胶乳微球的方程式
胶乳微球吸附原理
６. 将计算需求量的ＥＤC溶液加入到上述微球悬液中。(Ｎoｔｅ 6)．ﻫ7. 室温下，立即调节pH （Nｏte ７)．ﻫ8. 移除未结合的蛋白，并将包被微球用storage buffer重悬。(Nｏｔｅ 3 and 4)
3. 清洗：MES buｆfeｒ或DＩW清洗 两次;(Note3)；ﻫ4. 用DIＷ冲悬浮微球到浓度为１%；
5. 同时，用包被buffeｒ溶解稀释抗体。buｆfer一般为ph7~９,５０mM~１00mM。最终的蛋白浓度1mg／mＬ;
6. 清洗完微球后，立即加入一定体积的抗体溶液。(Notｅ 2)。(注意：此处给出的例子，微球浓度和蛋白浓度和ｂｕfｆer分别为０.5%（w/v),０.５mg／mＬ,２5～50mＭ）；ﻫ7. 室温下搅拌孵育２hr；ﻫ8． 每ml反应液中加入2.5ｍl 乙醇胺,室温搅拌孵育10~30mｉn;ﻫ9． 清洗：ｓｔorａge bufｆｅr清洗两次。（Nｏtｅ 3/4）
2. 每ｍl微球悬液加入20ｍg的EDC，室温孵育２0分钟,然后再次加入２0mg/mL的ＥDＣ,继续室温孵育20分钟。（Notｅ 7).
3. 离心或超滤，用等体积的包被缓冲液清洗两次微球，最后悬浮在包被缓冲液中。(Ｎoｔe 3).
4. 用包被缓冲液溶解抗体到1mg/mL,包被缓冲液pＨ7～9,浓度为50mM～１0０ｍＭ。(Note 1)
NOTＥS：
1． reactｉoｎ buffeｒ的组成根据蛋白种类的不同而改变，常用buｆfer有醋酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MEＳ缓冲液。蛋白在等电点附近更易于吸附到微球上,因为在等电点附近,蛋白表面会有更多的疏水位点暴露出来。在这种情况下，抗体也更紧密,因此需要更多的抗体用于标记到微球上。然而,最终 ｒeactｉon buffer的选择,需要考虑最终抗体微球复合物的生物活性，因此，几个不同浓度的抗体和不同pＨ的反应buffeｒ应该进行优化选择。起始实验，反应bufｆer的离子强度应该在25~５0ｍM。
JSR 胶乳微球
/scientific/products/particle-characterization/technology/zeta-potential/
6
How to redisperse aggregated particles
⇒ Sonication !
・ Mechanism of dispersion is different ・ Ultrasonic wave is generally using ・ Temperature control is important to avoid denature of antibody
cardiac
cancer other
19
10 ug/mL
100 ug/mL
1000 ug/mL
main
particle size
0.2um ～
0.45um
0.2um ～
0.35um
0.06um ～
0.2um
清聴感謝
“Blockmaster”,”IMMUTEX” are registed Trademarks of JSR Corporation in Japan, People's Republic of China.
30-60min Supernatant
Stirring（RT～37℃）
Antibody sol （1Vol） （Quantity;10～200μg/mg-LTX,１hr） EDC sol COOHx1～50 equivalent quantity
Centrifugation
-CONH-
-COOH
Blocking(pH7.2-8.5,1-2hr、BSA:1-2%,Blockmaster CE210, CE510) Redisperse by Vortex etc.
