痴呆动物模型
mcao拟血管性痴呆大鼠模型的建立3
mcao拟血管性痴呆大鼠模型的建立一、引言血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）是一种由脑血管疾病引起的认知功能障碍，严重影响了患者的生活质量。
目前，VD的病理机制尚不完全清楚，因此建立可靠的动物模型对于深入研究VD的发病机制、早期诊断和治疗具有重要意义。
本研究旨在通过改进线栓法制备大脑中动脉阻塞（Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO）大鼠模型，以模拟VD的病理过程，为VD的研究提供一个新的工具。
二、材料与方法1. 实验动物选取健康雄性SD大鼠，体重在250300g之间，饲养于清洁级动物房，自由摄食和饮水。
动物实验符合动物伦理学要求。
2. MCAO模型的制备（1）手术准备：大鼠术前禁食12小时，不禁水。
术前10分钟腹腔注射10%水合氯醛（350mg/kg）麻醉。
麻醉后，将大鼠仰卧位固定于手术台上，剪去颈部毛发，消毒皮肤。
（3）模型评估：术后24小时进行神经功能缺损评分（Neurological Severity Score，NSS）和脑梗死体积测量。
NSS评分包括运动、感觉和平衡功能，总分018分，分数越高表示神经功能缺损越严重。
脑梗死体积通过TTC染色法测量，梗死体积百分比（%）=（梗死体积/半球体积）×100%。
3. 数据处理采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。
计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。
P<0.05为差异有统计学意义。
三、结果1. MCAO模型的制备成功率本实验共制备MCAO大鼠模型40只，成功率为95%（38/40）。
失败原因包括术中出血、术后死亡等。
2. 神经功能缺损评分术后24小时，MCAO组大鼠的NSS评分为（14.5±1.8）分，显著高于假手术组（1.8±0.5）分（P<0.01）。
3. 脑梗死体积术后24小时，MCAO组大鼠的脑梗死体积百分比为（38.5±5.2）%，显著高于假手术组（0.0±0.0）%（P<0.01）。
拟血管性痴呆动物模型制备的实验研究
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陕西 医学 杂志 ２ ０ 年 ２月第 ３ 卷 第 ２ ０８ ７ 期
拟 血 管性痴 呆 动 物模 型 制备 的 实验研 究
广 西壮族 自治 区人 民 医院 神经 内科 （ 南宁 ５ ０ ２ ） ３ ０ １ 蔺心敬 殷 舞 李 吕力 王铁建 罗永 坚 董艳玲 肖继 东 摘 要 目的 ： 讨制备 理 想的血 管性痴 呆动物模 型 方法 。 法 ： 用反 复 大鼠双侧 颈 总动 探 方 采
老年性痴呆动物模型研究进展
A new target for antihepatof ibrosis:N a+/H+exchangersCHEN Hou2Chang,L IU Y ong2G ang(Dept of Pharm acology,the Fi rst M ilitary Medical U niversity,Guangz hou 510515)ABSTRACT Na+/H+exchangers(N HE)are vital transmembrane proteins involved in multiple cellular functions including the regulation of intracellular p H, the control of cell volume and the onset of prolifera2 tion,differentiation and apoptosis of cells,hence as2 sociated with liver fibrosis due to mediating hepatic stellate cell(HSC)activation and collagen synthesis effects induced by cytokines and oxidative stress. N