鸡胚在医学中的应用
鸡胚在医学中的应用摘要：鸡胚是研究动物发育的重要模型，已被大量用于医学各个学科的研究。
对鸡胚的研究可以追溯到古希腊著名的博物学家亚里士多德，之后被很多生物学家予以深入的研究。
现在对鸡胚发育的过程已有清楚的了解和认识。
鸡胚在疫苗的开发和研究中更是有着不可替代的作用。
本文主要阐述了鸡胚胎在发育生物学、肿瘤、神经、干细胞和免疫等研究领域中的应用。
关键词：鸡胚；发育；肿瘤；神经；干细胞；免疫正文：1鸡胚与发育生物学鸡胚在发育生物学上作为一个重要模型系统已具有悠久的历史，一个多世纪以来，鸡胚已经成为洞悉发育过程和胚胎细胞命运的一个经典实验模型。
随着生物技术的发展，如体内电穿孔技术、胚胎干细胞、新的转基因技术和基因组测序完成等，这些已经使鸡胚模型系统已变得更加强大，再结合传统的移植和世系追踪等技术，鸡胚已成为最优秀的实验系统之一[1]。
随着模式生物鸡的基因资源增加、胚胎的易得性和RNA干扰方法的应用，这些都使研究胚胎发育中众多基因的功能变得简单容易。
因此，鸡胚也成为众多对基因功能感兴趣的脊椎动物学家首选的研究系统[2]。
2 鸡胚和肿瘤宫颈癌是一种严重威胁女性健康和生命安全的恶性肿瘤[3,4]，近年来宫颈癌的治疗手段有了改进，但其生存率仍然有待提高，宫颈癌的动物模型对提高宫颈癌的实验研究水平具有重要意义。
有人用BALB／c~nude、SCID小鼠或大鼠作为人宫颈癌移植瘤的动物模型[5,6,7]。
鸡胚作为人类疾病模型有许多优点[8]，有人把鸡胚作为其它癌细胞如人结肠癌细胞系HT-29、成釉细胞瘤细胞、骨肉瘤细胞移植受体[9,10]，或作为肿瘤新生血管形成、肿瘤侵袭和远处脏器转移潜能，以及抗肿瘤药物作用机制探讨等方面研究的体内实验模型[11]，为建立宫颈癌鸡胚模型提供了可能性与借鉴方法。
3 鸡胚和神经生物学3.1建立鸡胚神经管缺陷模型鸡胚胎内注射氨甲喋呤(MTX)，制作鸡胚神经管缺陷动物模型。
鲍南、施诚仁等选用上海农业科学院“菜杭”鸡的受精蛋552枚，分成3组，分别为药物(MTX)注射组、生理盐水注射对照组及正常对照组。
药物注射时间选择在鸡胚孵化第2-7d，MTX剂量分别为0.01、0.02、0.05、0.l及0.25mg/kg。
孵化3周后观察结果。
结果孵育第3~6d注药的鸡(剂量为0.01、0.02、0.05及0.lmg/kg)有神经管缺陷畸形产生，为脑膜脑膨出、骶尾骨退化等[12]。
3.2 提取鸡胚内神经营养活性物质及其生物活性陈姝、何蕴韶等采用不同截留分子质量的超滤膜将不同胚龄的鸡胚内的蛋白分离提取，分成不同分子质量的蛋白组分，采用原代海马神经元和鸡胚背根节体外培养技术进行神经营养活性的分析与鉴定，发现不同胚龄的鸡胚相对分子质量Mr>50*103，的蛋白组分体外培养的海马神经元较对照组神经元存活数目多，存活时间长，突起粗而长，表明鸡胚相对分子质量Mr>50*l03蛋白组分可以维持和促进海马神经元的存活、生长．促进神经元之间的连接。
值得注意的是相对分子质量Mr>50*l03蛋白组分可以明显改变神经元胞体的形态，胞体截面积较对照组明显增大，表明对神经元也有较强的促分化的作用。
胚龄El6与El9的蛋白组分的促神经存活、分化与突起生长的作用较El2更加明显，提示随着胚龄的增加，具有神经营养活性的此蛋白组分的含量有增加的趋势。
免疫组化方法揭示鸡胚相对分子质量Mr>50*l03的蛋白组分对于神经细胞的作用有高度特异性。
本实验结果显示鸡胚相对分子质量Mr>5*l03蛋白组分除对中枢神经元的明显营养作用外．对外周神经背根节也有明显的促神经突起生长的作用[13,14,15,16]。
4 鸡胚和胚胎干细胞4.1 鸡胚胎干细胞的离体培养体系4.1.1 鸡胚胎干细胞的分离由于鸡的胚胎发育特点，受精卵排出体外时巳处于胚胎发育的X期，形成了具有约60000个细胞的盘状囊胚，相当于哺乳动物的囊胚期，因此并不能像哺乳动物那样从内细胞团来获得ES细胞。
1990年，Petitte J N等首次将分离的芦花鸡X期胚盘细胞注入白莱航鸡胚胎，获得芦花鸡与白莱航鸡的种系嵌合体，Naito M等(1991)采用同样方法获得了鹌鹑与鸡的种间嵌合体。
