灭菌用生物指示剂指导原则(新增)
灭菌用生物指示剂指导原则（新增）
生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制
成品，可用于灭菌设备的性能确认、特定物品的灭菌工艺研发及建立、产品灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控、灭菌程序的定期再验证、隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等。
生物指示剂的分类
生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281的要求。
（1）由微生物芽胞和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。
载体和内层包装不得含有物理、化学或微生物的污染物，避免影响生物指示剂的性能和稳定性；不得被特定的灭菌工艺降解；能被灭菌介质（蒸汽、射线、化学试剂、过滤等）穿透并使灭菌介质与生物指示剂能充分接触。
载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。
（2）芽胞悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽胞混悬于液体中。
若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽胞数和、D值和Z 。
（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统。
系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。
自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。
自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。
该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。
生物指示剂用微生物的基本要求
生物指示剂含有对灭菌模式有明确耐受性的一种或两种微生物。
除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。
一般认为含芽胞的细菌更适合用于制
备生物指示剂。
不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的
（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。
（2）菌种应无致病性。
（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存。
（4）易于培养。
生物指示剂的芽胞含量要在90%以上
生物指示剂的制备
生物指示剂应按程序进行制备和质控。
制备前，需先确定所使用微生物的特性。
制备生物指示剂时，将所用的微生物在适宜条件下进行大规模培养、收集和纯化，然后将休眠（未萌发状态）芽胞悬浮于无营养的液体中保存。
生物指示剂应避免其它微生物的污染，制备后需进行各性能参数测定。
应建立和保存相关的微生物鉴定和制备记录，包括菌株来源，鉴别，与生物指示剂直接相关的材料和成分的溯源记录，传代次数，培养基和其制备方法，以及热处理前后数据，芽胞的耐受性（D值和Z值）等信息。
商品化的生物指示剂应具备详细的生物指示剂的性能特征和使用说明，包括明确其可用于何种灭菌程序、灭菌后的微生物培养条件和培养基、对灭菌程序的耐受性包括D值，D值测定方法、效期内的微生物总数和耐受稳定性，以及储存条件（包括温度，相对湿度和其它储存要求）、有效期和使用后的废弃措施等信息。
用户亦可根据需求选择可作为生物指示剂的微生物自制供内部使用的生物指示剂。
用户应确定自制生物指示剂的纯度、芽胞数、D值等参数，并制定有效期，以保证灭菌验证和监控的有效性。
生物指示剂应在标签条件或验证条件下进行储存，避光，远离毒性物质，防止过热和潮湿。
生物指示剂的应用
生物指示剂的性能评估
在灭菌程序的验证中，生物指示剂的被杀灭程度，是评价一个灭菌程序有效
性最直观的指标。
用户应根据使用目的制定商品化生物指示剂的验收标准，以保证生物指示剂的性能符合相关要求。
在生物指示剂验收前，可考虑对D值进行评估，必要时可进行D值测定，确认D值和微生物数量的稳定性对于长期存放的生物指示剂尤为重要。
接收商品化生物指示剂时，应进行微生物纯度和形态的鉴定及测定微生物数量。
生物指示剂应在有效期内使用，必要时应重新进行耐受性检查。
自制的生物指示剂的性能应符合应用的要求。
生物指示剂的选择
用户应根据特定的灭菌工艺选择适宜的生物指示剂。
生物指示剂对灭菌过程的挑战必须超出产品内外的自然微生物负荷量及耐受性的挑战，以保证灭菌程序有更大的安全性。
湿热灭菌法：湿热灭菌工艺常用的生物指示剂为嗜热脂肪地芽胞杆菌（Geobacillus stearothermophilus）。
其他耐热芽胞菌，如生孢梭菌（Clostridium sporogenes），枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）和凝结芽胞杆菌（Bacillus coagulans）的生物指示剂也被用于湿热灭菌工艺的建立和验证。
干热灭菌法：干热灭菌工艺，一般使用枯草芽胞杆菌生物指示剂（Bacillus subtilis）萎缩芽孢杆菌生物指示剂（Bacillus atrophaeus）进行验证，但更多则采用去热原方法加以验证，因为去热原所需的温度远高于灭菌温度。
电离辐射法：评价辐射灭菌工艺曾采用短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）生物指示剂，但现在一般采用剂量设定方法包含辐射灭菌前初始菌的评估以及辐射剂量评估，无需使用生物指示剂。
此外，也出现了比短小芽胞杆菌更抗辐射的微生物。
环氧乙烷灭菌法：环氧乙烷灭菌工艺，最常使用萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）生物指示剂进行验证。