HE is expected to be a new important target for an2 tihepatofibrosis.KEY WORDS Na+/H+exchanger;liver fibrosis老年性痴呆动物模型研究进展丛伟红 刘建勋(中国中医研究院西苑医院实验研究中心,北京 100091)中国图书分类号 R749116;R2332;文献标识码 A 文章编号 100121978(2003)0520497205摘要 老年性痴呆(Alzheimers disease,AD)是以老年斑和神经纤维缠结为特征的一种进行性、退行性神经系统疾病。
阿尔茨海默病的非转基因动物模型概述
阿尔茨海默病(Alzheimer ’s disease,AD)又称老年性痴呆,是老年人群中发病率最高的神经退行性疾病。
其临床症状表现为短期记忆衰减、视觉空间技能损害、思维钝化、注意力无法集中、语言功能障碍及人格变化等,给患者及其家庭带来沉重的负担。
AD 的主要病理特征包括:胞外β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,A β)异常沉积形成老年斑、胞内过度磷酸化的Tau 蛋白聚集形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFT),以及神经元丢失[1]。
AD 的发生受多种因素影响,而年龄是AD 发病的首要危险因素,随着年龄的增长,AD 的患病率成倍增加[2]。
2022年的统计数据显示,全球有5000万AD 患者,仅美国65岁的老年群体患者就达650万人,相关花销预计将超过3000亿美元[3]。
目前,AD 发病假说众多,但是发病机制不明确,且尚无有效治疗药物,特别是针对中重DOI:10.16605/ki.1007-7847.2022.03.0128阿尔茨海默病的非转基因动物模型概述收稿日期:2022-03-25;修回日期:2022-09-21;网络首发日期:2022-10-24基金项目:深圳市基础研究学科布局项目(JCYJ20180507182417779)作者简介:邓云松(1997—),男,广东深圳人,硕士研究生;*通信作者:肖时锋(1984—),男,江西吉安人,博士,副研究员,主要从事阿尔茨海默病的机制和药物研究,Tel:*************,E-mail:*************.cn 。
邓云松,邹妙湛,肖时锋*(深圳大学生命与海洋科学学院,中国广东深圳518060)摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer ’s disease,AD)是一种由多种因素引发、在临床上表现为不可逆认知功能下降的神经退行性疾病。
AD 是当今世界所有国家均面临的一大挑战,其包括遗传型和散发型,其中95%以上的患者为散发型。
血管性痴呆(VD)动物模型制作及方法
血管性痴呆(VD)动物模型制作及方法一、双侧颈总动脉阻断模型(Model of occlusion of bilaterial carotis communis artery)(1)复制方法雄性大鼠，体重为250～300g。
以水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)经腹腔注射麻醉后仰卧位，剃除颈部毛发，手术区域皮肤消毒。
颈部正中切口，钝性分离双侧颈总动脉，用1号线将其行结扎。
缝合切口后再行局部消毒，小心放回笼内(每笼一只待其完全清醒)。
局部伤口缝合前，可用庆大霉素3～5滴滴入局部伤口内防止感染。
术后正常饲养12周，自第13周起可开始分组给药治疗。
行为学检验可采用穿梭箱法和Morris水迷宫分析系统，进行定位航行实验和空间探索试验。
(2)模型特点术后的1～3周，陆续有动物死亡发生，其死亡率在20％～40％，因此需根据实验情况增加手术动物的总数。
(3)比较医学该模型由于阻断了双侧颈总动脉，造成了脑部急性供血不足，随后可通过基底动脉和基底动脉环血流调节以及逐渐形成的侧支循环所改善，但海马区达不到正常脑供血水平，形成慢性大脑缺血，模拟了人类由于血管粥样硬化使头颈动脉逐渐狭窄所致的慢性大脑供血不。
水迷宫实验显示，动物的定位航行和空间探索能力均降低，痴呆率达80％左右。