随后大量实验证明，X期胚盘细胞具有发育的全能性，可参与各种组织的形成。
Pain B等[17]利用鸡X 期胚盘细胞首次成功培养出鸡ES细胞，细胞传至35代仍具有全能性，并获得种系嵌合体鸡。
Park TS等[18]从5.5d鸡胚生殖嵴分离PGCs细胞并在体外培养4个月，成功建立类EG(embryonic germ cells，EG)细胞系。
在国内，安静等[19]、谢蓓等[20]及秦洁等[21]分别成功对X期胚盘细胞及PGCs细胞进行离体培养与传代，在一定传代次数内细胞保持未分化状态，并获得种系嵌合体。
目前，主要通过X 期胚盘分离胚盘细胞或从早期胚胎生殖嵴分离PGCs来培养鸡ES细胞。
胚盘细胞可从X期胚盘的明区经胰酶消化后获得，而PGCs主要是从Ⅺ期～Ⅻ期鸡胚的血液或5.5d鸡胚生殖腺中分离并经Ficoll密度梯度离心法纯化[22]，但这种方法获得的PGCs数量有限，且操作繁琐。
最近Mozdziak PE等口报道了一种新方法—荧光活化细胞分拣法，用胚胎阶段表面特异性抗原SSEA-1(stage-specific embryonic antigens，SSEAs)对细胞进行荧光标记后，可从xⅢ期～xv期胚胎的血液及27期生殖嵴中分离到大量有活性的PGcs，大大提高了分离PGCs的效率口[23]。
4.1.2 鸡胚胎干细胞的离体培养ES细胞离体培养的关键是在保证细胞具备无限增殖能力的同时维持其未分化状态，而胚胎及机体发育过程中分化和分裂增殖一般是同时进行的，因此必须筛选适宜的培养体系，目前主要通过合理设计基础培养基、采用饲养层细胞培养以及添加抑制分化的细胞因子来解决。
4.1.3 鸡胚胎干细胞的鉴定关于ES细胞的鉴定标准有以下几条：①从囊胚内细胞团或原始生殖细胞分离培养获得；②能在体外长期培养且保持未分化状态；③AKP、OCT-4、SSEAs阳性表达，高端粒酶活性；④在体内或体外具有多向分化的能力；⑤长期培养后仍能维持正常的二倍体核型。
鸡ES细胞可通过形态学、APK活性、SSEAs检测、分化实验、嵌合体试验等方法进行鉴定[24,25]。
5 鸡胚和免疫学眼一泌尿生殖道衣原体是一种具独特生活周期的专性真核细胞内寄生性原核微生物[26]。
大规模培养和纯化一直是其研究过程中的困难所[27]。
1965年Gordon建立的McCoy细胞培养法是分离培养眼一泌尿生殖道衣原体的较好方法。
郭建巍、周学良[28]将Co．在McCoy细胞中扩大培养至50以上细胞形成包涵体以后用细胞培养物接种7日龄鸡胚卵黄囊，用此二步法来制各实验用的抗原。
通过第一步，oC．可在McoC y细胞中增殖生长，不但提高了Co．的数量，而且在48小时左右形成较多具传染性的原体。
用它来感染鸡胚．使鸡胚对Co．的敏感性提高，比较短的时间内出现充血、水肿至死亡。
McCoy细胞培养法与鸡胚卵黄囊接种法联合用于Co．的培养，不但克服了单纯用McCoy细胞培养中操作过程复杂，容易污染，抗原收获量小的缺点，而且也解决了Co．在鸡胚卵黄囊中死亡不规律．接种量大造成的毒种易于丢失等不足，同时在两种宿主体内交替传代还可避免Co．毒性的下降，在比较短的时间里可获得较多的抗原。
随着鸡基因组学和鸡胚胎体外操作技术的不断发展和完善，鸡胚胎在生命科学研究中的地位必将越来越受到研究者的广泛重视和偏爱，相信在不久的将来鸡胚能够发挥更大的实验模型作用，并最终为人类医学和畜牧业的发展和应用贡献更大的力量。
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病毒的鸡胚培养法接种途径
新乡医学院微生物学教研室 监督电话:3029945 Email:jcbwsw@
内容提要
一 抗酸染色 二 病毒的接种技术 三 真菌菌落的观察 （小白鼠和鸡胚共用注射器16支，病毒悬液用 锥蓝染液代替，小白鼠8只，鸡胚15只，微 量移液器4支，真菌示教培养管4支）
缺陷：带毒，缺敏感动物。
常用动物：鼠、家兔、猴和羊等。
接种的途径：脑内、鼻内、皮内、腹腔内和静