过氧化氢（VHP）汽相灭菌法：VHP已被证明是一种有效的表面灭菌剂或消毒剂。
生物指示剂可以用于验证表面灭菌效果，一般要求芽胞数下降3～6个lg 值。
过氧化氢蒸汽灭菌工艺用生物指示剂一般选用嗜热脂肪地芽胞杆菌（Geobacillusstearothermophilus），也可用枯草芽胞杆菌（Bacillus
subtilis）、生孢梭菌（Clostridium sporogenes）或其它微生物。
过氧化氢蒸汽灭菌工艺用生物指示剂可以使用各种含有玻璃、金属或塑料的不透气载体系统。
像纤维基质或其它易于吸收VHP或水分的高吸附性表面，可能对用于微生物灭活的VHP的浓度产生不利影响，因此，这类材料不适宜作为VHP 生物指示剂的载体。
商品化生物指示剂的典型特征，见表1。
①芽胞数范围在 1.0 × 106至5.0 × 106。
②芽胞数范围在1.0 × 106至5.0 × 107。
③芽胞数范围在 1.0 × 105至5.0 × 106。
生物指示剂的应用
用户应科学的选择和使用生物指示剂。
在灭菌程序的建立、确定、验证和日常监控中,需对灭菌产品（包括其材料和包装）进行全面了解,确保灭菌参数能达到所需的SAL水平。
生物指示剂的初始微生物的数量、耐受性（菌体耐受性）和放置的位置、方式等情况都会影响其灭活效果。
需通过实验室研究确定产品各组成部分是否比产品内的溶液或药品更难灭菌。
根据产品中最难灭菌的部位，制定不同的工艺参数以确保无菌保证水平小于10－6。
在产品性能验证阶段，应确定产品最难灭菌部位的微生物灭活工艺参数。
在进行产品灭菌工艺验证时，最难灭菌部位的灭菌工艺参数应作为最低灭菌条件。
生物指示剂的初始微生物数量和耐受性都会影响到灭菌后的培养结果。
在湿热灭菌工艺中，生物指示剂的使用是通过生物学的方法来验证其物理杀灭力,只要D值足够，即使初始微生物数量低于106，使用生物指示剂仍然可以验证其灭菌效果。
对湿热灭菌耐受性差的物品，其无菌保证应通过比较生物指示剂与物品灭菌前微生物的污染水平(耐受性及微生物污染数量)及灭菌程序验证所获得的数据进行评估。
2020版药典微生物变更细则
控制菌检查
• 供试品检查
• 阳性对照试验 供试品进行控制菌检查时，应做阳
性对照试验。取阳性对照菌于相应选择性培养基
平皿上划线接种，按供试品的控制菌检查方法培
养，观察菌落生长情况。阳性对照试验应检出相
应的控制菌。
100μl
• 阴性对照试验 取增菌液0.1ml，照相应控制菌检
查法检查，作为阴性对照。阴性对照应无菌生长
• 保管菌毒种应有严格的登记制度，建立详 细的总账及分类账。收到菌毒种后应立即 进行编号登记，详细记录菌毒种的学名、 株名、历史、来源、特性、用途、批号、 传代冻干日期和数量。在保管过程中，凡 传代、冻干及分发，记录均应清晰，可追 溯，并定期核对库存数量。
• 收到菌毒种后一般应及时进行检定。用培 养基保存的菌种应立即检定
志贺菌、沙门菌
项目
供试品检查中志贺 菌、沙门菌结果判 定及下一步鉴定指 导
2015版药典
2020版药典
供试品平皿培养24 若有疑似菌落生长， 小时、48小时各观 应进行分离、纯化 察结果1次，若未 及适宜的鉴定试验， 见菌落生长，判供 确证是否为志贺菌、 试品未检出志贺菌、沙门菌或制品中的 沙门菌；若有菌落 目的菌；若平皿上 生长，应与阳性对 未见菌落生长，或 照的菌落比较，并 虽有菌落生长但鉴 做革兰氏染色镜检 定结果为非控制菌， 等适宜的鉴定试验，判供试品未检出志 鉴别是否为制品中 贺菌、沙门菌 的目的菌或志贺菌、 沙门菌。
排除目的菌干扰的
• 因供试品为活菌制品，应选用能抑制目的 菌生长的选择性培养基进行检查。除另有 规定外，营养琼脂培养基用于非致病性杂 菌的计数，玫瑰红钠琼脂培养基用于真菌 计数。
也可采用其它经验 证的培养基
真菌计数
高压灭菌生物指示剂使用说明
高压灭菌生物指示剂使用说明一、高压蒸汽灭菌器使用方法（1）在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
（2）加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到33、78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。
（3）继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。
二、高压蒸汽灭菌器注意事项：（1）待灭菌的物品放置不宜过紧。
（2）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。
（3）灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。
须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
又名:高压灭菌器,高压灭菌锅,高压蒸汽灭菌锅,手提高压灭菌器,手提高压灭菌锅,手提式高压灭菌器,手提式高压灭菌锅,手提式高压蒸汽灭菌器,手提式高压蒸汽灭菌锅（4）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
（5）为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115℃）或安息香酸（熔点为120℃）置于试管内，然后进行灭菌试验。
如上述物质熔化，则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求，灭菌的效果是可靠的。
也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的。
（6）现在已有微电脑自控型高压蒸气灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。
M压力灭菌用生物指示剂的使用方法
