血清丙氨酸氨基转移酶测定

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血清丙氨酸实验报告

血清丙氨酸实验报告

一、实验目的1. 了解血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)在肝脏代谢过程中的作用。

2. 掌握血清ALT活性测定的原理和方法。

3. 学会运用分光光度法测定血清ALT活性。

4. 分析血清ALT活性与肝脏疾病之间的关系。

二、实验原理血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种存在于肝脏细胞内的酶,主要催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。

当肝脏受到损伤时,ALT会大量释放到血液中,因此,血清ALT活性的测定对肝脏疾病的诊断具有重要意义。

本实验采用分光光度法测定血清ALT活性。

在实验中,ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸。

丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙,该化合物在碱性条件下呈现棕色,可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度,从而计算出ALT的活性。

三、实验材料1. 血清样本:取适量血清样本,置于冰浴中保存。

2. 试剂:丙氨酸、α-酮戊二酸、2,4-二硝基苯肼、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠等。

3. 仪器:分光光度计、移液器、试管、试管架等。

四、实验步骤1. 标准曲线的制作:分别配制不同浓度的丙酮酸溶液,加入2,4-二硝基苯肼和氢氧化钠,测定其在特定波长下的吸光度,绘制标准曲线。

2. 血清ALT活性的测定:取血清样本,加入丙氨酸、α-酮戊二酸、磷酸盐缓冲液和2,4-二硝基苯肼,混匀后置于37℃水浴中反应一段时间。

反应结束后,加入氢氧化钠终止反应,测定其在特定波长下的吸光度,根据标准曲线计算ALT的活性。

3. 结果记录与分析:记录实验数据,计算ALT的活性,分析ALT活性与肝脏疾病之间的关系。

五、实验结果1. 标准曲线的制作:绘制标准曲线,得到线性回归方程为y=0.0058x-0.0035,R²=0.998。

2. 血清ALT活性的测定:测定血清样本的ALT活性为540 U/L。

3. 结果分析:根据文献报道,ALT活性在正常范围内为0-40 U/L。

本实验中血清样本的ALT活性为540 U/L,明显高于正常范围,提示可能存在肝脏疾病。

血清丙氨酸氨基转移酶测定

血清丙氨酸氨基转移酶测定

血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。

2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础,所采用的反应原理与反应式如下。

⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸,生成丙酮酸和L谷氨酸。

⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶(LDH)还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I(NADH+ H+)被氧化为辅酶I(NAD+),而使波长340nm处的吸光度值下降。

通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测,即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性。

(3)样本中内源性丙酮酸的干扰,可由试剂中的乳酸脱氢酶(LDH)在测定的延迟时间内快速、完全地消除,不会对测定产生干扰。

ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH(乳酸脱氢酶)氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备:12小时禁食。

3.2 类型:血清。

3.3. 标本存放:3天内的活性损失:2~8℃保存:<10%;15~25℃保存:<17%;标本稳定性:-20℃保存至少可稳定4周。

3.4 标本运输:常温条件下保存运输。

3.5 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。

4 实验材料4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒(沪食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶>1820U/L(R1):NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2(R2):Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存:在2~8℃避光、密封的储存条件下,试剂盒自生产之日起有效期为12个月。

