维生素的测定(精)
维生素的测定方法
维生素的测定方法
维生素的测定方法包括生物学方法、化学方法和仪器方法等。
1. 生物学方法：生物学方法是通过生物试验，如细胞培养、动物实验等来测定维生素的活性。
例如，利用酵母菌培养来测定维生素B2（核黄素）的含量，利用小鼠实验来测定维生素D的活性。
2. 化学方法：化学方法是通过化学反应来测定维生素的含量。
常用的化学方法包括滴定法、分光光度法和高效液相色谱法等。
例如，利用碘量法测定维生素C （抗坏血酸）的含量，利用氧化还原反应测定维生素A（视黄醇）的含量。
3. 仪器方法：仪器方法是通过利用特定仪器进行测定。
例如，利用高效液相色谱仪（HPLC）测定多种维生素的含量，利用气相色谱仪（GC）测定维生素E（α-生育酚）的含量。
需要注意的是，不同的维生素具有不同的化学性质和测定原理，因此选择适当的测定方法需要结合维生素的特性和要求进行决定。
同时，测定方法的准确性、灵敏度和重复性等因素也需要考虑。
18维生素的测定
（三）液相色谱分析 色谱推荐条件： 预柱：ODS 10μm,4mm×4.5cm 分析柱：ODS 5μm,4.6mm×25cm 流动相：甲醇：水＝98：2，混匀，临用
前脱气。
紫外检测器波长：300nm,量程0.02 进样量：20μL 流速：1.65～1.70mL/min
生物鉴定法：费时、费力、需要动物饲养场地 微生物法：仅限于水溶性维生素的测定 荧光法：用于硫胺素的测定 仪器法：快速、灵敏、有较好的选择性 HPLC：用于大多数维生素的测定，费用高
二、脂溶性维生素的测定
脂溶性维生素的理化性质
溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于苯、 乙 醚、 丙酮、三氯甲烷、乙醇等有机溶剂。
做空白试验
重复上述操作，将20ml维生素B1标准使用液加入 盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。
4.氧化
将5ml试样 净化液分别加 入A、B两个 反应瓶；
同时将5ml 标准净化液分 别加入A1、B 1两个反应瓶 中。
Maizel-Gerson 反应瓶
氧化流程
A、A1瓶 15%NaO H (3 ml)溶液振摇
（一）原理
样品中维生素A 及维生素E 经皂化提取 处理后，将其从不可皂化部分提取至有 机溶剂中。用高效液相色谱法C18 反相 柱将维生素A 和维生素E 分离，经紫外 检测器，用内标法定量测定
（二）样品处理
1.皂化称取适量样品（含维生素A 约3μg， 维生素E 各异构体约40μg）于三角瓶中， 加30mL 无水乙醇，振摇使样品分散。加 入5mL100g/L 抗坏血酸溶液和2.00mL 苯 并[e]芘溶液（5μg/L，内标用），混匀， 加10mL 氢氧化钾溶液（50％浓度），混 匀，于沸水浴上回流30min，使皂化完全， 皂化后立即放入冰水中冷却。
滴定法测定维生素C含量
滴定法测定维生素C含量一、本文概述维生素C，也被称为抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素，对人体健康具有多种益处，包括增强免疫力、促进铁质吸收、参与胶原蛋白的合成等。
由于其生理功能和广泛的应用，维生素C的含量测定在食品、药品、化妆品等领域具有重要意义。
滴定法作为一种经典的化学分析方法，因其准确度高、操作简便等优点，被广泛应用于维生素C含量的测定。
本文将详细介绍滴定法测定维生素C含量的原理、实验步骤、注意事项以及结果分析。
通过本文的阅读，读者可以了解滴定法的基本原理和实验操作，掌握维生素C含量测定的基本方法，为实际工作和研究提供有益的参考。
二、滴定法基本原理滴定法是一种常用的化学分析方法，通过测量一种已知浓度的试剂（称为滴定剂）与被测物质发生化学反应所需的量，从而确定被测物质的含量。
在维生素C含量的测定中，滴定法被广泛应用。
滴定法的基本原理是基于化学反应的定量关系。
在滴定过程中，滴定剂与被测物质按照一定的化学计量比进行反应，直到反应完全。
通过测量滴定剂的使用量，可以推算出被测物质的含量。
对于维生素C的滴定测定，通常使用碘作为滴定剂。
维生素C（抗坏血酸）具有还原性，可以与碘发生氧化还原反应。
在滴定过程中，碘逐渐与维生素C反应，直到维生素C完全消耗。
此时，通过测量剩余的碘的量，可以推算出样品中维生素C的含量。
滴定法的优点在于操作简便、准确度高、适用范围广。
然而，滴定法也需要注意一些影响准确度的因素，如滴定剂的纯度、操作误差等。