该模型可用于研究痴呆脑组织的形态及病理生理变化机制，也可用于判定某些治疗手段和药物的效果。
二、双侧颈总动脉、椎动脉阻断模型(Model of occlusion of bilaterial carotis communis artery with vertebral artery)(1)复制方法雄性大鼠，体重为300～350g。
以水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)经腹腔注射麻醉后俯卧位固定于立体定位仪上，剃除颈部毛发，手术区域皮肤消毒。
行背侧颈部正中切口，逐层钝性分离暴露双侧第1颈椎横突小孔，用直径0.5mm的电凝针烧灼双侧翼小孔内的椎动脉，造成闭塞。
大鼠血管性痴呆动物模型的研究进展
Ｖ Ｄ动物模 型 的研究进 展综 述如 下 ：
１ 模 型 制 作 方 法
种认 知功 能 缺 损 综 合 征 。 患 者 多 为 慢 性 、 行 性 、 进 持续 性智 能障 碍综 合 征 ， 床 表现 为 记 忆 及认 知 等 临 功能 障碍 综合 征 … 。建 立 Ｖ 动 物模 型 ， Ｄ 对深 入 探 讨该 病 的发病 机制 、 理 学 特 点 以及 临床 患 者 的早 病
ｄ ｉ ０． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ １ ７ ５ ． ０ ２ ０ ３ Ｏ １ ｏ：１ ３ ６ ／．ｓｎ １ ７ ． ８ ６ ２ １ ． ０ ． １
Ｒｅ ｅ ｓ ａ ｃ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｒａ ｏ ｌｏ ｓ ｕ ａ ｍ ｅ ｔａ ｃ ｎｔＲｅ ｅ ｒ ｈ Ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｔ Ｍ ｄｅ ｆ Ｖａ ｃ ｌ ｒ Ｄｅ ｎ ｉ
ｔ ｔ ｌｇ ｈｅ ｅｈｏｏ ｙ，ｈ ｓｏ ｒ ｏ ｏ ｙ，ｎ ｒ ｅ ａ ｄ ｂｉｃ ｅ ｉａ ｎ ｉ ａｏ ，ｉ ｇｎ ｎｄ ｏ ｈ ｒｏ ｓ ｒ ａｉ ｎ ｔｒ ｅ ｓ ｏ ｎ ｍａ ｄ ｌｏ ｉｔ ｍｏｐｈ ｌｇ ｅ ｖ ｎ ｏ ｈ ｍ ｃ ｌｉ ｄ ｃ ｔｒ ｍａ ｉｇ ａ ｔ ｅ ｂ ｅｖ ｔｏ ａ ｇ ｔ ｎ ａ ｉ ｌｍｏ ｅ ｆ ｖ ｓ ｕ ａ ｅ ｎｔａ ｉ ｅ ｅ ｔｙ ａ ｓ Ｓ ｐ ｙ ｒ ｌｔ ｄ ｅ ｉ ｎ ｅ ｆｒｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔｌｒ ｓ ａ ｃ ｎ ｆ ｕ ｅ． ａ ｃ ｌ ｒｄ ｍｅ ｉ ｎ ｒｃ ｎ ｅ ｒ． ｕ ｐｌ ｅ ａｅ ｖｄｅ ｃ ｏ ｘ ｅ ｉ ｎａ ｅ ｅ ｒｈ ｉ ｕｔｒ
共 同完 成脑供 血 ， 相 似 的脑 血 管解 剖 特 点 。且 大 有 鼠较 其 他 动 物 价 格 便 宜 、 存 率 高 、 殖 快 、 饲 生 繁 易 养 、 于检测 ， 较 强 的生 命 力 和 抗感 染 能 力 ， 便 有 目前 是制 备 Ｖ Ｄ模 型 最 适 宜 的 动 物 。本 文 现 将 大 鼠
血管性痴呆的动物模型
医 ｌＩｌ Ｉ 与保 健
血 管性 痴呆 的动物模 型
周 原
（ 辽东学院基础 医学院， 东 辽 宁 １３０ ） 丹 １０ ８
摘 要： 前常 用于研究血管性痴呆的动物模型主要 有四血 管阻断（一 ｏ ｔ 目 ４ ｖ ）和双侧颈总动脉结扎 （ Ｖ ） ， ２ ｏ 模型 但也有许 多不 同造模 型的方 一
法 ， 细介 绍 这 些 ห้องสมุดไป่ตู้ 法 。 详
关键词： 血管性痴呆； 动物模型 ； 研究
１ 双侧颈总动脉结扎模型（一 ｏ 就是永久 间长而 ２ｖ ） 人类血管性 途径。建立成功的衰老动物模型对 于揭示衰老机 制和研究抗衰老药物作用机制有着十分重要的意 性结扎双侧 颈总动脉 ， 方法是 ｌ％ Ｏ 水合氯醛按 痴呆 相似 。 相信随着衰老及抗衰老研究的不断深入， 更为 ４０ ｇ ｇ ０ ｍ ／ 腹腔注射麻醉后＇ 卧位， ｋ ｆ 印 颈部正 中切口， ５高脂血症血管性痴呆大 鼠 模型０ 首先将实 义， 分离双侧颈总动脉， １ 用 号线将其永久性结扎 术 验大鼠用高脂饲料喂养 １ 月后， 个＿ 测其血脂经证实 理想的动物模型将会问世。