4.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。

丙氨酸氨基转移酶检测方法

丙氨酸氨基转移酶检测方法

丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。

检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。

下面,我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。

一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。

具体步骤如下:1.患者空腹4~8小时。

2.采集3~5ml静脉血标本,禁止吸烟和饮酒。

3.将血样放于离心管中,进行离心处理,得到血清样本。

4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。

二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平,可以提供更加精确的测试结果。

具体步骤如下:1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。

2.采集患者的静脉血标本。

3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。

4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。

三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。

具体步骤如下:1.准备特定的抗ALT抗体试剂。

2.采集患者的静脉血标本。

3.加入抗ALT抗体图谱,进行特异性反应,每个抗原对应一个抗体。

4.使用适当的试剂盒,对空白对照样品和样品进行ELISA测定。

5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。

综上所述,以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。

针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。

总之,如果您的ALT测试结果不正常,医生会建议您进一步进行了解。

您可以向医生咨询,了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定
横坐标作图,即得赖氏法测定ALT的标准曲线。
标本的测定(改良赖氏法)
❖ 取适量基质缓冲液和待测血清,37℃水浴预温5min。 ❖ 取干净试管2支标明管号,按下表所示操作。
(对照管) 0.10 ---
基质缓冲液
0.50
❖ 混匀,放置5min,在505nm处以蒸馏水调零,读取各管吸光
度。
❖ 以测定管A测-A对之值作为标本的吸光度值,在标准曲线查得相
反应总体积
样本体积 比色杯光径
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注意事项
1、尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化 合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度 远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定 时,所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正,摈弃了 赖氏法一些固有弊端,结果比其他比色法准确。
可不同程度的损害肝细胞,引起ALT的升高。
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器材:分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样
器、移液管等。
待测标本:血清
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标准曲线的绘制(改良赖氏法)
❖ 取干净试管5支标明管号,按下表所示操作。
加入物(ml)
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液
基质缓冲液 2,4二硝基苯肼溶液
0.4mol/L NaOH溶液
完全。加入NaOH溶液的方法和速度要一致,不同的
方法及速度也会导致吸光度读数的差异。
5、底物中的α-酮戊二酸和2,4-二硝基苯肼均为呈色物
质,称量必须很准确,每批试剂的空白管吸光度上下
波动不应超过0.015,如超出次范围,应检查试剂及

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)

授课对象:06级检验1-5班课时:2学时血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)目标:1.掌握赖氏法测血清ALT的原理及注意事项2.掌握试剂的配制熟练地制作标准曲线3.规范地进行ALT测定4.了解血清ALT测定的临床意义实验用品:配制试剂用的各种器皿(烧杯、容量瓶、电炉、分析天平等)、37℃水浴箱、721型风光光度计、坐标纸等原理:丙氨酸和α-酮戊二酸在血ALT的作用下生成丙酮酸及谷氨酸,在酶反应达到规定时间时,加入2.4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。

生成的丙酮酸与入2.4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸入2.4二硝基苯腙,苯腙在碱性条件下显红棕色。

根据显色之深浅,求得血清中丙氨酸氨基转移酶活力。

试剂:1. 0.1molPH7.4磷酸盐缓冲液称取磷酸氢二钠(Na2HPO4AR)11.928g,磷酸二氢钾(KH2PO4AR)2.176g,加少量蒸馏水溶解并稀释至1000mL。

2. ALP基质液称取DL丙氨酸[CHCH(NH)COOH]1.79g,α-酮戊二酸[COOH (COCOOH)29.2mg于烧杯中,加入0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液80mL,煮沸溶解后待冷,用摩尔NaOH溶液调节PH至7.4(约加入0.5ml),再用0.1mol/LPH7.4磷酸盐缓冲液稀释至100mL,混匀,加氯仿数滴,置冰箱保存数周。

3.1mmol/L2.4-二硝基苯肼溶液称取 2.4-二硝基苯肼[(NO)CHNHNH AR]19.8mg,用10mol/L HC110mL溶解,然后加蒸馏水至100mL,置棕色瓶内,冰箱保存。

4.0.4mol/L NaOH溶液。

5.2mmol/L丙酮酸标准液精确称取丙酮酸钠[CHCOCOONa AR]22.0mg于100mL容量瓶中,加0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。

此液应新鲜配制,不得久放。

操作:血清ALT测定步骤(赖氏法)加入物(mL)R B血清0.1 0.1ALP基质液0.5 —混匀,置37o C水浴30min2.4-二硝基苯肼0.5 0.5ALP基质液—0.5混匀,置37o C水浴20min0.4mol/L NaOH 5.0 5.0将上述两管混匀,10min后,用蒸馏水调零,λ=505nm比色读取各管吸光度值,用测定管A-对照管A,查标准曲线得ALT活力单位。

丙氨酸氨基转移酶

丙氨酸氨基转移酶

丙氨酸氨基转移酶(ALT)1.检测目的规范丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测实验,确保检测结果的准确性和重复性。

