马松三色染色原理masson
改良Masson 三色染色液使用说明书
改良Masson三色染色液使用说明书货号：G1345规格：8×50ml/8×100ml有效期：室温保存，12个月有效产品简介：结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。
Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
改良Masson三色染色与常规Masson三色染色的区别在于采用天青石蓝苏木素淡染细胞核。
其特点在于：分化时间短(1～2分钟)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色。
改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，细胞核呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
产品组成：名称规格8×50ml8×100ml Storage试剂(A):Bouin液50ml100ml RT试剂(B):天青石蓝染色液50ml100ml4℃避光试剂(C):Mayer苏木素染色液50ml100ml4℃避光试剂(D):酸性乙醇分化液50ml100ml RT试剂(E):丽春红品红染色液50ml100ml RT避光试剂(F):磷钼酸溶液50ml100ml RT避光试剂(G):苯胺蓝染色液50ml100ml RT避光试剂(H):弱酸溶液50ml100ml RT使用说明书1份自备材料：10%的福尔马林、蒸馏水、系列乙醇、二甲苯、染缸操作步骤（仅供参考）：1、组织固定于10%的福尔马林中，常规脱水包埋。
Masson三色染色试剂盒说明书
Masson三色染色试剂盒说明书Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）【产品介绍】Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。
分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
淡绿分子量最大。
因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【用途】主要用于胶原纤维染色。
【产品特点】①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。
固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。
切片：所有类型。
【产品组成】编号名SBJ0126（7×50ml）SBJ0126（7×100ml）SBJ0126（7×500ml）Storage试剂（A）A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RTA2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。
试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】1、切片脱蜡至水。
2、试剂（A）染色5min～10min。
3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。
马松三色染色法
马松三色染色法马松三色染色法是一种用于显示组织中纤维的染色技术，特别适用于结缔组织的染色。
该方法使用三种染料：苏木精、酸性品红和丽春红，分别染色细胞核、肌纤维和胶原纤维。
首先，切片需要经过常规脱蜡至水的过程，以确保染色剂能够充分渗透到组织中。
然后，使用配制好的Weigert氏铁苏木素染色液对组织进行染色，以突出显示细胞核。
染色完成后，需要充分水洗，以去除未结合的染料。
接下来是酸性品红染色，用于标记肌纤维。
这个步骤需要在弱酸环境中进行分化处理，以将染色剂与组织中的碱性物质区分开来。
弱酸还能帮助酸性品红更好地渗透到组织中。
最后，使用丽春红品红染色液对胶原纤维进行染色。
在这个步骤中，需要使用弱酸工作液来洗去未结合的染料。
在整个染色过程中，组织固定起着非常重要的作用。
不同的固定液会影响染色时间，因此需要根据具体情况进行调整。
在完成染色后，需要进行常规脱水、透明和封固处理，以便在显微镜下观察。
马松三色染色法的优点在于它能够清晰地显示结缔组织中的胶原纤维和肌纤维，特别是在病理情况下，如器官硬化性疾病和瘢痕组织的鉴别诊断中，该方法能够提供有价值的信息。
此外，该方法具有较高的特异性和灵敏度，能够检测出病理变化中较小的差异。
然而，该方法也有一些局限性。
首先，该方法需要使用多种染料和化学试剂，这使得操作过程相对复杂。
其次，某些组织可能需要特定的处理步骤，例如脱蜡、脱水和固定等。
这需要技术人员具备一定的经验和技术水平。
尽管存在这些局限性，马松三色染色法仍是一种非常重要的病理学技术。
它可以提供关于组织结构和功能的重要信息，有助于病理医生做出准确的诊断和制定治疗方案。
Masson三色法
Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
Masson三色法
Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
MASSONS三色染色
SURGICAL PATHOLOGY - HISTOLOGY Date: STAINING MANUAL - CONNECTIVE TISSUE Page: 1 of 4 PURPOSE: Used to differentiate between collagen and smooth muscle in tumors, and the increase of collagen in diseases such as cirrhosis. Routine stain for liver and kidney biopsies.PRINCIPLE: As the name implies, three dyes are employed selectively staining muscle, collagen fibers, fibrin, and erythrocytes. The general rule in trichrome staining is that the less porous tissues are colored by the smallest dye molecule; whenever a dye of large molecular size is able to penetrate, it will always do so at the expense of the smaller molecule. Others suggest that the