动物模型研究也应顺 后缝合切１２ ｖ ３ 一 ｏ法制作的血性痴呆模型具有创 已 增高后霜用 １ ∞冰 合氯醛按 ３ Ｌ ｇ ｍ ｌ 腹腔麻醉， 应这—新的变化塌终 使人类能够藉动物模型的 ｋ 研 有效的方 伤大、 死亡率高、 导致痴呆 的时程长等缺点胆 这种 颈正中去毛， 碘酒消毒腹 侧颈正中切 口 露并分 究摊 动老年痴呆治疗学向着更加安全 、 暴 动脉穿 线备用。缺血时闭阻双侧颈总 向发 展 。 方法实质上是以慢性低灌注引起脑缺血缺氧最 终 离双侧觋总 导致神经细胞功能下降 、 习记忆功能障碍， 学 较好 动脉 ３ 每次 １ ｍｎ 次， ０ ｉ 每次 间隔 １ ｍｎ ， ０ ｉ 此法是模 参考 文献 地模拟了人类 因动脉粥样硬化、动脉管腔狭窄等 拟 Ｖ 发病的 Ｄ 危险因素， 如高脂血症而建立的一种 『 ｕｓ ｅ ｉ １ Ｐ ｌ ｎ ｌ １ ｉ ｌ ＷＡ ，Ｂ ｉｒ ｙ Ｊ ． ｅ ｏ ｅ ｆ ｒ ｌ Ｂ Ａ ｎ ｗ ｍ ｄ ｌｏ ｅｅ ｂ ｌｔ ｒｌ ｈ ｍｉ ｓ ｈ ｒｃ ｓ ｈ ｍｉ ｎ ｈ ｕ ａ ｅ — ｉ ｅ ａ ｅ － ｐ ｅｉ ｉｃ ｅ ａ ｉ ｔ ｅ ｎ ｎ ｓ ａ 因素导致的血管性痴呆 。而且 以永久性结扎双侧 动物模型接 近人类实际情况。 颈总动脉导致痴呆的老年大鼠＇ 在结扎术后 ２ 个月 ６ 舌下静脉注入铁粉法 叫 ，用戊巴比妥钠 ｔｅ ｚｄｒｔ ［ ｈｔ ｅ ａ ｉ Ｊ］． ｔ ｋ １７ Ｓｒ ｅ， ９，１ （ ： ６ ｏ ９ ０ ３ ２ ７— ） ７． ４ ０ 注射麻醉大鼠然 后固定于动物大脑 ２ ２ 学习记 仍无恢复趋势这 将有利于药物疗效 （ ｍ 的动态观察。可以作为血管性痴呆模型用于基础 立体定位仪上， 常规消毒＇ 正中切开头皮暴露颅骨， ［ ｏｄｔ ｍ Ｃ ， ｉｓ Ｋ ｆｃｓｏ ｈ ｎ— ２ ｒｓｏ Ｈ Ｓｅｊ Ｂ ．Ｅ ｅｔ ｆ ｅｏ ］Ｎ ｒ ｏ ｐ ａ ｂ ｔ ｎ ｅ ｒ — ｒ ｉｃ ｅ ａ ｌ ａ ｌ ａ ｅｅ ｒｌ 实验研究。 选以下部位安放电 额部位于前囱前 ２ ｍ向左 ｂ ｒ ｉ ｉ ｅ ｅ ｂ ａ ｓ ｈ ｍｉ．Ｐｒｔ Ｉ ：Ｃ ｒ ｂ ａ 极： ｍ ｅ ｅｇ ｅａｏｉ ｕ ｎ ｎ ｃｍｐｅ ｓｈｍ ａ ｎｒｙｍ ｔ ｌｍ ｄ ｒ ｇｉ－ ｏ ｌｅｉ ｅ ｉ［ ｂ ｓ ｉ ｔ ｃ Ｊ ２四血管阻断法ｆ ｖｏ， ４ ） 一 将实验大 鼠用 １％ 旁开 ２ ｍ 参 考电 ｏ ｍ 极位于远额窦。在上述部位用 穿过内板 在额部记录电 】． ｔ ｋ １７ ， ３７ —３ ５ 的水合氯醛（ ｍ Ｏ ｓ Ｏ ＵｌＯ ） ￣ 腹腔麻醉后， 背侧颈正中 小螺丝固定于头骨上， Ｓ ｏｅ， ９ ８ ９： ｒ ２ ３． ３ Ｓ ｔ ＭＬ ，Ｂ ｎ ｅ ＇Ｄ ｌ ｅ ，ｅ ． １ ｈ ｅｄ ｋ Ｇ ａ ｇ ｎ Ｎ ｂ ｒ ｔａ １ 切 口 暴露双侧第一颈椎横突翼小孔， ， 用直径为 极处在正后方固定一直径为 ５ ｍ ０ Ｔ ｍ 、 高斯磁场 ［ ｍｉ ２ ｄ ｌ ｏ ｔ ｄ － ｎ ｏ ｇ — ｅ ｍ ｅ ｖ ｒ — ｃ ｏ ‘ ０ｍ ． ｍ的电凝针插入双侧翼小孔烧灼双侧椎动脉， 的小磁铁， ５ 最后用自 凝牙托水和牙托粉封 固。术后 Ｍｏ ｅｓ ｆ ｒ ｓｕ ｙ ｉ ｇ ｌ ｎ — ｔ ｒ ｒ ｏ ｅ ｙ ｆｌ ｅ— 造成永久性闭塞。然后腹侧颈正中切口， 分离双侧 ３ 等刀口愈合＇ ｄ 体重恢复后． 始进行迷宫及 Ｐ ０ ｌ ｗｉ ｇ ｆ ｒ ｂ ａ ｎ ｉｃ ｅ ａ ｉ ｈ ｒ Ｌ ２ 一 ｖ ｓ 开 ３０ ｏ ｎ ｏｅ ｒ ｉ ｓ ｈ ｍｉ ｎ ｔ ｅ ａ Ａ２ 颈总动脉穿结备用。２ ｈ ４ 后用 微动脉夹夹闭双侧 测试。 将已达迷宫训练标准并完成 Ｐ ０ 测定的实 ｓｌｏ ｃ ｓ ｎ ｍｏ ｅ ｆ ３０ ｅ ｃ ｌ ｉ ｄ ｌ Ｊ】．Ａ ｔ Ｎ ｕｏ Ｓ ａ ｄ ， ｕｏ ｃ ｅ ｒｌ ｃ ｎ ａ ５ ４ ｋ） ｍｇ ￣腔注射麻醉大 １ ８ ，６ ：３ ５ — ４ ． ９４ ９ ８ ０１ 颈总动脉 ５ ｉ共夹闭 ３ 每次间隔 １ 。 ｍＩ ｌ ， 魄 ｈ 术后手 验大鼠用 ２ ％硫喷妥钠（ ／ｇ 术部位施以适量青霉素对抗感染， 然后缝合， 常规 鼠，用 Ｆ ， 粉 （ ｅ ０ 铁粒 子直 径 为 ６ 用 量 ［ Ｐ ｐ ａ Ａ ， ｅｌ Ｔ ｒ Ｃ ，Ｄ ｖｄｏ Ｍ ， ４ ａｐｓＢ ］ ｄ ａ ｏｔ Ｊ ｅ ａｉｓｎＣ ｔａ １ ｒｎｃ ｒｄ ｃ —ｉ ｆｃ ｒｂａ ｌｏ ｏ ｏ ｌ 饲养观察。