M压力灭菌用生物指示剂的使用方法Revised final draft November 26, 2020压力灭菌用生物指示剂1262该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1.将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;2.按照国家规范,分别将测试包放于锅内不同位置;3.灭菌完毕,取出该生物指示剂;4.挤破内含的安瓿,与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。
结果阅读：1.培养后指示管不变色(呈紫色),表示灭菌通过;2.培养后指示管变色(呈黄色),表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。
3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色),如阴性,可能的原因为:培养条件不符合要求;生物指示剂有问题;(应及时查出阴性原因)。
注意事项：1.灭菌完毕,含生物指示剂的包裹很热并有一定压力;需至少冷却10分钟以上,否则可能引起塑料管内的安瓿破裂,飞溅的碎片导致损伤;2.只有对照管为阳性,其生物监测结果才算有效。
3.贮存于室温:15-30℃;相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
1292该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。
3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3MATTEST290培养锅共用时,通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。
使用方法:1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号,负荷数量,灭菌日期;不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。
将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。
2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。
3、正常装载。
4、灭菌循环完毕,取出生物指示剂。
5、灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。
2020年版《中国药典》目录四部目录
附件42020年版《中国药典》目录四部目录通用技术要求目次通则制剂通则1 片剂2 注射剂3 胶囊剂4 颗粒剂5 眼用制剂6 鼻用制剂7 栓剂8 丸剂9 软膏剂乳膏剂10 糊剂11 吸入制剂12 喷雾剂13 气雾剂14 凝胶剂15 散剂16 糖浆剂17 搽剂18 涂剂19 涂膜剂20 酊剂21 贴剂22 贴膏剂23口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂24 植入剂25 膜剂26 耳用制剂27 洗剂28 冲洗剂29 灌肠剂30 合剂31 锭剂32 煎膏剂（膏滋）33 胶剂34 酒剂35 膏药36 露剂37 茶剂—1 —38 流浸膏剂与浸膏剂其他通则39 药材和饮片取样法40 药材和饮片检定通则41 炮制通则42 药用辅料43 制药用水44 国家药品标准物质通则45 一般鉴别试验光谱法46 紫外-可见分光光度法47 红外分光光度法48 荧光分光光度法49 原子吸收分光光度法50 火焰光度法51 电感耦合等离子体原子发射光谱法52 电感耦合等离子体质谱法53 拉曼光谱法54 质谱法55 核磁共振波谱法56 X射线衍射法57 X射线荧光光谱法色谱法58 纸色谱法59 薄层色谱法60 柱色谱法61 高效液相色谱法62 离子色谱法63 分子排阻色谱法64 气相色谱法65 超临界流体色谱法66 临界点色谱法67 电泳法68 毛细管电泳法物理常数测定法69 相对密度测定法70 馏程测定法71 熔点测定法72 凝点测定法73 旋光度测定法74 折光率测定法75 pH值测定法76 渗透压摩尔浓度测定法77 黏度测定法78 热分析法79 制药用水电导率测定法80 制药用水中总有机碳测定法其他测定法81 电位滴定法与永停滴定法82 非水溶液滴定法83 氧瓶燃烧法84 氮测定法85 乙醇量测定法86甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法87 脂肪与脂肪油测定法88 维生素A测定法89 维生素D测定法90 蛋白质含量测定法限量测定法91 氯化物检查法92 硫酸盐检查法93 硫化物检查法94 硒检查法95 氟检查法96 氰化物检查法97 铁盐检查法98 铵盐检查法99 重金属检查法100 砷盐检查法101 干燥失重测定法102 水分测定法103 炽灼残渣检查法104 易炭化物检查法105 残留溶剂测定法106 甲醇量检查法107 合成多肽中的醋酸测定法108 2-乙基已酸测定法特性检查法109 溶液颜色检查法110 澄清度检查法111 不溶性微粒检查法112 可见异物检查法113 崩解时限检查法114 融变时限检查法115 片剂脆碎度检查法116 溶出度与释放度测定法117 含量均匀度检查法118 最低装量检查法119吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法120 黏附力测定法121 结晶性检查法122 粒度和粒度分布测定法123 锥入度测定法124 比表面积测定法125 固体密度测定法126 堆密度和振实密度测定法分子生物学检查法127 聚合酶链式反应法128 细菌DNA特征序列鉴定法生物检查法129 无菌检查法130非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法131非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法132 非无菌药品微生物限度标准133 中药饮片微生物限度检查法134 抑菌效力检查法135 异常毒性检查法136 热原检查法137 细菌内毒素检查法138 升压物质检查法139 降压物质检查法140 组胺类物质检查法141 过敏反应检查法142 溶血与凝聚检查法—3 —生物活性测定法143 抗生素微生物检定法144 青霉素酶及其活力测定法145 