脉注射等。
1 病毒的动物接种
目的 了解病毒的动物接种法 材料 小白鼠（1~3天或3周龄）， 乙型脑炎 病毒悬液， 1ml注射器（8支），碘酒 ， 棉签，眼科剪等
小白鼠的脑内接种（共8只小白鼠）
病毒的培养
病毒的概念：形态最小，结构最简 单的微生物。缺乏完整的酶系统， 无完整的细胞结构，必须在活的组 织细胞中才能增殖。
常用的分离、 培养、鉴定 病毒的分离培养 病毒的方法
动物接种法
鸡胚培养法
组织细胞培养法
动物接种（Animal inoculation）
最早应用的病毒培养法。 用途：分离鉴定、传代、制备免疫血清。
本次实验不做培养，接种完病毒，可将 鸡胚去除部分卵壳后，小心将卵壳内组 织倒入平皿中，观察接种的病毒替代液 （锥蓝染液）是否接种部位正确及各膜 囊等的组织结构。
注意事项
消毒小白鼠时不要碰到眼睛
注射时不要扎的太深以免扎到手
磨卵壳及钻孔时力量要适中
看过的鸡胚不要倒入水池，倒入指定的 大烧杯中
菌落光滑、湿润；无菌丝 隐球菌菌落 外观和酵母型菌落相似，显微镜下可看到假菌丝 白色念株菌菌落 菌落系由多细胞菌丝体所组成 大多数丝状真菌或霉菌的菌落
〖医学〗流感病毒的分离鉴定
(2)取尿囊液0．1mL,作1：10稀释。
(3)取10支小试管，按给各管参加生理盐水。
(4)取1：10稀释的尿囊液0．2mL，加人第1个试管 中，混匀后，再吸出0．2mL参加第2个试管中； 混匀后，从第2个试管吸出0．2mL参加第3个试 管……依次作倍比稀释至第九管，混匀后自第9 个试管中取出0．2mL弃掉。这样各管液体量均 为0．2mL，从第1-9个试管的尿囊液稀释度为 1:20，1:40，…，1:5120，第10个试管为生理 盐水对照管。
+－
－
－
→→ → → → → → →→
㈠ ㈡ ㈢ ㈣ ㈤㈥ ㈦ ㈧ ㈨㈩
试管号 10
12 3 4 5
67
8
9
生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
0.2
0.2
病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
0.2
弃0.2
病毒稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 对照
不 管 是 中 医学 还是西 医学， 从二者 现有的 思维方 式的开 展趋势 来看， 均是走 向现代 系统论 思维， 中医药 学理论 与现代 科学体 系之间 具有系 统同型 性，属 于本质 相同而 描述表 达方式 不同的 两种科 学形式 。可望 在现代 系统论 思维上 实现交 融或统 一，成 为中西 医在新 的开展 水平上 实现交 融或统 一的支 撑点， 希冀籍 此能给 中医学 以至生 命科学 带来良 好的开 展机遇 ，进而 对医学 理论带 来新的 革命。 编 辑 本 段 现 代中医 史
《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验
《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验实验动物在病原微生物中的研究上占有重要地位。
利用实验动物可以进行病原菌的分离鉴定、毒力的检测、制备免疫血清等生物制品；进行各种皮肤试验；建立人工感染的动物模型；进行发病机制、疾病防治以及免疫机制的研究等。
一、实验动物的管理1．实验室常用的动物：家兔、豚鼠、小白鼠、大白鼠、地鼠、绵羊、鸡等，根据实验的目的选择最适宜的动物。
2．实验动物必须与正常动物分开饲养，动物室内要经常保持清洁和空气畅通，并应有防蚊、防蝇、防逃跑及保暖设备。
3．实验动物要精心饲养，喂以适当的饲料并给以充足的水，任何动物也不要断水。
4．实验动物要有详细的记录，包括性别、体重、体表特征(如毛色等)、接种材料、接种日期、接种途径、剂量、次数以及接种变化等。
5．实验动物应做好标记，对较大动物如家兔、豚鼠等可用金属号码牌固定于耳朵上，对较小动物如大白鼠、小白鼠等可用复红(或苦味酸等染料)涂于身体的不同部位，以资识别。