一 Ｏ为 目 ４Ｖ 前国际公认的 Ｖ Ｄ造漠 亳 ５Ａ ｇ 于 １ ｍ 生理盐水中， Ｉ ｉ 内沿大 ｅ ．Ｃｈ ｏ ｉ ｅ ｕ ｅ ｔ ｎ ｏ ｅｅ ｒｌｂｏｄ ｆ ｗ ６ｍ／ ｋ ５Ｌ 于 ｍｎ ｎ ｔｅａ ｕ ａ ｌｔ－ ｍｅｇｎ ｅｌｌｓ ｎ 它可高度模拟 Ｖ Ｄ的发病特点且 缺血后生理指标 鼠舌下静脉注入 从而造成 Ｖ 大 鼬Ｉ型。该模型 ｉ ｈ ｄ ｈ ｒｔ： ａｅ ｅ ｒｉｇ ＣＡ１ ｃｌ ｏｓａ ｄ Ｄ 莫 稳定不影响缺血后结果病 理改变较为充分、 具有操作简便 、 明确， 创伤少 、 重复性好 、 较快导致痴呆 ｍ ｍ ￣ ｄｓ ｎｔ ｎ 【 Ｂ ｍ ｅ １９， ０ （－） ｅ ｏ ｙｆ ｃ ｏ Ｊ￣ ｒ ｎ Ｒ ｓ ９ ６ ７ ８ ２ ｕ ｉ ， １ ： ０ ８ 中分指数低元 明显肢体运动障碍， 但存活率相对 的优点， 而且在脑皮质、 海马组织中观察到梗死灶 ５ — ５ １ 小暮久也． 管痴呆 动物． 脑血 医学 较低。 和软化灶敲 好地模拟人类多发性脑梗死， 可用于 嘲长泽治夫， 南 ，９ １ １ ８ ） １ １９ ． ５（． ３ ９６ － ３大脑 中动脉梗塞 （ ｄ ｌ ｅｅｒｌ ｔｒｏ— 研究血管性痴呆的病理机制。 ｍｉｄｅ ｒｂａ ｒ ｙｃ ｃ ａｅ ｃ ｓ ｎ Ｃ Ｏ Ｃ Ｏ及再灌 注模 型 ｌｉ， Ａ） Ａ ｕ ｏＭ Ｍ 选 用 长 ７ 颈内动脉注射微小栓子模型 从大 鼠 —侧 ［ ｏ ｇ Ｌ Ｗｅｎｔｉ Ｐ ，Ｃ ｒ ｏ ， ｔａ ６ ｎａＥ ｉｓ ｎ Ｒ ］Ｌ ｅ ａｌ ｎ Ｓ ｅ １ ｓ ． ｖ ｒ ｉ ｌ ｄ ｌ ｅ ｅ ｒ ａ ｔ ｒ ｃ ｌ ｓｏ ｔ ｌ ｈ １ｍ ６ ｍ的丝线栓子， ５ ｍ硅化成柱状， 前端 ｍ 将此栓 颈 内动脉注入纤维蛋白、 血凝块 、 中心球、 塑料微 Ｒｅ ｅ ｓｂ ｅ ｍｉ ｄ ｅ ｃ ｒ ｂ ａ ｒｅ ｙ ｏ ｃｕ ｉ ｎ ｗｉ － ｕ ｒ ｅ ｏ ｉ ａｓ叨 ｔ ｅ， ９ ９ ２ （ ｎ ｅ ｍｙ ｏ ） 子从大鼠颈内 动脉分支处插 入 阻断大脑中动脉血 小栓子及血栓诱导剂致缺血陛中风模型的报道很 ｏｔｃａｉ ｔ ｎｒｔ Ｓｒｋ １ ８ ， ０１ ： ， ４ ． 无菌自 然干燥血凝块， 研碎 ８ — ９１ 流。缺血 ｌ 后再拔出栓子艘 其血流再通， ｈ 从而造 多。本法是取同种大 鼠 成 Ｖ 模型。 Ｄ 此外尚有左心室注射液体石蜡饵 将 后经 ２０ ｐ ０ ｍ筛孔过筛备用， 应用时用生理盐水 ［Ｙ ｍ ｍｏ Ｔ ｍｕａＡ ， ｒ ｏ ｅ ａ Ｂ — Ｔ ａ ａ ｔ Ｍ． ａ ｒ Ｊ ｏ Ｋｉｎ ｔ １ ｅ ｉ ． ａ ｒ ｃ ａ ｇ ｓ ｆｅ ａ ｃ ｒｂ ａ ｉｃ ｅ ａ ｂ ｌ ｏ ｌ ｌ 液体石蜡注人实验大鼠左心室中造成漠型） 和高血 ０ ｍ 加血凝块 １ ｍ 制成混悬液显 微镜下测量 ｈ ｄｏａ ｈ ｎ ｅ ａｔｒｆｃ ｅｅ ｒ ｓ ｈ ｍｉ ｙ ＿ Ｌ Ｓ ０ ｇ ０ ｅｔ ｄ ｌ ｅｅ ｒｌ ａｔｒ ｃ ｃｕ ｉｎ ｉ ａｓ ０ ２０ｍ 压复合 Ｖ 模型等等方法。这些 Ｖ 模型的制备， 直径为４ ～ ０ Ｌ 。然后将实验大 鼠用水合氯醛 ｌｆ ｍｉｄｅ ｃ ｒｂａ ｒｅｙ ｏ — ｌ ｓｏ ｎ ｒｔ Ｄ Ｄ 都是从模拟人类 Ｖ Ｄ发病的 某—个侧面来完成的， 腹腔麻醉（ ｍ ０ 园 部正中切开暴露双侧颈总 Ｂａ ｅ １ ８， ２（－２ ： ２ ３ ８ ３ ｏ颈 ５ ｒｉ Ｒ ￣ ９ ８ ５ １ ） ３ ３－ ２
血管性痴呆两种动物模型的比较
用 单 因 素方 差 分 析 。Ｐ＜ ． ００ ５为 差 异有 统计 学 意 义 。
２ 结 果 பைடு நூலகம்
１ｍ ｎ 再 通 ５ ｎ 再 夹 闭 １ ｍｎ 再 通 ， ５ ｉ， ｍｉ， ５ ｉ， 连续 ３次 ， 后 局 部 撒 上 然
１ ． 神 经 行 为 学评 分 ４ 模 型复 制 后 ４ ， 行 初 次 神 经 行 为 学 评 ｄ进
床 发 病 过程 ， 于 深 入研 究 临 床 Ｖ 对 Ｄ有 十 分 重要 的意 义 。 因此 寻
找 一 种 有效 的 ，更 接 近 人类 脑缺 血 的发 病 机理 造 模 方 法 十 分 重 要 ． 实验 就 运 用 的 两种 造模 方 法 进 行 比较 。 本