体外诊断试剂胶乳比浊法学习
胶乳免疫比浊法相关知识很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。
本人总结了部分胶乳微球标记技术,并加以分类,以便朋友们查阅：胶乳微球物理吸附：反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。
磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2,因此在酸性pH保持稳定.醛基微球表面也带有磺酸基团,但能和蛋白行程共价键。
羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5。
0以上时保持稳定。
带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法.这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。
疏水吸附方法只能用于疏水微球(硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球)。
醛基表面修饰微球是一个特例,其疏水吸附结果取决于后来的共价结合.虽然物理吸附是不依赖pH的,但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率.一般,在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。
反应步骤：1.用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml；2.用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；3.将蛋白溶液加入到胶乳微球溶液中,10ml胶乳中加入1ml蛋白溶液。
室温搅拌孵育2hr；4.离心或超滤，除去未结合蛋白；5。
将微球蛋白复合物用储存缓冲液溶解。
注意事项：1.最优蛋白标记量影响因素1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值得增加；2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用；3）免疫反应:最近标记量由免疫反应需要决定。
2.胶乳微球中加入蛋白后，快速搅拌混合，利于反应均衡.反应体积是1ml时，可用移液器吸取蛋白加入微球中,并吹打数次.如果反应体积较大时，用烧杯，边搅拌边加入蛋白，3.储存缓冲液和反应缓冲液不同时，抗体有脱落的可能；4.表面活性剂能使得抗体从胶乳中脱落,所以应避免加入。
Protocol1一步法偶联胶乳微球与抗体
1. Dissolve the protein to be modified at a concentration of 1–10 mg/ml in 0.1 M sodium phosphate, pH 7.4. NaCl may be added to this buffer if desired. For the modifi cation of keyhole limpet hemocyanin (KLH; Thermo Fisher) as described by Staros et al., 1986, include 0.9 M NaCl to maintain the solubility of this high-molecular-weight protein.If lower or higher concentrations of the protein are used, adjust the amounts of the other reactants as necessary to maintain the correct molar ratios.2. Dissolve the molecule to be coupled in the same buffer used in step 1. For small molecules, add them to the reaction in at least a 10-fold molar excess over the amount of protein present. If possible, the molecule may be added directly to the protein solution in the appropriate excess. Alternatively, dissolve the molecule in the buffer at a higher concentration, and then add an aliquot of this stock solution to the protein solution.3. Add the solution prepared in step 2 to the protein solution to obtain at least a 10-fold molar excess of small molecule to protein.4. Add EDC (Thermo Fisher) to the above solution to obtain at least a 10-fold molar excess of EDC over the amount of protein present. Alternatively, a 0.05–0.1 M EDC concentrationin the reaction usually works well. Also, add sulfo-NHS (Thermo Fisher) to the reaction to bring its final concentration to 5 mM. To make it easier to add the correct quantity of EDC or sulfo-NHS, higher concentration