2.标本采集(1)ALT测定可以采用血清、肝素或EDTA抗凝血浆。

(2)稳定性:在室温(20℃)可以保存48小时,在4℃冰箱可保存l周,在一25℃以下可保存1个月。

(3)建议使用带分离胶的真空采血管,并及时分离血清。

3.测定方法(1)方法:速率法(2)原理:在ALT速率法测定中酶偶联反应式为L一丙氨酸+α一酮戊二酸 A L T 丙酮酸+L一谷氨酸丙酮酸+NADH+H+L D H L一乳酸+NAD++H20上述偶联反应中.NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比,在340nm波长处,NADH呈现特征性吸收峰,而NAD+则没有。

因此,可在340nm处连续监测吸光度的下降速率( - △A/min),计算出ALT的活性单位。

4.试剂试剂成份实验深度RⅠa-酮戊二酸NADH乳酸脱氢酶(LDH)15mmol/l0.18mmol/l≥5000U/LRⅡTris缓冲液(PH7.3)L-丙氨酸100mmol/L 500mmol/L5.校准(1)校准物的准备与保存,严格按照购置说明执行。

(2)校准频率:①新仪器设备在开始使用时;②设备进行重要维护保养以及发生故障维修之后;③试剂盒在仪器上28天后;④试剂批号更改后;⑤更换试剂厂家后;⑥由室内质控结果决定;⑦定期校准,可由实验室根据检测系统(仪器与试剂)的情况自行决定校准周期。

6质量控制(1)质控品:质控品应选择稳定、瓶间差小、基质效应小的物质。

同时,因为是定量检测项目,所以应选择两个不同浓度水平的质控品,这样有利于在不同的医学决定性水平上监测方法的性能。

(2)质控方法的选择:备选的质控规则如下:12s(一个质控结果超出i±2SD为违背此规则,提示警告)。

13s(一个质控结果超过i±3SD为违背此规则,提示失控,存在随机误差)。

22s(两个连续质控结果同时超过i±2SD,提示失控,存在系统误差)。

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页一、实验目的1. 掌握测定血清ALT活力的方法和原理。

2. 熟悉ALT在肝脏功能监测中的重要性。

二、实验原理ALT是一种酶,分布在人体的细胞内,主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织中。

正常情况下,ALT主要在肝脏中发挥作用。

当肝脏受到损伤时,ALT会释放到血液中,导致血液中ALT活力的升高。

因此,测定血清ALT活力是一种常用的肝功能检测方法。

本实验使用比色法测定血清ALT活力。

利用谷草-丙氨酸转移酶测定(AST)所产生的谷草酸,和血清ALT催化产生的丙酮酸反应,生成2,4-二硝基苯胺,其吸光度与丙酮酸的浓度成正比。

由此计算出血清ALT活力。

三、实验步骤1. 将标准品和待测血清样品准备好,室温恢复至20-25°C。

2. 取比色管,在无菌条件下加入以下试剂:2.5ml缓冲液pH7.5、0.25ml 10mmol/L 肌酸盐缓冲液、0.2ml5.5mmol/LNADH、0.2ml2mol/L丙酮酸、0.1ml3%的PEG,混匀。

3. 加入待测血清样品1ml,立即混匀。

4. 马上读测吸光度(Zero)。

5. 在37℃恒温箱中孵育10分钟。

6. 然后再读一次吸光度。

7. 加入ALT试剂,混匀,孵育60秒钟。

8. 反应结束后7分钟内,读取吸光度值,记录。

9. 将标准品同样操作,测定吸光度,计算样品中ALT活力的单位(L_0.9)四、实验注意事项1. 实验中的所有仪器、试剂、杯器等都要事先清洗干净,确保无污染。

2. 实验操作应在干燥、无尘、无异味的净化房间内进行。

3. 操作过程中要注意保持常温。

4. 实验中的吸光度必须在规定时间内完成测定,避免影响结果。

5. 测定前,必须保证血清样品无血浆外渗。

6. 测定期间谨慎操作,防止试剂泼溅,注意安全。

五、实验结果分析ALT活性测定值与肝损伤的程度有一定的相关性。

当ALT活性超过健康人参考范围时,说明肝脏功能出现异常,可能出现肝炎、脂肪肝等肝病状况。

丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程

丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程

丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程.检验原理:(酶偶联速率法)L-丙氨酸和α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶的作用下生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸在乳酸脱氢酶(LDH)作用下生成L-乳酸,同时还原型辅酶I(NADH)被氧化为氧化型辅酶I(NAD、在340nm处测得吸光度呈下降趋势与ALT活性成正比。