因此，在进行滴定法测定时，需要严格控制实验条件，确保测量结果的准确性。
通过滴定法，我们可以有效地测定样品中维生素C的含量，为食品、药品等产品的质量控制提供重要依据。
滴定法也为研究维生素C 的生理功能和代谢途径提供了重要的实验手段。
三、实验材料与方法试剂：维生素C标准品，碘酸钾（KIO₃），硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃），淀粉指示剂，盐酸（HCl），氢氧化钠（NaOH）等。
标准溶液的制备：精确称取一定量的维生素C标准品，用适量水溶解后，转移到容量瓶中定容，得到标准溶液。
维生素C含量的测定实验报告
维生素C含量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握一种常见且有效的测定维生素 C 含量的方法，了解维生素 C 的化学性质和在不同样品中的含量差异，提高实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理维生素 C 又称抗坏血酸，具有较强的还原性。
在酸性溶液中，维生素C 能将染料2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。
当染料被还原后，溶液的颜色会发生变化。
利用这个特性，通过滴定法可以测定维生素C 的含量。
在滴定过程中，当溶液中的维生素 C 全部被氧化后，再滴加的染料溶液会使溶液呈现粉红色，此时即为滴定终点。
根据染料的用量，可以计算出样品中维生素 C 的含量。
三、实验材料与仪器1、材料新鲜水果（如橙子、柠檬等）、维生素 C 药片。
2、仪器电子天平、容量瓶（100 mL、250 mL）、移液管（5 mL、10 mL）、酸式滴定管（50 mL）、锥形瓶（250 mL）、玻璃棒、烧杯（100 mL、500 mL）、漏斗、滤纸、研钵。
3、试剂2%草酸溶液、0001 mol/L 2,6-二氯酚靛酚溶液。
四、实验步骤1、样品处理（1）水果样品：称取新鲜水果 50 g，用研钵研碎，加入 50 mL 2%草酸溶液，搅拌均匀，过滤，滤液收集在 100 mL 容量瓶中，用 2%草酸溶液定容至刻度，摇匀备用。
（2）维生素 C 药片：将维生素 C 药片研磨成粉末，称取适量粉末（相当于 50 mg 维生素 C），用 2%草酸溶液溶解并转移至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，摇匀备用。
2、滴定（1）用移液管准确吸取 10 mL 样品溶液于 250 mL 锥形瓶中，加入20 mL 2%草酸溶液，用 0001 mol/L 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定，边滴边摇动锥形瓶，直至溶液呈现粉红色，并在 15 秒内不褪色，即为终点。
记录消耗的 2,6-二氯酚靛酚溶液的体积（V1）。
（2）同时做空白实验，即在 250 mL 锥形瓶中加入 30 mL 2%草酸溶液，用 0001 mol/L 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，记录消耗的体积（V0）。
食品分析理论第十章 维生素的测定_OK
• 1、微生物法：根据某种维生素是某种细菌生长所必需的原理，以细 菌繁殖程度或代谢产物定量该维生素含量，方法选择性较高，多用 于水溶性维生素检测，适用于检测多种衍生物的总和（如总叶酸）， 是经典方法。但微生物法操作繁琐、耗时过长，而且要求有特殊设 备和专门的训练人员。
• 2、比色法 可见分光光度、紫外分光光度
2021/7/3
16
(二)测定方法
• 维生素D的测定方法有：比色法、荧光法、紫外分光 光度法、气相色谱法、液相色谱法及薄层层析法等。
• 比色法灵敏度较高，但操作十分复杂、费时。
• 气相色谱法虽然操作简单，精密度也高，但灵敏度 低，不能用于含微量维生素D的样品。
• 液相色谱法的灵敏度比比色法高20倍以上，且操作简 便，精度高，分析速度快。是目前分析维生素D的最 好方法。
2021/7/3
14
• 胡萝卜素一般存在于植物性食品中，以含有胡萝卜为食物家 禽、兽类、水产动物及其加工产品，为着色而添加胡萝卜素 的食品，也含有胡萝卜素。
• 胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫外线和空气中的氧可 促进其氧化破坏。用有机溶剂从食物中提取。