升压素生物测定法146 细胞色素C活力测定法147 玻璃酸酶测定法148 肝素生物测定法149 绒促性素生物测定法150 缩宫素生物测定法151 胰岛素生物测定法152 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用测定法153 硫酸鱼精蛋白效价测定法154 洋地黄生物测定法155 葡萄糖酸锑钠毒力检查法156 卵泡刺激素生物测定法157 黄体生成素生物测定法158 降钙素生物测定法159 生长激素生物测定法160 放射性药品检定法161 灭菌法162 生物检定统计法中药其他方法163 显微鉴别法164 膨胀度测定法165 膏药软化点测定法166 浸出物测定法167 鞣质含量测定法168 桉油精含量测定法169 挥发油测定法170 杂质检查法171 灰分测定法172 酸败度测定法173 铅、镉、砷、汞、铜测定法174 汞、砷元素形态及价态测定法175 二氧化硫残留量测定法176 农药残留量测定法177 真菌毒素测定法178 注射剂有关物质检查法生物制品相关检查方法含量测定法179 固体总量测定法180 唾液酸测定法181 磷测定法182 硫酸铵测定法183 亚硫酸氢钠测定法184 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法185 氯化钠测定法186 枸橼酸离子测定法187 钾离子测定法188 钠离子测定法189 辛酸钠测定法190 乙酰色氨酸测定法191 苯酚测定法192 间甲酚测定法193 硫柳汞测定法194对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法195 O-乙酰基测定法196 已二酰肼含量测定法197 高分子结合物含量测定法198 人血液制品中糖及糖醇测定法199 人血白蛋白多聚体测定法200 人免疫球蛋白类制品lgG单体加二聚体测定法201 人免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法202 人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法203 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法204 lgG含量测定法205 单抗分子大小变异体测定法206 抗毒素/抗血清制品分子大小分布测定法207 单抗电荷变异体测定法208 单抗N糖谱测定法化学残留物测定法209 乙醇残留量测定法210 聚乙二醇残留量测定法211 聚山梨酯80残留量测定法212 戊二醛残留量测定法213 磷酸三丁酯残留量测定法214 碳二亚胺残留量测定法215 游离甲醛测定法216 人血白蛋白铝残留量测定法217 羟胺残留量测定法微生物检查法218 支原体检查法219 外源病毒因子检查法220 鼠源性病毒检查法221 SV40核酸序列检查法222 猴体神经毒力试验223血液制品生产用人血浆病毒核酸检测技术要求224 黄热减毒活疫苗猴体试验225禽源性病毒荧光定量PCR（Q-PCR）检查法生物测定法226 免疫印迹法227 免疫斑点法228 免疫双扩散法229 免疫电泳法230 肽图检查法231 质粒丢失率检查法232 外源性DNA残留量测定法233 抗生素残留量检查法234 激肽释放酶原激活剂测定法235 抗补体活性测定法236 牛血清白蛋白残留量测定法237大肠埃希菌菌体蛋白质残留量测定法238假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法239酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法240 类A血型物质测定法241 鼠lgG残留量测定法242 无细胞百日咳疫苗鉴别试验243 抗毒素、抗血清制品鉴别试验244A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法245 伤寒Vi多糖分子大小测定法246b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法247 人凝血酶活性检查法—5 —248 活化的凝血因子活性检查法249 肝素含量测定法250 抗A、抗B血凝素测定法251 人红细胞抗体测定法252 人血小板抗体测定法253 人免疫球蛋白类制品lgA残留量测定法254 免疫化学法生物活性/效价测定法255 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法256 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法257 人用狂犬病疫苗效价测定法258 吸附破伤风疫苗效价测定法259 吸附白喉疫苗效价测定法260 类毒素絮状单位测定法261 白喉抗毒素效价测定法262 破伤风抗毒素效价测定法263 气性坏疽抗毒素效价测定法264 肉素抗毒素效价测定法265 抗蛇毒血清效价测定法266 狂犬病免疫球蛋白效价测定法267 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法268 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法269 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）270 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（淋巴细胞毒试验）271 人凝血因子Ⅱ效价测定法272 人凝血因子Ⅶ效价测定法273 人凝血因子Ⅸ效价测定法274 人凝血因子Ⅹ效价测定法275 人凝血因子Ⅷ效价测定法276人促红素体内生物学活性测定法277 干扰素生物学活性测定法278 人白介素-2生物学活性测定法279人粒细胞刺激因子生物学活性测定法280人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法281牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法282人表皮生长因子生物学活性测定法283鼠神经生长因子生物学活性测定法284 