盛装动物的笼具等，也应付以标签。
6．接种后的动物应每天观察1～2次，注意动物的精神状态，活动能力、饮食和大小便情况，体温、注射部位的反应以及全身反应，如不安、耸毛、震颤、弓背、麻痹及死亡等，并应详细记录之。
7．感染动物死亡后，应立即剖检或暂时冻存。
动物的排泄物及使用的笼具等必须严格消毒。
任何用过的动物，不宜再做其他试验。
二、实验动物的选择选择实验动物应注意以下几点：1．易感性：是选择实验动物的首要条件。
2．动物健康：体质健康、发育正常、体重适宜；最好使用自己繁殖的动物，由市场购买的动物至少经过一周的隔离观察，证明无隐性感染方可使用；某些特殊实验应需选用专门喂养繁殖的无菌动物；实验动物应容易获得，便于喂养和管理。
3．动物大小：同一实验应选用大小一致的动物，通常以年龄或体重为标准。
4．性别：某些实验最好选用同一性别，特别是免疫的动物和需要观察较长时间的实验动物。
5．动物品系：某些实验要求使用纯系动物，纯系小鼠用于免疫学、杂交瘤及病毒感染等研究。
常用实验动物在生物医学研究中的应用
最早用于这方
表 1 其他常用实验动物在生物医学研究中的应用
畜牧兽医科技信息
2013 年第 07 期 7
专论与综述
面研究的动物即家免，如利用纯胆固醇溶于植物油中喂饲家 兔，可引起家兔典型的高胆固醇血症，主动脉粥样硬化病、冠 状动脉硬化病。
大鼠对营养物质缺乏敏感，可发 生典型缺乏症状，是营养学研究使用最早、最多的实验动物。
大鼠常用于药物毒力、药效评价、新药筛 选等研究。
可复制成各种肿瘤模型，是肿瘤实验研究 最常用的实验动物之一。易患肝癌，可用二乙基亚硝胺、二甲 基偶氨苯（DAB）复制大鼠肝癌，用甲基苄基亚硝胺诱发复制 大鼠食管癌等。
大鼠是研究支气管肺炎、副伤寒的重要实 验动物。对流感病毒、麻疯、霉形体、巴氏杆ห้องสมุดไป่ตู้、葡萄球菌、念 珠菌、黄曲霉菌等比较敏感，适合复制多种细菌性和病毒性
吸虫、锥虫、疟疾等寄生虫病的研究。 许多近交系小鼠自发性肿瘤发病率很
高，与人体肿瘤接近，进行药物筛选比移植性肿瘤可能更为 理想。另外，严重免疫缺陷小鼠，如裸鼠、SCID 小鼠可接受各 种人类肿瘤细胞的植入，直接用于人类肿瘤生长、转移及治 疗的研究。
小鼠毛色变化多样，其遗传学基 础已研究得比较清楚，因此常用小鼠毛色做遗传学分析。此 外，许多小鼠具有遗传疾病，如小鼠黑色素瘤、家族性肥胖、 遗传性贫血、尿崩症等，这些疾病与人类发病相似，可用作人 类遗传疾病的动物模型。
用于某些药物或毒物对胎儿后期发育影响的实验；由于豚鼠 对组织胺敏感，能引起支气管痉挛性哮喘，常用于平喘药和 抗组织胺药物的研究等。
211181479_鸡胚地龙贴膏联合双醋瑞因治疗早中期膝骨关节炎的临床观察
·药物与临床·鸡胚地龙贴膏联合双醋瑞因治疗早中期膝骨关节炎的临床观察Δ张强 1＊，曹益发 2，胡建山 1，李溥 2，胡静 2，陆耀宇 1，苏军 1，梁子聪 1，杨柱 3 #（1.贵州省黔南布依族苗族自治州中医医院/贵州中医药大学第三附属医院骨伤科，贵州 都匀 558000；2.贵州水族药物开发有限责任公司，贵州 三都 558100；3.贵州中医药大学骨伤学院，贵阳 550025）中图分类号 R 969.3；R 979.9 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）09-1099-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.09.14摘要 目的 探讨鸡胚地龙贴膏联合双醋瑞因治疗早中期膝骨关节炎（KOA ）的临床疗效及安全性。
方法 将100例KOA 患者按随机数字表法分为对照组和试验组，每组50例。
对照组患者口服双醋瑞因胶囊，每次50 mg ，每日2次；试验组患者在对照组治疗基础上给予鸡胚地龙贴膏外贴，每日1次。
两组疗程均为4周，疗程结束后3个月随访。