stock solutions may be prepared if they are dissolved and used immediately. Mix to dissolve. If this ratio of EDC/sulfo-NHS to peptide or protein results in precipitation, scale back the amount of addition until a soluble conjugate is obtained.5. React for 2 hours at room temperature.6. Purify the conjugate by gel filtration or dialysis using the buffer of choice (for many conjugates 0.01 M sodium phosphate, 0.15 M NaCl, pH7.4 is appropriate). If some turbidity has formed during the conjugation procedure, it may be removed by centrifugation or filtration.。
胶乳微球吸附原理
胶乳微球物理吸附反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。
磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。
醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。
羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5.0以上时保持稳定。
带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。
这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。
疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。
醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。
虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。
一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。
反应步骤：1. 用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml；2. 用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；3. 将蛋白溶液加入到胶乳微球溶液中，10ml胶乳中加入1ml蛋白溶液。
室温搅拌孵育2hr；4. 离心或超滤，除去未结合蛋白；5. 将微球蛋白复合物用储存缓冲液溶解。
注意事项：1. 最优蛋白标记量影响因素1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值得增加；2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用；3）免疫反应：最近标记量由免疫反应需要决定。
2. 胶乳微球中加入蛋白后，快速搅拌混合，利于反应均衡。
反应体积是1ml时，可用移液器吸取蛋白加入微球中，并吹打数次。
如果反应体积较大时，用烧杯，边搅拌边加入蛋白，3. 储存缓冲液和反应缓冲液不同时，抗体有脱落的可能；4. 表面活性剂能使得抗体从胶乳中脱落，所以应避免加入。
微球共价结合抗体方法一、一步法1. 准备50mM pH 6.0的reaction buffer，醋酸或MES buffer更合适2. 用reaction buffer溶解抗体，使其浓度为1mg/mL。
聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法
聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法聚苯乙烯（PS）是一种热塑性树脂，具有较高的硬度、透明度和抗冲击性能。
然而，由于其具有较高的比重和生产成本，使其应用受到一定的限制。
近年来，聚苯乙烯胶乳微球（PSL）因其具有较低的比重、优异的加工性能和低成本等优点而备受关注。
本文将会介绍聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法。
一、聚苯乙烯胶乳微球聚苯乙烯胶乳微球是聚苯乙烯水乳液通过聚合和微球化产生的胶乳乳液，其粒径通常为几十纳米到数百纳米。
它将聚合物的优异性能和乳胶的良好加工性能结合在了一起，成为了一种理想的材料选择。
在工业上，聚苯乙烯胶乳微球广泛应用于轻质填充材料、油墨沉淀剂、聚合物乳液增稠剂、表面涂装剂等领域。
其中，作为轻质填充材料，PSL在汽车、航空、建筑等行业应用广泛，能够有效降低材料重量，减少燃料消耗。
二、制备方法1. 乳液聚合法乳液聚合法是制备聚合物微球最为常用的方法之一。
通常，首先通过有机溶剂或水相制备聚合物乳液，再通过乳液聚合来制得具有所需性质的聚合物微球。
该方法具有操作简单、制备量大、适用性广等优点。
2. 溶剂挥发法溶剂挥发法是通过添加低挥发性溶剂将聚合物溶解成溶液，然后将溶液加入高挥发性溶剂中，利用溶剂与大气之间的压力差使得小液滴形成，并通过溶剂挥发的过程形成微球。
该方法制备的微球形态规则、分散性好，但成本较高。
3. 原位乳化法原位乳化法是在单体溶液中通过引入促进乳化的表面活性剂，形成微小乳珠，随后开始聚合并逐渐增大，最终形成微球。
该方法具有操作简单、反应体系稳定等优点，但微球的粒径还存在着一定的不均匀性。
本文介绍了聚苯乙烯胶乳微球及其制备方法。
聚苯乙烯胶乳微球因其具有较低的比重、优异的加工性能和低成本等优点，目前在轻质填充、油墨、增稠剂等领域得到了广泛的应用。
制备方法有乳液聚合法、溶剂挥发法、原位乳化法等。