尼妥珠单抗生物学活性测定法285 人白介素-11生物学活性测定法286 A型肉毒毒素效价测定法287Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗效力试验288 康柏西普生物学活性测定法特定生物原材料/动物及辅料289生物制品生产及检定用实验动物质量控制290 重组胰蛋白酶291 新生牛血清292 细菌生化反应培养基293 氢氧化铝佐剂294 生物制品国家标准物质目录药包材检测方法295 121℃玻璃颗粒耐水性测定法296 包装材料红外光谱测定法297 玻璃内应力测定法298 剥离强度测定法299 拉伸性能测定法300 内表面耐水性测定法301 气体透过量测定法302 热合强度测定法303 三氧化二硼测定法304 水蒸气透过量测定法305 药包材急性全身毒性检查法306 药包材密度测定法307 药包材溶血检查法308 药包材细胞毒性检查法309 注射剂用胶塞、垫片穿刺力测定法310 注射剂用胶塞、垫片穿刺落屑测定法试剂与标准物质311 试药312 试液313 试纸314 缓冲液315 指示剂与指示液316 滴定液317 对照品对照药材对照提取物318 标准品与对照品指导原则指导原则319 原料药物与制剂稳定性试验指导原则320 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则321生物样品定量分析方法验证指导原则322缓释、控释和迟释制剂指导原则323 微粒制剂指导原则324药品晶型研究及晶型质量控制指导原则325 分析方法确认指导原则326 分析方法转移指导原则327 分析方法验证指导原则328 药品杂质分析指导原则329 药物引湿性试验指导原则330 近红外分光光度法指导原则331 中药生物活性测定指导原则332基于基因芯片的药物评价技术与方法指导原则333中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则334 DNA测序技术指导原则335 标准核酸序列建立指导原则336药品微生物检验替代方法验证指导原则337非无菌产品微生物限度检查指导原则338药品微生物实验室质量管理指导原则339 微生物鉴定指导原则340药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则341无菌检查用隔离系统验证和应用指导原则342 灭菌用生物指示剂指导原则343生物指示剂耐受性检查法指导原则—7 —344 细菌内毒素检查法应用指导原则345 注射剂安全性检查法应用指导原则346 中药有害残留物限量制定指导原则347 色素测定法指导原则348 中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则349 中药中真菌毒素测定指导原则350 遗传毒性杂质控制指导原则351 生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则352 生物制品稳定性试验指导原则353正电子类放射性药品质量控制指导原则354锝[99m Tc]放射性药品质量控制指导原则355药用辅料功能性相关指标指导原则356 动物来源药用辅料指导原则357预混与共处理药用辅料质量控制指导原则358 药包材通用要求指导原则359 药用玻璃材料和容器指导原则360国家药品标准物质制备指导原则药用辅料品名目次1 乙二胺2 乙基纤维素3 乙基纤维素水分散体4 乙基纤维素水分散体（B型）5 乙酸乙酯6 乙醇7 二丁基羟基甲苯8 二甲基亚砜9 二甲硅油10 二甲醚11 二氧化钛12 二氧化硅13 二氧化碳14 十二烷基硫酸钠15 十八醇16 十六十八醇17 十六醇18 丁香茎叶油19 丁香油20 丁香酚21 丁烷22 丁基羟基苯甲醚23 七氟丙烷（供外用气雾剂用）24 三乙醇胺25 三油酸山梨坦26 三硅酸镁27 三氯叔丁醇28 三氯蔗糖29 大豆油30 大豆油（供注射用）31 大豆磷脂32 大豆磷脂（供注射用）33 小麦淀粉34 山梨酸35 山梨酸钾36 山梨醇37 山梨醇山梨坦溶液38 山梨醇溶液39 山嵛酸甘油脂40 门冬氨酸41 门冬酰胺42 己二酸43 马来酸44 马铃薯淀粉45 无水乙醇46 无水亚硫酸钠47 无水乳糖48 无水枸橼酸49 无水脱氢醋酸钠50 无水碳酸钠51 无水磷酸二氢钠52 无水磷酸氢二钠53 无水磷酸氢钙54 木薯淀粉55 D-木糖56 木糖醇57 中链甘油三酸酯58 牛磺酸59 月桂山梨坦60 月桂氮䓬酮61 月桂酰聚氧乙烯（6）甘油酯62 月桂酰聚氧乙烯（8）甘油酯63 月桂酰聚氧乙烯（12）甘油酯64 月桂酰聚氧乙烯（32）甘油酯65 巴西棕榈蜡66 玉米朊67 玉米油68 玉米淀粉69 正丁醇70 甘油71 甘油（供注射用）72 甘油三乙酯73 甘油磷酸钙74 甘氨酸75 可可脂76 可压性蔗糖77 可溶性淀粉78 丙二醇79 丙二醇（供注射用）80丙交酯乙交酯共聚物（5050）（供注射用）81丙交酯乙交酯共聚物（7525）（供注射用）82丙交酯乙交酯共聚物（8515）（供注射用）83 丙氨酸84丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物水分散体85 丙酸86 石蜡87 卡波姆共聚物88 卡波姆均聚物—9 —89 卡波姆间聚物90 甲基纤维素91 四氟乙烷（供外用气雾剂用）92 白凡士林93 白陶土94 白蜂蜡95 瓜尔胶96 对氯苯酚97 共聚维酮98 亚硫酸氢钠99 西曲溴铵100 西黄蓍胶101 肉豆蔻酸102 肉豆蔻酸异丙酯103 色氨酸104 交联羧甲纤维素钠105 交联聚维酮106 冰醋酸107 羊毛脂108 异丙醇109 红氧化铁110 纤维醋法酯111 麦芽酚112 麦芽糊精113 麦芽糖114 麦芽糖醇115 壳聚糖116 花生油117 低取代羟丙纤维素118 伽马环糊精119 谷氨酸钠120 肠溶明胶空心胶囊121 辛酸122 辛酸钠123 间甲酚124 没食子酸125 没食子酸丙酯126 尿素127 阿尔法环糊精128 阿司帕坦129 阿拉伯半乳聚糖130 阿拉伯胶131 