中图 分 类号 ：７ ９１ 文 献 标 志 码 ： 文 章 编号 ：０ ４ ７ ５ ２ １ ）２ ０ １— ２ Ｒ ４．３ ＋ Ａ １０ — ４ Ｘ（０ ２ ０ — ２４ ０
【 要 】 目的 对 大 鼠血 管 性 痴 呆两 种模 型— — 双 侧 颈 总动 脉结 扎 结 合 腹 腔 注 射 硝 普 钠 法 （一 Ｏ） 摘 ２ Ｖ 和椎 基 底
率 低 于 ４ Ｖ 但 动 物 反 应记 忆 能 力 的有 效 率 明显 低 于 ４ Ｖ 一 Ｏ， 一 Ｏ。结 论 在 本 实 验 中 ４ Ｖ 与 ２ Ｖ 比较 ， 出 一Ｏ 一Ｏ 得
４Ｖ 一 Ｏ是 建 造 大 鼠血 管 性 痴呆 的较 为 理 想模 型 。
【 关键 词】 血管性痴呆 动物模 型 大 鼠 两血管结扎结合硝普钠法 四血管结扎法
・
２ ４・ １
中 国 中 医急 症 ２ １ ０ ２年 ２月第 ２ 卷 第 ２期 Ｊ Ｔ Ｍ． ｅ ．０ ２． ｏ． １ Ｎ ． １ Ｅ Ｃ Ｆｂ ２ １ Ｖ １２ ． ｏ２
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基底前脑胆碱能神经元损毁一种老年性痴呆方法学动物模型的复制及应用要点郭德玉1 叶翠飞1王钜2李林1敖平3李斌4 何士大11首都医科大学宣武医院北京1000532首都医科大学实验动物中心北京1000543中国协和医科大学研究生院北京1007304New York State Institute for Basic Research in Developmental Disability(New York,10314) 摘要目的本文介绍一种老年性痴呆的方法学动物模型基底前脑胆碱能神经元损毁模型的复制及应用要点以及该模型比较生物学研究的有关进展方法采用鹅膏覃氨酸基底前脑区Maynert基底核定位注射造模通过水迷宫实验测试动物的学习记忆能力结果该手术方法能造成动物学习记忆能力下降但各组内动物个体差异极大变异系数为27.1 46.2%我们以正常动物平均成绩的95%置信区间为标准对造模的成功率进行筛选表明该模型的成功率为50~75%说明了进行模型筛选的重要意义结论基底前脑胆碱能神经元损毁模型对老年痴呆研究具有重要价值但在应用中需要注意有关方法学问题关键词老年性痴呆动物模型胆碱能神经元损毁随着社会人口的老龄化老年病将日益成为严重的社会问题特别是老年性痴呆Alzheimer’s disease, AD作为致残最严重的疾病之一给家庭社会带来了沉重的负担并且有日益上升的趋势据统计国外65岁以上AD患病率为4~6%80岁以上达20%我国为2.9%本院调查北京地区本病的发病率为4.9%因此对老年性痴呆的研究将具有十分重要的意义而动物模型的建立是该病研究的必要工具目前疾病的动物模型包括2类一类是通过人工筛选或转基因手段培育的遗传因素决定的动物模型另一类是正常动物通过实验手段诱发的动物模型后者称为方法学动物模型老年性痴呆的组织学特征为老年斑社经原纤维缠结和神经元丢失尤其以基底前脑胆碱能神经元丢失最为严重是本病的主要病理表现之一也是当前药物研究的重要靶点兴奋性氨基酸注入基底前脑区Maynert 基底核后能通过谷氨酸受体特异地激动胆碱能神经元并过度兴奋致使引发钙超载等一系列反应使神经元死亡[12]这种方法造成的动物学习记忆障碍是本病的重要动物模型之一本文将重点讨论该模型的复制要点以及应用中的注意事项1 模型复制方法1.1 动物SD大鼠23月龄210-240克1.2 试剂鹅膏药覃氨酸Ibotenic acid, IBO戊巴比妥钠硫酸阿托品0.5mg,1ml/支30%双氧水1.3 仪器脑立体定位仪平头微量注射器2.5µl1.4 神经毒剂的配制取5mg鹅膏覃氨酸溶于400µl冷0.05M PH 7.4的PBS溶液中注意溶液必须在冰浴和避光条件下配制以免神经毒剂在光热作用下自发降解用10N氢氧化钠调PH值到7.7一般用2-5µl这是由于IBO在PH7.7时的损伤效果最显著调整 PH 可以使用具有纤细电极的PH计来精确确定PH值也可以简单使用PH试纸最后用PBS 定容到500µl终浓度为0.025M即10µg/µl溶液分装在聚丙烯Eppendorf管中每份50µl 在-40以下保存使用时反复冻容6次未发现作用强度显著丧失1.5 