快、精度高的优点。
具体计算公式可以根据不同的测量方法进行推导。
四、JSR微球的表面电荷密度计算表面电荷密度是衡量JSR微球表面电荷量的一种物理量，可以通过电泳法进行测量。
电泳法中，JSR微球在电场作用下会发生迁移，其迁移率与表面电荷密度成正比。
通过测量微球的迁移率和溶液的离子强度，可以计算出微球的表面电荷密度。
具体计算公式可以根据电泳理论进行推导。
五、JSR微球的羧基含量计算羧基含量是JSR微球表面的一种重要化学性质，可以通过滴定法进行测量。
滴定法中，可以采用酸碱滴定或者电位滴定等方法，通过滴加滴定剂与微球表面的羧基发生反应，记录滴定曲线并计算终点时滴定剂的浓度。
结合已知的微球质量和滴定剂的反应系数，可以计算出微球表面的羧基含量。
具体计算公式可以根据滴定理论进行推导。
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/scientific/products/particle-characterization/technology/zeta-potential/
6
How to redisperse aggregated particles
⇒ Sonication !
・ Mechanism of dispersion is different ・ Ultrasonic wave is generally using ・ Temperature control is important to avoid denature of antibody
cardiac
cancer other
19
10 ug/mL
100 ug/mL
1000 ug/mL
main
particle size
0.2um ～
0.45um
0.2um ～
0.35um
0.06um ～
0.2um
清聴感謝
“Blockmaster”,”IMMUTEX” are registed Trademarks of JSR Corporation in Japan, People's Republic of China.
30-60min Supernatant
Stirring（RT～37℃）
Antibody sol （1Vol） （Quantity;10～200μg/mg-LTX,１hr） EDC sol COOHx1～50 equivalent quantity
Centrifugation
-CONH-
-COOH
Blocking(pH7.2-8.5,1-2hr、BSA:1-2%,Blockmaster CE210, CE510) Redisperse by Vortex etc.
Scale up
14
△
○
Purification process and calibration curve
15
Profits of our latex particles
Ready to use. No need to wash.
Without purification After purification
Stirring（RT～37℃）
Supernatant
Centrifugation
R2 Buffer
Redisperse by ultrasonic wave
Latex Reagent
(4)
Absorbance of each steps of making latex reagents
(3)
(2)
Notes for developing ＆ manufacturing
latex reagents
1
Principle of latex photometric Immunoassay
Serum（Ag）
λ
I0
Cuvette
(Intensity)
I0
A=In(I0／ Iｔ)
Iｔ
T0
Tt
Absorbance R2
⇒ No worry to change other lots.
2year
JSR Life Sciences is No.1 supplier of latex in Japan.
17
Products & Samples List
Wide range Type
middle range Type
High sensitive Type
12
Purification Process of making latex reagents
Centrifugation
Pellet
Remove
Tangential flow filtration(TFF)
Wash out Hollow fiber
Pump
Circulation
13
Ref) /filtration/
R1＋
(T)
T0
2
Iｔ （T)
Tt
Characteristics of IMMUTEXTM
1) Uniform size of polystyrene particle for IVD 0.06um-0.45um
2) Plan type & Carboxylated PSL Plan type :Physical adsorption Carboxylated PSL: Covalent conjugation using EDC
18
Required range & particle size
0.1
1
ng/mL ng/mL
No item
10 ng/mL
100 ng/mL
1 ug/mL
1 PSA 2 PGⅡ 3 PGⅠ 4 AFP 5 FER 6 Mb 7 U-β2M 8 Cys-C 9 CRP 10 S-β2M 11 D-dimer 12 RBP
(1)
(4)
OD570 of every step shows ultra sonication can redisperse completely.
(※) Blockmaster™or BSA in R2 buffer help long-term stability.
9
Calibration curvcation
Zeta potential is an important factor to understand stability of particle.
The absolute value of zeta potential is higher, the particle is more stable.
+EDC
CH3CH2N=C=NCH2CH2CH2NCH3 HCl
NHOC
OSO3-
OSO3-
PSL－ COOH
CONH OSO3-
CONH
4
Covalent conjugation（１step）
Latex(0.5％×1Vol) Buffer（EX：MES, HEPES、pH6-7.5)
-COOH
30-60min
Polystyrene Latex
OSO3-
OSO3-
PSL
OSO3-
Physical adsorption
OSO3-
OSO3-
PSL
OSO3-
Carboxylated Polystyrene Latex
adsorption
OSO3-
COO-
COO-
PSL－ COOH
OSO3-
OSO3-
COO-
Covalent conjugation
Antibody
-----
-
-----COO-
EDC・HCl
--
--
--COO-
--- - -
Zeta potential (mV) about 40%Down
The absolute value of zeta potential go down when using EDC, antibody adsorption
30-60min
Stirring（RT～37℃）
Aggregation is likely to occur at this step!
Supernatant
Centrifugation
R2 Buffer
Redisperse by ultrasonic wave Latex Reagent
5
Why is aggregation occurred?
Background is high
Sonication is very useful to make good latex reagent.
10
Effect of Temp, pH and EDC at sensitization
Antibody denatured!
11
γ: μg/mg-beads
3) Customized grade is available
COOα
β
OSO3-
COO -
Density：1.05
Refractive Index :1.59
Pure water＋0.09%NaN3
3
TEM Photograph
Methods of Antibody conjugation
IMMUTEXTM is PSL designed as “ready to use” and have most suitable surface to immobilize antibodies
Ultrasonic wave
Temperature control
Homogenizer Orifice Tube Temperature control 7
Absorbance
Checking dispersion level of particles
①
③ it’s time to finish!!
Using TFF purification ⇒ Max 20L> / day
merits and demerits
Small particle processing
Centrifuge TFF
△
◎
Multi preparation
○
△
Small scale preparation
○
△
Ref) /filtration/