阿拉伯胶喷干粉132 纯化水133 环甲基硅酮134 环拉酸钠135 苯扎氯铵136 苯扎溴铵137 苯甲酸138 苯甲酸钠139 苯甲醇140 苯氧乙醇141 DL-苹果酸142 L-苹果酸143 松香144 果胶145 果糖146 明胶空心胶囊147 依地酸二钠148 依地酸钙钠149 乳糖150 单双硬脂酸甘油酯151 单亚油酸甘油酯152 单油酸甘油酯153 单硬脂酸乙二醇酯154 单糖浆155 油酰聚氧乙烯甘油酯156 油酸乙酯157 油酸山梨坦158 油酸钠159 泊洛沙姆188160 泊洛沙姆407161 组氨酸162 枸橼酸163 枸橼酸三乙酯164 枸橼酸三正丁酯165 枸橼酸钠166 轻质氧化镁167 轻质液状石蜡168 氢化大豆油169 氢化蓖麻油170 氢氧化钠171 氢氧化钾172 氢氧化铝173 氢氧化镁174 香草醛175 胆固醇176 亮氨酸177 活性炭（供注射用）178 浓氨溶液179 盐酸180 桉油精181 氧化钙182 氧化锌183 氧化镁184 氨丁三醇185 倍他环糊精186 胶态二氧化硅187 胶囊用明胶188 粉状纤维素189 烟酰胺190 烟酸191 DL-酒石酸192 L（＋）-酒石酸钠193 酒石酸钠194 海藻酸195 海藻酸钠196 海藻糖197 预胶化羟丙基淀粉198 预胶化淀粉199 黄凡士林200 黄原胶201 黄氧化铁202 硅酸钙203 硅酸镁铝204 硅藻土205 甜菊糖苷206 脱氢醋酸207 脱氧胆酸钠208 羟乙纤维素—11 —209 羟丙甲纤维素210 羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯211 羟丙甲纤维素空心胶囊212 羟丙纤维素213 羟丙基倍他环糊精214 羟丙基淀粉空心胶囊215 羟苯乙酯216 羟苯丁酯217 羟苯丙酯218 羟苯丙酯钠219 羟苯甲酯220 羟苯甲酯钠221 羟苯苄酯222 混合脂肪酸甘油酯（硬脂）223 液状石蜡224 淀粉水解寡糖225 蛋黄卵磷脂226 蛋黄卵磷脂（供注射用）227 维生素E琥珀酸聚乙二醇酯228 琥珀酸229 琼脂230 葡甲胺231 葡糖糖二酸钙232 椰子油233 棕氧化铁234 棕榈山梨坦235 棕榈酸236 棕榈酸异丙酯237 硬脂山梨坦238 硬脂富马酸钠239 硬脂酸240 硬脂酸钙241 硬脂酸锌242 硬脂酸聚烃氧（40）酯243 硬脂酸镁244 硝酸钾245 硫酸246 硫酸钙247 硫酸钠248 硫酸钠十水合物249 硫酸铝250 硫酸铵251 硫酸羟喹啉252 紫氧化铁253 黑氧化铁254 氯化钙255 氯化钠（供注射用）256 氯化钾257 氯化镁258 氯甲酚259 稀盐酸260 稀醋酸261 稀磷酸262 焦亚硫酸钠263 焦糖264 普鲁兰多糖空心胶囊265 滑石粉266 富马酸267 酪氨酸268 硼砂269 硼酸270 微晶纤维素271 微晶纤维素胶态二氧化硅共处理物272 微晶蜡273 腺嘌呤274 羧甲纤维素钙275 羧甲纤维素钠276 羧甲淀粉钠277 聚乙二醇300（供注射用）278 聚乙二醇400279 聚乙二醇400（供注射用）280 聚乙二醇600281 聚乙二醇1000282 聚乙二醇1500283 聚乙二醇4000284 聚乙二醇6000285 聚乙烯醇286 聚山梨酯20287 聚山梨酯40288 聚山梨酯60289 聚山梨酯80290 聚山梨酯80（Ⅱ）291 聚丙烯酸树脂Ⅱ292 聚丙烯酸树脂Ⅲ293 聚丙烯酸树脂Ⅳ294 聚卡波菲295 聚甲丙烯酸铵酯Ⅰ296 聚甲丙烯酸铵酯Ⅱ297 聚氧乙烯298 聚氧乙烯油酸酯299 聚氧乙烯（40）氢化蓖麻油300 聚氧乙烯（60）氢化蓖麻油301 聚氧乙烯（50）硬脂酸酯302 聚氧乙烯（35）蓖麻油303 聚维酮K30304 聚葡萄糖305 蔗糖306 蔗糖八醋酸酯307 蔗糖丸芯308 蔗糖硬脂酸酯309 碱石灰310 碳酸丙烯酯311 碳酸氢钠312 碳酸氢钾313 精氨酸314 橄榄油315 豌豆淀粉316 醋酸317 醋酸纤维素318 醋酸钠319 醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯320 糊精321 缬氨酸322 薄荷脑323 磷酸324 磷酸二氢钠一水合物325 磷酸二氢钠二水合物326 磷酸二氢钾327 磷酸钙—13 —328 磷酸钠十二水合物329 磷酸氢二钠十二水合物330 磷酸氢二钾331 磷酸氢二钾三水合物332 磷酸氢二铵333 磷酸氢钙二水合物334 磷酸淀粉钠335 麝香草酚。
9207灭菌用生物指示剂指导原则(新增)
9207灭菌用生物指示剂指导原则（新增）生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认、特定物品的灭菌工艺研发及建立、产品灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控、灭菌程序的定期再验证、隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等。
生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281的要求。
（1）由微生物芽孢和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。
载体和内层包装不得含有物理、化学或微生物的污染物，避免影响生物指示剂的性能和稳定性；不得被特定的灭菌工艺降解；能被灭菌介质（蒸汽、射线、化学试剂等）穿透并使灭菌介质与生物指示剂能充分接触。
载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、及运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。
（2）芽孢悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽孢混悬于液体中。
若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽孢数和D值。