实验步骤大鼠1%戊巴比妥钠麻醉并注射硫酸阿托品0.5mg1ml/支0.03ml防止在手术过程中由于气道分泌物造成窒息脑立体定位仪固定平颅头位切开皮肤及皮下组织用棉签蘸取少量双氧水轻拭颅骨表面清除泡沫能清晰显现前囟按大鼠脑定位图谱[3]基底前脑区Maymert基核在大鼠也称无名质区在前囟后0.8mm中线旁3.0mm自脑表面深度7.0mm在该点双侧注射1l鹅膏覃氨酸每点需用5分钟缓慢抽针以3分钟为宜减少神经毒剂通过毛细作用到达皮层假手术组注射等量PBS手术方法同上正常动物组未进行麻醉和手术处理1.6 术后护理大鼠造模后昏迷时间显著延长需要采用保暖措施保持体温苏醒后大鼠常出现阵颤痉挛惊厥和咬前肢现象对于后者需要使用布和胶带保护前肢如果神经毒剂进入侧脑室动物可能在手术时立即死亡如果损伤丘脑饮食中枢则动物停止进食因此手术会造成一定的死亡率一般在20%左右2 检测指标学习记忆功能的测定有多种方法空间学习记忆能力的测定通常使用水迷宫包括通道式水迷宫和Morris水迷宫都比较敏感至于一次性被动学习记忆测试如避暗及跳台反射敏感性较差很难评价该模型的学习记忆功能的改变其他学习记忆的测定工具如穿梭箱国内产品尚不可靠下面介绍通道式水迷宫评价模型空间学习记忆能力的方法该方法参照中国医学科学院药物研究所小鼠水迷宫按比例放大[4]迷宫由黑色有机玻璃制成 2.1 1.70.6m3水深40cm水温控制在22~25之间如图1所示本装置共设3个盲端终点有台阶动物可通过台阶上岸躲避溺水威胁各组动物依次进行水迷宫实验第1天将挡板置于A位置动物在A点入水路径包括1个盲端如果动物未找到台阶将动物置于台阶附近诱导其学习第2天将挡板置于B位置动物在B点入水路径包括2个盲端第345天将挡板置下地C位置动物在C点入水路径包括3个盲端每天训练2次记录每只动物的游出时间如果120秒内未上岸按120秒记录及在游游泳中进入盲端的次数即错误次数第12天为训练后3天数据记为学习记忆成绩3.模型复制的成功率及重复性研究模型复制方法如前文所述实验分为正常组假手术组和模型A B C组A B C组为三批重复实验每组15~20只动物造模中部分动物死亡14天后每组为12~15只动物进行通道式水迷宫实验测定动物的学习记忆能力各天及后三天平均成绩见图1和蔼水迷宫实验第12天为诱导过程且入水位置不同因此不计入成绩后三天各组动物成绩不断提高对照及假手术组表现明显正常组及各模型组后3天平均学习记忆成绩分别与假手术组进行组间t检验正常组与假手术组游出时间及错误次数均无显著性差异对于游出时间仅有模型A组与假手术组有显著性差异p<0.05对于错误次数3个模型组与假手术组均有极显著的差异表明该手术方法能造成动物学习记忆能力下降且错误次数指标较为敏感统计各组动物后3天平均学习记忆成绩的个体变异系数表明各组内动物个体差异极大在正常组表现更加突出如表1这主要是由于学习记忆功能本身复杂多因素的神经生化机制造成的除了动物的个体差异外手术操作也有误差一方面造成大约20%的动物死亡另外还有部分动物无显著学习记忆功能丧失这是造成个体间存在较大变异系数的原因模型组的变异系数低于正常组是由于基底前脑损毁这一显著的干预因素造成3组模型动物组间游出时间和错误次数的变异系数分别6.88%和10.76%表明组间重复性较好图1对照及各模型组水迷宫训练各天学习记忆成绩第1天路径包括1个盲端第2天2个盲端第345天3个盲端每天训练2次记录每只动物的游出时间如果120秒内未上岸按120秒记录及在游泳中进入盲端的次数即错误次数第12天为训练后3天数据记为学习记忆成绩图示内数据为动物数4.模型的筛选由于模型动物个体间存在很大的差异因此在应用该模型从事药理等研究前必须根据成绩筛选合格动物并且需要根据成绩差异进行分层随机分组降低个体差异和手术过程等因素造成的偶然误差在正常对照组和假手术组中也存在学习记忆能力差异因此也要进行筛选根据我们的经验提出了一个筛选标准以供参考1在正常组计算正常动物后3天平均成绩95%置信区间高于置信区间最高值表示动物显著空间学习记忆能力降低低于置信区间最低值表示学习记忆能力超常2在假手术组剔除学习记忆降低和超常的动物这种动物可能是由于非特异性损伤或个体差异造成3在模型组2项指标中至少有1项超过剔学习记忆能力正常和超常的动物在上述研究中正常动物平均游出时间为58.8秒95%置信区间为37.2-80.4秒平均错误次数为1.35次95%置信区间为0.64-2.06秒根据这两项指标统计各组动物的分布情况如表26所示正常组成绩分布比较离散假手术组有73.3%的动物两项指标均在正常动物均值的置信区间内即有73.3%符合筛选标准模型A组有75%符合筛选标准模型B组为61.5%模型C组为50%据此我们可以判该模型的成功率为5075%当然在实际应用中筛选标准可根据实验具体情况而定表5. 