一种plga微球的制备方法
一种plga微球的制备方法随着生物医学领域的发展，PLGA（聚乳酸-羟基丁酸共聚物）微球作为一种重要的药物载体，在药物传递和组织工程等方面得到了广泛应用。
然而，PLGA微球的制备方法对于微球的质量和性能具有重要影响。
本文介绍了一种简单、高效的PLGA微球制备方法，该方法可用于制备不同尺寸和形状的PLGA微球，以满足不同的应用需求。
材料与方法材料：PLGA（50:50，分子量为10,000）、聚乙烯醇（PVA，分子量为9,000-10,000）、乙酸乙酯、石油醚、无水乙醇、荧光素（用于荧光显微镜观察）方法：1. 制备PLGA溶液：将PLGA加入乙酸乙酯中，浓度为10 mg/mL。
在磁力搅拌器上搅拌至PLGA完全溶解。
2. 制备PVA溶液：将PVA加入无水乙醇中，浓度为1%。
在磁力搅拌器上搅拌至PVA完全溶解。
3. 制备PLGA微球：将PLGA溶液滴加入PVA溶液中，以形成水-油-水（W/O/W）乳液。
使用高速离心机将乳液离心，以分离出PLGA 微球。
用石油醚洗涤PLGA微球，去除残留的乙酸乙酯和PVA，并用无水乙醇再次洗涤PLGA微球。
最后，用荧光素标记PLGA微球，以便在荧光显微镜下观察。
结果与讨论通过上述方法，制备了不同尺寸和形状的PLGA微球。
通过调整PLGA和PVA的浓度，可以控制微球的大小。
例如，当PLGA浓度为10 mg/mL，PVA浓度为1%时，制备的PLGA微球平均直径为20 μm。
当PLGA浓度为5 mg/mL，PVA浓度为1%时，制备的PLGA微球平均直径为10 μm。
此外，通过改变乳液的搅拌速度和时间，还可以制备不同形状的微球，如球形、椭圆形和棒状等。
为了评估制备的PLGA微球的质量和性能，进行了荧光显微镜观察和扫描电子显微镜（SEM）分析。
荧光显微镜观察表明，标记的PLGA 微球具有良好的荧光性能，可以用于药物追踪和显微镜观察。
SEM分析表明，制备的PLGA微球表面光滑，形状规则，没有明显的缺陷和孔洞，符合要求的微球形态。
乳液聚合聚苯乙烯微球 ppt
三：实验部分
3.1 实验步骤
乳液法制 备聚苯乙 烯微球
3.2 表征和测量 3.3 微球粒径的影响因素分析 3.4 破乳剂的初步选择分析
3.1 实验步骤
0 2 0 1
03
将上述制备得到的乳液转移至烧杯中，边 搅拌边滴加50%氯化锂水溶液10ml，使 乳液破乳，将破乳后的乳液在布氏漏斗中 用微孔滤膜减压抽滤， 用蒸馏水和无水乙 醇交替洗涤、抽滤，重复3 次，将产品置 于真空烘箱内60℃干燥24 h，得到纯净 的白色粉末状微球
五：实践心得
本次专业实践让我收获良多。 本次专业实践，是我第一次独立地进行一次完整的化学实验，包括了实验 前的资料查找，实验选题、设计、实验、得出结论等等环节。在这个过程中 我学到了很多知识，熟练掌握一些仪器的基本操作，更深入地理解了以前学 习的一些未解之处，但同时，也由此认识到自己的很多不足。 在实验过程中，我第一次如此直观、切身的感受到一个科学工作者的科研 生活。在这个过程中，文献的查找极大的锻炼了我对于本学科的信息检索能 力。实验设计更是对我以前所学知识的一个综合考验。这次的专业实践使我 对自己的不足有了一个非常直观的认知，在我以后的求学生涯中，我也会时 时刻刻谨记这些不足，务必要把知识学懂，学透。再说真正地进行实验，我 以前所做的实验都是老师们设计好的，基本上都能很顺利地做出一个不错的 结果，但是真正的科研不是这样，他会遇到很多问题，会失败很多次，但你 要懂得如何寻找问题，发现问题以及解决问题，这是一个科研工作者的基本 素质。 这次的专业实践让我明白了一个科研工作者需要的不仅仅是扎实的知识积 累，更需要一种能吃苦耐劳的精神，这是足够我受用一生的收获。经过这次 为期三周的专业实践，我收获了许多，也发现了许多自己的不足。虽然时间 不长，但是我得到了许多能够获益一生的收获，这才是最大的成果。
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M. Surface Saturation (Protein)
6
S=
•C
ρS d
where: S = amount of representative protein required to achieve
surface saturation (mg protein/g microspheres) ρS = density of solid sphere (g/cm3)* d = mean diameter (µm)*
J. Settling Velocity (In Water)
Vm = 5.448 x 10-5 • (ρS - 1) • d2
where: Vm =
ρS = d =
maximum settling velocity (cm/sec) for a single microsphere settling in water at room temperature under the influence of normal gravitational force (1G) density of solid sphere (g/cm3)* mean diameter (µm)*
I. Introduction
Values obtained through use of the following equations should be considered estimates, as the equations are based upon a number of theoretical assumptions. Values that are determined empirically or through use of analytical techniques are expected to differ to an extent. Some values (designated with an *) are provided on the Certificates of Analysis and order paperwork that accompanies microsphere shipments.