（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统，其耐受性是针对整个系统而言。
系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。
自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。
自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。
该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。
生物指示剂用微生物的基本要求除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。
一般认为含芽孢的细菌更适合用于制备生物指示剂。
不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物应具备以下特性：（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。
（2）菌种应无致病性。
（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存。
欧盟发布《灭菌工艺指南》取代灭菌决策树文件
欧盟发布《灭菌工艺指南》取代灭菌决策树文件3月8日，EMA 发布了新的《药品、活性物质、辅料和内包材灭菌指导原则》。
该指南将取代灭菌决策树文件CPMP/QWP/054v98，为无菌产品选择合适的灭菌方法提供了依据和指导。
该指南解读如下：一般要求：∙应指定灭菌前的生物负荷控制标准。
∙应规定组件和待灌装溶液的生物负荷和细菌内毒素（如适用）的接受标准。
∙如果使用二级容器(例如用于保持输液袋或泡罩外部无菌的外袋), 应说明包装过程, 包括风险评估, 因为它可能会影响成品的无菌性;例如, 在内包装容器和二级容器之间残留水分。
应提供关于何时 (灭菌前或灭菌后) 进行包装步骤以及所采用的任何无菌技术的信息。
工艺应从微生物的角度加以证明。
如果使用二级容器意味着需要对成品进行额外的灭菌, 则应在无菌保证和对成品质量的任何潜在影响方面进行论证。
蒸汽灭菌：∙所有蒸汽灭菌工艺都要求最低杀灭力为F0≥8分钟, 最低工艺温度为110°C。
∙如果使用F0作为监测工艺杀灭力的额外控制, 则应说明 F0, 并由温度传感器测量的最低温度来确定 F0。
∙成品温度低于115°C的蒸汽灭菌保持阶段是一种特殊情况, 应进行论证∙如果 F0 的测定中包括低于110°C 的温度 (在加热和冷却过程中), 则应进行论证。
∙F0＜8可以作为无菌加工的终端热处理，不应作为不良无菌生产操作的补偿。
有没有无菌加工终端热处理在无菌工艺部分的要求是一样的。
∙尽管使用过度杀灭，也应定义灭菌前的生物负荷水平（≤100 CFU/100ml），对于蒸汽灭菌前的生物负荷水平要求如下：∙对于F0＜8的工艺，要求待处理溶液的生物负荷≤0CFU/100ml∙如所使用生物指示剂D值＜1.5min，应对灭菌前生物负荷进行鉴定，并确认其耐热性。
应论证灭菌阶段开始和结束，即记录F0的开始和结束∙对于采用过杀的灭菌程序，需证明微生物下降12个log.干热灭菌：∙对于肠外成品制剂, 在没有进一步理由的情况下, 最大生物负荷为 100 CFU/100 g 或 100 CFU/100 毫升。
2020版药典微生物变更细则解读
控制菌检查
供试品检查
阳性对照试验 供试品进行控制菌检查时，应做阳 性对照试验。取阳性对照菌于相应选择性培养基
平皿上划线接种，按供试品的控制菌检查方法培
养，观察菌落生长情况。阳性对照试验应检出相
应的控制菌。
100μl
阴性对照试验 取增菌液0.1ml，照相应控制菌检
查法检查，作为阴性对照。阴性对照应无菌生长。
基本要求： 微生态活菌制品的制备方法、工艺应能保证
成品含有足够的活菌数量，保持其稳定性，同时 应防止外源因子的污染。生产和检定用设施、原 材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例” 的有关要求。
生产用菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定
• 名称及来源； • 种子批的建立：三级种子批应分别冻干，
附录3 微生态活菌制品杂菌检查法
新增：
如果供试品本身对某些试验菌具有较强的抑菌 性能，影响试验菌的回收。在此情况下，应根 据原辅料的杂菌负载、生产工艺及产品特性进 行风险评估，保证检验方法的可靠性；在药品 生产、贮藏各个环节中，应严格遵循GMP的指 导原则，以降低产品受杂菌污染的风险。
附录3 微生态活菌制品杂菌检查法
铜绿假单胞菌
项目
供试品检查中 铜绿假单胞菌 结果判定及下 一步鉴定指导
2015版药典
2020版药典
如平皿上无菌落生长或生长的菌 供试品平皿上若 落与阳性对照菌落形态特征不符， 有疑似菌落生长， 判供试品未检出铜绿假单胞菌； 取菌落分离、纯 如平皿生长的菌落与上述菌落形 化后采用氧化酶 态特征相符或疑似，应挑选2-3个 试验及适宜的鉴 菌落，分别放在接种于营养琼脂 定试验，确证是 培养基斜面上，培养18-24小时。 否为制品中的目 取斜面培养物进行革兰氏染色、 的菌或铜绿假单 镜检及氧化酶试验，鉴别是否为 胞菌 制品中的目的菌或铜绿假单胞菌
0002015-01 生物指示剂(BI)管理规程
目录1. 目的 (3)2. 范围 (3)3. 定义 (3)4. 职责 (3)5. 程序 (3)6. 相关文件 (5)7. 附件 (5)8. 历史记录 (5)9. 发放部门 (5)1.目的建立生物指示剂管理规程，加强对生物指示剂购入、使用等的管理，保证生物指示剂在预定的质量状态，保证检验结果的准确和可信。
2.范围适用于广州科锐特生物科技有限公司质量控制实验室生物指示剂（BI）的管理。
3.定义3.1生物指示剂（Biological Indicators）：简称BI，是一类特殊的活微生物制品，是对特定灭菌工艺有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，可用于确定灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