• 胡萝卜素本身是一种色素，在450nm波长处有最大吸收。胡 萝卜素常与叶绿素、叶黄素等共存，在测定前，必须将胡萝 卜素与其它色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层 层析法，下面介绍的是纸层析法。
• ②、操作时加入乙酰氯可以消除温度的影响，可使 灵敏度比仅用三氯化锑提高约3倍。并可减少部分甾 醇的干扰。
• ③、此法不能区分D2和D3测定值是两者的总量。
2021/7/3
18
B、高效液相色谱法
• 1、原理 • 试样经皂化后，用苯提取不皂化物，馏去苯后，使用第一阶段的分
维生素类药物的分析方法
（3）维生素A在光照下产生的无活性的聚合物：鲸醇。 （4）维生素A的异构体等： 以上这些杂质在 310nm~340nm 的波长范围内有吸收， 所以干扰维生素A的测定。
12
5. 合成的维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式
维生素A，如供试品中干扰测定的杂质较少，能符合下 列第一法测定的规定时，可用溶剂溶解供试品后直接 进行测定，否则应按第二法，经皂化提取除去干扰后 测定。
pH不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值
（ΔA）。以浓度C为横坐标，以差示吸收值ΔA为纵坐 标绘制标准曲线。
30
样品的测定 取本品20片，精密称定，研细。精密称取适量粉末，
（2）反应介质需无水 （3）温度对呈色强度的影响很大 （ 4）本反应并非维生素 A专属，在相同条件下，某些有关物质均与
三氯化锑显蓝色，干扰测定，常使测定结果偏高。
（ 5 ）三氯化锑试剂有强的腐蚀性，易损坏皮肤和仪器，使用时应 严加注意。
15
（三）高效液相色谱法
采用RP-HPLC法同时测定人血清中维生素 A和维生素E的含量。 根据不同病理生理状态下人血清中维生素A、E的浓度，寻求弄清 与某些疾病的关系，为临床治疗学、营养学等研究提供参考。 1. 仪器与色谱条件 色 谱 柱 为 C18 ； 流 动 相 为 甲 醇 - 水 （ 96:4 ） ； 流 速 为 1.2ml/min。内标物为维生素A醋酸酯。 2. 分析用样品液 对照品：维生素A，维生素E，维生素A醋酸酯
维生素类药物的分析方法：
生物法 微生物法 化学法 物理化学法
2
第一节
维生素A的分析
维生素A 包括
第九章维生素的测定ppt课件
维生素的结构复杂： 分为： 胺类（B1） 醛类（B6） 醇类（A） 酚 醌类等
萝卜素，主要是β-胡萝卜素）
维生素A的测定常用的方法有: 三氯化锑比色法 紫外分光光度法 荧光分析法 液相色谱法。
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
比色法测定VA的含量 （GB/T 5009.82—2003中第二法） （一） 原理
维生素的分析方法
测定方法 生物鉴定法
微生物法 仪器分析（紫外法； 荧光法） 各种色谱法（柱、纸 、薄层层析）
现代高压液相色谱和 气相色谱
化学分析法（比色法
优点
不用详尽分离
选择性高，主要用于 水溶性V 灵敏、快速、有较好 的选择性 高分离效能，可分离 、纯人、定性、定量
缺点
费时（21天）费力（ 要动物饲料）
检查方法：三氯甲烷不稳定，放置后易受空气中氧的作用生 成氯化氢。检查时可取少量三氯甲烷置试管中加水振摇，使 氯化氢溶到水层。加入几滴硝酸银溶液，如有白色沉淀即说 明三氯甲烷中有分解产物。 （6） 25%三氯化锑-三氯甲烷溶液 用三氯甲烷配制25%三氯 化锑溶液，储于棕色瓶中（注意避免吸收水分） （7） 50%氢氧化钾溶液（KOH） W/V （8） 维生素A标准液 视黄醇（纯度85% Sigma）用脱醛乙 醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄 醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。 （9） 酚酞指示剂 用95%乙醇配制1%溶液
《中国药典》维生素c的含量测定
《中国药典》维生素c的含量测定维生素C是一种重要的水溶性维生素，也是人体所必需的营养物质之一。
在《中国药典》中，对维生素C的含量测定方法进行了详细的规定，以确保维生素C产品质量的可靠性和一致性。
《中国药典》中关于维生素C含量测定主要参考内容如下：1. 原理：维生素C的测定主要采用氧化还原反应原理，以氧化剂作为指示剂，测定待测样品中维生素C的氧化还原能力。