观察两组患者的临床疗效，治疗前后及疗程结束后3个月随访时的视觉模拟评分法（V AS ）评分、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数量表（WOMAC ）评分、Lysholm 膝关节功能评分，检测膝关节液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、超氧化物歧化酶（SOD ）、丙二醛（MDA ）、一氧化氮（NO ）、软骨寡聚基质蛋白（COMP ）、基质金属蛋白酶13（MMP-13）和Ⅱ型胶原C 端肽（CTX-Ⅱ）的水平，并记录不良反应发生情况。
结果 治疗4周后，试验组患者的总有效率为96.0%，对照组为90.0%，两组比较差异无统计学意义（P ＞0.05）；疗程结束后3个月随访时，试验组患者的总有效率（94.0%）显著高于对照组（62.0%）（P ＜0.05）。
治疗4周后和疗程结束后3个月随访时，两组患者的V AS 评分、WOMAC 评分和膝关节液中TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 、NO 、COMP 、MMP-13、CTX-Ⅱ水平均显著低于治疗前，Lysholm 评分和膝关节液中SOD 活性均显著高于治疗前，且同一时期试验组指标均显著优于对照组（P ＜0.05）。
医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检
原则：与细菌类似 •用于分离培养的标本： 采取采取急性期标本、使用抗生素处 理防细菌污染
无菌操作、低温保存、尽快送检
•血清学诊断的标本： 双份血清？
早期采集
标本的采集和送检六原则
无菌采集 采集合适的标本
采集双份血清
尽快送检 正确标记
❖ 种类：常用的传代细胞有HeLa（宫颈癌）细胞、KB（口 腔癌）细胞、HEp-2（喉癌）细胞、Vero（非洲绿猴肾） 细胞等。
❖ 特点及作用：由于传代细胞系能有规律地持续传代，容
易保存（-70℃~-196℃）且对某些病毒易感，因此，在
诊断、科研等非疫苗生产的项目中常被采用。目前广泛 用于病毒的实验室诊断工作，根据病毒对细胞的亲嗜性 ，选择敏感的细胞系使用传代细胞系
病毒1:100稀释
病毒1:1000稀释
中性红染色：活细胞呈红色，受病毒感染破坏的细胞不着色
三、病毒感染的诊断
1.病毒形态学检查 2.病毒成分（病毒蛋白和核酸）检查 3.病毒感染的血清学（病毒抗体）检查
❖ 标本类型？ 与细菌标本类似 ❖ 好的标本？ 正常无菌性体液 ❖ 标本内容物一般需要含有宿主细胞
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒的实验室诊断方法
动物接种
病 毒
鸡胚培养
分离培养方法（金标准）
检 细胞培 养 测 病毒成分检测
活细胞
血清学诊断
（一）病毒的分离培养
1.动物接种
❖ 最原始的病毒培养方法 多用于没有敏感细胞进行细胞培养的病毒 （乙肝、丙肝、丁肝、戊肝病毒等）
二倍体细胞培养(diploid cell culture )
胚的培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握胚胎培养的基本原理和操作步骤。
2. 学习在体外条件下模拟胚胎发育过程，观察胚胎的形态变化和生长情况。
3. 探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
二、实验原理胚胎培养是指将受精卵或早期胚胎置于体外的人工培养系统中，模拟体内环境，使其继续发育和生长。
通过胚胎培养，可以研究胚胎发育的规律，筛选优良胚胎，以及进行胚胎基因编辑等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 受精卵或早期胚胎- 培养基：DMEM/F12、KSR、Hams F12- 胎牛血清（FBS）- 促性腺激素（如hCG）- 透明质酸酶- 胚胎培养皿- 显微镜- CO2培养箱- 移液器- 计时器2. 实验仪器：- 超净工作台- 恒温箱- 高压灭菌器- 电子天平四、实验步骤1. 准备培养基：- 将DMEM/F12、KSR、Hams F12培养基按照说明书比例配制，并加入胎牛血清（FBS）。