生物指示剂按用途可分为湿热灭菌用生物指示剂、干热灭菌用生物指示剂、离子辐射用生物指示剂、环氧乙烷灭菌生物指示剂、液态过氧化氢（VPHP）灭菌用生物指示剂。
生物指示剂按形态可分芽孢条（Spore Strip）、芽孢悬浮液（Spore Suspension）、自含型生物指示剂（Self-contained Indicator）。
3.2COA：产品质量检验报告书。
4.职责4.1质量控制部负责本文件的起草、修订、审核、培训及执行。
4.2质量保证部负责本文件的审核及文件执行过程中的监督。
4.3质量负责人负责本文件的审批。
5.程序5.1生物指示剂的申购5.1.1生物指示剂的使用人员应根据验证要求，选择合适的生物指示剂，应在生物指示剂还有一定的库存的时候，根据日后的验证需求，提出生物指示剂合理的购买数量。
5.1.2供应商需能够提供产品的COA，COA中需包括微生物种类、孢子量、D值、有效期等内容。
5.2生物指示剂的接收5.2.1新购入的生物指示剂由生物安全管理员接收，接收时需核对COA中微生物种类、孢子量和D值等内容，查看生物指示剂的规格是否与计划的一致，不可用的剔出；仔细检查生物指示剂包装是否破损，有破损的剔出；核对生物指示剂的有效期，过期的剔出。
灭菌验证中关于生物指示剂
灭菌验证中关于生物指示剂关于生物指示剂生物指示剂系一类特殊的活微生物制品。
可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。
（一）制备生物指示剂用微生物的基本要求不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性：①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染微生物的耐受性；②菌种应无致病性；③菌株应稳定。
存活期长，易于保存；④易于培养。
若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。
（二）生物指示剂的制备生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示）等。
菌株应用适宜的培养基进行培养。
培养物应制成悬浮液，其中孢子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。
生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式，通常是将一定数量的孢子附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。
生物指示剂应选用合适的材料包装，并设定有效期。
载体和包装材料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触。
载体和包装应设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。
有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。
使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。
（三）生物指示剂的应用在灭菌程序的验证中，尽管可通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。
可使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的最耐受微生物制备的孢子。
在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的耐受性，并测定孢子的纯度和数量。
验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。
浅谈药品微生物限度检查存在的问题
浅谈药品微生物限度检查存在的问题摘要：非无菌药品在生产、运输、储存等环节可能会引入微生物污染。
微生物限度检查是非无菌药品质量标准检查项下内容，将是检查药品中微生物污染状况，保障用药安全性和有效性的重要方法。
药品中很多组分都有抑菌作用，从而干扰检查结果的准确性，因此中国药典规定微生物限度检查所选方法的适用性必须要经过确认。
方法适用性试验影响因素很多，其中标准菌株的保存、活化、使用、加菌回收是方法适用性试验的操作难点和关键点之一。
关键词：药品微生物限度检查存在的问题引言制药行业中涉及的微生物检验主要分为生产过程监控和出厂检验两部分。
生产过程监控包括原辅料和中间产品的检验，制药用水的监控，微生物药物的发酵菌种等的鉴定分析，环境微生物的监控、调查和溯源；出厂检验包括终产品的无菌检查，非无菌产品的微生物限度检查，微生物菌株等的鉴定分析。
微生物检测分析方法包括微生物的检测、筛选、计数和鉴定等。
由于传统微生物检测方法简单有效且相对成本低，适用于大部分微生物检测实验室，同时这些方法也存在检验周期长和不能实时反馈工艺和产品现状等问题，成为生产过程微生物质量实时监控及快速放行的障碍，不完全适用于基于过程控制和风险评估的现代化制药行业管理模式。
一、检验方法根据《中国药典》（2020版）[1101]以及相关药品检验要求，对药品进行微生物限度检验，检验内容包括需氧菌总数、霉菌，酵母菌数、控制菌检验，详细记录各种误差发生情况，同时分析影响检验结果误差的主要因素。
在误差影响因素分析中，按照以下步骤进行分析：（1）确认一级影响因素指标，具体包括检验人员（“人”）、检验器具与设备（“机”）、检验材料（“样”）、检验方法（“法”）、检验所处的环境（“环”）；（2）确认二级影响因素指标，在一级指标的基础上进行细化二级指标，同时排除一些不可控因素，如空气质量、材料、实验室来源菌控制等。
其中，“人”包括检验人员的质量控制意识和操作技能水平；“机”包括器皿、设备的洁净度以及设备的性能；“样”包括样品污染程度、活体易变性、抑菌成分、原材料含菌量、原菌液材料质量；“法”包括操作技术标准、材料控制标准、实验室环境质量控制标准；“环”包括培养基质量控制、菌悬液的质量、验证用菌的传代次数、检验技术问题、稀释准确性、菌悬液培养时间控制、菌液保存质量。