模型B组成绩分布情况T<064 0.64<T<2.06 E>2.06T<37.2 0 0 037.2<T<80.4 2(15.4%) 3(23.1%) 0T>80.4 0 2(15.4%) 6(46.2%)5.模型的比较生物学及病理生理学研究回顾在70年代后期发现老年性痴呆患者脑中乙酰胆碱含量显著降低乙酰胆碱是中枢神经系统主要神经递质之一具有增进注意力和学习记忆功能的作用由于这个发现产生了胆碱能缺陷学说认为老年性痴呆患者记忆功能和行为的障碍是由于在突触末端胆碱能缺陷造成的并且目前有效改善老年痴呆症状的唯一有效的药物就是胆碱能增强剂这个学说有以下3方面的证据支持1脑的活栓和尸检清楚地显示在老年性痴呆患者脑皮层胆碱乙酰转移酶活性显著降低该酶的作用是将胆碱合成为乙酰胆碱见图3且胆碱乙酰转移酶水平与神经炎性斑和MMSE简易智能量表成绩高度相关另外一项尸检研究发现胆碱能神经缺失同时伴随突触前膜M2和N受体减少但突触后膜M1相对保持较好2广泛投射到皮层的基底前脑区Maynert基底核和其他皮层下神经核团中胆碱能神经元的缺失也支持这种假说见图4这些大的神经元主要起到向大脑皮层供应乙酰胆碱的功能在中介注意力和学习新事物方面发挥重要作用3扩展到人和动物的药理学研究表明胆碱能拮抗剂如东莨菪碱能显著干扰学习记忆功能另外发现胆碱能促进剂能改善学习记忆功能这也支持乙酰胆厉在注意与学习记忆中的重要生理功能这些证据为基地前脑胆碱能神经元损毁模型提供了比较生物学的理论基础[5]图3 乙酰辅酶A AchE和胆碱choline通过胆碱乙酰转移酶ChAT合成为神经递质乙酰胆碱Ach乙酰胆碱被释放到突触间隙在多个位点发挥作用包括包括突触前膜M 2和N受体突触后膜M1发挥激动+和抑制-作用乙酰胆碱酯酶AchE 将乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸From Christine Kenney进一步研究发现对不同年龄的大鼠损毁基底前脑神经元均可造成学习记忆功能的障碍但在中老年动物表现更为严重且其他相关受体的反应也有很大差异这表明了随着年龄的增长脑代偿功能的障碍[6]通过脑实质微透析的方法双侧Maynert基底核损伤的范围与前脑皮层乙酰胆碱含量密切相关从而证明了Maynert基底核是前脑皮层乙酰胆碱的主要来源[7]近年的研究还发现破坏基底前脑胆碱能神经元能造成皮层神经元突触可塑性的障碍影响突触的重构但对皮层的感觉运动功能没有影响突触的可塑性是学习记忆的物质基础因此阐明了胆碱能神经元障碍造成学习记忆障碍的生理基础但对于突触可塑性形成的机理还有待于深入探讨[89]通过单侧Maynert 基底核损伤损伤模型发现损伤侧-Amyloid前体蛋白APP高于对侧2.6倍这表明胆碱能神经元的损伤可以诱导老年性痴呆相关病理产物的增加[10]并发现这种损伤诱导的APP可以与神经生长相互作用通过胰岛素信号途径增加神经元的生存能力[11]因此基底前脑胆碱能神经元损伤动物模型能够体现老年性痴呆中胆碱能神经元缺损的重要病理改变是对该病研尤其是药理研究的重要工具但在应用中需要注意模型的制作方法和筛选等方面的方法学问题参考文献1.盛树力,裴进京李林.老年性痴呆:从分子生物学临床诊治,北京:科学文献出版社,1998,93-1252.Gary L Wenk. Animal model of Alzheimer’s disease. In: A. Boulton, G. Baker,and R. Butterworth. Neuromethods, V ol. 21:Animal Models of Neurological Disease,I. The Humana Press Inc. 1992:29-623.包新民,舒斯云:大鼠脑立体定位图谱,人民卫生出版社,北京,19914.张均田,石成璋,梅保幸,韩鑫玉:水迷宫自动控制仪的研制及在神经药理研究中的应用药物分杂志199111123-26。