tissue is stained first with the acid dye, Biebrich Scarlet, which binds with the acidophilic tissue components. Then when treated with the phospho acids, the less permeable components retain the red, while the red is pulled out of the collagen. At the same time causing a link with the collagen to bind with the aniline blue.FIXATIVE: Bouin's is preferred, 10% formalin.TECHNIQUE: Cut paraffin sections 4mEQUIPMENT: Rinse glassware in DI water. Coplin jars, 60°C oven or waterbath, microwaveREAGENTS:Bouin’s FixativeSaturated picric acid1500.0 ml Formaldehyde500.0 ml Glacial acetic acid100.0 ml Mix well, label, date and initial. Stable for 2 years.CAUTION: Carcinogenic, irritant.Biebrich Scarlet:Biebrich scarlet 2.7 gm Acid fuchsin0.3 gm Distilled water300.0 ml Glacial acetic acid 3.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.CAUTION: Avoid contact and inhalation.MASSON’S TRICHROME Page: 2 of 4Weigert's Iron Hematoxylin Stock Solution A:Hematoxylin 5.0 gm 95% alcohol500.0 ml Mix well, label with initial and date. Stable for 1 year.CAUTION: Flammable,avoid contact and inhalation.Stock Solution B:29% ferric chloride20.0 ml Distilled water475.0 ml Hydrochloric acid 5.0 ml Mix well, label with initial and date. Stable for 1 year.CAUTION: Corrosive, avoid contact and inhalation.Weigert's HematoxylinWorking SolutionSolution A25.0 ml Solution B25.0 ml Mix well, solution will remain stable for 3 - 4 days.Phosphotungstic/ Phosphomolybdic Acid Solution: Phosphotungstic acid 25.0 gm Phosphomolybdic acid25.0 gm Distilled water1000.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.CAUTION: Avoid contact and inhalation. Aniline Blue:Aniline blue 2.5 gm Distilled water100.0 ml Glacial acetic acid 1.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.Caution: Avoid contact and inhalation. 1% Acetic Acid:Glacial acetic acid10.0 ml Distilled water1000.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 1 year. Caution: Avoid contact and inhalation.SAFETY: Wear gloves, goggles and lab coat. Avoid contact and inhalation of dyes and chemicals.Bouin's contains: formaldehyde, a known carcinogen, picric acid can become explosive when dry. Toxic by skin absorbtion. Keep hot uncapped Bouin’s under the hood.Phosphomolybdic, phosphotungsic acid powders, and acetic acid solutions are skin and eye irritants, and strong corrosives.MASSON’S TRICHROME Page: 3 of 4 1.*Mordant in Bouin's solution, microwave 1 minute, allow to stand 15minutes.2.Wash in running tap water to remove the picric acid, 5 minutes.3.Weigert's working hematoxylin, 10 minutes.4.Blue in running tap water for 5 minutes, rinse in distilled water.5.Biebrich scarlet for 5 minutes.6.Rinse in distilled water.7.Phosphotungstic/phosphomolybdic acid for 10 minutes, discardsolution.8.Transfer directly into Aniline blue for 5 minutes.9.Rinse in distilled water.10.1% Acetic acid for 1 minute, discard solution, rinse in distilled water.11.Dehydrate, clear, and coverslip.