- 将培养基在无菌条件下过滤除菌，并分装于培养皿中，备用。
2. 胚胎处理：- 将受精卵或早期胚胎置于超净工作台中，用消毒后的移液器吸取一定量的透明质酸酶，轻轻涂抹在胚胎表面。
- 适当放置一段时间，使透明质酸酶作用于胚胎表面，使其分散成单个细胞。
3. 胚胎培养：- 将处理后的胚胎放入装有培养基的培养皿中，放入CO2培养箱中培养。
- 每天观察胚胎的生长情况，记录胚胎的形态变化和细胞分裂情况。
4. 不同培养条件实验：- 将胚胎分别置于不同浓度的胎牛血清（FBS）培养基中培养，观察胚胎的生长情况。
- 将胚胎置于不同温度、pH值、氧气浓度等条件下培养，观察胚胎的生长情况。
5. 结果记录与分析：- 记录不同培养条件下胚胎的形态变化、细胞分裂情况以及生长速度。
- 对实验结果进行统计分析，探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
五、实验结果1. 正常培养条件下：- 胚胎在正常培养条件下能够正常发育，细胞分裂速度较快，形态变化明显。
2. 不同胎牛血清（FBS）浓度条件下：- 随着胎牛血清（FBS）浓度的增加，胚胎的生长速度和细胞分裂速度逐渐加快。
第十二章病毒的培养
第十二章病毒的培养一、实验动物二、鸡胚三、组织培养(一)组织（块）培养(二)器官培养(三)细胞培养(四)组织和细胞的培养方法(五)细胞克隆技术(六)细胞的保存四、病毒的组织培养五、病毒蚀斑技术病毒缺乏完整的酶系统,又无核糖体等细胞器,所以不能在任何无生命的培养液内生长。
因此,实验动物、鸡胚以及体外培养的器官和细胞就成为人工增殖病毒的基本工具。
而大量病毒的培养,又是病毒学实验研究以及制备疫苗和特异性诊断制剂的先决条件。
培养病毒最早应用的方法是实验动物和鸡胚,但从50年代简便适用的细胞培养广泛应用于病毒培养以来,前两种方法已降到次要地位,但至今仍有部分病毒的分离鉴定还离不开实验动物或鸡胚,特别是在免疫血清制备以及病毒致病性、免疫性、发病机理和药物效检等方面。
在禽类病毒病和流感、副流感类等病毒病的研究方面,鸡胚(含其它禽胚)仍具有重要的应用价值。
一、实验动物实验动物是长期以来分离和增殖病毒、制造病毒抗原和病毒疫苗以及病毒病实验研究的常用材料和工具。
但是后来发现,实验动物经常自身带有病毒,常常混淆试验结果,并给病毒疫苗的生产带来严重的潜在危险,例如被某些致瘤病毒所污染等等。
为了克服这个缺陷,目前已通过微生物控制手段,培育出无菌动物(Germ Free Animal, 简称GF)、已知菌动物或称悉生动物(Gnotobiotics, 简称GN)和无特定病原动物(Specific Pathogen Free Animal,简称SPF)。
GF动物体内和体外均检不出任何微生物、寄生虫或其它生命体。
GN是确知所带微生物的动物。
只带一种菌的叫单菌动物,其次为双菌和三菌动物,四菌以上则称多菌动物。
SPF是指体内无特定微生物和寄生虫感染的动物。
从微生物控制的程度讲,SPF动物虽是这三类中最低的,但它无人畜共患病,无主要传染病,无对实验研究产生干扰的微生物,所以能满足病毒学一般实验的需要,比应用普通实验动物取得的结果更为科学与可靠。
新型肿瘤在体模型——鸡胚绒毛尿囊膜的研究进展
新型肿瘤在体模型——鸡胚绒毛尿囊膜的研究进展张锦燕【摘要】鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)是近年来兴起的一种新型的肿瘤模型,与传统的动物肿瘤模型相比具有更为简单、方便、价廉、快速、敏感等的优点.利用CAM肿瘤模型在肿瘤浸润以及肿瘤转移机制、肿瘤血管生成、抗肿瘤药物筛选等各方面研究均取得了一定的成果.然而,CAM肿瘤模型的应用尚存在一定的局限性以及有待解决的问题.充分并正确利用此模型可以为肿瘤生长侵袭的体外研究提供一种科学可行的方法及思路.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2010(016)011【总页数】3页(P1639-1641)【关键词】鸡胚绒毛屎囊膜;肿瘤;模型【作者】张锦燕【作者单位】广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科,南宁,530021【正文语种】中文【中图分类】R73-3为了解恶性肿瘤在体的生物学行为特点,往往需要构建肿瘤在体模型模拟肿瘤真实生存环境。
鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）在发育的早中期不排斥来自异种动物的组织、细胞移植,因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。
CAM模型已广泛应用于新生血管生成、微循环、肿瘤生物学等方面的研究[1],现就 CAM肿瘤模型的研究进展予以综述。
1 肿瘤在体模型的发展历程肿瘤动物模型作为人类肿瘤的复制,是肿瘤研究中不可缺少的手段。
随着近代医学发展,特别是肿瘤学和免疫学研究的需要,免疫缺陷动物的出现解决了移植瘤的免疫排斥问题,人体肿瘤移植于免疫缺陷动物,能保持其生物学特性,对于研究人体肿瘤的机制,药物筛选提供了很大帮助。
裸鼠是在近十几年中发展起来的动物模型,在肿瘤学、免疫学、有效药品的筛选等实验方面,有着特殊的价值。
研究者[2]发现,裸鼠移植瘤可以保存原有组织学构造或各种功能,且将人癌组织的组织培养物移种于裸鼠时,能重现已在组织培养中消失的原有的癌结构。
这些特征有助于分析人类肿瘤的性质,从而推动各方面的工作,为实验肿瘤学提供新的有效的工具。
鸡胚原代细胞培养
鸡胚原代细胞培养细胞是一微小而完整的生命单位，它组成各种生物体并生长、繁殖。
在生命体外，如果提供类似生物体内的环境条件，细胞也能生长繁殖。
要使每个细胞都能从人造环境中获得营养物质，必须将组织块分散成单个细胞。
组织培养法是目前培养病毒应用最广的一种方法，其优点是：一般没有隐性感染，没有免疫抵抗力，便于选择易感细胞，实验条件易于控制，成本便宜，经济适用。
组织培养法多应用于病毒的分离、鉴定、病毒感染细胞的机制、生产疫苗和抗原等。
很多组织，包括鸡胚，各种动物的肾脏组织，人胎羊膜细胞或流产胎儿组织等均可作组织培养的来源。
细胞来源的选择，主要是根据细胞对病毒的敏感性而定。
组织培养的方法中以单层细胞培养是最常用的方法，它又有原代和次代细胞培养、二倍体细胞株和传代细胞系三种类型。
原代培养是指将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖的过程。
本试验介绍原代细胞的鸡胚成纤维细胞培养方法。
（一）实验目的了解单层细胞培养方法（二）实验材料1、10日龄鸡胚。
2、1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒。
3、无菌组织培养瓶、吸管、滴管、剪子、镊子、超净工作台、CO2培养箱、蒸水器、纯水器（生物级）、滤器、真空泵、高压灭菌锅、培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）。
（三）实验方法1、用碘酒消毒鸡卵气室端外壳，并将鸡胚直立于卵架上。
以镊子将小鸡取出放在无菌培养皿内，去头，爪、内脏和骨骼，用Hanks氏溶液洗2-3次。
2、用小剪在小烧瓶内将鸡胚剪成小块（1～２mm3），加Hankr氏溶液（约１０ml）冲洗2-3次，静置１～２分钟，用毛细吸管吸去液体，依同法再洗涤２次，将血球充分洗去。
３、用镊子将组织块放入无菌三角烧瓶内，加入１０～１５ml0.25液，37?水溶浴20分钟，中间摇动几次，由于胰酶的作用可使大量的细胞游离，液体变混，经四层纱布过滤后的细胞悬液，低速离心沉淀（1000转/分钟以内），5分钟，吸上去清液，再用Hanks氏溶液洗一次，沉淀物加入适量营养液，用白细胞计数的方法进行计数，使成每毫升含50～８０万细胞的细胞悬液。