2. 试剂：(1) 0.1mol/L碘液：通过溶解碘粉和氢碘酸制备。
(2) 10%硫酸：将浓硫酸与等体积的蒸馏水混合而成。
(3) 混合指示剂：将0.1mol/L的淀粉溶液与蒸馏水按1:100混合。
(4) 维生素C对照溶液：浓度为1.00mg/mL的维生素C溶液。
3. 仪器设备：(1) 滴定管：用于滴定过程中调节试液加入速度。
(2) 滴定管架：用于固定滴定管。
(3) 温度恒定水浴：用于控制滴定温度。
4. 操作步骤：(1) 取适量待测样品，加入10%硫酸溶液挤压提取维生素C。
(2) 将提取液过滤，并将滤液冷却至室温。
(3) 取适量的滤液和维生素C对照溶液，用0.1mol/L碘液逐滴滴定到产生淡蓝色终点。
(4) 加入混合指示剂，继续滴定到溶液变为无色。
(5) 计算样品中维生素C含量。
5. 计算公式：维生素C（mg/g）=（V-V0）×C×V1/m其中，V为滴定终点消耗的0.1mol/L碘液体积（mL），V0为滴定过程中滴定管中的0.1mol/L碘液消耗体积（mL），C为0.1mol/L碘液浓度（mol/L），V1为滴定取样体积（mL），m 为样品质量（g）。
以上是《中国药典》中关于维生素C含量测定的相关参考内容。
通过实验操作，并结合计算公式，可以准确测定维生素C 的含量。
这些规定的制定和执行可以保障维生素C产品的质量及安全，帮助人们获得足够的维生素C供给，维持身体健康。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第九章
维生素的测定
教学目的与要求
• 掌握维生素Ａ、维生素Ｄ、维生素Ｃ的 测定方法和原理； • 熟悉维生素的生理功能； • 了解维生素测定的意义； • 了解其它维生素的测定方法和原理。
教学内容
• §１ 概述
• §２ 脂溶性维生素的测定 • §３ 水溶性维生素的测定
第一节 概 述
• 维生素是维持人体正常生命活动所必需的一
Hale Waihona Puke 三、维生素C的测定 2，6—二氯靛酚滴定法
2，4—二硝基苯肼比色法
GB/T 5009.86—2003 《蔬菜、水果及其制 品中总抗坏血酸含量测定方法》第二法 荧光法 GB/T 5009.86—2003 第一法
习
题
1、对于某一特定的维生素，在选择分析方法时 应考虑哪些因素？ ２、大多数维生素定量方法中，维生素必须先从 食品中提取出来，通常使用哪些方法提取维生 素？对于一水溶性维生素和一脂溶性维生素， 分别给出一个适当的提取方法。 • 有两种普通的AOAC法测定维生素C的含量， 辨别这两种方法，然后比较这两种方法所涉及 的原理。
脂溶性物质的干扰．不易比色测定： 该法的主要缺点是生成的蓝色络合物的稳定 性差。比色测定必须在 6秒钟内完成 ，否则蓝色 会迅速消退，将造成极大误差。
注意：
1. 维生素A见光易分解，整个实验应在暗处进 行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。
2. 三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯 化锑遇水生成白色沉淀．因此用过的仪器 要先用稀盐酸浸泡后再清洗。
三、β—胡萝卜素的测定 （GB/T 5009.83—2003 ） 第一方法是HPLC；
第二方法为纸层析法。
四、维生素D的测定
分析方法中较好的是比色法和高效 液相色谱法。 三氯化锑比色法
液相色谱法
第三节 水溶性维生素的测定
一、维生素Bl的测定 GB/T 5009.84—2003中唯一的方法 是荧光计法 二、维生素B 2的测定 GB/T 5009.85—2003中 第一法为荧光法； 第二法为微生物法。
二、比色法测定VA的含量 （GB/T 5009.82—2003中第二法） 原理： 在氯仿溶液中，VA与三氯化锑可 生成蓝色可溶性络合物，在 620 nm 波长 处有最大吸收峰，其吸光度与VA的含量在 一定的范围内成正比，故可比色测定。
•
适用范围及特点
本法适用于维生素A含量较高的各种样品(高
于 5—10 μ g ／g )，对低含量样品，因受其他
类天然有机化合物。
•其种类很多，目前已确认的有30余种，其中 被认为对维持人体健康和促进发育至关重要的 有20余种。 •这些维生素结构复杂，理化性质及生理功能各 异，有的属于醇类，有的属于胺类，有的属于 酯类，还有的属于酚或醌类化台物。
第二节 脂溶性V的测定
一、 高效液相色谱法测定食物中VA、VE （GB/T 5009.82—2003中第一法）