*Conventional method: Mordant in Bouin's solution, 60°C for 1 hour. RESULTS:Nuclei blackCytoplasm, muscle, erythrocytes redCollagen blueNOTES:1.Light green may be substituted for Aniline blue..2.5% phosphotungstic acid for 5 minutes, must be substituted whenusing Light green.3.When staining liver biopsies, the collagen is better light blue thandark blue.REFERENCE:Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, 1980, pp 189-190, Battelle Press, OhioBancroft J, Stevens A, Theory and Practice of Histological Techniques, 2nd Ed, 1982, pp 131-135, Churchill-Livingston, NYLuna L, Manual of Histologic Staining Methods of the AFIP, 3rd Ed, 1968, pp 94-95, McGraw-Hill, NYCarson F, Histotechnology A Self-Instructional Text, 1st Ed, 1990, pp 142-143, ASCP, IllCONNECTIVE TISSUEMASSON’S TRICHROME Page: 4 of 4 Laboratory, 2nd ED, 1991, AnatechPrepared: By:Approved: By:Downloaded from WebPath: Internet Pathology Laboratory/WebPath/webpath.htmlTRICHROME STAIN, MASSON'S (TRI)-COLLAGEN Page 1 of 21.*Mordant in Bouin's solution, microwave 1 minute, allow to stand 15 minutes.2.Wash in running tap water to remove the picric acid, 5 minutes.3.Weigert's working hematoxylin, 10 minutes.4.Blue in running tap water for 5 minutes, rinse in distilled water.5.Biebrich scarlet for 5 minutes.6.Rinse in distilled water.7.Phosphotungstic/phosphomolybdic acid for 10 minutes, discard solution.8.Transfer directly into Aniline blue for 5 minutes.9.Rinse in distilled water.10.1% Acetic acid for 1 minute, discard solution, rinse in distilled water.11.Dehydrate, clear, and coverslip.*Conventional method: Mordant in Bouin's solution, 60°C for 1 hour.RESULTS:Nuclei blackCytoplasm, muscle, erythrocytes redCollagen blueSAFETY/PPE: Wear gloves, goggles and lab coat. Keep hot Bouin’s under the fume hood.Weigert's Iron HematoxylinStock Solution A:Hematoxylin 5.0 gm 95% alcohol500.0 ml Mix well, label with initial and date. Stable for 1 year.CAUTION: FlammableStock Solution B:29% ferric chloride20.0 ml Distilled water475.0 ml Hydrochloric acid 5.0 ml Mix well, label with initial and date. Stable for 1 year.Working SolutionSolution A25.0 ml Solution B25.0 ml Mix well, solution will remain stable for 3 -4 days.Bouin’s FixativeCAUTION: Carcinogenic, irritant, toxic.Biebrich Scarlet:Biebrich scarlet 2.7 gm Acid fuchsin0.3 gm Distilled water300.0 ml Glacial acetic acid 3.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.CAUTION: Possible carcinogen Phosphotungstic/Phosphomolybdic Acid Solution: Phosphotungstic acid 25.0 gm Phosphomolybdic acid25.0 gm Distilled water1000.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.TRICHROME STAIN, MASSON'S (TRI)-COLLAGEN Page 2 of 2Aniline B lue:Aniline blue 2.5 gm Distilled water100.0 ml Glacial acetic acid 1.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.1% Acetic Acid:Glacial acetic acid10.0 ml Distilled water1000.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 1 year.1% ACETIC ACID:Glacial acetic acid10.0 ml Distilled water1000.