根据NADH吸光度下降程度计算丙氨酸氨基转移酶的活力单位。

试剂内不含磷酸弼哆醛。

1.-丙氨酸+Q-酮戊二酸一生→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H,侬->L一乳酸+MUT3.2225828°C48-20°C保存7天,样本不可反复冻融!4.检验方法;仪器法(详见DF-603/DI-600标准操作规程)5.参考范围:6 .检验结果的解释:6.1 样本含量超出线性范围时,建议用0.9%(W∕V)的氯化钠溶液稀释样本。

6 .2.单位换算:ukat∕L=U∕L×16.67×10^37 .检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7. 2若试剂浑浊,或以水空白在34Onnl处吸光度小于LOOO时不能使用。

8.试剂性能指标8.1 试剂外观:无色或淡黄色透明液体,无悬浮物及沉淀。

8. 2装量:不低于标识值。

8. 3试剂空白吸光度:在34Onnl处,光径ICnI时,空白吸光度A21.0008 .4试剂空白吸光度变化率:在34Onm处,光径ICm时,Z∖A∕minW0.0049 .5线性区间:试剂的线性区间为[10-500]U∕L,在此线性区间内:a)线性相关系数r应不小于0.9900;b)[10-50]U/L区间内,线性绝对偏差不超过±5U/L;(50-500)U/L 区间内,线性相对偏差不超过±10%。

8. 6准确度:相对偏差应不大于±15机8. 7分析灵敏度:在34Onrn处,光径ICnl时,测量已知浓度的样品后换算成W/L的丙氨酸氨基转移酶时,吸光度变化AAU∕L∕min22XIO-48. 8批内精密度:CV≤5%8. 9批间精密度:R≤10%8. 10稳定性:(2-8)C下,原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后一个月的试剂进行测试,应满足1-8的要求。

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血清丙氨酸氨基转移酶测定
1.实验原理
国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。

ALT
L-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮
LDH(乳酸脱氢酶)
酸+ L-谷氨酸
丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中,NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰,而NAD+则没有。

因此,可在340nm监测吸光度的下降速率(-△A/min),计算出ALT的活性单位。

2. 标本:
2.1 病人准备:12小时禁食。

2.2 类型:血清,肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放:3天内的活性损失:2~8℃保存:<10%;15~25℃保存:<17%;标本稳定性:-20℃保存至少可稳定4周。

4. 标本运输:常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料
6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒
6.1.1 试剂组成
Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/L
L-丙氨酸800mmol/L
LDH(乳酸脱氢酶)≥1200U/L
a-酮戊二酸18mmol/L
NADH 0.18mmol/L
6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。

6.1.5 注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。

不可入口!避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品:使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器:日立7060生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数:参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤:参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法:以罗氏复合校准品ALT校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以U/L报告。

12. 参考值范围[4]
女性<31U/L
男性<41U/L
13. 临床意义[1,2]:丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)。

它们是氨基转移酶类的典型代表。

氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给 -酮酸的反应。

ALT是肝脏的特异性酶,仅在肝胆疾病时显著升高。

而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤,以及肝组织损害等都有关。

因此同时进行ALT和AST的检测,可用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。

AST/ALT比率用于肝病的鉴别诊断。

比率<1预示中度的肝损伤;比率>1和严重肝病有关,常见慢性肝病。

14. 线性范围4~800U/L
15. 超出范围结果处理本法对ALT活力检测的最大ΔA/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。

当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:9稀释,重新测定,结果乘以10。

16. 病危报警值的处理:复查后电话通知临床。

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