III. Sample Values
the microsphere population) SD = standard deviation (µm)* (Note: Standard deviation is
IV. References
not provided for all products.) d = mean diameter (µm)*
1.004 • DC • ρS • d
where: P = parking area (Å2/charge group)* DC = surface charge density or titration value (meq/g)* (provided in µeq/g on COA) ρS = density of solid sphere (g/cm3)* d = mean diameter (µm)*
TechNote 206
Equations
9025 Technology Dr. • Fishers, IN 46038-2886 800.387.0672 • 317.570.7020 • Fax 317.570.7034
info@ •
BEADS
A B O V E T H E R E S T™
ent of variation (size)
area (surfaCcoencthearngtesdensity)
H. # Charge groups / microsphere
I. Settling velocity (speBc.ify m%eCdoiuemff)icient of Variation (Size Distribution of the Microsphere J. Settling velocity (in water)Population)
where: v =
d =
ρS = ρ0 =
h=
G =
settling velocity (cm / sec) mean diameter (µm)* density of solid sphere (g/cm3)* medium density (g/cm3)* medium viscosity (poise = g/cm • sec) gravity (980 cm/sec2)
C = capacity of microsphere surface for a given protein (mg protein/m2 of sphere surface)
I. Settling Velocity (Specify Medium)
1
10-6
v = 18 d2 (ρS - ρ0) h G
II. Equations
A. Solids Content*
m • 100
S=
OR m =
VS
S•V S 100
where: S = weight % solids*
V = volume of suspension (mL)* S
m = mass of microspheres (g)*
Notes: a. b.
Surface titer / parking area are not provided for all products. For a detailed description of parking area, see “The Particle Doctor®” section of our March 2001 issue of Painless Particles®, which may be downloaded from our website, .
C. # Microspheres/Gram*
6 x 1012 N=
π • ρS • d3
where: N =
ρS = d =
# microspheres/gram for dry powders* density of solid sphere (g/cm3)* mean diameter (µm)*
Notes: a. C ~ 3 mg/m2 for BSA [MW 65kD], C ~ 2.5 mg/m2 for bovine IgG [MW 150kd].1 b. See Tech Note 204, Adsorption to Microspheres, and TechNote 205, Covalent Coupling, for more detailed information.
room temperature under the influence of normal
gravitational force (1G) Vch5% = hindered settling velocity in the centrifuge (cm/sec) for a 5% w/w suspension of microspheres settling in water at
Bangs Laboratories, Inc. TechNote 206
Rev. #005, Active: 19/March/2013
<< COPY >>
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TECH NOTE 206
G. Parking Area (Surface Charge Density)*
1 P=
h = distance from the top of the liquid to the bottom layer of
settled solids (cm) Vh5% = true settling velocity or hindered velocity (cm/sec) for a 5% w/w suspension of microspheres settling in water at
I. Introduction II. Equations
A. Solids Content B. % Coefficient of Variation (Size Distribution of Microsphere Population) C. # Microspheres/Gram D. # Microspheres/mL E. Surface Area/Gram F. Surface Area/mL G. Parking Area (Surface Charge Density) H. # Charge Groups/Microsphere I. Settling Velocity (Specify Medium) J. Settling Velocity (In Water) K. Settling Velocity (In the Centrifuge) L. Settling Time M. Surface Saturation (Protein) III. Sample Values IV. References
F. Surface Area / mL*
A = 6 x 1010 • S • ρL ρS • d
where: A =
S =
ρL = ρL = ρS = d =
surface area / mL for suspensions in water (µm2/g)* weight % solids (for 10% solids solution, S=10)* density of microsphere suspension (g/mL)* 100 • ρS / [S (1-ρS) + (100 • ρS)] density of solid sphere (g/cm3)* mean diameter (µm)*