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 1 year. Caution: Skin and eye irritantDATE:TECH:EXPIRATION:ANILINE BLUE:Aniline blue 2.5 gm Distilled water100.0 ml Glacial acetic acid 1.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.Caution: Avoid contact and inhalation. DATE: TECH:EXPIRATION: ANILINE BLUEDATE:TECH: BIEBRICH SCARLET:Biebrich scarlet 2.7 gm Acid fuchsin0.3 gm Distilled water300.0 ml Glacial acetic acid 3.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.Caution: Avoid contact and inhalation. DATE: TECH: EXPIRATION: BIEBRICH SCARLET:DATE:TECH:PHOSPHOTUNGSTIC/ PHOSPHOMOLYBDIC ACID SOLUTION:Phosphotungstic acid 25.0 gm Phosphomolybdic acid25.0 gm Distilled water1000.0 ml Mix well, label with initial and date. Solution is stable for 6 months.Caution: Avoid contact and inhalation. DATE: TECH: EXPIRATION: PHOPHOTUNGSTIC / PHOSPHOMOLYBDIC ACID: DATE: TECH: WEIGERT'S IRON HEMATOXYLIN: Stock Solution A:Hematoxylin 5.0 gm 95% alcohol100.0 ml Mix well, label with initial and date. Stable for 1 year. CAUTION: FLAMMABLE, avoid contact and inhalationTECH:DATE:EXPIRATION:WEIGERT’S IRON HEMATOXYLIN: Stock Solution B:29% ferric chloride20.0 ml Distilled water475.0 ml Hydrochloric acid 5.0 ml Mix well, label with initial and date. Stable for 1 year.CAUTION: Corrosive, avoid contact and inhalation.TECH:DATE:EXPIRATION:WEIGERT'S HEMATOXYLINDATE:TECH:。
masson三色染色 原理
masson三色染色原理马森三色染色的原理马森三色染色是一种组织学染色技术，用于区分神经组织的不同成分。
它基于通过磷钨酸-血红素溶液和靛胭脂溶液的顺序染色，这赋予神经元不同的颜色。
磷钨酸-血红素溶液的染色原理磷钨酸-血红素溶液是一种呈酸性的溶液，含有磷钨酸和血红素。
磷钨酸是一种多价阴离子，对组织中的碱性成分，如细胞核和细胞质，具有亲和力。
血红素是一种铁卟啉分子，与氧气结合形成稳定的络合物。
当磷钨酸-血红素溶液应用于组织时，磷钨酸会与细胞核和细胞质中的碱性成分结合，形成不溶性沉淀。
血红素与氧气结合，形成棕红色的血红素氧络合物，沉积于这些碱性成分上。
因此，细胞核和细胞质被染成深棕色。
靛胭脂溶液的染色原理靛胭脂是一种阳离子染料，对组织中的酸性成分，如细胞外基质和神经胶质纤维，具有亲和力。
当靛胭脂溶液应用于组织时，它会与这些酸性成分结合，形成不溶性蓝紫色沉淀。
神经胶质纤维是神经胶质细胞产生的长而细的纤维，它们包裹着神经元并提供支持。
通过与靛胭脂结合，这些纤维被染成蓝色。
神经元的染色神经元的细胞体主要由细胞核和细胞质组成，它们富含碱性成分。
因此，它们在磷钨酸-血红素溶液中被染成深棕色。
神经元的轴突和树突是神经元的细胞突起，它们由神经胶质细胞包裹。
神经胶质细胞产生的神经胶质纤维含有酸性成分，因此它们在靛胭脂溶液中被染成蓝色。
通过磷钨酸-血红素溶液和靛胭脂溶液的顺序染色，马森三色染色可以区分神经元的不同成分：细胞核和细胞质呈深棕色，神经胶质纤维呈蓝色。
这种差异允许在显微镜下对神经组织进行详细的观察和分析。
Masson三色染色
Masson三色染色主要用途：主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。
检验原理:由mallory三色染色改造，利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。
根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成份显示出来。
主要成份：1.weigert铁苏木素A液2.weigert铁苏木素B液3.丽春红酸性品红染液4.磷钼酸溶液5.苯胺蓝溶液样本要求：组织片充分固定和脱蜡。
检验方法：1.组织固定于bouin氏液或zenker氏液，流水冲洗过夜，常规脱水包埋2.切片脱蜡至水3.weigert铁苏木素（weigert铁苏木素A、B液等比例混和）染5-10分，流水稍洗4. 1%盐酸酒精分化，流水冲洗数分5. 丽春红酸性品红染液染5-10分，流水稍冲洗。
6.磷钼酸溶液处理约5分钟，不用水洗，直接用苯胺蓝人染液复染5分钟7. 1%冰醋酸处理1分钟，95%酒精脱水多次。
.无水酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。
检验结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色、胞核染蓝黑色。
、注意事项：1.weigert铁苏木素分A、B两液，应与临用前将两液等分混合，而不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而逐渐失去染色能力。
2.组织用bouin氏液或zenker氏液固定为佳，如已用10%甲醛液固定，切片可在脱蜡至水后，再放入bouin氏液作用一晚或置37℃温箱内1-2小时，然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。
3.磷钼酸处理时，要镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。